药物分析重点内容.docx

药物分析重点内容
绪论
药物：是指用于预防、治疗，诊断人的疾病，有目的地调节人的生理机能并规定有适应症或者功能主治、用法和用量的物质。
药品：通常是指药物经一定的处方和工艺制备而成的制剂产品，是可供临床使用的商品。
药物分析：是利用分析测定手段，发展药物的分析方法，研究药物的质量规律。对药物进行全面检验和控制的科学。

第一章 药品质量研究的内容和药典概况
药品质量研究的目的：为了制定药品标准，加强对药品质量的控制及监督管理，保证药品的质量均一并达到用药要求，保证用药的安全、有效和合理。
检查是对药品的安全性，有效性，均一性和纯度四个方面进行验证。
制剂的规格：指每一支、片或其他每一个单位制剂中含有主药的重量或含量或装量，即制剂的标示量。
标准物质：指供药品检验中使用的，具有确定特性量值，用于校准设备、评价测量方法、给供试药品赋值或者鉴别用的物质。
标准品：指用于生物检定或效价测定的标准物质，其特性量值按效价单位IU或重量单位ug计，以国际标准物质进行标定。
称取：0.1g , 0.06-0.14g; 2g ,1.5-2.5g;2.0g,1.95-2.05g;2.00g,1.995-2.005g (4舍6入5成双)
精密称定：准确到所取重量的千分之一
约：指取用量不得超过规定量的±10％
恒重：指供试品连续两次干燥或炽灼后称重的差异在0.3mg以下的重量。
空白试验：指在不加供试品或以等量溶剂代替供试液的情况下，按同法操作所得的结果。
手性药物用：单晶X射线衍射 不同晶型：粉末X射线衍射
药品中文名须按照《中国药品通用名称》收载的名称及其命名原则命名。
没有INN名称的药物，可根据INN命名原则进行英文名命名。
常用鉴别试验的方法和特点： 化学，色谱，光谱或生物学方法等。
1. 要有一定的专属性，灵敏性和简便性
2. 尽可能采用药典已收载的方法
3. 一般选用2-4种不同类型的方法，化学法和仪器法相结合，互相取长补短
4. 原料药应侧重于具有指纹性的光谱学方法，制剂应侧重于抗干扰的专属性色谱方法

第二章 药物的鉴别实验
一般鉴别实验：是依据某一类药物的化学结构或理化性质的特征，通过化学反应来鉴别药物的真伪。（只能证实是某一类药物，而不能证实是哪一种药物）
1有机氟化物的鉴别
经氧瓶燃烧法破坏，被碱性溶液吸收成无机氟化物，和茜素氟蓝、硝酸亚铈在PH4.3溶液中形成蓝紫色络合物。
2有机酸盐
水杨酸盐 和三氯化铁生成配位化合物，中性红色，弱酸紫色。
加稀盐酸，析出白色水杨酸沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液中溶解。
酒石酸盐 加氨制硝酸银试液数滴，水浴加热，试管内壁成银镜。
3芳伯氨基反应
加稀盐酸煮沸，加等体积的亚硝酸钠和脲溶液数滴，振摇1分钟，滴加碱性B-萘酚试液数滴，生成由粉色到猩红色沉淀。
4托烷生物碱类
发烟硝酸5滴，水浴蒸干，得黄色残渣，放冷，加乙醇2-3滴湿润，加固体氢氧化钾一粒，显深紫色。
5无机金属盐
焰色反应 钠盐鲜黄色 钾盐紫色 钙离子砖红色 钡离子黄绿色 绿色玻璃中透视蓝色
铵盐 加过量的氢氧化钠试液后，加热，即分解，发生氨臭；遇到润湿的红色石蕊试纸，变蓝，并能使硝酸亚汞试液润湿的滤纸显黑色。
6无机酸根
氯化物 法一：用稀硝酸酸化后，滴加硝酸银，生成白色凝乳状沉淀；分离，沉淀加氨试液溶解，再加稀硝酸酸化后，沉淀再次生成。
法二：加和供试品等量的二氧化锰，混匀，加硫酸润湿，缓慢加热，即产生氯气，能使润湿的碘化钾试纸变蓝。
硫酸盐 法一：加氯化钡试液，产生白色沉淀；分离，沉淀在硝酸或盐酸中均不溶解。
法二：加醋酸铅试液，产生白色沉淀，分离；沉淀在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解。
法三：加盐酸，不生成白色沉淀（和硫代硫酸盐区别）
硝酸盐 法一：加和供试品等量的硫酸，小心混合，冷却后，沿管壁加硫酸亚铁试液，分层，接界面显棕色。
法二：加硫酸和铜丝，加热，发出红棕色的蒸气。
法三：滴加高锰酸钾试液，紫色不褪去（和亚硝酸盐区别）
专属鉴别实验：是根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性不同，选用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪。
