羊病毒病防控技术.ppt

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肉类仍缺口,233,万吨；,奶类缺口,367,万吨。,1,羊产品的数量安全,1.1,人口增多，生活水平提高，需求量加大。,4,我国奶山羊产业的发展概况,2012,年全国奶山羊存栏量达到,1200,万只，比,2007,年增加,260,万只，增长,28%,。,2012,年羊奶产量,124.38,万吨，羊奶占全国奶类总产量的比重为,2.52%,。据初步统计，我国奶山羊主要分布于黄河流域，,2012,年该区域奶山羊存栏量占全国的比重达到,46.4%,，优势区域明显。,5,羊布病、兰舌病、小反刍兽疫、羊痘、羊口疮、羊传染性胸膜肺炎、羊快疫、羊肠毒血症、绵羊巴氏杆菌肺炎、羊链球菌病、炭疽等。,我国羊病死率为,3%,5%,，是发达国家的两倍以上。,1.2,新发再发疫病制约养羊业发展,6,布氏杆菌病,绵羊痒病；,李斯特杆菌病；,羊结核（乳、肉）。,沙门氏菌,肠炎,弓形体,2,羊产品的卫生安全,2.1,食源性疫病影响食品安全,7,羊结核病；,羊布病；,羊炭疽,羊包虫病；,血吸虫病。,2.2,人兽共患病威胁人类健康,8,第一部分 当前规模化羊场疫病防控存在的主要问题,9,（一）当前羊疫病防控的迫切问题,小反刍兽疫,布病与羊结核,口蹄疫,羊的梭菌病,羊痘与羊口疮,绵山羊胸膜肺炎,寄生虫病如棘球蚴、吸虫、绦虫,10,（二）羊疫病诊断及预防产品短缺,-,与羊养殖业发展速度以及健康状况极不适应,2011-2013,年全国各大类动物保健品销售所占比重为：猪约占,40%,，鸡占,50%,，牛羊和其它动物合计占,10%,。,2013,年我国动物疫苗生产情况是：鸡用疫苗约占,80%,，猪用疫苗约占,18%,，牛羊等其它动物疫苗只占,1%,。,诊断用产品少：,2007,年我国生产的动物疫苗,155,种，血清和诊断液等其它类制品只有,9,种；牛羊用诊断产品几乎是空白，而进口产品价格昂贵无力消费，导致临床上不能准确诊断与有效防治。,建议：加大对牛羊病的研究及其生物制品研发的投入,。,11,（三）动物疫病防控的地方技术力量薄弱,行业管理与地方人事任命的矛盾，称职的人力资源难以安排到所需要的岗位。,地方行政执法部门搞创收，有利益冲突，不利于有效执法。,建议：动物防疫检疫队伍实行省以下垂直管理，可望有效解决上述矛盾和问题。,12,（四）布病与结核的防控策略执行不到位,新型检疫方法以及鉴别诊断方法的科学性或实用性，还有待于验证。,发达国家的经验表明，用常规检疫方法将感染率降到千分之几，是不难做到的。,关键,1,：阳性羊应无害资源化利用、,而不应出售。,关键,2,：执法力度，补贴力度。,13,（五）养羊产业方兴未艾,养羊产业正在向规模化、标准化、产业化发展。,养羊产业投入不足，生物安全体系不健全。,从业人员疫病防控意识不强，职业化培训亟待加强。,市场流通检疫监管亟待加强。,14,第,二部分规模化羊场,预防羊病六大措施,15,1、科学饲养管理,俗话说“羊儿壮，百病传不上”，,提供充足优质的饲料，不喂发霉变质饲料。,羊舍卫生：,经常打扫，保持干燥；粪污远离羊舍，堆积发酵；饲料槽、饮水槽及其用具勤刷勤洗。,牢固树立“养重于防，防重于治”的健康养殖理念！,16,17,2,.1实行隔离饲养，防止疾病传播,门口最好设立消毒池、进入羊场更衣换鞋。,一般谢绝同行参观。,怀疑传染病的发病羊（带病菌、病毒）进行早期隔离，或治疗，或淘汰。,2、养羊场应有防疫设施和防疫管理制度,18,2.2 消灭传染源,病死羊尸体深埋,，或发酵床深埋。,病羊的分泌物、呕吐物、排泄物无害化处理。,2、养羊场应有防疫设施和防疫管理制度,19,2.3 消除传染媒介,活的传染者：动物（如老鼠、螺类）；昆虫（如苍蝇、蚊子）。,污染的饲料、饮水、空气、土壤、用具、畜舍。