病原微生物实验室基础生物安全操作规程.docx

病原微生物实验室基础生物安全操作规程
实验室标本的收集、运输和处理不当，会带来使相关人员感染的危险。
标本容器：
标本容器可以是玻璃的，但最好使用塑料制品。标本容器应当坚固，正确地将盖子或塞子盖好后应无泄漏。在容器外部不能有残留物。容器上应当正确地粘贴标签以便于识别。标本的要求或说明书不能够卷在容器外面，而是要分开放置，最好放置在防水的袋子里。
标本的收集、接收和标记：
需要接收大量标本的实验室应当安排专门的房间或空间并：
1. 始终遵循标准防护方法，所有操作均要戴手套。
2. 应当由受过培训的人员来采集病人或动物的血样。
3. 在静脉抽血时，应当使用一次性的安全真空采血管取代传统的针头和注射器，用完后自动废弃针头。
4. 对每个标本作唯一性标识。
5. 装有标本的试管应置于适当容器中运至实验室，在实验室内部转运也应这样。检验申请单应当分开放置在防水袋或信封内。
6. 接收人员不应打开这些袋子。
标本在设施内的传递：
为了避免意外泄漏或溢出，应当使用盒子等二级容器，并将其固定在架子上使装有标本的容器保持直立。二级容器可以是金属或塑料制品，应该可以耐高压灭菌或耐受化学消毒剂的作用。密封最好有一个垫圈，要定期清除污染。
打开标本及处理：
接收和打开标本的人员应当了解标本对身体健康的潜在危害，并接受过如何采用标准防护方法的培训，尤其是处理破碎或泄漏的容器时更应如此。
标本打开处理时：
1. 推荐在生物安全柜内打开标本管。
2. 必须戴手套，并建议对眼睛和黏膜进行保护（护目镜或面罩）。
3. 打开标本管时，应用纸或纱布抓住塞子以防止喷溅。
避免传染性物质的注入
1. 通过认真练习和仔细操作，可以避免破损玻璃器皿的刺伤所引起的接种感染。应尽可能用塑料制品代替玻璃制品。
2. 锐器损伤（如通过皮下注射针头、巴斯德玻璃吸管以及破碎的玻璃）可能引起意外注入感染性物质。
3. 以下两点可以减少针刺损伤：
（a）减少注射器和针头的使用（可用一些简单的工具来打开瓶塞，然后使用吸管取样而不用注射器和针头）；
（b）在必须使用注射器和针头时，采取锐器安全装置。
4. 不要重新给用过的注射器针头戴护套。一次性物品应丢弃在防/耐穿透的带盖容器中。
血清的分离
1. 只有经过严格培训的人员才能进行这项工作。
2. 操作时应戴手套以及眼睛和黏膜的保护装置。
3. 规范的实验操作技术可以避免或尽量减少喷溅和气溶胶的产生。血液和血清应当小心吸取，而不能倾倒。严禁用吸液。
4. 移液管使用后应完全浸入消毒液中。移液管应在消毒液中浸泡适当的时间，然后再丢弃或灭菌清洗后重复使用。
5. 带有血凝块的废弃标本管，在加盖后应放在适当的防漏容器内高压灭菌和/或焚烧。
6. 应备有适当的消毒剂来清洗喷溅和溢出标本。
对血液和其他体液、组织及排泄物的标准防护方法
设计标准防护方法（其中包括“常规预防措施”）以降低已知或未知感染源的微生物传播危险。
玻璃器皿和“锐器”
1. 尽可能用塑料制品代替玻璃制品。只能用实验室级别（硼硅酸盐）的玻璃，任何破碎或有裂痕的玻璃制品均应丢弃。
2. 不能将皮下注射针作为移液管使用。
用于显微镜观察的盖玻片和涂片
用于显微镜观察的血液、唾液和粪便标本在固定和染色时，不必杀死涂片上的所有微生物和病毒。应当用镊子拿取这些东西，妥善储存，并经清除污染和/或高压灭菌后再丢弃。
清除污染
建议使用次氯酸盐和高级别的消毒剂来清除污染。一般情况可使用新鲜配制的含有效氯1 g/L的次氯酸盐溶液，处理溢出的血液时，有效氯浓度应达到5g/L。戊二醛可以用于清除表面污染。
培养皿、试管和试剂瓶
由于没有明确的事故发生及明显的溢出物，因此不能确定打开的平板、试管及试剂瓶里的一些微生物体是否会引起实验室感染。这些很高的传染因子中很有可能有一些传染病会发生。当打开存在真菌类的平板、试管及瓶子时需格外小心，因为在操作中可能会释放出大量胞子。一些培养物应该在生物安全柜内进行操作。在吸取液体培养物前，为确保它成为均一的悬液，应给予振动混匀。剧烈的摇动将产生大量的气溶胶。轻微的打旋可以成为均一的悬液，但仍伴有微量的气溶胶产生。当液体培养物恢复原状停留片刻后再打开容器时，气溶胶产生减少。将消毒后热的金属接种环或针插入液体或斜面培养物会产生飞溅并产生气溶胶。为减少气溶胶的产生，金属接种环应在空气中冷却，或在容器内壁，或在繁殖物培养的琼脂表面没有物体生长的地方接触一下进行冷却。
在粗糙不平整的培养基上用接种环或针划线接种培养物会导致气溶胶的产生。如果培养基表面光滑整洁，通常是不会产生气溶胶的。丢弃粗糙不平整的培养基是好的方法。
有盖培养皿内的培养物脱出的水里通常存在活的细小微生物，并且在倒转平板的盖子和边缘之间形成一层膜。当打开平板时这层膜破裂，释放出气溶胶。对于盖子与边缘只有三个接触点的塑料有盖培养皿可能减少危害物。使用完全干燥的平板也能减少这种风险。如果平板明显潮湿，则应在生物安全柜内打开。打开有螺旋帽的瓶子和带塞的试管时会产生看不见的气溶胶。这是因为在打开塞子或盖时，感染性液体在塞子边缘处形成的那层膜被破坏，产生了气溶胶。振动或离心后立即取下长颈瓶、瓶子、离心管的棉花塞子或塞盖，产生气溶胶导致环境污染。长颈瓶或离心管不处于垂直状态，去除湿的瓶塞也会产生危害。此外，离心时会产生微量的泡沫，瓶塞很可能会被少许弄湿。由于这些可能性，因此应在生物安全柜内打开液体感染性培养物及危害物质，同时穿戴手套、长袖实验室工作服，这是很好的安全措施。干缩的、有感染性的培养物可聚集在盖子边缘或培养管/长颈瓶的壁上，当受到干扰时会扩散到空气里。装有干粉状危害物的容器应在生物安全柜内打开。