区别：一般鉴别试验是以某些类别药物的共同化学结构为依据，根据其相同的物理化学性质进行药物真伪的鉴别，以区别不同类别的药物。而专属鉴别试验，则是在一般鉴别试验的基础上，利用各种药物的化学结构差异，来鉴别药物，以区别同类药物或具有相同化学结构部分的各个药物单体，达到最终确证药物真伪的目的。
一、 化学鉴别法
1. 呈色反应鉴别法
1.酚羟基的三氯化铁呈色反应
2.芳伯氨基的重氮化-偶合反应
3.托烷生物碱类的Vitali反应
4.肾上腺皮质激素类的四氮唑反应
5.含羰基结构的苯肼反应
6.氨基苷及氨基糖苷类的茚三酮反应
7.氨基醇结构的双缩脲反应
2. 沉淀生成反应鉴别法
1.丙二酰脲类的硝酸银反应
2.氯化物的银盐沉淀反应
3.含氮杂环类的生物碱沉淀剂
3. 荧光反应鉴别法
硫酸奎宁的稀硫酸溶液显蓝色荧光
4. 气体生成反应鉴别法
1. 酰胺类药物经强碱加热产生氨气（巴比妥类药物）
2. 含硫的药物经强酸处理后加热产生硫化氢气体（盐酸雷尼替丁）
5. 使试剂褪色的鉴别法
司可巴比妥钠的碘试液反应
二、 光谱鉴别法
1. 测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长；
2. 规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸光度；
3. 规定吸收波长和吸收系数法；
4. 规定吸收波长和吸收度比值法；
5. 经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特征。
三、 色谱鉴别法
TLC薄层色谱

第三章药物的杂质检查
药物杂质的来源：1生产过程中引入的杂志 2贮藏过程中引入的杂质
药物杂质的分类：1按来源分为一般杂质和特殊杂质
一般杂质：是指在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质。
特殊杂质：是指在特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质，也常称为有关物质，这类杂质随药物的不同而不同。
2按毒性分为毒性杂质（重金属和砷盐）和信号杂质（信号杂质一般无毒，但其含量可反映出药物的纯度、生产工艺水平以及生产过程中的问题。）
杂质限量：是指药物中所含杂质的最大允许量。
杂质限量的控制方法：限量检查法 采用对照法 灵敏度法 比较法
定量测定法
杂质的常用检查方法：色谱方法
1薄层色谱法TLC
（1） 杂质对照品法：适用于已知杂质并能制备杂质对照品的情况。
（2） 供试品溶液的自身稀释对照法：适用于杂质的结构不确定；或者虽然杂质结构已知，但是没有杂质对照品的情况。
（3） 两法并用法：当药物中存在多个杂质时，若已知杂质有对照品，则采用杂质对照品法检查；共存的未知杂质或没有对照品的杂质，则可同时采用供试品溶液的自身稀释对照法检查。
（4） 对照药物法：当无适合的杂质对照品，或者是供试品显示的杂质斑点颜色和主成分斑点颜色有差异，难以判断限量时，可采用和供试品相同的药物作为对照。
2高效液相色谱法
（1）外标法：适用于有杂质对照品，而且进样量能够精确控制的情况。
（2）加校正因子的主成分自身对照法：仅适用于已知杂质的控制。
（3）不加校正因子的主成分自身对照法：仅适用于没有杂质对照品的情况。
3气相色谱法 药物中挥发性杂质的检查
4毛细管电泳法 多肽，酶类药物中杂质的检查。
药物中一般杂质的检查：
一、 氯化物检查法
1. 原理：药物中的微量氯化物在硝酸酸性条件下和硝酸银反应，生产氯化银胶体微粒而显白色浑浊，和一定量的标准氯化钠溶液在相同条件下产生的氯化银浑浊程度进行比浊。
2. 方法：供试品→加水溶解→加稀硝酸→加水稀释
加入硝酸银试液，比浊
适量标准氯化钠溶液→加稀硝酸→加水稀释
3. 注意事项：加硝酸可避免弱酸银盐的干扰，且可加速氯化银沉淀的生成并产生较好的乳浊；供试品若带有颜色，可采用内消色法消除干扰（供试品＋硝酸银后过滤＋标准氯化钠作为对照）
二、 铁盐检查法
1. 原理：铁盐在盐酸酸性溶液中和硫氰酸盐作用生成红色可溶性的硫氰酸铁配离子，和一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色。
2. 方法：供试品→加水溶解→加稀盐酸和过硫酸铵→加水稀释
适量标准铁溶液→加稀盐酸和过硫酸铵→加水稀释
分别加过量硫氰酸铵溶液，加水定量后比色
