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一、患者准备
为确保检验质量,检验科在验收标本时应清楚了解病人准备情况。
1 空腹采血准备
1.1 病人正常晚餐(清淡饮食,不饮酒,不过饱)晚餐后不再进食。
1.2 空腹血糖必须12小时空腹,餐后血糖是指吃两个刀切馒头1杯牛奶后2小时采血。
1.3 验血脂必须三天以上清淡饮食,然后空腹采血。
2 尿液标本留取
2.1 尿液培养标本留取:清洗消毒外阴,将中段尿直接留入特殊无菌容器(由院方提供无菌容器),不能用其他容器转接。
2.2 24 小时尿液留取(生化测定用):素食三天,正常进食,不过多饮水,不剧烈运动。早晨8时整排尿弃去,然后把所有尿留入一洁净容器,可用甲苯(或二甲苯)防腐,按0.5ml/100ml尿加入。次晨8时整将最后一次尿留入容器送检。
2.3 12小时尿液留取(尿沉渣计数用):正常饮食,不过多饮水,不剧烈运动。晚8时排尿弃去,然后把所有尿留入一洁净容器,次晨8时将最后一次尿排入容器,送检。可用甲醛防腐,按400g/L甲醛0.5ml/100ml尿加入。
3 痰标本:清晨清水嗽口,用力咳出深部痰液,半小时内送检。
4 精液标本:3-7天内不同房,取全量,30分钟内送检,各冬季注意保温。
二、检验标本采集须知
1.申请单请注明送检物种类,送检标本种类不同时请分开开单。
2.病人一般需在安静状态下采集标本。
3.一般要求在空腹12小时后抽血。
4. 在采集标本前暂停使用各种药物。
5.门诊病人要核对病人姓名、年龄等信息,将条形码贴在采集标本的容器上。
6.严格按照抽血管上注明的采血量采集,普通干燥管采血3ml为宜。
7.要特别注意采血不能在输液的同侧进行,更应杜绝在输液管内采血。
8.24小时尿标本的收集:患者上午8时排尿一次,将膀胱排空,弃去尿液,此后收集各次排出尿液(逐次加入防腐剂),直至次日上午8时最后一次排出的全部尿液.应准确的收集24小时的尿液,并测量尿量,混匀后取适量标本送检(10ml)。
9.血气分析标本请用专用血气针抽血或肝素抗凝抽血针,完全排空混入的空气,用胶塞封住针头,混匀,立即送检。
三、标本采集注意事项
具体标本采集规范操作详见《临床检验标本采集方法》,标本采集日常应注意以下问题:
1 血液标本采集
1.1 认真核对顾客姓名、性别、年龄。
1.2 根据送检项目,详细询问顾客饮食情况,是否符合检测条件。
1.3 按检验目的要求,选择合适的盛放标本的真空采血管,认真检查真空采血管是否完好。
1.4 将病人信息条码贴在真空采血管上。
1.5 按消毒规范要求操作并按检验目的要求正确采集标本。
2 尿液标本采集
2.1 留取新鲜尿液,以清晨第一次尿为宜,应使用清洁容器。将顾客条码信息贴在试管上。
2.2 尿液标本应避免与白带、精液、粪便等混入。
2.3 标本留取后应及时送检,夏季不超过1小时,冬季不超过2小时。
3 大便标本采集:留取新鲜大便,指头大小(约5g)放入干燥、清洁、无吸水性有盖的容器内。
4 脑脊液、浆膜腔积液(由临床医生采集):细胞计数管及细胞学检查应避免标本凝固,可加入抗凝剂。
5 阴道分泌物(由临床医生采集):采取分泌物前勿用药、同房,冬季注意保温。
6 痰液
6.1收集晨痰,患者起床后刷牙、漱口后,用力咳出气管深处呼吸道分泌物,勿混入唾液及鼻咽部分泌物。
6.2 细胞学、抗酸杆菌检查,留上午9—10时深咳的痰,应尽量留取含血的标本。
7 骨髓检查、脱落细胞、穿刺细胞(由临床医生采集):
7.1 骨髓穿刺应在治疗前,未输血及血液制品前进行。
7.2 吸取骨髓液一般为0.2ml,否则易于稀释。
7.3 标本抽取后立即送检,为防止凝固,可加抗凝剂。
8 精液
8.1 一周内禁同房。
8.2 收集全部精液至容器内,记录好排出时间,勿丢失,勿用避孕套内的精液。
8.3 30分钟内送检,冬季注意保温。
9 细菌培养标本:按无菌手续,用无菌用具,正确采集标本。
四、血液标本采集操作
1 血液标本的种类和用途:血液标本分全血、血浆或血清三中,血清和血浆为临床常用,除前者不含纤维蛋白原外,其余多数化学成分无差异;血气分析、血红蛋白电泳等用全血,一般临床化学分析多不用全血。根据试验项目和用血量不同,可自毛细血管、静脉或动脉采血。除床边试验外,全血和血浆标本需要添加抗凝剂。
