高效液相色谱培训课件.doc

培 训 课 件

年月

目 录

……..液相色谱的理论部分
……..液相色谱的操作部分（三聚氰胺的检测）
……..色谱柱的安装
…….. 三聚氰胺检测卡的使用
…….. 水解蛋白的检测
.…….灰分的测定
…….马弗炉的使用
……..食品中蛋白质的测定
……仪器回收率的测定
……的使用
……..塑化剂的检测

一、高效液相色谱的理论部分
一、 色谱定义
1、 色谱法：利用组分在两相间分配系数不同而进行分离的技术。
2、 流动相：携带样品流过整个系统的流体。
3、 固定相：静止不动的一相，色谱柱。
二、 色谱的分类
1、 高效液相色谱。、气相色谱。、薄层色谱。、毛细管电泳。
三、 色谱优点
1、 同时分析。、分离性能好。、灵敏度高（—）。、进样量小（—μ）。
四、 色谱要求
1、 水：专门的纯水机或超纯水机，理想的用水应为18.2MΩ 超纯水，并通过μ的滤膜，除去热源、有机物、无机离子等。不管采用何种途径，配制流动相应用新鲜水。
2、 有机溶剂：色谱纯，用前需要有机膜过滤，超声。
3、 缓冲盐：水系膜过滤，超声，冷藏，易长菌。使用前后必需要用：的甲醇水过渡，不能直接使用纯有机溶剂。否则会造成腐蚀、磨损、阻塞等现象。使用前后，需要用纯水冲洗泵头清洗管路，易受细菌和霉菌的影响。
4、 脱气（超声）：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡。泵中气泡使液流波动，改变保留时间各峰面积；柱中气泡使流动相绕流，峰变形；检测器中的气泡产生基线波动。
五、 高压梯度洗脱：用两台高压输液泵将两种溶剂输入。避免分析时间长，分离度差，在最短时间内获得最佳的分离。
六、 柱温箱，我们设定的柱温为40℃，这样是为了分析结果重现性好，提高柱效，降低柱压，保证检测稳定性。
七、 分析柱的维护
1、 在使用新柱之前，最好用强溶剂在低流量下（）冲洗，长时间未用的分析柱也要同样处理。
2、 定期作用强溶剂冲洗柱子。
3、 我们使用的流动相主要是缓冲盐，要先用：的甲醇水溶液冲洗，再用有机溶剂冲洗。
4、 净化样品。
5、 分离条件。
6、 不使用时，要盖上盖子，避免固定相干涸。
八、 紫外检测器，原理基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收。
九、 我们现有这种方法最低检出限为，所以对于小于的低含量样品，我们只能做到定性检测。
1、 色谱峰的定性鉴别 通过目标物的保留时间进行定性，需要指定保留时间误差范围（时间窗、时间带）。
2、 在相同的分析条件下 保留时间相同并不肯定是同样的组份，保留时间不同肯定不是同样的组份。
3、 定性确认 仅仅通过保留时间并不能完全确证该物质，通过加入标准物确认，通过色谱条件确认，质谱联用也可以作为进一步确证的手段。
十、外标法 是实验室常用的定量方法，定量结果准确。其特点：
、不需要所有峰都流出或被检测到，只对目标组分作校正。
、需要标准样品。
、进样量必须准确。
、仪器必须有良好的稳定性。
十一、吸液过滤器清洗：用纯的异丙醇或的稀硝酸超声，超声清洗无效时，需要更换。检查吸滤器网眼堵塞的方法，取出过滤部分，记录压力波形。如果取出后压力波形不正常，则吸滤器网眼堵塞。