3. 注意事项：在盐酸酸性条件下，可防止三价铁离子的水解；加入过硫酸铵氧化剂既可将供试品中的二价铁氧化为三价铁，又可以防止由于光线使硫氰酸铁还原或分解褪色；加入过量的硫氰酸铵，不仅可以增加生成配位离子的稳定性，提高反应灵敏度，还能消除其他阴离子和铁盐形成配位化合物而引起的干扰。
三、 重金属检查法
第一法 硫代乙酰胺法：适用于溶于水，稀酸或和水互溶的有机溶剂，并且不含有可和金属离子强配位基团的药物。
1. 原理：硫代乙酰胺在弱酸性PH=3.5条件下水解，产生硫化氢，和重金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物混悬液，和一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较。
2. 方法：甲管（标准管）：准铅溶液→加入醋酸盐缓冲液（PH3.5）→加水稀释定容
乙管（供试品管）：供试品溶液稀释定容
丙管（标准加样管）：供试品→加水溶解→标准铅溶液→加入醋酸盐缓冲液（PH3.5）→加水稀释定容
分别加入硫代乙酰胺试液比色
结果：当丙管颜色不浅于甲管使，乙管的颜色和甲管比，不得更深。
3. 注意事项：加硝酸防止铅盐水解，便于保存；供试品若带有颜色，用外消色法消除影响（在加硫代乙酰胺试液前，在甲管滴加少量稀焦糖溶液或其他带颜色无干扰的溶液，使之和乙管，丙管保持颜色一致。）；供试品若用强酸溶解，在加硫代乙酰胺试液前应先加氨水至溶液对酚酞指示液显中性，在加醋酸缓冲液调节酸度。
第二法 炽灼后的硫代乙酰胺法：适用于难溶于水，稀酸或和水互溶有机溶剂的有机药物，以及含有可和金属离子强配位基团的芳环，杂环药物。
1. 原理：重金属可能会和含有强配位键的芳环、杂环药物形成牢固的价键作用，影响直接溶样检查；或者提供试品不溶解，可能包裹重金属。这时，需要将供试品炽灼破坏为重金属的氧化物残渣，并加硝酸进一步破坏，蒸干。加盐酸转化为易溶于水的氯化物，再按第一法进行检查。
2. 方法：供试品炽灼破坏后，加硝酸进一步破坏，蒸干，加盐酸转化为易溶于水的氯化物，再按第一法检查。
3. 注意事项：温度越高，重金属损失越多；加硝酸加热处理后，必须蒸干，除尽氧化氮，否则亚硝酸可氧化硫化氢析出硫，影响比色。
第三法 硫化钠法：本法适用于溶于碱性水溶液而难溶于稀酸或在稀酸中即生成沉淀的药物。
原理：在碱性介质中，以硫化钠为沉淀剂，使铅离子生成硫化铅微粒的混悬剂，和一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，判断供试品中重金属是否符合限量规定。
四、砷盐检查法
砷盐为毒性杂质，须严格控制其限量
古蔡氏法
1. 原理： 金属锌和酸作用产生新生态的氢，和药物中微量砷盐反应生成具挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，可用于砷盐的检查。
2. 方法：标准砷斑的制备 标准砷溶液→加盐酸，水→加碘化钾试液，酸性氯化亚锡试液→加入锌粒→水溶45min
样品砷斑的制备：供试品溶液→加盐酸，水→加碘化钾试液，酸性氯化亚锡试液→加入锌粒→水溶45min
比较砷斑颜色
3. 注意事项：碘化钾及氯化亚锡的催化作用：1.加入碘化钾及氯化亚锡将五价砷还原为三价砷；2.产生的锌离子能形成稳定的配位离子，有利于生成砷化氢的反应不断进行；3.氯化亚锡可和锌作用，在锌粒表面形成锌锡齐，起去极化作用，从而使氢气均匀而连续的发生；4.氯化亚锡和碘化钾可抑制锑化氢的生成；醋酸铅棉花吸收硫化氢气体；含硫药物的预处理：供试品若为硫化物，亚硫酸盐，硫代硫酸盐等，在酸性溶液中生成硫化氢或二氧化硫气体，干扰砷斑检查。预先加硝酸湿法消化处理，使硫化物氧化成硫酸盐，可消除干扰。
五、干燥失重测定法
1. 常压恒温干燥法：本法适用于受热较稳定的药物105℃
2. 减压干燥法和恒温减压干燥法：本法适用于熔点低或受热分解的供试品
减压干燥器 恒温减压干燥箱
3. 干燥剂干燥法：本法适用于受热分解或易升华的供试品。
常用干燥剂：变色硅胶 五氧化二磷 硫酸
六、水分测定法
1. 费休氏法原理：碘氧化二氧化硫为三氧化硫时，需要一定量的水分参和反应，根据定量反应关系和消耗碘的重量，可计算出参和反应的水分含量。
无水吡啶和无水甲醇既参和反应又发挥溶剂的作用；反应完毕后多余的游离碘呈现红棕色，即可确定为终点。
2. 费休氏试液的配制：碘+二氧化硫+无水吡啶+无水甲醇
