其他成分医学知识专家讲座.pptx

,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,第一节 脂肪酸类化合物,一、概述,定义,脂肪酸是脂肪族中含有羧基一类化合物。,2.,分布,这类化合物广泛分布于动植物中。,3.,生物合成,以乙酰辅酶,A,和丙二酸单酰辅酶,A,为原料而被生物合成，它们在生物体内几乎均以酯形式存在。,其他成分医学知识专家讲座,第1页,1,饱和脂肪酸,棕榈酸,（,16:0,）：,CH,3,-(CH,2,),14,-COOH,硬脂酸（,18:0,）：,CH,3,-(CH2),16,-COOH,2,不饱和脂肪酸,（,1,）单不饱和脂肪酸,分子中有一个双键。,油酸（,18:1,）：,CH,3,-(CH,2,),7,-CH=CH-(CH,2,),7,-COOH,棕榈油酸（,16:1,）：,CH,3,-(CH,2,),5,-CH=CH-(CH,2,),7,-COOH,（,2,）多不饱和脂肪酸,分子中有两个以上双键。,二、脂肪酸结构分类,其他成分医学知识专家讲座,第2页,亚油酸（,18:2,）：,CH,3,-(CH2),4,-(CH=CH-CH,2,),2,-(CH2),6,-COOH,-,亚麻酸（,18:3,）：,CH,3,-CH,2,-(CH=CH-CH,2,),3,-(CH,2,),6,-COOH,-,亚麻酸（,18:3,）：,CH,3,-(CH,2,),4,-,（,CH=CH-CH,2,),3,-(CH,2,),3,-COOH,花生四烯酸（,20:4,）：,CH,3,-(CH2),4,-(CH=CH-CH,2,),4,-(CH,2,),2,-COOH,二十碳五烯酸（,20:5,）,CH,3,-CH,2,-(CH=CH-CH,2,),5,-(CH,2,),2,-,COOH,，,EPA,二十二碳六烯酸（,22:6,）：,CH,3,-CH,2,-(CH=CH-CH,2,),6,-CH,2,-,COOH,DHA,分布：,含,2,个或,3,个双键脂肪酸,-,植物油脂,4,个以上双键多不饱和脂肪酸,-,海洋动物脂肪,其他成分医学知识专家讲座,第3页,三、脂肪酸理化性质,1,溶解性,脂肪酸不溶于水，溶于乙醚、己烷、苯、氯仿、热乙醇等有机溶剂，可溶于冷氢氧化钠溶液。,2,酸性,脂肪酸含有羧基，可与碱结合成盐。,3,羟基置换反应,羧基中羟基可被卤素、烃氧基、酰氧基、氨基等置换，分别生成酰卤、酯、酸酐和酰胺。,4,酸败,脂肪酸在空气中置久，会产生难闻气味，这种改变称为酸败。,其他成分医学知识专家讲座,第4页,5,显色反应,（,1,）碘酸钾,-,碘化钾试验,（,2,）溴四氯化碳试验,（,3,）高锰酸钾试验,（,4,）溴,-,麝香草酚蓝试验,样品溶液加溴,-,麝香草酚蓝试液，呈蓝色。,其他成分医学知识专家讲座,第5页,四、脂肪酸提取与分离,1,提取,（,1,）有机溶剂提取法,惯用乙醚、石油醚及环己烷等亲脂性有机溶剂进行提取，回收溶剂即得粗脂肪酸。,（,2,）超临界流体萃取法,通常在,0.1Kpa,5Kpa,，温度,30,45,下提取总脂肪酸。,其他成分医学知识专家讲座,第6页,2,分离,（,1,）蒸馏法,减压分馏和分子蒸馏两类方法。,（,2,）丙酮冷冻法,原理：碳链长度及饱和程度不一样脂肪酸，在过冷丙酮溶剂中溶解度不一样，借此到达分离目标。