1.1毛细血管采血
毛细血管采血适用于仅需微量血液(用血量<200ul的实验),如全血细胞计数、血细胞形态学和血液寄生虫检验,血糖等快速检验以及婴幼儿某些临床化学检验。常用部位为耳垂、无名指端,小儿有时为大趾或足跟。采血针刺入皮肤深度应为2mm(<2.5mm),采血局部应无炎症、水肿等。
*应避免用力压挤以防组织液的干扰。
1.2 静脉采血
应用最多的采血方式。常用的静脉为肘前静脉、腕背静脉,小儿和新生儿有时用颈静脉和前囟静脉。静脉血是临床检验中最常使用的血液标本,用于绝大多数临床化学、血液学和免疫学、全血细胞计数和血细胞形态学、出凝血实验、血液寄生虫和病原微生物检验、血液和组织配型等。
*采取临床化学标本时,皮肤消毒75%乙醇或异丙醇,不用碘酒,因可干扰多种实验。
1.3 动脉采血
动脉血主要用于血气分析、乳酸测定。用含有干燥肝素钠注射器或用肝素溶液充满注射器死腔和针头,过多的肝素可使pH和pO2值降低及相关计数参数错误。注射器内不得有气泡,因可改变pO2结果。与静脉血比较,乳酸、pO2、SO2(氧饱和度)不同,如用静脉血或动脉化毛细血管测定血气一定要注明。
2 采血器材和添加剂
2.1采血器材
2.1.1注射器和试管:塑料器材与玻璃器材,普通采血与真空采血,对某些试验有不同的影响。
※凝血因子测定以用塑料注射器和塑料试管为好,玻璃器材可加速血液凝固。
※用塑料注射器和塑料试管,因血液不易凝固,分离血清时间延长,不利于临床化学检验。
※普通注射器取血由于抽吸和转注,容易引起可见的或不可见的溶血,使血浆某些成分发生改变,例如K+、LDH、AST升高等。
2.1.2 真空采血装置
真空管采血简便、快速、省力,可连续多管采血;免去用注射器的抽吸和转移步骤,可避免或减轻机械性溶血,;无血液污染,保持手、工作台和申请单清洁,预防交叉感染;对工作人员和患者有保护作用;抗凝剂与血液比例固定,有利于保证检验质量。
不可以用大真空管采去小量样本血,因真空蒸发而使血液浓缩。厂商提供不同规格和不同用途的真空采血管,应按实验要求的标本性质和需要血量选用,不仅可避免真空蒸发,而且还可以防止暴露蒸发。
表1.真空管规格和标志
标记
抗凝剂
促凝剂
分离胶
用 途
规格(ml)
红帽
-
-
-
常规临床化学和血清学测定
3,5,7,10
黄帽
-
+
+
急诊临床化学和血清学测定
3,5,7,10
橘帽
-
+
+
常规临床化学和血清学测定
3,5,7,10
绿帽
肝素钠
-
+
微量元素、血液流变学等测定
3,5,
浅绿
肝素钠
-
+
急诊临床生化各种项目测定
3,5,7,10
蓝帽
枸橼酸钠
-
-
凝血试验、地贫基因分型等测定
2
黑帽
枸橼酸钠
-
-
红细胞沉降率测定
2
紫帽
EDTA-2K
-
-
全血细胞计数和血细胞形态学、配血
2
注:-表示无,+表示有
2.2 添加剂
除全血细胞计数、血气、血氨、血沉、凝血因子、急诊生化等检验使用全血或血浆需加抗凝剂外,临床化学和免疫学检验多不用抗凝剂。草酸盐、氟化钠抑制测试的酶活性或酶法检验的酶触反应,不推荐使用。
2.2.1 全血细胞计数、血细胞形态学检验推荐使用EDTA-2K盐,1.5mg/ml血,可保持血细胞体积不变,在1-4小时内无影响;但应及时制作血涂片,因延迟时间过长(超过4小时)可使中性粒细胞颗粒消失。
2.2.2 凝血因子检验用枸橼酸钠抗凝优于草酸盐,因可使V因子稳定。用109mmol/L(3.2%)溶液与血液按1:9比例,浓度与比例虽对凝血酶原时间(PT)影响不大,但对活化部分凝血活酶时间(APTT)有影响。抗凝pH对PT试验有影响,pH〈7.1和pH〉7.4延长,应在2小时内完成检验,4℃储存不稳定,Ⅶ因子仍可激活,-20~-70℃时可稳定3周。
2.2.3 魏氏法血沉测定用109mmol/L(3.2%)枸橼酸钠,抗凝剂与血液应严格按1:4比例,抗凝剂多或血液少则血沉加速;反之,抗凝剂少或血液多则血沉减慢。
2.2.4 血气分析用肝素钠抗凝,针管中不得有残留空气,针头用橡胶泥(橡胶瓶塞)封口,混合后防在冰盒中立即送实验室按急诊检验处理。
2.2.5 血氨测定用添加肝素钠的有帽试管(25U抗凝1ml血)或真空管采血,混合后立即送实验室按急诊检验处理。