七、炽灼残渣检查法
炽灼残渣是指有机药物或挥发性无机药物，在硫酸存在的条件下，进行炭化和炽灼后，所残留的非挥发性的硫酸盐灰分。通常用于有机药物中非挥发无机杂质的检查和控制。
1. 方法：取供试品，置已炽灼至恒重的坩埚中，加硫酸使润湿，缓缓低温加热至炭化，放冷至室温，精密称定后，再在700-800℃炽灼至恒重，即得。
2. 注意事项：一般应使炽灼残渣量为1-2mg,残渣限量一般为0.1％-0.2％
八、易炭化物检查法
药物中存在的遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂质称为易炭化物。

第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析
基本结构： 1.邻羟基苯甲酸类（水杨酸类）水杨酸 阿司匹林
2.芳基丙酸类 布洛芬
3.吲哚乙酸类 吲哚美辛 4.其他甾体类 对乙酰氨基酚
理化性质：1.酸性游离的羧基
2.水解性：阿司匹林和双水杨酯具有酯键，对乙酰氨基酚具有酰胺键
3.吸收光谱特征
4.基团或元素特征：酮洛芬的二苯甲酮可和二硝基苯肼缩合显色
鉴别实验：
一、 和三氯化铁反应
1. 水杨酸反应 水杨酸的水溶液加三氯化铁试液，即生成紫堇色配位化合物。
中性或弱酸性（PH=4-6）条件下进行；本反应极为灵敏，宜在稀溶液中进行。
2. 酚羟基反应 对乙酰氨基酚的水溶液加三氯化铁试液即显蓝紫色。
二、 缩合反应
酮洛芬具有的二苯甲酮结构，在酸性条件下可和二硝基苯肼缩合成橙色偶氮化合物。
三、 （水解后）重氮化-偶合反应
对乙酰氨基酚具有潜在的芳伯氨基，在稀盐酸中加热水解生成氨基酚，后者具有游离的芳伯氨基，在酸性溶液中和亚硝酸钠试液进行重氮化反应，生成的重氮盐再和碱性B-萘酚偶合生成红色偶氮化合物。
四、 其他反应
（一） 水解反应
阿司匹林和碳酸钠试液加热水解，得到水杨酸钠及醋酸钠，加过量稀硫酸酸化后，则生成白色水杨酸沉淀，并发出醋酸的臭气、
（二） 元素反应
1. 氯元素 双氯芬酸钠和碱共热产生氯化物
2. 硫元素 美洛昔康高温分解产生硫化氢气体，遇醋酸铅生成硫化铅黑色沉淀。
有关物质的检查：（游离水杨酸）简答题
ChP2005曾用稀硫酸铁铵溶液显色反应检查游离水杨酸。但由于在供试品溶液制备过程中阿司匹林可发生水解产生新的游离水杨酸，所以2010年药典采用1％冰醋酸甲醇溶液制备供试品溶液，以防阿司匹林水解，同时采用高效液相色谱法检查。用十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)为填充剂，按外标法以峰面积计算，游离水杨酸不得过0.1％。
含量测定：
(一)直接滴定法（原料药测定法）
1.原理：将药物溶于中性乙醇、甲醇或丙酮中，以酚酞、酚红或酚磺酞为指示剂，用氢氧化钠滴定液直接滴定。
2.注意事项：(1)滴定在不断振摇下稍快进行，防止局部碱液浓度过高导致阿司匹林水解；(2)受阿司匹林水解产物水杨酸和醋酸干扰，故不适用于水杨酸含量高的样品。
(二)水解后剩余量滴定法
1.方法：加入定量过量的氢氧化钠滴定液，加热使酯键水解后，再用酸滴定液回滴定剩余的氢氧化钠滴定液，可显著提高测定的准确度和精密度。

第七章 苯乙胺类拟肾上腺素药物的分析
基本结构：
肾上腺素 麻黄碱
理化性质：1.酚羟基特性：邻苯二酚结构，可和重金属离子配位呈色，不稳定。
2.弱碱性：烃氨基侧链 3.旋光性 4.紫外吸收特征
鉴别实验：
一、和铁盐的反应
具有酚羟基取代的本类药物，可和三价铁离子配位显色(大多为绿色)；加入碱性溶液即变色(大多为紫色)，随即被高铁离子氧化发生颜色变化(大多为紫红色)。选择
1.肾上腺素：加盐酸溶解，三氯化铁(翠绿色)，再加氨试液(紫色)，最后变成紫红色
2.盐酸异丙肾上腺素：三氯化铁(深绿色)，加新制的5％碳酸氢钠溶液，即变蓝色，然后变红色
3.重酒石酸去甲肾上腺素：三氯化铁(翠绿色)，再缓缓加入碳酸氢钠试液，即显蓝色，最后变成红色
盐酸去氧肾上腺素：三氯化铁(紫色)
二、和甲醛-硫酸反应
具有酚羟基取代的本类药物，可和甲醛在硫酸中反应，形成具有醌式结构的有色化合物。
肾上腺素-红色；异丙肾上腺素-棕色，暗紫色；去甲肾上腺素-淡红色；去氧肾上腺素-玫瑰红→橙红→深棕红
三、还原性反应
易被碘、过氧化氢、铁氰化钾等氧化剂氧化而呈现不同的颜色。
1.肾上腺素+双氧水→肾上腺素红+放置→棕红色多聚体