,操作：将脂肪酸混合物加到预先冷至,-25,以下丙酮中，搅拌，滤过，除去结晶，浓缩后，即得含有较高浓度,EPA,及,DHA,。,其他成分医学知识专家讲座,第7页,（,3,）脂肪酸盐结晶法,将脂肪酸混合物经氢氧化钠醇溶液皂化为脂肪酸盐，冷却，使饱和及单不饱和脂肪酸盐析出，滤液酸化提取，得高浓度多不饱和脂肪酸。,此法适合用于工业生产。,（,4,）尿素结晶法,原理：尿素能与脂肪族化合物形成加合物，形成加合物能力与脂肪酸饱和程度相关，不饱和程度愈低，愈易形成加合物。,操作：将脂肪酸混合物与尿素醇溶液混合，保温搅拌，冷却，滤过，得较高浓度,EPA,和,DHA,。,其他成分医学知识专家讲座,第8页,第二节 有机含硫化合物,芥子苷类,-,白芥子与黑芥子,芥子苷通式,白芥子苷,sinalbin,黑芥子苷,sinigrin,其他成分医学知识专家讲座,第9页,芥子苷类化合物特点：,1.,在植物体内通常以钾盐形式存在，但有时也以钠盐、铵盐形式存在。,2.,水解,在中性条件下，以,芥子苷酶,进行水解，先生成葡萄糖和硫代羟肟酸，后者经转位最终产生,异硫氰酸酯。,其他成分医学知识专家讲座,第10页,2.,大蒜新素（,allitridi,）,-,大蒜,性质：淡黄色油状液体，相对密度,1.085,，折光率,1.580,（,20,）。,药理作用：大蒜新素含有抗病原微生物、抗肿瘤、降血脂、去除自由基及保护肝、胃等作用。,CH,2,=CHCH,2,SSSCH,2,CH=CH,2,大蒜新素（,allitridi,）,其他成分医学知识专家讲座,第11页,蔊菜（,Rorippa montana,）全草或花,水煮沸，滤过,滤 液,减压浓缩,浓缩液,加入乙醇至乙醇含量为,75%,，过滤,沉 淀,滤 液,减压浓缩，,10,下放置，滤过,沉 淀,滤 液,3.,蔊菜素,Rorifon,其他成分医学知识专家讲座,第12页,沉,淀,40%NaOH,溶液处理，水洗至中性,粗,品,乙醇重结晶，硅胶柱色谱，,EtOAc,洗脱,乙酸乙酯洗脱液,浓缩，加,Et,2,O,至混浊，滤过,蔊菜,素,祛疾作用较强，镇咳作用次之，平喘作用微弱。,用于慢性支气管炎，可使痰量降低，咳喘减轻。,此结晶不溶于酸或碱溶液，,遇碘化铋钾呈橙红色。,其他成分医学知识专家讲座,第13页,第三节 氨基酸、环肽、蛋白质和酶,使君子氨酸（,quisqualic acid,）,海人草氨酸（,kainic acid,）,使君子,（,Quisqualis indica,）,鹧鸪茶,（,Caloglossa leprieuii,）,一、氨基酸,其他成分医学知识专家讲座,第14页,南瓜子氨酸（,cucurbitine,）,三七素（,dencichine,）,田七氨酸,天门冬素（,asparagine,）,其他成分医学知识专家讲座,第15页,（二）氨基酸结构与分类,中性、酸性和碱性氨基酸,氨基和羧基,相对位置,氨基和羧基,数目,-,氨基酸、,-,氨基酸、,-,氨基酸等,其他成分医学知识专家讲座,第16页,（三）氨基酸理化性质,性状,无色结晶，具较高熔点,溶解性,易溶于水，难溶于有机溶剂,成盐,与强酸、强碱均能成盐；分子内氨基和羧基可相互作用生成盐,其他成分医学知识专家讲座,第17页,等电点,当将氨基酸溶液调至某一特定,pH,值时，氨基酸分子中,羧基电离和氨基电离趋势恰好相等,，这时,溶液,pH,值,称为该氨基酸等电点。