二、液相色谱操作部分

液相色谱简易流程图
溶剂→输液泵→进样器→色谱柱→检测器→数据处理

一、原理：试样用三氯乙酸溶液乙腈提取，经阳离子交换固相萃取柱净化后，用高效液相色谱测定，外标法定量。
二、试剂与材料
除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为 规定的一级水。
甲醇：色谱纯。
乙腈：色谱纯。
氨水：含量为～。
三氯乙酸：()准确称取10g三氯乙酸于1L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀后备用。。
柠檬酸。
辛烷磺酸钠：色谱纯。
离子对试剂缓冲溶液：准确称取2.10g柠檬酸和2.16g辛烷磺酸钠，加入约水溶解，调节至后，定容至1L备用。
甲醇水溶液：准确量取甲醇和水混匀后，用有机系膜过滤，超声半小时，备用。并在下一次用前需要再超声—。
氨化甲醇溶液（）：准确量取氨水和甲醇，混匀后备用。
三聚氰胺标准品：，纯度大于。
三聚氰胺标准储备液：准确称取（精确到）三聚氰胺标准品于容量瓶中，用甲醇水溶液（）溶解并定容至刻度，配制成浓度为的标准储备液，于4℃避光保存。
阳离子交换固相萃取柱：混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为基本苯磺酸化的聚苯乙烯二乙烯基苯高聚物，填料质量为，体积为或相当者。使用前依次用甲醇、水活化。
定性滤纸。
氮气：纯度大于等于。
微孔滤膜：µ,有机相。
注：其中甲醇、乙腈、缓冲盐都需要过滤并超声（用有机系或水系膜过滤，超声半小时，并在下一次用前需要再超声）。甲醇水也要超声半小时，并在下一次用前需要再超声。
三、仪器和设备
高效液相色谱（）仪：配有紫外检测器或二级管阵列检测器。
分析天平：感量为0.0001g和0.01g。
离心机：转速不低于。
超声波水浴。
固相萃取装置。
氮气吹干仪。
涡旋混合器。
具塞塑料离心管：。
振荡器。
四、样品前处理
提取：称取2g（精确至0.01g）试样于具塞塑料离心管中，加入三氯乙酸溶液和乙腈，超声提取，再振荡提取后，以不低于离心。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容至，移取滤液，加入水混匀后做待净化液。
净化：将步中的待净化液转移至已经活化的固相萃取柱中。依次用水和甲醇洗涤，抽至近干后，用氨化甲醇溶液洗脱。整个萃取过程流速不超过。洗脱液于50℃下用氮气吹干，残留物（相当于0.4g样品）用流动相（也可以用水）定容，涡旋混合，用１ｍＬ注射器吸出样品，然后拿下针头，慢慢的过微孔滤膜盖上样品瓶盖，并使样品瓶盖内的小胶垫有颜色的一面对着样品，轻轻带上盖子即可，不要把盖拧的太紧，把样品瓶放在样品架上相应的位置，供测定。
五、实验具体操作步骤：
1、 连接好各个电源，打开电脑，由下至上打开各个仪器开关以及自动进样器的开关。在画面上双击分析按钮，听到“吱、吱”的声音，表明电脑已经识别到各个连接部件，除柱温箱外（柱温箱的温度设定为40℃，温度要过几分钟才能升到），其它部件显示灯均应为绿色。
2、 换上已经超声过的：的甲醇：水，依次把泵的旋钮按“逆时针”方向由原来的“竖直”位置旋至“水平”位置，并分别按下两个泵的键，分钟后结束，再“顺时针”方向将两个泵的旋钮由“水平”位置旋至“竖直”位置。同时注入ｍＬ纯水，洗一下泵头。然后在实时分析状态下点击工具栏上的“仪器开关”按钮，修改参数，并点击“下载”。
3、 第二步进行半小时后（也称洗脱半小时或过渡半小时），点击实时分析状态下工具栏上的“泵的开关”按钮，将泵关掉，换成做样所用的流动相。我们现在用色谱主要检测三聚氰胺，所用流动相为缓冲盐（辛烷磺酸钠柠檬酸）和乙腈。然后同样需要“”分钟，过程同步。然后，修改仪器参数，在正常状态下的简单设置里，找到泵的模式:二元高压梯度;总流速：泵的浓度：;检测器波长：;结束时间：;柱温箱温度：40℃。然后起个文件名，找个位置把这个方法另存在一个你容易找到的位置。因为这个方法在后处理时我们要用它进行数据分析，然后点击“下载”，将信息传送给仪器。