,2、养羊场应有防疫设施和防疫管理制度,20,绿脓杆菌,蓝舌病,羊痘,口蹄疫,结核杆菌,大肠杆菌,布氏杆菌,梅迪,-,维斯纳病,3,、建立以消毒为核心的生物安全,坚固长城,21,3、,严格消毒,机械性消毒,阳光和干燥消毒,高温消毒,化学消毒,生物热消毒,22,化学消毒药的分类,种 类,作用范围,醛类（甲醛、戊二醛等）,各种微生物（高效）,有机氯、有机溴类（二氯、三氯）等,各种微生物（高效）过氧化物类（过氧乙酸、过氧化氢）,粘膜和环境消毒（高效）,烷基化气体消毒剂（环氧乙烷）,各种微生物（高效）,含碘化合物（碘仿等）,皮肤、粘膜消毒（中效）,酚类（酚、甲酚、来苏儿）,浸泡消毒和粘膜消毒（中效）,醇类（乙醇）,皮肤和小器械消毒（中效，作用快）,季铵盐类（新洁尔灭、杜米芬等）,皮肤粘膜和环境消毒（低效，作用快）,酸类和脂类（乳酸、醋酸、水杨酸）,浸泡（低效）,二胍类（洗必泰）,皮肤粘膜、物体表面（低效）,金属制剂（汞盐、铜盐、银制剂）,皮肤粘膜和防腐,其它（高锰酸钾、碱类、染料类）,环境消毒（高效）,23,过氧乙酸溶液（,）,24,戊二醛癸甲溴铵溶液,25,发生传染病时应采取的措施羊群发生普通传染病时，应立即将病羊及可疑感染羊只进行隔离，对已隔离的羊只进行药物治疗。对所有健康羊只及可疑感染羊只，要进行疫苗紧急接种或用药物进行预防；隔离场禁止人、畜出入和接近，并采取随时消毒。用具、饲料、粪尿、排泄物等未经彻底消毒不得运出；病羊并采取随时消毒。用具、饲料、粪尿、排泄物等未经彻底消毒不得运出；病羊尸体要焚烧，远离水源深埋，无害化处理，不得随意抛弃或出售。,发生口蹄疫、羊痘等急性烈性传染病时，应立即向上级兽医部门报告疫情，划定疫区，采取严格的隔离封锁和紧急免疫接种、扑杀病畜等紧急措施，并组织力量尽快扑灭，并根据有关规定在兽医部门的批准下解除疫情。,26,4、按期检疫诊断,禁止到疫区购羊，从非疫区购来的羊也应先隔离饲养,1个月。,对原有羊群要分期分批进行各种方法的检疫。（流行病学、临床症状、病理解剖、病原学及免疫学）,27,羊场重要疫病常规检疫与监测,口蹄疫免疫监测,羊场口蹄疫疫苗接种后每隔3个月需进行一次抗体效价监测，根据抗体效价水平，决定是否进行有针对性疫苗接种和加强免疫，检测方法依国家口蹄疫检测技术进行。,布鲁氏杆菌病检疫,羊场内每年必须进行两次以上布病检疫，于春秋季进行，并建立检疫档案。凝集反应检查阳性羊只，根据疫苗接种情况，再进行鉴别诊断，判定是否为注苗阳性或自然感染阳性，判定为自然感染阳性羊只，需淘汰处理。,检疫技术及方法参照GB/T18646-2002执行。普检采用虎红平板凝集试验。虎红平板凝集试验阳性反应羊只再采用试管凝集试验复检。区别是否注苗阳性，进一步可用补体结合试验或结合利凡诺尔试验进行鉴别。,引进、转运羊只检疫,羊场在引进、转运羊只时必须进行检疫，根据技术条件及区域羊病流行病学情况确定检疫内容，至少进行羊布病的检疫，并出具检疫证明，阴性羊或布病注苗阳性羊只方可出入场。,28,5、打好预防针,根据所在地区的疫病流行情况和规律，确定接种的时机。,必须注射以下,6种苗：,小反刍兽疫弱毒疫苗、山羊痘弱毒疫苗；,O,-,亚,1型,口蹄疫二联灭活疫苗；羊三联四防灭活疫苗；山羊传染性胸膜肺炎氢氧化铝菌苗；炭疽芽孢苗（据实际情况）。,29,羊场,预防免疫接种,目前羊场应开展以下传染病的免疫接种，并建立免疫接种档案。,口蹄疫：山羊、绵羊无论大小羊只，每只肌注口蹄疫,A,、,O,型双价灭活疫苗,1ml,，每年春秋季各免疫一次，根据流行情况可适当进行加强免疫，剂量同上。,炭疽：绵羊、山羊无论大小均皮下注射,号炭疽芽孢苗,1ml,，每年春季免疫接种一次。,布鲁氏菌病：绵羊、山羊无论大小均按,200,亿菌体,/,只，口服接种布氏杆苗,S2,苗，每年春季接种一次。,羊痘病：绵、山羊无论大小皮下注射羊痘弱毒苗,0.5ml,，每年春季接种一次。,羊快疫、羊猝死、肠毒血症、羔羊痢疾：,绵羊无论大小均肌肉或皮下注射羊快疫,羊猝击,肠毒血症三联苗氢氯化铝稀释液,1ml,，每年春季免疫接种一次。,羊传染性支原体性肺炎：山羊、绵羊颈侧皮下注射羊肺炎支原体氢氧化铝灭活苗，成羊,3ml,，,6,个月以内羊,2ml,，每年春季免疫一次。