,不一样氨基酸，含有不一样等电点。,在氨基酸等电点时，其溶解度最小，,能够沉淀析出,。,酸性氨基酸 2.83.2,中性氨基酸 4.86.3,碱性氨基酸 7.610.8,其他成分医学知识专家讲座,第18页,茚三酮反应,与亚硝酸反应,除亚氨基酸（脯氨酸、羟脯氨酸）外，,-,氨基酸中氨基能与亚硝酸作用，放出氮气，生成,-,羟基酸。,其他成分医学知识专家讲座,第19页,（四）氨基酸检识,1,理化检识,（,1,）,Ninhydrin,反应,取供试液,1ml,，加,0.2%,茚三酮溶液,2,3,滴，摇匀，在沸水浴中加热,5,分钟，冷却后，如显蓝色或蓝紫色，表明含有氨基酸、多肽或蛋白质。,供试液制备：,取中药粗粉,12g,，加水,1020ml,温浸,1,小时，滤 过，得滤液。,其他成分医学知识专家讲座,第20页,（,2,）吲哚醌试剂（,Isatin,反应）,(3)1,2,茶醌,4,硫酸试剂（,Folin,试剂）,其他成分医学知识专家讲座,第21页,2,色谱检识,（,1,）纸色谱,展开剂：正丁醇,-,醋酸,-,乙醇,-,水（,4:1:1:2,）,甲醇,-,水,-,吡啶（,20:20:4,）,水饱和酚,（,2,）薄层色谱,展开剂：正丁醇,-,醋酸,-,水（,4:1:5,，上层）,氯仿,-,甲醇,-17%,氨水（,2:2:1,）,96%,乙醇,-26%,氨水（,77:23,）,酚,-,水（,3:1,）,其他成分医学知识专家讲座,第22页,（五）氨基酸提取分离,（,1,）水提法,其他成分医学知识专家讲座,第23页,（,2,）稀乙醇提取法,其他成分医学知识专家讲座,第24页,(1,）溶剂法,原理：,依据各种氨基酸在水和乙醇等溶剂中溶解度不一样，将氨基酸彼此分离。,胱氨酸和酪氨酸在冷水中极难溶解，而其它氨基酸易溶，故可将这两种氨基酸与其它氨基酸分离；,酪氨酸在热水中溶解度大，而胱氨酸在冷、热水中溶解度均小，借此分离。,氨基酸分离,其他成分医学知识专家讲座,第25页,（,2,）成盐法,其他成分医学知识专家讲座,第26页,其他成分医学知识专家讲座,第27页,（,3,）电泳法,将总氨基酸水溶液调至适当,pH,，于电泳槽或纸片上，在一定电场中，中性氨基酸留在原点，带净正电荷碱性氨基酸移向阴极，带净负电荷酸性氨基酸则移向阳极，此种现象称为电泳。,氨基酸电泳移速，与,氨基酸本身所带电荷、缓冲液离子性质、,pH,值、粘度、温度等相关。,溶液,pH,越靠近等电点，氨基酸净电荷越低，离子移动速度越慢；反之，则加紧。,控制电泳液,pH,，可使氨基酸完全分离。,其他成分医学知识专家讲座,第28页,电压：,0,30kV,；,分离柱为毛细管空管，内径,100m,；,紫外检测器，检测波长,280nm,；,缓冲液：,5mM NaH,2,PO,4,缓冲液（,pH3.0,）；,样品：色氨酸,(0.50g/L),、酪氨酸,(,饱和,),混合稀盐酸溶液。,高,效,毛,细,管,电,泳,仪,其他成分医学知识专家讲座,第29页,总氨基酸水液,pH5.5,时,阳离子交换树脂交换氨基酸强度 碱性中性酸性,阴离子交换树脂交换氨基酸强度 酸性中性碱性,（,4,）,离子交换树脂法,其他成分医学知识专家讲座,第30页,二、环肽（,cyclopeptides,）,1定义,指由,酰胺键或肽键,形成一类环状肽类化合物。