2.2.6 血糖测定如标本放置过久,糖被血细胞分解而降低,用肝素或EDTA(均指其盐,后同) 抗凝,采血后立即分离血浆,试管加塞防蒸发,室温可稳定24—48小时;用带分离胶的肝素或EDTA的真空管采血立即分离血浆,室温可保存3—4天。氟化钠虽有抑制糖酵解的作用但也能抑制测试的酶触反映。或用碘乙酸钠或碘乙酸锂0.5mg/ml血,可稳定3天。
2.2.7 急诊临床生化检验,用肝素锂抗凝或浅绿帽真空管采血,可快速分离血浆不影响酶和电解质测定;也可用含凝血酶的真空管采血,可加速纤维蛋白原转变,缩短血液凝固时间。
3 采血条件和病人准备
血液成分受饮食、情绪和肌肉活动的影响,也受采血体味的影响。采血一般应在安静、空腹状态下进行,通常采取早晨过夜静脉血,饮水没有影响。为了方便门诊病人可以放宽约束,但血脂、血磷等的测定则必须空腹。血糖测定根据需要可测清晨空腹血糖、三餐前血糖、餐后2小时血糖或就寝前血糖,一些有节律性变化的成分应在规定的时间取血。
3.1 住院病人:除特殊检验外,住院病人一般应在早晨起床活动前安静卧床空腹状态下取血。这不仅是为了保证检验质量,也是为了方便临床和实验室工作;急诊检验可随时取血。
3.2 门诊病人:门诊病人采血很难避免肌肉活动,应静息半小时以上,坐位取血按立位解释结果。因短时间的坐位机体无法调整体液的分布,空腹者可在上午7-9时取血,进餐者除血脂外可在上午9-12时取血,由于医院设备水平的不断提高,对门诊病人除血、尿、便常规以外非特别费时的检验项目,也应尽可能做到当时或当日等取结果以减少病人的复诊次数。
3.3 急诊病人:急诊病人可以随时卧位取血,不受饮食限制,但须注意输液和用药对检验结果的影响。特别是血糖和电解质。不得在输液的同一针管或近心端血管取血,并要注明输液以及输注液体和药物种类,供实验室和临床医师解释结果时参考。
**进餐可使葡萄糖、胰岛素、甘油三酯、尿素氮、碱性磷酸酶、尿酸、 胆红素、乳酸、Na升高;血清总蛋白、白蛋白、a-2球蛋白、血红蛋白、红细胞容积、游离脂肪酸、K(高糖饮食时)、无机鳞降低。
**饮食虽可影响某些成分,但进餐90分钟后多数试验项目与对照组比较无统计学意义。为方便门诊病人,除下述应在空腹取血的项目外,一般在午餐前3小时取血不防碍临床评价,但应注明进餐和取血时间以便解释结果时参考。
**应在空腹取血的实验:血脂、血清铁、铁结合力、维生素B12、叶酸、胃泌素、抗体;血糖和胆法酸有时需要在餐前或餐后测定。
**空腹指禁食6小时以上,血脂测定应禁食12-14小时,不禁水,但须禁茶、咖啡、烟、酒或药物。
4 周期变化成分检测:有周期变化的成分规定,应按规定的时间取血。
4.1 促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇,应在上午8点和下午4点两次取血,了解其分泌水平和分泌节律。醛固醇(ALD),应在早6-8点分别采取立位和卧位静脉血。
4.2 甲状旁腺激素(PTH),最好在早8点取血。
4.3 急性心肌梗死(AMI)发病后,心肌酶变化有一定的规律,应记录取血的时间。
5 采血方法
5.1 应备物品:一次性负压真空采血(管、针、贴、架),注射器、一次性纸巾、止血带、0.2%安儿碘、棉签、放置采血后废弃的(针头、注射器等)专用回收容器、紫外线灯、污物桶。
5.2 操作步骤
①抽血室护士应严格执行无菌操作技术规程,熟练业务,一次穿刺成功率高,以免增加受检者的痛苦。
②抽血前,护士要洗手、戴口罩、帽子、手套。
③在真空采血管上标明受检者的姓名,将真空试管上的条码撕下,贴在申请单上标本号处,并仔细核对,严防差错。
④采血前检查一次性真空采血穿刺针是否平滑,真空采血管皮塞是否有松动、裂缝。在穿刺部位肢体下垫软枕或一次性纸巾、止血带。
⑤仔细选择受检者血管,常用肘窝部贵要静脉、肘正中静脉、头静脉及前臂内侧静脉。
⑥在静脉穿刺部位上方约6cm外扎止血带,嘱受检者握紧拳头,使静脉充盈显露。消毒穿刺部位。以进针点为中心,消毒范围直径大于5cm。穿刺针头斜面向上,呈15-30℃角穿刺,见回血后,插入负压真空采血管至所需血量,放松止血带,以无菌棉签按压针孔并拔出针头。
⑦嘱受检者继续按压针孔3-5分钟,勿揉搓针孔处,以免穿刺部位瘀血。如凝血功能障碍患者按压时间延长至10分钟。