2.异丙肾上腺素+碘→异丙肾上腺素红+硫代硫酸钠→淡红色
3.去甲肾上腺素+酒石酸氢钾饱和液+碘试液+硫代硫酸钠→无色或微红色或淡紫色
四、氨基醇的双缩脲反应
盐酸麻黄碱+硫酸铜和20％氢氧化钠→显蓝紫色→加乙醚放置→乙醚层显紫红色，水层变成蓝色。
盐酸去氧肾上腺素+硫酸铜和氢氧化钠→显紫色→加乙醚放置→乙醚层应不显色。
五、脂肪伯胺的Rimini试验
ChP2015重酒石酸间羟胺+亚硝基铁氰化钠+丙酮+固体氢氧化钠，60℃水浴1min→显红紫色
盐酸多巴胺也可用此方法鉴别
杂质检查：酮体杂质用紫外分光光度法
含量测定：
一、非水溶液滴定法
基本原理：肾上腺素等为游离碱，直接和高氯酸反应。盐酸多巴胺等盐类药物的高氯酸滴定过程，实际上是一个置换滴定，即强酸(HClO4)置换出和有机碱结合的较弱的酸(HA)。
注意事项：1.适用范围：适用于pKb＞8的有机弱碱性药物及其盐类的含量测定；pKb为8-10时，宜选用冰醋酸为溶剂；pKb＞10时，冰醋酸，醋酐为溶剂；pKb＞12时，醋酐为溶剂。
2.酸根的影响：高氯酸＞氢溴酸＞硫酸＞盐酸＞硝酸＞磷酸
在非水介质中，高氯酸的酸性最强，有机弱酸碱均用此反应。
测定卤醛盐时，置换出的氢卤酸相当强，影响滴定终点。可加入醋酸汞冰醋酸溶液，使其生成醋酸中难解离的卤化汞沉淀。
3.滴定剂的稳定性：供试品和滴定液温度差在10℃
ChP2015中硫酸沙丁胺醇的含量测定，要注意有机碱的硫酸盐，因硫酸在滴定液中酸性很强，只能滴定至硫酸氢根。
二、溴量法
ChP2015盐酸去氧肾上腺素用此方法。

第八章 对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物的分析
结构：对氨基苯甲酸酯类(盐酸普鲁卡因，盐酸丁卡因无芳伯氨基) 酰苯胺类(盐酸利多卡因，盐酸罗哌卡因)
理化性质：1.芳伯氨基特性：对氨基苯甲酸酯具有芳伯氨基，有重氮化-偶合反应；酰苯胺类药物在酸性溶液中，芳酰胺基可水解为芳伯氨基。
2.水解性：对氨基苯甲酸酯有酯键，易水解
3.弱碱性：脂烃胺侧链为叔胺氮原子(除苯佐卡因)
4.和重金属离子反应特征：酰胺基上的氮可和水溶液在铜离子或钴离子络合，生成有色的配位化合物沉淀。此沉淀可溶于三氯甲烷等有机溶剂而呈色。
5.吸收光谱特性
鉴别实验：
一、重氮化-偶合反应
橙黄色-猩红色沉淀
盐酸丁卡因无此反应，但在酸性溶液中和亚硝酸钠反应，生成N-亚硝基化合物的乳白色沉淀。可和苯佐卡因，普鲁卡因，普鲁卡因胺区别。
二、和金属离子反应
利多卡因的鉴别：
1.ChP2015盐酸利多卡因+碳酸钠试液+硫酸铜→蓝紫色配位化合物→转入三氯甲烷中显黄色。
2.在酸性条件下和氯化钴试液反应，生成亮绿色细小钴盐沉淀。
3.利多卡因的水溶液加硝酸酸化后，加硝酸汞煮沸，显黄色。对氨基苯甲酸酯类药物显红色或橙黄色，可和之区别。
盐酸普鲁卡因胺的鉴别：可被浓的过氧化氢氧化成羟肟酸，再和三氯化铁作用形成配位化合物羟肟酸铁。紫红色→暗棕色至棕黑色。
含量测定：
亚硝酸钠滴定法
1.原理：芳伯氨基或水解后生成芳伯氨基的药物在酸性溶液中和亚硝酸钠定量发生重氮化反应，生成重氮盐，可用永停滴定法指示反应终点。
2.测定的主要条件：(1)加入适量溴化钾加快反应速度，使得NO^+浓度增大(2)加过量盐酸加速反应：有利于1.重氮化反应速度加快2.重氮盐在酸性溶液中稳定3.防止生成偶氮氨基化合物而影响测定结果。但是，酸度过大1.阻碍芳伯氨基的游离2.使亚硝酸分解。所以，芳胺类药物和酸的摩尔比为1：(2.5~6)(3)反应温度高，加快反应速度，但重氮盐分解也会加快。可在室温(10~30℃)下进行，其中15℃结果较准确。(4)滴定速度：为避免亚硝酸挥发和分解，滴定速度不宜太快；滴定时宜将滴定管尖端插入液面下约2/3处，一次将大部分亚硝酸钠滴定液在搅拌条件下迅速加入；将滴定管尖端提出液面，用少量水淋洗，再缓缓滴定；在近终点时，须在最后一滴加入后，搅拌1~5分钟，再确定终点是否真正达到。
永停滴定法（指示终点滴定法）实验装置

第九章 二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析
结构：基本母核-苯基-1,4-二氢吡啶
理化性质：1.二氢吡啶环的还原性
2.硝基的氧化性：可被还原剂(锌粉)还原为芳伯氨基
3.二氢吡啶环氨基质子解离性
4.光不稳定性
5.旋光性
6.吸收光谱特征
鉴别试验：