,30,表,1,洼地绵羊种羊免疫程序（仅供参考）,免疫时间,免疫品种,免疫方法,免疫剂量,备注,2,月份,羊痘弱毒疫苗,尾根或股内侧皮内注射,1,头份（,0.5ml,）,3,月份,羊三联四防疫苗,颈部肌肉或皮内注射,1,头份,(5ml),4,月份,口蹄疫疫苗,颈部肌肉注射,1,头份,羊链球菌灭活疫苗,颈部肌肉注射,1,头份,可选,5,月份,羊大肠杆菌灭活疫苗,颈部肌肉注射,1,头份,9,月份,羊三联四防疫苗,颈部肌肉或皮内注射,1,头份,(5ml),10,月份,口蹄疫疫苗,颈部肌肉注射,1,头份,羊链球菌灭活疫苗,颈部肌肉注射,1,头份,可选,11,月份,羊大肠杆菌灭活疫苗,颈部肌肉注射,1,头份,羊传染性胸膜肺炎疫苗,颈部肌肉或皮内注射,1,头份（,6ml,）,可选,31,表,2,洼地绵羊羔羊与商品羊免疫程序（仅供参考）,免疫时间,免疫品种,免疫方法,免疫剂量,备注,出生日,破伤风类毒素,皮下或肌肉注射,按说明使用,15,日龄,羊传染性胸膜肺炎疫苗,颈部肌肉或皮内注射,1,头份（,6ml,）,可选,1,月龄,羊三联四防疫苗,颈部肌肉或皮内注射,1,头份,(5ml),1.5,月龄,羊三联四防疫苗,颈部肌肉或皮内注射,1,头份,(5ml),根据需要,2,月龄,羊痘鸡胚化弱毒疫苗,尾根或股内侧皮内注射,1,头份（,0.5ml,）,羊大肠杆菌灭活疫苗,颈部肌肉注射,1,头份,可选,2.5,月龄,口蹄疫疫苗,颈部肌肉注射,1,头份,3,月龄,羊链球菌灭活疫苗,颈部肌肉注射,1,头份,可选,6,月龄,口蹄疫疫苗,颈部肌肉注射,1,头份,32,6、定期进行驱虫,可选用以下驱虫药：,丙硫咪唑（又称抗蠕敏）；,阿苯达唑；吡喹酮,左旋咪唑；,伊维菌素（绿伊佳）；,绿都螨净,美里哒唑。,33,当前流行羊病的一般处理措施,1,、流行情况,2,、症状,3,、做的工作 分离到,A,型魏氏梭菌、链球菌。,4,、处理措施及效果,1,）紧急注射三联四防疫苗,5-8,毫升,（,2,）注射绿复康,0.067,毫升,/,公斤体重，连用两天、对病重羊只继续注射。迅速减少死亡。,34,35,第三部分 规模化羊场,重要病毒病防控技术,小反刍兽疫,口蹄疫（）,绵羊痒病（,scrapie,）,羊痘（,Capripox,）,羊传染性脓疱（,Sheep contagious ecthyma,）,羊伪狂犬病,蓝舌病（,Bluetongue disease,，,BT,）,羊肺腺瘤病,36,一、小反刍兽疫,小反刍兽疫是由副黏病毒科麻疹病毒属小反刍兽疫病毒（,PPRV,）引起的，以发热、口炎、腹泻、肺炎为特征的急性接触性传染病，,山羊和绵羊易感，山羊发病率和病死率均较高。,世界动物卫生组织（,OIE,）将其列为法定报告动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。,2007,年月，小反刍兽疫首次传入我国。,为及时、有效地预防、控制和扑灭小反刍兽疫，农业部在,2007,年制定了,小反刍兽疫防治技术规范,。,PPR,主要通过直接或间接接触传播，感染途径以呼吸道为主。,山羊和绵羊是本病唯一的自然宿主，山羊比绵羊更易感，且临床症状比绵羊更为严重。,37,小反刍兽疫及全球流行情况,小反刍兽疫首次发现于西非的科特迪瓦（象牙海岸），主要分布在撒哈拉沙漠以南及赤道以北的非洲国家，近年来，几乎遍及所有中东、西亚、南亚国家，我国周边国家和地区均呈地方性流行。我国,2007,年首次发现于西藏，,2013,年底又在新疆发现，专家推测，疫情均是从境外传入的。,2013,年,12,月份以来，我国新疆、甘肃、内蒙古、宁夏、山东等,20,多个省区先后发生小反刍兽疫疫情,38,图,1,：小反刍兽疫历史疫点分布图 来源：,OIE,39,1,羊小反刍兽疫（,PPR,）,截止,2014,年,4,月,14,日晚，从,OIE,网站,WAHID,（世界动物健康信息数据库）中,登记的,小反刍兽疫情，,2014,年至今，全球发病,24705,只，死亡,17583,只。,PPR,在国内多地爆发，诊断与防控形势严峻,世界卫生组织,WAHID,信息库中国,PPR,发病分布图,40,2013.12-2014.02.18,疫情,时 间,地 点,2013-12-5,新疆伊犁州霍城县,2013-12-26,新疆哈密地区哈密市,2014-1-2,新疆巴州轮台县,2014-1-3,新疆阿克苏地区库车县、柯坪县,2014-1-24,甘肃省武威市古浪县,2014-2-17,内蒙古巴彦淖尔市乌拉特后旗、杭锦后旗,2014-2-18,宁夏吴忠市盐池县,41,42,（一）病原,病毒在体外存活时间不长，,56 C,，病毒於血、脾、淋巴腺内的半衰期为,5,分钟。,70 C,以上，迅速灭活。