4、 一个小时后观察基线走平情况，若平，我们就可以做样了，不平就再多走一会。我们做样较多，我们就采用批处理的方法。首先，进行单次分析，做一个标准样，得到目标物质的保留时间，然后才能进行批处理。因为同一种目标物质的保留时间会随流动相和环境温度的不同而不同，所以每天做样都要重新做校准曲线。在实时分析中的数据采集状态下，点击助手栏中的“单次运行”，会弹出一个对话框，这里我们要添写上①样品名称：某一浓度的标准样，②数据文件：改为与你今天保存方法的文件夹一致的数据文件；③样品瓶号：与你所要单次运行的标准样相对应的瓶号数;④进样体积：µ,点击“确定”。
5、 单次运行结束后，我们双击中的“再解析”，打开数据分析状态，在数据文件中找到标准样，双击它，会在化合物表视图中看到一个表格，点一下结果，就会看到保留时间的数值。记下这个保留时间，下面执行批处理时会用到。
6、 点击实时分析助手栏中的批处理，弹出一个表格，在这里，我们添写以下内容：①样品瓶号：样品架上的瓶号是从号开始，我们就依次“向下填充”从开始至我们所需要的瓶号即可。②样品名称：我们前五个都是标准样，我们就从第行开始填写样品名称。③样品：对应的填写样品的批次。④样品类型：在标准样的第一个空格里点下表格后面的小黑键头，出来一个对话框，点下标准，初始化校准曲线，然后确定；第二个样准样到最后一个标准样都点击添加校准曲线级别。样品均写上未知样。⑤方法文件：找到你保存的那个方法文件并打开它。⑥数据文件：找到与方法文件相同的文件夹并写上标准样,在它的空格内点击详细信息，写上至行，未知样并在它的空格内点填加系列。⑥级别:标准为至个级别，未知样均为。⑦进样体积： µ。点击左侧助手栏中的返回，再点“数据分析”，在此状态下点击菜单栏中的“方法”命令下的“数据分析参数”，弹出一个对话框，前面的几个参数看一下，都是设定所需要的参数，我们就不用管它，主要看一下“化合物表”这一项，添写保留时间，和五个级别的浓度值，浓度要由低到高的顺序。添写完后，点击确定，并打开文件，点击另存批处理文件为，保存在今天的文件夹里。然后再点击批处理开始，进行批处理分析。
7、 校准曲线：批处理，自动生成校准曲线。运行到第六针时，我们就可以在再解析状态下，打开数据文件，双击每一标准样，然后在它的图上点右键查看校准曲线信息，就能看到曲线的线性关系，至少为两个以上。
8、 分析结束，我们打开再结析状态，查看结果并乘以稀释因子则是我们检测样品的最终结果。打开文件找到报告模板，把每一个样品的数据文件用鼠标左键拖到报告模板上，并打出报告，关闭再解析对话框。回到实时分析对话框，在菜单栏上关上泵，换上超声的：的甲醇：水，进行，同时注射器再注水，清洗泵头。如果第二天不需要做样，甲醇水走半小时后，再换纯甲醇走半小时。
六、要注意几点：第一，每一次换流动相，都要先关闭泵，要。结束后，一定要再打开泵。第二，换完流动相，要查看下吸滤头是否放在液面下，并要尽可能地把流动相的瓶口封好。第三，流动相要准备充分，实验中途不能添加，只能是更换–超声–重新走基线，比较繁琐。
七、平常保养
做好平常的保养可以有效的降低故障的发生率
做好平常的保养可以延长仪器的使用寿命
常做的保养()保证仪器的使用环境（经常清洁仪器，尤其是灰尘）()泵的保养（使用缓冲盐时要清洗柱塞，水和盐不要长期保存在泵里）（）进样器要经常清洗，避免污染物吸附或者堵塞管路（）色谱柱要定期清洗，保证柱效及使用寿命（）系统中不要长期保存水和盐，长时间不用时应将仪器所有部分更换为以上的甲醇，避免细菌的滋生及盐的析出。
八、吸滤头堵塞时表现为管路中不断有气泡生成，用异丙醇（或稀硝酸），超声波清洗，再用蒸馏水清洗。