一、化学鉴别法
(一)和亚铁盐反应(苯环硝基氧化性)
尼莫地平+乙醇+新制的硫酸亚铁铵+硫酸
(二)和氢氧化钠试液反应(二氢吡啶环氨基质子的解离性)
硝苯地平+丙酮+20％氢氧化钠→橙红色
(三)沉淀反应(弱碱性)
和重金属盐类形成沉淀。
尼莫地平+氯化汞→白色沉淀；尼群地平+碘化铋钾→橙红色沉淀
(四)还原后重氮化-偶合反应
可用于鉴别硝苯地平，显红色。
含量测定：
铈量法(硫酸铈法)
原理：二氢吡啶的还原性→强酸→硫酸铈滴定→四价铈离子黄色→三价铈离子无色
自身可作指示剂，但不灵敏，常用邻二氮菲作指示剂，终点敏锐。
终点时微过量的四价铈离子将指示液中的二价铁离子氧化成三价铁离子，使橙红色消失，以指示终点。
特点：标准溶液稳定；反正简单，副反应少；专属性强；终点敏锐；适用范围广。

第十章 巴比妥及苯二氮卓类镇静催眠药物的分析
第一节 巴比妥类药物的分析
结构：环状酰脲类镇静催眠药
理化性质：
1.弱酸性：1.3-二酰亚胺基团，酮式-烯醇式互变异构
2.水解反应：酰亚胺结构，和碱液共沸，释放出氨气，可使红色石蕊试纸变蓝。用于鉴别异戊巴比妥和巴比妥。
3.和金属离子的反应：丙二酰脲（-CONHCONHCO-）或酰亚胺基团和某些重金属离子，生成有色沉淀。
（1）和银盐的反应：巴比妥类药物分子中的酰亚胺基团，在碳酸钠溶液中，生成钠盐而溶解，再和硝酸银溶液反应，首先生成可溶性的一银盐，加入过量的硝酸银溶液，则生成难溶性的二银盐白色沉淀。
（2）和铜盐的反应：巴比妥类药物和铜吡啶试液反应呈紫堇色或生成紫色沉淀，含硫巴比妥类药物则呈现绿色。
（3）和钴盐的反应：生成紫堇色配位化合物，在无水条件下更灵敏。常用溶剂：无水甲醇或乙醇；钴盐为醋酸钴、硝酸钴或氯化钴；碱以有机碱为好，一般采用异丙胺。
（4）和汞盐的反应：生成白色沉淀，此沉淀能在氨试液中溶解。
4.和香草醛（Vanillin）的反应
巴比妥类药物分子结构中，丙二酰脲基团中的氢比较活泼，可和香草醛在浓硫酸存在下发生缩合反应，生成红棕色产物。
BP2009戊巴比妥的鉴别：戊巴比妥+香草醛+硫酸→混合水浴显棕红色+乙醇→颜色先变为紫色，再变为蓝色。
4. 紫外吸收光谱特征：（1）在酸性溶液中，5,5-二取代和1,5,5-三取代巴比妥类药物不电离，无明显的紫外吸收峰；（2）在PH10的碱性溶液中，发生一级电离，形成共轭体系结构，在240nm波长处有最大吸收峰；（3）在PH13的强碱性溶液中5,5-二取代巴比妥类药物发生二级电离，引起共轭体系延长，导致吸收峰红移至255nm;1,5,5-三取代巴比妥类药物，因1位取代基的存在，故不发生二级电离，最大吸收波长仍位于240nm。
鉴别试验：
（一） 丙二酰脲反应
1. 银盐反应：加碳酸钠，滤过，滤液中加入硝酸盐试液，即生成白色沉淀，振摇，沉淀溶解；继续加过量的硝酸银试液，沉淀不再溶解。（异戊巴比妥）
2. 铜盐反应：供试品加吡啶溶液溶解后加铜吡啶试液，显紫色或生成紫色沉淀。
硫喷妥钠在吡啶试液和铜吡啶试液中，显绿色。
（二） 特征基团反应
1.利用硫元素的鉴别试验 硫代巴比妥类分子中含有硫元素，可在氢氧化钠溶液中和铅离子反应生成白色沉淀；加热后，沉淀转变为硫化铅的黑色沉淀。本试验可供硫代巴比妥和巴比妥类的区别。CHP2015对注射用硫喷妥钠采用此法鉴别。
2.利用不饱和取代基的鉴别试验
（1）和碘试液的反应：加碘试液显棕黄色在5分钟内消失。
司可巴比妥钠和溴试液，也可以发生加成反应，使溴试液褪色。
（2）和高锰酸钾的反应：司可巴比妥钠分子中的烯丙基可将紫色的高锰酸钾还原为棕色的二氧化锰。
3.利用芳环取代基的鉴别试验
（1）硝化反应：和硝酸钾和硫酸共热，生成黄色硝基化合物。
（2）苯巴比妥+硫酸-亚硝酸钠→橙黄色→橙红色
苯巴比妥+甲醛-硫酸→玫瑰红色
含量测定：
银量法
原理：在滴定过程中，巴比妥类药物首先形成可溶性的一银盐，当被测供试品完全形成一银盐后，继续用硝酸银滴定液滴定，稍过量的银离子就和巴比妥类药物形成难溶性的二银盐沉淀，使溶液变浑浊，以此指示滴定终点。
巴比妥类药物：硝酸银+碳酸钠形成银盐再加硝酸银形成二银盐
滴定剂：硝酸银（1:1反应）
溶剂系统：甲醇+3%无水碳酸钠
终点指示：电位法（银-玻璃电极）
溴量法
注意事项：
（1） 防止溴和碘的逸失，平行条件进行空白试验，立即密塞，微开瓶盖。
（2） 淀粉指示液，近终点时加淀粉指示液，继续滴定至颜色消失。
第二节 苯二氮卓类药物的分析