,4 C,下，,pH 7.2-7.9,，病毒稳定，半衰期,3.7,天，但如,pH,高於,9.6,或低於,5.6病毒迅速灭活。,病毒可在胎绵羊肾、胎羊及新生羊的翠丸细胞、,Vero,细胞上增殖，并产生细胞病变,(CPE),，形成合胞体。,43,（二）流行病学,1,、传染源。患病动物及其分泌物和排泄物，组织，或被其污染的草料、用具和饮水等。,2,、传播途径。小反刍兽疫主要通过呼吸道和消化道感染。传播方式主要是接触传播，可通过与病羊直接接触发生传播，病羊的鼻液、粪尿等分泌物和排泄物可含有大量的病毒，与被病毒污染的饲料、饮水、衣物、工具、圈舍和牧场等接触也可发生间接传播，在养殖密度较高的羊群偶尔会发生近距离的气溶胶传播。,44,（二）流行病学,感染母羊发病前,1,天起至发病後,45,天期间，乳汁含病毒，故可经乳汁传染。目前尚缺乏冷冻羊肉或其他肉品的病毒存活资料，但因肉品的,pH,值下降，病毒不易存活，故经由肉品传播机率低。,病毒在体外不易存活，故各种病媒的传播机率低。病媒虫亦不认为会传播本病。,45,（二）流行病学,3,、易感动物。山羊及绵羊为主要的感受性动物，山羊较绵羊感染性高且临床症状较严重。不同品种的山羊或同品种不同个体的感受性亦有不同，欧洲品系山羊的较易被感染发病。猪感染时，不发病亦不排毒。牛以人工接种或接触感染，皆不发病，但产生抗体。红鹿及白尾鹿亦会被感染发病，其余鹿种可能会被感染但不发病。本病亦会感染野生动物如瞪羚、阿而卑斯山野生山羊或其他野生绵羊等，但通常为亚临床经过。,46,（二）流行病学,4,、发生与分布。目前，主要流行于非洲西部、中部和亚洲的部分地区。,5,、小反刍兽疫潜伏期为,4,5,天，最长,21,天，,陆生动物卫生法典,规定为,21,天。如同其他动物传染病，首次入侵时，所有感受性羊群即大爆发本病，但一旦常在後，变为散发，随季节性羊羔的出生而病例增加。,47,（二）流行病学,6,、一年四季均可发生，但多雨季节和干燥寒冷季节多发。潜伏期一般为,4-6,天，短在,1-2,天，长者,10,天，,OIE,陆生动物卫生法典,规定最长潜伏期为,21,天。,48,（三）临床症状,PPR,是小反刍兽的一种以发热，眼、鼻分泌物，口炎，腹泻，和肺炎为特征的急性病毒病，该病临床症状和牛瘟相似，但只有山羊和绵羊感染后才出现症状，感染牛则不出现临床症状，本病潜伏期多为,4,6,天，发病急，高热可达,41,以上，持续,3,5,天，病畜精神沉郁，食欲减退，体重下降，鼻镜干燥，口鼻腔分泌物逐渐变成浓性黏液，如果病畜不死，这种症状可以持续,14,天。,49,（三）临床症状,发热开始的,4,天内，口腔黏膜先是轻微充血及出现表面糜烂，大量流涎，小区坏死通常首发于牙床下方黏膜，其後坏死现象，迅速向牙龈、硬颚、颊、口腔乳突、舌等黏膜蔓延。坏死组织脱落，出现不规则且浅的糜烂斑。,50,（三）临床症状,部分羊的口腔病变者，,2,天内痊愈，这些羊可能恢复。后期出现带血水样腹泻，严重脱水，消瘦，怀孕羊可能流产。随之体温下降，因二次细菌性感染出现咳嗽、呼吸异常，发病率可达,100%,，死亡率可达,100%,，一般不超过,50%,，幼年动物发病率和死亡都很高。超急性病例可能无病变，仅出现发烧及死亡。,51,羊小反刍兽疫,发病率和病死率均较高,临床诊断难以鉴别,与梭菌混合感染,瘤胃出血,真胃出血,软肾,结肠出血,便血,52,图,2,：眼鼻分泌物增多、支气管炎、腹泻、死亡率高,图,3,：眼鼻排出大量分泌物,53,图,4,：结膜炎,-,眼分泌物增多,图,5,：鼻腔分泌物增多,-,卡他性，脓性,54,图,6,：有时口腔有溃疡,图,7,：有时口腔有坏死,55,图,8,：口腔有时会有干酪样分泌物,图9,：嘴唇肿胀，上皮坏死,56,图,10,：嘴唇外围结节性病变,图,11,：腹泻,57,流涎,58,粪便带粘液、血液,59,瘤胃出血、溃疡,60,（四）病理变化,口腔和鼻腔黏膜糜烂坏死,;,支气管肺炎，肺尖肺炎,;,可见坏死性或出血性肠炎，盲肠、结肠近端和直肠出现特征性条状充血、出血，呈斑马状条纹,;,可见淋巴结特别是肠系膜淋巴结水肿，脾脏肿大并可出现坏死病变,;,组织学上可见肺部组织出现多核巨细胞以及细胞内嗜酸性包含体。