三、液相色谱柱的安装

打开柱温箱，里面按色谱柱的位置标有箭头，与色谱柱上的箭头方向一致即可。拧下柱温箱内色谱柱两端的螺丝取下色谱柱，再打开封在新色谱柱两端的顶盖，小心地拧紧两端的螺丝，色谱柱的安装就完成了。
长时间不用仪器，应将柱子拿下来，堵上柱子两端，防止流动相干掉，保存在以上的甲醇溶剂里。

四、三聚氰胺快速检测卡的说明及使用

三聚氰胺快速检测卡用于定性、半定量检测样品中三聚氰胺残留，对于我们的奶粉检测限为。它的灵敏度达到。
下面以奶粉为例讲述一下卡的使用。
试样的处理，奶粉用纯净水按：稀释，一般溶解奶粉的水温需要度，用涡旋或手动强烈振荡分钟。然后使试样恢复室温。
从包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时内尽快地使用，以免腐败造成失效或污染。
将检测卡平放，用滴管吸取稀释后的待检样品溶液，垂直滴加滴（µ）于加样孔中，加样后开始计时。
检测结果：分钟读取结果，分钟后结果无效，根据线和线的情况判断结果的阴阳性。
结果的判断：阴性（）：、线均出现。表示样品中不含有三聚氰胺或浓度低于检测限。阳性（）：检测线不出现，则表示样品中三聚氰胺浓度高于检测限。无效：未出现质控线，表明操作过程不正确或检测卡已失效。
注意事项：
检测卡请在保质期内一次性使用。
使用前将检测卡和待检样本恢复至室温。
检测时避免阳光直射和电风扇直吹。
尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面。
样品滴管不可混用，以免交叉污染。
如果样品偏酸或偏碱，需要调节至中性后再检测。
样品垂直滴加滴于加样孔中，若奶粉样品爬行缓慢可适当补加滴。
出现阳性结果时应按法定程序分瓶封装样品用于确证法检测。

五、水解蛋白类物质的检测

目的
乳制品企业以蛋白质含量计价，部分奶农为了掺水不使蛋白质含量降低，同时也能提高非脂干物质的含量而向原奶中加水解蛋白粉。
原理
用硝酸汞沉淀除去乳酪蛋白，但水解蛋白不会被除去，与饱和苦味酸产生沉淀反应。
试剂配制
除蛋白试剂
硝酸汞14g,加入蒸馏水，加浓硝酸约，加热水助溶，待试剂全部溶解后加蒸馏水至。
饱和苦味酸溶液
称取2g固体苦味酸于烧杯中，用冷却的蒸馏水定容至，后将定容好的溶液倒入烧杯中煮沸（沸腾即可），然后将液体冷却，待结晶析出后将上清液倒入试剂瓶中。
操作方法
准确称取5.6g奶粉，溶于60℃～70℃蒸馏水中，搅拌使奶粉充分溶解,制成复原乳。取复原乳，放入干净干燥的试管中，加硝酸汞混合均匀，边加边摇动，不可产生大体积紊状物，将摇匀的液体过滤于试管中收集滤液约左右，然后加入饱和苦味酸,观察是否浑浊。浑浊则判定含有水解蛋白。
注意事项：
过滤时观察滤液是否澄清，如需要可以二次过滤，一定保证滤液的澄清度，否则后面的试验无法判断。
如果奶粉含有一些离子也可以导致试验变浑浊，造成试验无法判断，需要用别的方法进一步判定。

六、食品中灰分的测定

食品中除含有大量有机物质外，还含有丰富的无机成分。食品经高温燃烧，有机成分挥发逸散，而无机成分则残留下来，这些残留物称为灰分。灰分是标示食品中无机成分总量的一项指标 。
原理：食品经灼烧后所残留的无机物质称为灰分。（一定量的样品经碳化后放入马弗炉内灼烧，使有机物被氧化分解，以二氧化碳、氮的氧化物及水的形式逸出，而无机物质以硫酸盐、磷酸盐、石碳酸盐、氯化物等无机盐和金属氧化物的形式残留下来，这些残留物即为灰分，称量残留物的质量即可计算出样品中总灰分的质量分数。）
试剂：、：的盐酸溶液。
、的三氯化铁溶液和等量蓝墨水的混和合液。
仪器和设备
马弗炉：温度≥ ℃。
天平：感量为 。
石英坩埚或瓷坩埚。
干燥器（内有干燥剂）。
电热板。
水浴锅。