⑧如需抗凝的血标本,要颠倒轻柔摇匀6-8次,放入采血架后及时安全送检。
⑨若一次穿刺失败,重新穿刺需更换部位。
⑩按医疗废物处理条例处置用物,脱手套、洗手。
5.3 消毒隔离、预防交叉感染措施
5.3.1 每日定时开窗通风。
5.3.2 每日定时用紫外线消毒抽血室30—60分钟。
5.3.3 每日清洁桌椅和地面,必要时用有效的消毒液擦拭。
5.3.4 被血液污染的台面、地面要及时用高效消毒剂擦拭。
5.3.5 消毒液(安儿碘)应密闭存放,开启后72小时以内有效;建立物品消毒有效期登记本,并认真做好记录,以确保无菌物品的有效性。
5.3.6 受检者要做到一人一针一巾一带。
5.3.7 医用废弃物置于防渗漏,防锐器穿透的专用包装物或密闭容器内交由医疗废物集中处置单位处理。
注:如同时采多个项目的标本时,使用配套的真空采血管-采血针,采血顺序:血培养→无添加剂的采血管→凝血标本管→其他标本管。
5.4 真空采血管使用中常见问题及处理办法
⑴ 溶血
①原因:真空管的负压相对较大,采血初始,血液流入管底速度快,红细胞相互撞击可致破裂,临床偶见溶血。
②措施:采集血标本时,倾斜双向采血针采血管侧针头,使其靠近采血管侧壁,血液沿管壁缓缓流下,避免红细胞直接撞击造成破裂。
⑵ 漏血
①原因:双向采血针采血管端乳胶护套松动或针头刺出乳胶护套,至使双向采血针密封不严。静脉穿刺时,血液沿双向采血针采血管端漏出。
②措施:采血前检查并安紧乳胶护套,遇有针头刺出则重新套好针头,以保持其密闭性。
⑶ 血液流入不畅
①原因:穿刺针头贴于血管壁或采血管内无负压。
②措施:在保证静脉穿刺成功的前提下,调节针头方向至血液流入采血管,若无效则更换采血管。
⑷ 采血量不足
①原因:采血管内负压不足
②措施:将注射器针头自采血管胶塞处刺入,抽吸采血管内空气使之形成负压至采足血标本。原有血容量较少时也可直接更换采血管。
⑸穿刺针头脱出
①原因:机械牵拉所致,尤其是在多个采血管采血时。
②措施:一次采血使用采血管较多时,注重有效固定;更换采血管时,动作幅度要小,以防针头脱出增加病人痛苦。
5.5 采血注意事项
5.5.1 止血带或压脉器的使用注意事项
1)静脉压迫时间过长,引起淤血,静脉扩张,水分转移,血液浓缩,氧消耗增加,无氧酵解加强,乳酸升高,pH降低,K、Ca、肌酸激酶升高。
2)静脉取血技术要熟练,压脉带压迫时间以不超过40秒为宜。
3)乳酸测定最好有用压脉带或针头刺入静脉后立即解除压脉带。
5.5.2 输液时采血的注意事项
应尽量避免输液时取血,输液不仅使血液稀释,而且使检验发生严重干扰,特别是糖和电解质;不得已时可在对侧手臂或足背静脉取血,并要注明输液及其种类。在一般情况下,推荐中断输液至少3分钟后取血。
5.5.3 避免溶血
红细胞某些成分与血浆不同,标本溶血可使红细胞成分释放干扰测定结果,应尽力避免认为因素造成的机械性溶血。推荐使用真空管采血。
5.6 糖尿病血糖检测标本的采集
出于不同的目的,可测定空腹、餐后、睡前以及夜晚任何时间的血糖,不同时间采血其临床意义不同。可用静脉血或末梢血,用于糖尿病检测以用末梢快速测定较为简便,用于糖尿病诊断则必须用静脉血标准法测定,因快速法误差太大,不能满足临床的需要。
5.6.1 空腹血糖:空腹血糖用于住院常规检查、人群普查和糖尿病流行学研究,以及胰岛素储备功能和基础分泌水平评价。一般在早6-8时空腹取血,不可过早,以免放置时间过长使血糖降低,如为临床需要则应按急诊及时送检,立即测定。
5.6.2 餐前血糖:用于糖尿病治疗检测和疗效评价。在午餐前和晚餐前30分钟内取血;空腹或餐前血糖正常不能排除糖尿病。
5.6.3 餐后血糖:(糖耐量试验)餐后血糖用于糖尿病早期筛查和流行学研究、诊断和治疗检测、药物调整和疗效评价。
A.用于糖尿病的筛查、流行学研究和糖尿病早期诊断,较空腹血糖敏感。一般应在摄取谷类事物干重不少于100g的早餐后2小时取静脉血,用标准法(葡萄糖氧化酶法或己糖激酶法)测;由于升糖激素水平的因素,早餐后血糖较午餐后更为敏感。
B.用于糖尿病治疗监测、药物调整和疗效评价,可用简便快捷的血糖计测定。
a自我监测:应分别测定口服降糖药和胰岛素注射的早、午、晚三餐后2小时血糖,每周1天或2天,根据餐后血糖水平逐步调整降糖药或胰岛素剂量。