,61,图12：尖叶性肺炎,图,13,：消化道出血性条纹,-,斑马条纹,（四）病理变化,62,瘤胃出血,63,真胃出血,64,软肾,65,结肠条带状出血,66,小肠溃疡、坏死,67,（五）诊断要点,1,、根据临床症状、流行病学、剖解病变进行初步诊断，确诊需要进行实验室诊断。,2,、样品采集：以拭棒采取睫膜炎分泌物及鼻、口腔及直肠等拭子，以及剖检采取取淋巴结、扁桃腺、脾、肺、大肠等组织块，以干冰或冰袋冷藏输送至实验室，如输送时间超过,72,小时，则病材先加以冷冻以干冰冷冻输送。供病理切片组织则以,10%,中性福马林液保存及输送。另采取抗凝血剂之全血，供病毒分离、血液学及血清学使用。,68,（五）诊断要点,3,、实验室诊断,血清学检测方法：抗体检测可采用竞争酶联免疫吸附试验（,ELISA,）和间接酶联免疫吸附试验（,ELISA,）。,病原学检测方法：病毒检测可采用琼脂凝胶免疫扩散、抗原捕获酶联免疫吸附试验（,ELISA,）、实时荧光反转录聚合酶链式反应（,RT-PCR,）、普通反转录聚合酶链式反应（,RT-PCR,），对,PCR,产物进行核酸序列测定可进行病毒分型。,69,（五）诊断要点,疑似患病动物的病料需经国家外来动物疫病研究中心进行确诊。（地址：山东省青岛市南京路,369,号，联系电话,0532 85621552,）,70,（五）诊断要点,4,、鉴别诊断：小反刍兽疫诊断时，应注意与牛瘟、蓝舌病、口蹄疫、急性消化道感染症、羊痘做鉴别。,71,OIE,规定的,PPRV,诊断技术,琼脂凝胶免疫扩散,AGID,N,蛋白捕获酶联免疫吸附试验（,ELISA,）PCR,检测,与核酸探针,对流免疫电泳,组织培养和病毒分离,病毒中和试验,抗体,ELISA,检测,其他：免疫荧光试验等,72,1-1,羊小反刍兽疫,RT-PCR,诊断技术,根据其核蛋白（,N,蛋白）,高保守,RNA,序列设计引物,从组织样品中提取基因组,RNA,RT-PCR,扩增,RNA,凝胶电泳分析,400bp,处条带,73,技术应用,应用于,PPR,疑似样本的检测，检测灵敏度可达到,0.01ng DNA,应用于,PPRV,疫苗的特异性检验，可检测到,0.001TCID,50,的病毒,从左至右：样品,1,，样品,2,，,Marker2000,，,10,-2,10,-3,TCID,50,疫苗74,反转录合成,PPRV,cDNA,分别设计,PPR,和魏氏,梭菌,a,毒素特异引物,从组织（肝脏，胃）样品中提取基因组,RNA,与,DNA,双重,PCR,扩增,DNA,电泳分析,280bp,与,400bp,条带,1-2,小反刍兽疫,-,魏氏梭菌鉴别诊断,75,小反刍兽疫,-,魏氏梭菌鉴别诊断技术应用,能够从肝脏样品中检测到,PPRV,与魏氏梭菌,PPRV,与魏氏梭菌添加回收试验：,对,PPRV,与魏氏梭菌,a,毒素的灵敏度均低于,0.1ng DNA,从左至右：,Marker DL2000,，样品,1-6,。,76,BAC-to-BAC,杆状病毒表达系统表达,N,蛋白,1-3,小反刍兽疫抗体检测,ELISA,基因克隆技术获得,PPRV,N,蛋白基因序列,大肠杆菌表达系统原核表达,N,蛋白,蛋白纯化,标准阳性血清制备,标准阴性血清制备,抗体检测,ELISA,调试,77,（六）防治,6,1,预防 严禁从存在本病的国家或地区引进相关动物。在发生本病的地区，可根据小反刍兽疫病毒与牛瘟病毒抗原相关原理，用牛瘟组织培养苗进行免疫接种。,PPRV,弱毒活疫苗：,Nigeria 75/1,皮下注射,新疆天康生物生物,78,农业部,2013,年国家动物疫病强制免疫计划,附件,5,小反刍兽疫免疫方案,根据风险评估结果，对西藏、新疆、新疆生产建设兵团等受威胁地区羊进行小反刍兽疫强制免疫。,新生羔羊,1,月龄以后免疫一次，对本年未免疫羊和超过,3,年免疫保护期的羊进行免疫。,发生疫情时对疫区和受威胁地区所有健康羊进行一次加强免疫。最近,1,个月内已免疫的羊可以不进行加强免疫。,79,（六）防治,6,2,处理 一旦发生本病，应按,中华人民共和国动物防疫法,小反刍兽疫防治技术规范,规定，采取紧急、强制性的控制和扑灭措施，扑杀患病和同群动物。疫区及受威胁区的动物进行紧急预防接种,。,80,二、口蹄疫,口蹄疫是偶蹄兽的一种急性发热性高度接触性传染病，其临诊症状是,口腔粘膜、蹄部和乳房皮肤发生水疱,和溃烂。,本病在世界各地均有发生，目前在非洲、亚洲和南美洲流行较严重。