主要起源于植物、海洋生物和微生物等。,2.,生物活性,抗肿瘤、抗病毒和免疫调整作用：,didem B-,海洋被囊动物,(,Trididemnum solidum,),安眠作用：,Zizyphine-,酸枣仁（,Ziziphus,jujuba,）,其他成分医学知识专家讲座,第31页,二、分 类,I,II,III,A-B=-CHH-,，,CH,（,CO,）,CH,2,-,，,-COCH,2,R,1,，,R,2,=,芳基，烷基,R,3,=,氨基酸残基部分,其他成分医学知识专家讲座,第32页,3,环肽理化性质,（,1,）性状,普通易于结晶，熔点多高于,260,，有旋光性。,（,2,）溶解性,易溶于水，可溶于甲醇、氯仿等有机溶剂。,4,环肽提取分离,（,1,）酸碱法,采取经典生物碱提取法，即酸提取液经中和、浓缩、碱化后，用硅胶柱色谱分离，不一样百分比氯仿,-,甲醇（,99:1,70:30,）洗脱。,适用范围：,型,型环肽分离。,其他成分医学知识专家讲座,第33页,（,2,）溶剂法,甲醇或乙醇提取，提取液浓缩，经溶剂（多用醋酸乙酯或氯仿）分离，经过硅胶柱色谱、高效液相色谱、制备薄层色谱以及制备衍生物等方法深入分离。,此法适合于,型和,型环肽分离。,其他成分医学知识专家讲座,第34页,5,环肽检识,-,薄层色谱,吸附剂：硅胶,G,或硅胶,H,展开剂：氯仿,-,甲醇（,9:1,）,显色剂：,0.2%,茚三酮溶液,其他成分医学知识专家讲座,第35页,茜草中环肽提取与分离,其他成分医学知识专家讲座,第36页,其他成分医学知识专家讲座,第37页,三、蛋白质和酶,一、概述,（一）定义,蛋白质,为氨基酸经肽键相连聚合而成得高分子化合物（分子量几万几百万），,酶,为具高度特异催化性蛋白质。,蛋白质普通作为杂质除去（中药注射剂中有蛋白质可引发异性蛋白过敏）。但有些蛋白质具一定生理活性或药理作用。,天花粉蛋白 中期引产,菠萝蛋白酶 抗水肿，抗炎,雷丸素（蛋白酶）,杀绦及钩虫,超氧化歧化酶（,SOD,）延缓机体衰老,其他成分医学知识专家讲座,第38页,蛋白质和酶理化性质,（,1,）溶解性,多数蛋白质和酶溶于水，不溶于有机溶剂。蛋白质溶解度受,pH,影响。,（,2,）分子量,蛋白质和酶 溶液含有亲水胶体特征，分子量多在一万以上，高可达一千万左右，为高分子物质，不能透过半透膜，此性质可用于提纯蛋白质。,（,3,）两性和等电点,蛋白质分子两端有氨基和羧基，同氨基酸一样含有两性和等电点。,其他成分医学知识专家讲座,第39页,（,4,）盐析和变性,蛋白质和酶在水溶液中可被高浓度,硫酸铵或氯化钠溶液盐析而沉淀,，此性质是可逆。,当蛋白质和酶被加热，或与酸、碱等作用时，则变性而失去活性，此反应不可逆。,（,5,）水解,蛋白质在酸、碱、酶等作用下可逐步水解，最终产物为各种,-,氨基酸。,（,6,）酶解,酶含有很高催化性及专属性。如麦芽糖酶（,maltase,）只能水解,-,苷键，而对,-,苷键无作用。,其他成分医学知识专家讲座,第40页,（,7,）沉淀反应,与酸作用：蛋白质与鞣质、三氯醋酸、苦味酸、硅钨酸等反应产生不溶性物质。,与金属盐作用：蛋白质与各种金属盐如氯化高汞、硫酸铜等反应产生沉淀。,（,8,）颜色反应,Biuret,反应：蛋白质在碱性溶液中与,稀硫酸铜,溶液作用，产生红色或紫红色。