结构：苯环和七元含氮杂环稠合而成的有机药物 理化性质：（1）弱碱性 （2）水解性（形成相应的二苯甲酮衍生物） （3）UV吸收特性
鉴别试验
一 化学鉴别反应
1. 沉淀反应：氯氮卓的盐酸溶液（9→1000），遇碘化铋钾试液，生成橙红色沉淀
阿普唑仑的盐酸溶液遇硅钨酸溶液生成白色沉淀，而和碘化铋钾溶液，生成橙红色沉淀
2. 硫酸-荧光反应：苯二氮卓类药物溶于硫酸后，在紫外光下，地西泮为黄绿色，氯氮卓为黄色。在稀硫酸中颜色略有差异，地西泮为黄色，氯氮卓为紫色。
1
二 特征基团反应
1 氯化物的鉴别反应：本类药物大多为有机氯化物，用氧瓶燃烧法破坏，生成氯化氢，用5％的氢氧化钠吸收，加硝酸酸化，显氯化物反应。CHP2015用此法鉴别地西泮。
2 芳伯胺的反应：此类药物如N1位上未取代者，和盐酸供热水解后，生成芳伯胺，可发生重氮化-偶合反应显色。
氯氮卓和奥沙西泮盐酸溶液（1→2），缓慢加热煮沸，放冷，依次加入亚硝酸钠和碱性B-萘酚试液，生成橙红色沉淀，而后者放置颜色变暗。
四 含量测定
一 非水溶液滴定法
1 非水碱量法
2 非水酸量法
二 紫外分光光度法（常用于制剂含量、含量均匀度及溶出度的测定）
1 对照品比较法
2 吸收系数法
第十一章吩噻嗪类抗精神病药物的分析
吩噻嗪类
结构：硫氮杂蒽母核
理化性质：
1 弱碱性
2 易氧化性（母核具有还原性）
3 和金属离子配合呈色：硫氮杂蒽母核的二价硫可和钯离子配合，生成有色化合物，可用于鉴别和含量测定。其氧化物亚砜和砜则无此反应。
4 紫外光吸收特性（在205 254 300nm三处波长处有最大吸收）
5 红外光吸收特性
二 鉴别试验
1 化学法
(1) 和生物碱沉淀剂反应(1、10位的含氮取代基具有碱性，可和生物碱沉淀剂发生沉淀反应2、测定生成物的熔点，可鉴别本类药物及其制剂)
(2) 氧化显色反应（盐酸氯丙嗪和硝酸生成红色、渐变淡黄色）CHP2015盐酸氯丙嗪
(3) 和钯离子配合呈色反应：该反应不受硫氮杂蒽母核氧化物亚砜和砜的干扰，专属性强CHP2015癸氟奋乃静+氯化钯→红色配合物沉淀
(4) 含卤素取代基反应（1、焰色反应2、显色反应）
(5) 氯化物的鉴别反应
第四节 含量测定
一、 酸碱滴定法
（一） 非水溶液滴定法：国内外药典多采用非水溶液滴定法测定本类药物及其盐酸盐的含量。
二、分光光度法
（一）直接分光光度法（本法适用于纯度较高、杂质及辅料无干扰或干扰易排除的制剂）CHP2015盐酸氯丙嗪片
（二）提取后分光光度法（适用于药物制剂，先用提取法排除辅料的干扰）
盐酸异丙嗪+氨水碱化生成异丙嗪+三氯甲烷提取和盐酸洗涤生成盐酸异丙嗪+挥于三氯甲烷生成异丙嗪残渣+稀硫酸溶液生成硫酸异丙嗪→对照品比较法测定
盐酸异丙嗪口服液的测定
（三）提取后双波长分光光度法（可采用提取后双波长分光光度法消除辅料及氧化物的干扰）盐酸异丙嗪注射液用含量测定
（四）二阶导数分光光度法（提取后分光光度法或提取后分光光度法虽然可以消除吩噻嗪类药物制剂中的辅料和氧化物对含量测定的干扰，但操作繁琐。二阶导数分光光度法在一定条件下可以方便的消除吩噻嗪类药物特征吸收峰附近的干扰吸收）
（五）钯离子比色法（基于硫氮杂蒽母核的硫元素和钯离子之间的配位成色反应，可采用笆篱子比色法测定吩噻嗪类药物制剂的含量。而且该法不受硫氮杂蒽母核氧化物的干扰，专属性强）
三、 高效液相色谱法
（一） 反相高效液相色谱法（是一种常用的分离分析方法，一般以烷基硅烷键合硅胶为固定相，以甲醇或乙腈等有机溶剂和水或缓冲液组成的混合溶剂系统为流动相）（但是，烷基硅烷键合硅胶表面收空间位阻的影响，未烷基化的弱酸性硅醇基和弱碱性吩噻嗪类药物能够发生吸附或离子交换作用，使色谱柱的分离性能下降，表现为吩噻嗪类药物的色谱峰拖尾、保留时间过长（甚至不能被洗脱以抑制碱性药物和弱酸性硅醇基的作用。常用扫尾剂有醋酸铵、三乙胺、二乙胺、乙腈等）
（二） 离子对高效液相色谱法（极性强的吩噻嗪类药物在反相色谱固定相中保留较弱，可以再流动相中加入和呈解离状态的待测组分离子电荷相反的离子对试剂，使之在洗脱中和待测组分离子形成离子对，以增强待测组分在非极性固定相中的保留，从而改善待测组分的色谱保留和分离行为）（常用烷基磺酸盐阴离子对试剂、如戊烷磺酸钠、）
十二章 喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析
喹啉类药物