,动物感染本病将导致其,生产性能下降约,25%,，由此而带来的贸易限制,和卫生处理等费用更难以估算。因此，世界各国都特别重视对本病的研究和防制。,口蹄疫病毒属于微核糖核酸病毒科的口蹄疫病毒属，毒蛋白质决定其抗原性、免疫性和血清学反应。,口蹄疫病毒含有,4,种主要多肤,(VP1,一,VP4),。,与中和抗体以及抗感染有关的主要是,VP1,，但只有完整病毒粒子和空衣壳有良好的免疫原性，而且似乎与,VP1,本身立体结构有关。,81,临床：,1514,年，首次病例报道（意大利）,1839,年，初次奶牛发生记录（美国）,1895,年，最早人感染记载（法国）,1.2,历史,研究：,重大突破：,1898,年，发现病原，证明毒力,重大贡献：1922-1954,年，确认病毒多型性,82,引自,internet,FMD,病毒,X-,射线衍图,83,84,85,86,口蹄疫全球流行分布图,87,4,羊口蹄疫,作为国家规定的一类病，该病主要侵害偶蹄兽，绵羊、山羊和骆驼等较为易感。,临床症状主要表现为体外升高，口腔、蹄、乳房等部位出现水疱、溃疡和糜烂,。,与羊痘、羊口蹄疫等相似，需要进行鉴别诊断,口蹄疫图片来源于网页,88,3,、感染发病动物向环境大量排毒,发病绵羊一昼夜：,呼出的气体排出,10,5.4,TCID,50,，粪便,10,6.2,TCID,50,。,水泡皮有特别高的病毒滴度,10,9.0-9.6,TCID,50,/g,，,水泡液为,10,10.0,TCID,50,/ml,，唾液为,10,4.5-6.0,TCID,50,/ml,。,89,口蹄疫的有效控制关键是早期检测，,有很多疾病的临床症状与口蹄疫相似，所以必须快速、准确地进行实验室诊断。,目前实验室诊断方法包括病毒学诊断和血清学诊断。,病毒学诊断方法有病毒分离、补体结合试验、酶联免疫吸附试验（,ELISA,）、,RT-PCR,以及乳胶凝集试验（,LAT,）。,ELISA,方法是,OIE/FAO,（国际兽医局,/,国际农粮组织）的口蹄疫世界参考实验室（,WRL,）确认的检测,FMDV,抗原和病毒血清型应优先采用的方法。,我国相关单位已研制出了相关试剂盒，但需要加强其产业化进程。,90,国家规定的,FMDV,诊断技术,间接夹心,ELISA,（,OIE,标准方法,),RT-PCR,试验,反向间接血凝试验（,RIHA,）,病毒分离,病毒中和试验,液相阻断,ELISA,检测抗体,抗体,ELISA,非结构蛋白,ELISA,检测抗体,正向间接血凝试验检测抗体等,91,4-1,羊口蹄疫,O,型抗体,ELISA,应用：结合检测试剂盒制定了羊口蹄疫疫苗免疫程序，确保羊群免疫后达到农业部口蹄疫免疫合格标准。经在示范羊场推广试验，免疫阳性率达,98%,以上，远远超过规定水平。,以原核表达的,VP1,蛋白为包被抗原，研制了,O,型口蹄疫间接,ELISA,抗体检测试剂盒，与中国农科院兰州兽医研究所的阻断,ELISA,抗体检测试剂盒阳性符合率达,96.2%,。,92,FMDV,灭活疫苗免疫力有限。,FMDV,弱毒活疫苗有许多优点，如剂量小、可提供对免疫动物较好的免疫保护、保护时间比较长、价格低等，但弱毒活疫苗也有一些弊病，对于一种动物的减毒，并不保证对其他动物的减毒，而且经过传代后弱毒病毒的毒力有可能恢复等。,我国口蹄疫疫苗研究于,1959,年开始，较成功的弱毒疫苗有,O,型鼠化弱毒,OM2,株、亚洲,I,型兔化,II,系弱毒株、,AIII,系鼠化弱毒株，均达到弱毒苗的安全要求，对成年牛羊免疫保护率可达,100%,。,基因工程疫苗与以上两种疫苗比较，是一类非常安全的疫苗。基因工程疫苗种类很多，它们基本上是一种亚单位疫苗，包括基因修饰活疫苗、化学合成多肽疫苗和生物合成多肽疫苗、核酸疫苗等,11,。,目前最常见的基因工程疫苗是生物合成多肽疫苗。多肽疫苗具有安全稳定、易于大批量生产、针对性强的优点，但免疫原性一般较差，因此多肽疫苗在设计时，不仅要有,B,细胞表位，而且还要有,T,细胞表位。能引起可产生中和抗体的,B,细胞免疫应答是防止病原再次感染的关键，但产生细胞毒性,T,细胞免疫应答也是必不可少的，一个理想的多肽疫苗应当同时含有,B,细胞和,T,细胞表位。随着生物科技的发展，这些新型的疫苗必将在口蹄疫的防制中发挥重要作用。