b门诊监测:测定口服降药或胰岛素注射的早餐后和午餐后2小时血糖;餐后不同时间和血糖,判定标准不同(1h PPG<8.9mmol/L或160mg/dl,2h PPG<7.8mmol/L或140mg/dl,3h PPG<6.7mmol/L或120mg/dl)。
5.6.4 夜间血糖:为防止夜间低血糖发生或鉴别清晨高血糖原因,监测就寝前(例如晚9-10时候)血糖,或必要时加测夜间0时、2时、4时或早晨6时血糖。此时以用末梢血床边快速测定为好。
五、尿液标本采集操作
1定性和常规检验标本
化学定性和常规检验应留取中段尿,女性须用消毒纸巾擦净外阴部以免阴道分泌物混入。按留取标本的时间,尿标本分为以下几种。
1.1 首次尿 清晨第一次尿,较浓缩,适用于化学成分和有形成分检验。但常因留取后放置时间过长,尿液温度降低盐类成分析出、细菌繁殖和尿素分解,使尿液变碱性,影响相对密度(比重)、亚硝酸盐和酸碱度测定的准确性。
1.2 随意尿 适用于化学成分和有形成分检验。尿液比较稀薄。适合门诊或健康体检,尿液新鲜,有形成分和酸碱度保持不变。亚硝酸盐试验须留取在膀胱存留3小时以上的尿立即送检。
1.3 负荷尿 为某种特殊需要检查一定负荷后的尿,如葡萄糖负荷后的糖耐量试验、菊糖负荷后的菊糖清除率试验、运动负荷后的运动后血尿、起立活动后的直立性(体位性)蛋白尿等。
1.4 餐后尿 进餐前排尿弃去,留取餐后2小时尿检测尿糖或常规,用于糖尿病筛查和糖尿病流行学研究,糖尿病治疗检测、药物调整和疗效评价。
1.5 餐前尿 早、午、晚三餐前半小时至1小时排尿弃去,进餐前再留取尿标本检测尿糖。此为进餐前两次留取尿间隔的一小段时间内肾脏排泌的尿,尿糖浓度反映餐前空腹(或餐后3-4小时)的血糖平均水平。用于糖尿病治疗监测和疗效评价。
1.6 睡前尿 夜晚就寝前排尿弃去,就寝时留取尿标本检测尿糖,用于监测夜间血糖水平,预防药物性低血糖反应和评价晨间高血糖原因。
2 化学定量和细胞计数标本
须先排尿弃去,计时,准确留取规定时间内的全部尿液,不得溢失。
留取3小时尿,用于测定细胞排泄率;留取4小时尿,用于测定肌酐清除率;
留取12小时尿,用于Addis计数;留取24小时尿,用于化学成分定量。
一般自早7时或8时起排净膀胱,尿液弃去并计时,准确收集规定时间的内全部尿液。留取期间尿液须置4-8℃冷藏;或容器中先加入1g/dl麝香草酚异丙醇溶液5-10ml防腐,但不能用于胆盐测定的Hay试验和17-羟类固醇、17-酮类固醇测定的Zimmerman反应,因前者可致假阳性,后者可干扰测试反应;或用石油醚或二甲苯1-2ml防腐,适用于化学成分检验;或用甲醛防腐,适用于有机成分检验。
3 尿液标本采集注意事项
3.1 容器要保持清洁,避免污染,最好使用一次性尿杯。
3.2 标本要求新鲜,留取后1小时内送检,否则应冷藏。
3.3 定时尿标本,必须留取规定时间内的全部尿液,时间开始的尿排净收集,记录尿液量,混匀后取10-20ml送检。
六、大便、脑脊液、浆膜腔积液等标本采集
1 大便标本的采集
标本不得混有尿液、消毒液、自来水;标本应在服药之前采集,服抗生素者应停药3天后采样;采样须从粪便表面深处多个部位挑取,并首选有黏液、脓血等病理成分;隐血试验,禁食肉类、血类制品,停服铁剂及维C三天。
2 脑脊液标本采集
严格无菌操作下采取脑脊液数毫升于无菌试管。标本采集后应立即送检,以防细菌死亡。疑似有脑膜炎奈瑟菌时,应注意保暖,不可置冰箱保存。
3 浆膜腔积液标本采集
浆膜腔积液包括胸水、腹水、心包液、关节液和鞘膜液等,以严格无菌操作抽取数亳升液体置无菌试管或小瓶送检。对易自凝的标本可添加抗凝剂。
4 胃液标本采集
试验前1天停用影响胃酸分泌的药物,如抗胆碱脂类及碱性药物。试验前晚8:00后禁食、禁饮、禁烟。有胃排空迟缓者,则在试验前1~2天进流质饮食。
由受试者空腹坐姿,插管抽取胃液。弃去残余胃液,连续抽取1h胃液作为空腹胃液标本,计量,以此测基础胃酸分泌量。
皮下或肌内注射五肽胃泌素6ug/kg,然后每15分钟留1份标本,共留取4次分别计量送检。
5 十二指肠引流液及胆汁检查
按照胆汁来源不同,可分为甲、乙、丙、丁四管,在容器上必须注明。
6 痰液标本采集