,Dansyl,反应：分子中末端氨基在碳酸氢钠溶液中与,1-,二甲氨基萘,5-,磺酰氯,反应生成对应磺酰胺衍生物，显黄色荧光,其他成分医学知识专家讲座,第41页,3.,蛋白质与酶提取与分离,普通采取水或,5%,8%,氯化钠水溶液提取蛋白质,其他成分医学知识专家讲座,第42页,1,分级沉淀法分离,（,1,）有机溶剂分级沉淀法,溶剂：,EtOH,MeOH,其他成分医学知识专家讲座,第43页,（,2,）无机盐分级沉淀法,其他成分医学知识专家讲座,第44页,（,3,）,pH,分级沉淀法,利用蛋白质在等电点时溶解度最小原理改变,pH,值进行沉淀。,其他成分医学知识专家讲座,第45页,透析法,除去粗蛋白中,盐类及其它小分子杂质,超速离心法,不一样分子量蛋白质经超速离心,，其沉降速度有显著差异，借以分离不一样分子量蛋白质混合物。,色谱法,惯用色谱法有离子交换色谱法、葡聚糖凝胶色谱法等。,其他成分医学知识专家讲座,第46页,加热沉淀试验,Biuret,反应,Solway purple,反应,3.,蛋白质与酶检识,薄层吸附剂：硅胶,G,展开剂：氯仿,-,甲醇（或丙酮）（,9:1,）,显色剂：,2%,茚三酮溶液,其他成分医学知识专家讲座,第47页,天花粉蛋白提取,其他成分医学知识专家讲座,第48页,Thank You!,其他成分医学知识专家讲座,第49页,第十三章,中药复方,药效物质基础研究,其他成分医学知识专家讲座,第50页,复方,原意：以两个或两个以上单方组成方剂,金人成无己,伤寒明理论,序,当代人所说复方：,由两味或两味以上中药组成。,六味地黄丸、麻黄汤、四君子汤,其他成分医学知识专家讲座,第51页,第一节 研究意义及必要性,中药复方物质基础研究,1,、是中药复方研究关键问题,2,、有利于阐释中医药理论,3,、可搭建中西医结合纽带和桥梁,4,、中药当代化必经路径,5,、促进中药制剂等相关学科发展,其他成分医学知识专家讲座,第52页,第二节 研究进展,一、中药复方配伍理论物质基础研究,四逆汤,伤寒论,中回阳救逆代表方,生脉散,半夏泻心汤配伍,四物汤,白头翁汤,其他成分医学知识专家讲座,第53页,二、中药复方化学成份或有效部位分离判定,补阳还五汤（临床用于治疗缺血性中风后遗症）,活性成份：异黄酮类和紫檀烷类,银翘散,抗病毒效部位群：黄酮类化合物,有机成份和无机成份配合物,其他成分医学知识专家讲座,第54页,三、中药复方提取分离新技术应用,超声波提取法,超临界流体萃取法,大孔吸附树脂,超滤技术,半仿生提取法,其他成分医学知识专家讲座,第55页,四、中药复方定性、定量研究,（一）依据化学反应定性,（二）薄层色谱法定性,（三）指纹图谱检验,（四）中药复方定量分析,其他成分医学知识专家讲座,第56页,第三节中药复方药效物质基础研究思绪与方法探讨,一、指导思想,既要认识中药复方完整性和复杂性，又要明确本事域研究必须引进当代科学技术和方法，才能促进学术进步，促进中医药发展。,其他成分医学知识专家讲座,第57页,二、坚持化学成份和药理研究相结合标准,三、中药复方血清靶成份研究,四、中药复方中化学物种形态和生物活性研究,五、其它新思绪,1.,采取化学剂量学方法进行研究,2.,组合化学研究,3.,体内代谢化学成份研究,其他成分医学知识专家讲座,第58页,