结构：4-喹啉甲醇类（代表药物喹啉）、4-氨基喹啉类（代表药物氯喹、哌喹、咯萘啶）和8-氨基喹啉类（代表药物伯氨喹）
理化性质：
1 碱性（喹啉环上的氮原子碱性较弱）
2 旋光性（硫酸奎宁为左旋体、硫酸喹尼丁为右旋体）
3 荧光特性（硫酸喹宁和二盐酸奎宁在稀硫酸溶液中均显蓝色荧光）
4 紫外吸收光谱特征
鉴别试验
（一） 绿奎宁反应（奎宁为6-位含绿奎林衍生物，可以发生绿奎宁反应）（硫酸奎宁和二盐酸奎宁的反应机制同上。取其水溶液，加溴试液0.2ml和氨试液1ml，即显翠绿色。加酸呈中性变成蓝色，呈酸性时则为紫红色。翠绿色可转溶于乙醇、三氯甲烷中二不溶于醚，因此Ch2015采用此类反应鉴别硫酸奎宁和二盐酸奎宁）
（二） 光谱特征（1、紫外吸收光谱特征2、荧光光谱特征（利用硫酸奎宁和二盐酸奎宁在稀硫酸溶液中均显蓝色荧光的性质进行鉴别））
（三） 无机酸盐
1 .硫酸盐的鉴别反应（利用硫酸奎宁中的硫酸根显硫酸盐的鉴别反应进行鉴别）
（1） 取供试品溶液，滴加氯化钡试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。
（2） 取供试品溶液，加醋酸铅试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解。
（3）取供试品溶液，加盐酸，不生成白色沉淀（和硫代硫酸钠区别）
2. 氯化物的鉴别反应（取供试品溶液，加稀硝酸使成酸性后，滴加硝酸银试液，即生成白色凝乳状沉淀；分离，沉淀加氨试液即溶解，再加稀硝酸酸化后，沉淀复生成。）取供试品溶液，置试管中，加等量的二氧化锰，混匀，加硫酸润湿，缓缓加热，即发生氯气，能使水湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色
3 .磷酸盐的鉴别
（1） 取供试品的中性溶液，加硝酸银试液，即生成浅黄色沉淀；分离，沉淀在氨试液或稀硝酸中均易溶解。
（2） 取供试品溶液，加氯化铵镁试液，即生成白色结晶沉淀
（3） 取供试品溶液，加钼酸铵试液和硝酸后，加热即生成黄色沉淀，分离，沉淀能在氨试液中溶解。
四 含量测定
硫酸奎宁的含量测定
1mol硫酸奎宁消耗3mol高氯酸滴定液
1mol硫酸奎宁片消耗4mol高氯酸滴定液
青蒿素类药物
结构：青蒿素 双氢青蒿素
理化性质：1.氧化性 2.旋光性 3.水解反应（由于存在内酯，所以可以水解） 4.UV
鉴别试验：
呈色反应
1. 过氧桥的氧化反应（碘化钾试液-淀粉）
2. 羟肟酸铁反应：含有内酯的化合物、羧酸衍生物和一些酯类化合物在碱性条件和羟胺作用，生成羟肟酸，在稀酸中和高铁离子呈色。CHP2015
含量测定：CHP2015中青蒿素原料药常采用HPLC法进行含量测定。
第十三章莨菪烷类抗胆碱药物的分析
莨菪烷生物碱
结构：由莨菪醇和不同的有机酸所成的酯
理化性质：1 水解性 2 碱性（如阿托品的PKb1为4.35，可和硫酸成盐）
3 旋光性（氢溴酸东莨菪碱分子结构中含有不对称碳原子，呈左旋体，阿托品为外消旋体，无旋光性）
鉴别试验
一 、托烷生物碱类的Vitali鉴别反应
阿托品、莨菪碱等莨菪烷类生物碱结构中的酯键水解后生成莨菪酸，经发烟硝酸加热处理转变为三硝基衍生物，再和氢氧化钾的醇溶液和固体氢氧化钾作用脱羧，转化成具有共轭结构的阴离子而显深紫色。
二、 和硫酸-重铬酸钾的反应
本类药物水解后，生成的莨菪酸可和硫酸-重铬酸钾在加热的条件下发生氧化反应，生成苯甲醛，而逸出类似于苦杏仁的臭味。
三、 和生物碱显色剂或沉淀剂的反应
生物碱在酸性水溶液中可和重金属盐类或大分子酸类等沉淀试剂反应，生成难溶性盐、复盐或配合物沉淀（加氢氧化钾试液数滴只发生瞬即消失的类白色浑浊）
CHP2015氢溴酸东莨菪碱的鉴别
四、硫酸盐和溴化物的反应
改善莨菪烷类生物碱药物的水溶液和稳定性，他们大都制成硫酸盐或氢溴酸盐，所以他们的水溶液则分别显硫酸盐或溴化物的鉴别反应
溴化物+硝酸银→溴化银沉淀（淡黄色凝乳沉淀）
溴化物+氯试液→溴游离→三氯甲烷中显黄色/红棕色
有关物质和检查
氢溴酸东莨菪碱的有关物质和检查
1. 酸度 东莨菪碱的碱性很弱，对石蕊试纸几乎不显碱性反应
2 .易氧化物 （主要检查生产过程中引入阿扑东莨菪碱，他们的紫外吸收最大波长红移，可使高锰酸钾溶液褪色）
3.其他生物碱（本品水溶液加入氨试液不得发生浑浊，本品水溶液加入氢氧化钾试液，则有东莨菪碱析出，溶液变浑浊。因东莨菪碱在碱性条件下可水解，生成异东莨