,93,口蹄疫防控的几个问题及对策,境外传入是造成我国流行毒株多样化的根源,-,建议：在边境省份建立几个新的口蹄疫研究及诊断实验室，以应对国内外的复杂局面,在免疫压力下，我国的流行毒发生着程度不同的变异,-,建议：从表位着手深入研究抗原变异的本质，在此基础上，才能对新出现的变异株进行快速的预警预报、研发有效的针对性疫苗,加大新型疫苗的研究力度,-,美国动物病研究中心近十年来一直进行缺损腺病毒表达空衣壳疫苗的研究，目前已进入产业化阶段,-,同行专家认为，该空衣壳疫苗是目前唯一可能被有效使用的口蹄疫新型疫苗,94,1.,概述,2.,病原体,3.,检疫要点,4.,检疫处理,5.,防疫措施,三、绵羊痘和山羊痘,95,三、,绵羊痘和山羊痘,羊痘是由山羊痘病毒属成员引起的绵羊、山羊的一种急性、热性、接触性传染病 俗称“羊天花”。,是家畜中最重要的痘病,中国将其列为一类动物疫病,本病特征是发热,无毛或少毛部位皮肤黏膜发生丘疹和疱疹,本病的发生易造成巨大经济损失,严重影响国际贸易和养羊业的发展,羊痘主要在中非、北非、中东、印度等地呈地方性流行,该病在我国也常见报道,有的地区呈暴发流行,Sheep pox and Goat pox,96,97,羊痘常规的血清学诊断方法有病毒中和试验、琼脂扩散试验、荧光抗体试验、免疫电泳、斑点凝集试验等。,由于,CPV,和副痘病毒有相似的血清型，许多血清学检测方法因会出现抗体交叉反应而无法区分来源于绵羊、山羊和牛的痘病毒株及副痘病毒，使其推广受限,因此，建立特异、敏感、快速的羊痘病毒血清学诊断方法是目前国内外学者的研究热点。,ELISA,因其操作便利、快速、敏感、特异性强、能检测群体特异性抗体而备受人们的关注，这些优点为其便于推广应用也奠定了基础。,98,研究背景,1,、病原特点：羊痘病毒对外界抵抗力较强，但一般的消毒药物即可,将其杀死。其在干燥环境中可存活,68,周。病毒主要存在于病羊的,痘疮、浆液及水泡皮内。病毒变异性差，目前发现，只有一个血清型。,2,、感染途径：其感染主要通过呼吸道，也可通过污染的饲料、饮水、,用具、垫草等，经损伤的皮肤、黏膜及消化道感染。,3,、易感动物：各种年龄的羊均可感染，但羔羊最易感染，如发生融,合痘、出血痘、坏疽痘，死亡率达到,90%,以上！感染动物康复后，终,身免疫。,4,、诱发因素：该病常发生于多雨潮湿的天气，饲养管理不好、环境,卫生不良等因素可促使发病，迅速蔓延全群羊只。,5,、公共卫生：该病可传染给人，但人发病轻微，人与人之间不传播。,6,、疫苗：有良好的免疫原性，羊痘疫苗接种成功一次，其产生的免,疫力就可维持,1-1.5,年。,99,（三）临床症状,潜伏期一般,714 d,。,体温升至,40,以上，精神沉郁，食欲减退乃至废绝，眼、鼻流出粘性或脓性液体，继而无毛或少毛部位出现丘疹、红斑。随着发展程度不同可表现为水疱、脓疱、结痂等。黏膜较易形成糜烂，有时痘疹不形成疱而保持硬固成为“石痘”，也有形成脓疱并融合出血的，或溃疡或坏疽。,100,鼻口部结痂,鼻口部严重痘疹,（三）临床症状,101,鼻口部严重丘疹，部分覆盖出血性分泌物,鼻口部大量粘稠分泌物，部分堵塞鼻孔,（三）临床症状,102,皮肤严重痘疹,皮肤轻度痘疹,（三）临床症状,103,腹股沟皮肤严重的融合性斑,（三）临床症状,104,尾部中间两个痘，干燥、暗红色坏死和脱落形成的中心,阴囊及邻近腹股沟皮肤多个丘疹,（三）临床症状,105,乳房部皮肤丘疹,乳房部皮肤两个界限清楚的坏死灶,（三）临床症状,106,主要表现体表病变，气管及支气管黏膜充血水肿，表面有大小不等水疱样痘疹；肺表面或切面有白色结节灶，肺门淋巴结肿胀，切面多汁。齿龈、舌面、硬颚、咽喉黏膜有大小不等、圆形丘疹，有的破溃、出血、化脓。瘤胃和真胃黏膜和浆膜可见豌豆大小石头痘，肠道卡他性炎症。肝、肾表面偶尔能见到白斑。,（四）病理变化,107,肺脏散布多个苍白到红棕色的结节,肺、肝部痘疹,（四）病理变化,108,肺脏多个红棕色融合灶,（四）病理变化,109,肺脏弥漫性肉芽肿结节,肺脏弥漫性褐色圆形肺炎灶，有的有白色坏死中心,（四）病理变化,110,（五）实验室诊断,根据典型症状和流行病学可确诊。皮肤或可视黏膜有明显散在或密集痘疹、痘肿或病理变化明显的判为病羊。精神、食欲、体态有异常；皮肤或可视黏膜有疑似痘疹、痘疱的判为可疑羊。