6.1 咳痰:清水反复漱口后用力咳嗽,从呼吸道深部咳出新鲜痰液(请区分痰与唾液)于无菌容器送检。痰量极少者可用45℃ 10%氯化钠溶液雾化吸入导痰。
6.2对咳嗽乏力或昏迷病人,可用吸痰管经鼻腔或口腔抵达气管腔内吸引痰液。用纤维支气管镜可直接在病灶部位采集高浓度的感染病原菌,但不能完全避免咽喉部正常菌群污染。
6.3 双侧肺部感染伴人工气道如气管切开或气管插管患者,可用吸痰管经人工气道插至肺叶支气管水平吸引痰液。
6.4 对重症、难治,或伴免疫抑制,或疑似厌氧菌引起的医院内肺部感染,可采用环甲膜穿刺经气管吸引(TTA)、经胸壁穿刺肺吸引(LA)、经纤维支气管镜或人工气道作防污染双套管毛刷(PSB)或防污染支气管肺泡灌洗(PBAL)采集无口咽部菌群污染的痰液,进行精确的感染病原学诊断。
6.5 痰标本不能及时送检者,可暂存4℃冰箱。室温下延搁数小时定植于口咽部的非致病菌呈过度生长而肺炎链球菌、葡萄球菌和流感嗜血杆菌检出率则明显下降。
七、微生物培养标本的采集
1 微生物培养标本采集基本原则
1.1 发现感染应及时采集微生物标本作病原学检查,二、三级医院微生物标本送检率不应低于70%。
1.2尽量在抗菌药物使用前采集标本。
1.3标本采集时应严格执行无菌操作,减少或避免机体正常菌群及其他杂菌污染。
1.4标本采集后应立即送至实验室。床边接种可提高病原菌检出率。
1.5以棉拭子采集的标本如咽拭、肛拭或伤口拭子,宜采用插入运送培养基送检。
1.6混有正常菌群的标本如咳痰、尿液、伤口拭子,不可置肉汤培养基内送检。
1.7盛标本容器须经灭菌处理,但不得使用消毒剂。
1.8送检标本应注明来源和检验目的,使实验室能正确选用相应的培养基和适宜的培养环境。
2 常见感染标本采集与送检方法
2.1 血液及骨髓
2.1.1 通常采血部位为肘静脉。疑似细菌性心内膜炎时,以肘动脉或股动脉采血为宜,切忌在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本。
2.1.2 采血部位的局部皮肤应严格消毒。将采集的血液注入血培养基前,应更换针头或过火消毒针头。
2.1.3 每次采血量成人5-10ml,婴幼儿1-2ml,脊髓1-2ml。培养基与血液之比以10∶1为宜,以稀释血液中的抗生素、抗体等杀菌物质。采样后应立即送检。
2.1.4 怀疑菌血症应尽早采血,体温上升阶段采血可提高阳性率,但要防止因等待而延误时机。对已用抗菌药物而不能停药者,可在下次用药前采血。
2.1.5对疑为细菌性骨髓炎或伤寒病人,在病灶或者髂前(后)上棘处严格消毒后抽取骨髓1 ml作增菌培养。
2.2 尿培养标本的采集 留尿应在未服用抗生素之前或停用后3-5天进行。通常应留取晨尿,留尿前应清洗尿道口,留取中段尿,尿量以试管1/2为宜,严格无菌操作,采集后应立即送检,夏季不超过半小时,冬季不超过一小时。无菌尿管送检过程中尿管口应直立朝上,切勿平放,严禁尿液与管塞接触。
2.2.1 中段尿:女性采样前应先用肥皂水或0.1%高锰酸钾溶液冲洗外阴部及阴部及尿道口;男性翻转包皮冲洗,用0.1%新洁尔灭消毒尿道口,灭菌纱布擦干后,收集标本。
2.2.2 导尿管导尿采样可减少污染。对留置导尿者,可用碘酒消毒尿道口处的导尿管壁,用真空针筒的细针斜穿管壁抽吸尿液;或拔去闭式引流的集尿袋,弃去导尿管前段尿液,留无污染的膀胱内尿液数毫升送检。不可从集尿袋的下端管口留取标本。
2.2.3 尿厌氧菌培养,或婴幼儿中段尿采集困难,或培养结果与病情不符时,可经耻骨上皮肤穿刺采集无污染的膀胱内尿液。
2.2.4 送检标本以晨起第一次尿液为佳。
5、室温下尿标本担搁稍久可致尿内细菌浓度明显增加而影响病原菌与污染菌的区分。不能立即送检者,可暂存4℃冰箱。
2.3 痰培养标本的采集:最好在服用抗菌素前或停用3-5天后方可采集。以晨痰为好。
2.3.1 咳痰:清水反复漱口后用力咳嗽,从呼吸道深部咳出新鲜痰液(请区分痰与唾液)于无菌容器送检。痰量极少者可用45℃ 10%氯化钠溶液雾化吸入导痰。
2.3.2对咳嗽乏力或昏迷病人,可用吸痰管经鼻腔或口腔抵达气管腔内吸引痰液。用纤维支气管镜可直接在病灶部位采集高浓度的感染病原菌,但不能完全避免咽喉部正常菌群污染。
2.3.3 双侧肺部感染伴人工气道如气管切开或气管插管患者,可用吸痰管经人工气道插至肺叶支气管水平吸引痰液。
2.3.4 对重症、难治,或伴免疫抑制,或疑似厌氧菌引起的医院内肺部感染,可采用环甲膜穿刺经气管吸引(TTA)、经胸壁穿刺肺吸引(LA)、经纤维支气管镜或人工气道作防污染双套管毛刷(PSB)或防污染支气管肺泡灌洗(PBAL)采集无口咽部菌群污染的痰液,进行精确的感染病原学诊断。
2.3.5 痰标本不能及时送检者,可暂存4℃冰箱。室温下延搁数小时定植于口咽部的非致病菌呈过度生长而肺炎链球菌、葡萄球菌和流感嗜血杆菌检出率则明显下降。
2.4 脓汁或创面分泌物
2.4.1 无菌生理盐水擦洗病灶表面后,用棉拭子采取病灶深部的脓液和分泌物,置运送培养基内送检。
2.4.2 对未溃破的脓肿宜用碘酒、酒精消毒皮肤后,以无菌注射器抽取脓液送检;也可于切开排脓时用无菌棉拭采样。
2.4.3 采样前病灶局部应避免用抗菌药物或消毒剂。
2.5 粪培养标本的采集:用专用无菌棉拭子管采集。
采集原则:腹泻病人应在急性期采集,最好在使用抗菌素或停用3-5天后方可采集。采集新鲜有脓血黏液部位的粪便,半小时内送检。
2.5.1 排便后,挑取有脓血、粘液部分的粪便约2-3克(液状粪便则取絮状物),成盛于灭菌广口瓶或蜡纸盒送检。用棉拭挑取粪便插入Cary-Blair运送培养基或pH7.0的磷酸盐甘油中送检,可提高病原菌检出率。
2.5.2 对为易获取粪便者或婴幼儿,可用直肠拭子(又称肛拭子)采集。将拭子前端用无菌甘油水湿润,然后插入肛门约4-5cm(幼儿约2-3cm)处,轻轻旋转擦取直肠表面粘液后退出,置运送培养基内送检。
2.6 咽拭、口腔拭子
2.6.1 病人清水嗽口后,由检查者将其舌外拉使悬雍垂尽可能向外牵引,棉拭子越过舌根到咽后壁或悬雍垂的后侧,反复擦拭数次,插入运送培养基。棉拭子应避免触及舌、口腔粘膜和唾液。
2.6.2 对化脓性扁桃体炎或口腔念珠菌病,用棉拭在病灶部位擦拭数次即可。
2.7 浆膜腔积液、脑脊液标本
2.7.1 浆膜腔积液包括胸水、腹水、心包液、关节液和鞘膜液等,以严格无菌操作抽取数亳升液体置无菌试管或小瓶送检。对易自凝的标本可添加EDTA抗凝剂。
2.7.2 严格无菌操作下采取脑脊液数毫升于无菌试管。标本采集后应立即送检,以防细菌死亡。疑似有脑膜炎奈瑟菌时,应注意保暖,不可置冰箱保存。
2.8 生殖道标本
2.8.1 根据不同感染种类和病变特征采集不同的标本。采集尿道标本时,先用生理盐水局部清洗,以无菌棉拭子插入尿道口1-2 cm停留十余秒钟,轻轻旋转拭子后退出。
2.8.2 对外阴部糜烂、溃疡,生理盐水清洗后用棉拭擦取病灶边缘的分泌物。
2.8.3阴道和宫颈口分泌物须在窥阴器下用长棉拭采集。
2.8.4子宫内分泌物需用无菌导管抽取。导管外套一层保护膜,插入子宫后再刺穿该膜予负压吸引,可减少阴道菌群污染。
2.8.5女性盆腔脓肿,应在阴道局部消毒后,由直肠子宫陷凹处进针抽取。
2.8.6 前列腺液需进行前列腺按摩获取。
2.9 组织标本
2.9.1 表浅的感染组织和各种窦道标本可用棉签擦拭、小刀刮取、穿刺抽吸或手术切除对窦道和瘘管应深部刮取,获得部分管壁组织。
2.9.2 深部组织标本可经皮穿刺采集或手术切取。标本置无菌容器并加入少量生理盐水以保湿度,或置肉汤增菌液,或置血平皿内送检。
2.9.3 尸检标本应于死后20h内采取,以防肠道等菌群侵入引起污染。
2.9.4 作病原菌分离的组织标本,不可用福尔马林固定。疑有污染的较大组织块,可用烧红的烙铁烧灼其表面或置沸水中5-10秒钟使表面变白消除污染后,再用无菌器械切开组织,取中央部位组织送检。
2.10 静脉导管
2.10.1 从病人体内拔出静脉插管,用无菌技术剪去导管体外部分。体内段导管立即置血琼脂平板上作滚动涂布接种。不能作床边接种者,将导管置含有少量生理盐水的无菌试管内送检。
2.10.2 也可将剪下的导管体内段置肉汤增菌液或用于血培养的培养液内,但不能区分导管感染菌与少量的定植菌。
八、性病检查标本的采集
1 淋病检查采样指导:
1.1 男性标本
1.1.1 应在清洗龟头部后,用2%红汞或1:1000新洁尔灭消毒尿道口,挤出分泌物立即以无菌棉拭子采取,立即送检,或以专用的无菌细拭子插入尿道口1~2cm,旋转采取。
1.1.2 如疑为前列腺炎、精囊炎的慢性淋病奈瑟菌感染应由医师按摩前列腺,以无菌手续自尿道口采取前列腺液送检。