可疑羊继续观察，电镜检查和包涵体检查、血清学检查。,111,山羊、绵羊都易感，发病率高，羔羊死亡率高，对生产影响大。,内脏型羊痘增加，诊断易混淆,2,山羊痘与绵羊痘,112,羊痘的实验室诊断方法,病理组织学检查,对检测操作技术要求高，容易出现假阳性结果,病毒分离,耗时长，需要原代细胞，分离成本高,ELISA,仅监测体液免疫，检测结果有一定局限性，有报道但是无成品上市,血清学检测,敏感程度相对较低,PCR,具有敏感性高，特异性强等优势，成为诊断技术的突破重点,。,113,根据羊痘病毒属P32基因高保守序列设计扩增引物，可以用于诊断山羊痘与绵羊痘。,最小检出量为40.625ng,DNA,2-1,羊痘病毒通用,PCR,114,2-2,羊痘荧光定量,PCR,在,PCR,反应体系中加入了荧光分子，可在反应进行过程中进行扩增产物的分析和检测,相对于普通PCR而言荧光定量能准确确定初始拷贝数和高的灵敏度，无需通过琼脂糖凝胶电泳评估结果，节省时间提高效率,115,SYBR Green 法,价格便宜、使用方便、无需合成特异性的探针,TaqMan探针法,敏感性高特异性强，成本高，需要特异性的探针。,116,建立了山羊痘,SYBR Green,荧光,PCR,检测方法，检测敏感性可达到,400,个,DNA,模板拷贝数,/,L,。,建立了,TaqMan,荧光定量,PCR,最低极限检测值可达到1,个,DNA,模板拷贝数,/,L,。,在保证适当的反应条件下,使用SYBR Green会更为经济、简便,适合用于临床诊断、病毒载,量定量和其他科研、开发项目,117,（六）检疫处理,当地县级以上人民政府兽医主管部门立即划定疫点、疫区、受威胁区，并采取相应措施；同时及时报请同级人民政府对疫区实行封锁，逐级上报至国务院兽医主管部门，并通报毗邻地区。对病死羊、扑杀羊及其产品进行销毁；对病羊排泄物和被污染或可能污染的饲料、垫料、污水等通过焚烧、密封堆积发酵等方法进行无害化处理。疫区和受威胁区内所有易感羊紧急免疫接种。,118,（七）防疫措施,免疫为主，扑杀与免疫相结合,加强饲养管理，平时注意环境卫生，做好常规驱虫、环境消毒等，增强机体抵抗力,未发病地区健康羊注射弱毒疫苗，建立免疫带；已发病地区严加封锁，病羊隔离治疗,疫区羊只用羊痘鸡化弱毒苗进行免疫接种,加强检疫，特别是引进种羊的检疫，严禁从疫区买羊，从非疫区买羊也要进行检疫和隔离观察,20,天左右，证实无病后再合群,119,120,1,、尾根内侧或股内侧皮内注射,0.5ml,。,2,、成功接种后，接种部位皮肤应鼓起一个小包注射后,5-7,天，应检查是否有痘发生，如没有说明接种失败，存在痘瘢,接种成功。,121,沈氏绿都提醒您，科学免疫。推荐的免疫程序为：,育肥羊免疫：,21,日龄,0.5ml/,只（,1,只份），尾根内侧或股内侧皮内注射。集中育肥羊，要尽快免疫，,0.5ml/,只（,2,只份）。,种羊免疫：,21,日龄,0.5ml/,只（,1,只份），,35,日龄加强免疫,0.5ml/,只（,2,只份），尾根内侧或股内侧皮内注射以后每隔,12,个月免疫,1,次，,0.5ml/,只（,2,只份）。,有发病史的羊场，每隔,6,个月加强免疫，,0.5ml/,只（,2,只份）。,122,123,预防羊痘主要依靠弱毒活疫苗，毒力返强给弱毒疫苗的使用带来了隐患。,为了给养羊业健康发展提供物质保障，安全、廉价、有效的新型羊痘疫苗的研制迫在眉睫。,羊痘病毒活载体疫苗为新型疫苗的研究提供了思路。,Berhe,等研制出了可用于预防羊痘、牛瘟、小反刍兽疫,(PPR),的重组羊痘疫苗,;Perrin,等以羊痘病毒为载体，成功构建并表达了蓝舌病病毒,(BTV-2),衣壳蛋白,VP2,、,VP7,和非结构蛋白,NS1,、,NS3,，动物试验研究结果表明，该重组羊痘病毒对,BTV-2,强毒攻击具有免疫保护作用。,Carn,等对,p32,蛋白作为羊痘病毒亚单位疫苗的候选蛋白进行研究，动物试验结果证明，,p32,亚单位疫苗可以产生较高的羊痘病毒中和抗体水平，降低,CPV,强毒感染引起的临床症状。,124,四、羊传染性脓疱（羊口疮）,羊传染性脓疱皮炎俗称“羊口疮”，是由羊传染性脓疱皮炎病毒,(ORFV),引起的绵羊、山羊和人的一种急性、接触性、嗜