1.1.3 中段尿:应翻转包皮冲洗,用2%红汞或1:1000新洁尔灭消毒尿道口,弃去前段尿,留取在膀胱内停留6~8h以上的中段尿。
1.2 女性标本
1.2.1 成年妇女自宫颈采取标本,应在扩阴器的支持下,选取有炎症或分泌物部位,先以无菌棉拭子拭去表浅层分泌物,再用另一拭子取分泌物送检。
1.2.2 如未成年幼女疑患性病传播疾病时,不应使用扩阴器,以一无菌拭子在阴道口处采取分泌物送检。
1.2.3 中段尿:女患者以手指将阴唇分开,用肥皂水或碘伏清洗外阴,然后以清水冲洗尿道口周围,擦干并排出前段尿液后,用无菌容器接取膀胱内停留6~8h以上的中段尿。
2 沙眼衣原体检测采样指导
2.1 男性标本:尿液标本。采集前1小时内不应小便,留取20~30mL“初射”尿液。
2.2 女性标本:子宫颈棉拭标本。应在扩阴器的支持下,选取有炎症或分泌物部位,先以无菌棉拭子拭去表浅层分泌物,丢弃,再用另一拭子伸入子宫颈内膜,转动10~30秒,取出棉拭时应避免与阴道表面接触。
3 支原体检测采样指导
3.1 男性标本:应在清洗龟头部后,用2%红汞或1:1000新洁尔灭消毒尿道口,无菌拭子插入尿道口2~4cm,轻轻捻转取柱状上皮细胞。也可用前列腺液、精液或中段尿。
3.2 女性标本:子宫颈棉拭标本。应在扩阴器的支持下,选取有炎症或分泌物部位,先以无菌棉拭子拭去表浅层分泌物,丢弃,再用另一拭子伸入子宫颈内膜,转动10~30秒,取出棉拭时应避免与阴道表面接触。
4 阴道加特那菌检测采样指导 收集阴道分泌物。
5阴道毛滴虫检测采样指导
5.1 分泌物
女性取材:用无菌棉拭子从阴道后穹隆处取泡沫样分泌物。
男性取材:最好在清晨排尿前采集,用男性尿道拭子伸入尿道2.5cm以上停留1—2分钟后取出送检。
5.2 尿液:收集清晨首次尿或憋4小时后的首次尿的前段尿10—20ml送检。
5.3 前列腺液:取前列腺液于洁净的载玻片上送检。
6 念珠菌培养采样指导
6.1 分泌物
女性:用灭菌棉拭子从阴道后穹隆处取分泌物。最好取奶酪样或豆渣样白色凝块。
男性:用灭菌钝刀蘸取少量灭菌生理盐水,刮取龟头或阴茎包皮,取分泌物及皮屑。尿道感染者用尿道拭子缓慢伸入尿道内2—4cm处取材。
6.2 尿液:收集清晨新鲜中段尿10—20m1,以2000r/min离心15分钟后,取沉渣涂片。
6.3 前列腺液:前列腺按摩,无菌取材。
6.4 龟头皮屑:钝刀刮取皮屑或湿棉拭子用力擦拭。
九、疑似SARS病人和SARS病人标本的采集
疑似SARS病人和SARS病人临床检测标本包括体液、血液、分泌物、排泄物及组。病毒标本在标本中存活时间长于单独存在时间,因此,一切取自疑似SARS病人和SARS病人的标本均应视为带病毒强传染性样品,依据传染病法处理。
1 标本的采集:详细登记有关病例的姓名、性别、年龄等基本信息,发病日期、采样日期等。
1.1 尿液标本的采集
将2-5ml尿液装入带盖收集容器内,盖紧盖子,加注特别标识,密封送检。
1.2 分泌物的采集
1.2.1咽拭子:用无菌湿棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,再将棉签放入无菌试管中,加注特别标识,密封送检。
1.2.2 痰液:让患者直接将痰液咳入无菌平皿中,加注特别标识,密封送检。
1.2.3 粪便标本的采集:将10-50cm3的粪便装入粪便杯或尿液收集容器内,盖紧盖子,加注特别标识,密封送检。
1.2.4 血液标本的采集:血液标本一律使用负压静脉采血,不使用末梢血,以免在采集过程中造成更大范围的污染。标本采集后加注特别标识,密封送检。
2 标本的运输:送检的标本,要求密封包装,放在专门为运输用的容器内,加盖,有专人运送。运送过程中严防遗散。送入检验科,由专人签收、登记。
十、标本采集的影响因素
1 采血部位的影响 一般在前臂窝附近的肘静脉选择一根比较明显的静脉做穿刺。当静脉不明显时,可选取手背、手腕,窝及外踝处静脉,幼儿可选择外颈静脉采血,偶或用前囟静脉窦采血。不应从正在静脉输注药物的输液针管中抽。此时血液受到液体稀释和药物的干扰。
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