操作步骤：
1、 坩埚的准备。将坩埚用：的盐酸煮，洗净晾干后，用三氯化铁溶液与蓝墨水的混合液在坩埚外壁及盖上编号；然后将坩埚置于（± ）℃的马弗炉中灼烧，再将其冷却至200℃以下后取出，放入干燥器中冷却后，精确称量，并重复灼烧至恒重（重复灼烧至前后两次称量结果相差不超过为恒重）。
2、 样品测定（分别以雪糕绿豆沙、饮料山楂汁、固体粉末奶粉为例）（）样品的称取。首先都要将样品混均，在恒重的坩埚中奶粉加入—3g、雪糕和饮料-10g样品后，精确称量（0.0001g）。（）样品碳化。雪糕和饮料须先在沸水浴蒸干。固体或蒸干后的样品，先以小火加热使样品充分碳化至无烟。（）样品灰化。将碳化后的样品置于马弗炉中，在（± ）℃灼烧至无碳粒，即灰化完全。冷却至200℃以下取出，放入干燥器中冷却，精确称量。重复灼烧至前后两次称量相差不超过为止。
计算：试样中灰分按式计算

式中：
——坩埚和灰分的质量，单位为克（）；
——坩埚的质量，单位为克（）；
——坩埚和试样的质量，单位为克（）。
试样中灰分含量≥ 时，保留三位有效数字；试样中灰分含量＜ 时，保留二位
有效数字。
精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 。

七、智能马弗炉的简单操作

主要技术参数及功能：
额定温度：1000℃
功 率：
控温范围：300℃∼999℃
温度分辨率：1℃
控温精度：±2℃
工作环境：室内0℃∼40℃，相对温度≤
电源电压：±±
主要功能：
专用测试程序个：慢灰、快灰、挥发分。
通用测试程序个：可以设置个恒温点，每个恒温点的恒温时间可任意设定。
有断偶、超温报警的功能。
试验操作
控制面板（见下图）上设有个功能选择键：慢灰、快灰、挥发分和通用。个置数键：设置、百位、十位和个位。另外还有一个“启动置入”键和一个“复位”键。使用电源开关机和按“复位”键，屏幕显示“”提示符，仪器进入待命状态。
时间显示屏
温度显示屏

复 位
通用
挥发
快灰
慢灰
启动置入
个位
十位
百位
设置
通用
挥发
快灰
慢灰
报警
报讯
加热
就绪

我们现在测的就是通用灰分，下面就是怎样设置通用测试参数。
通用测试需要设置个温度参数和个时间参数，每个温度参数可达999℃，时间参数可达小时，以下是设置步骤：
按次“设置”键，在显示“000”时键入密码“622”，按“启动置入”键确认。
此时温度显示处显示上一次设置的并闪烁，使用“百位”、“十位”和“个位”键设置温度，然后按“启动置入”键确认。
进入下一个参数和设置。此时时间显示上一次设置的时间，小时档闪烁，按“百位”键，闪烁位在时、分、秒处循环（闪烁位表明可以输入），再按“十位”、“个位”键设置需要的恒温时间（即按“百位”键选择时、分、秒，按“十位”和“个位”键输入时间）。设置好后按“启动置入”键确认。
参数的设置顺序为：(其中，为温度参数，为时间参数)。
所有参数设置好后，按“启动置入”键确认后程序复位。

八、蛋白质的测定

原理：食品中的蛋白质在催化加热的条件下被分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵。碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后以盐酸或硫酸标准滴定溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质的含量。
试剂：
除非另有规定，本方法中所用试剂均为分析纯，水为 规定的三级水。
硫酸铜（· ）。
硫酸钾（ ）。
硫酸（ 密度为1.84g）。
硼酸（ ）。
甲基红指示剂（ ）。
溴甲酚绿指示剂（ ）。
亚甲基蓝指示剂（ · ）。
氢氧化钠（）。
乙醇（ ）。
硼酸溶液（ ）：称取 硼酸，加水溶解后并稀释至 。
氢氧化钠溶液（ ）：称取 氢氧化钠加水溶解后，放冷，并稀释至 。
硫酸标准滴定溶液（ ）或盐酸标准滴定溶液（ ）。
甲基红乙醇溶液（ ）：称取0.1g 甲基红，溶于 乙醇，用 乙醇稀释至 。
亚甲基蓝乙醇溶液（ ）：称取0.1g 亚甲基蓝，溶于 乙醇，用 乙醇稀释至 。
溴甲酚绿乙醇溶液（ ）：称取0.1g 溴甲酚绿，溶于 乙醇，用 乙醇稀释至 。
混合指示液： 份甲基红乙醇溶液（ ）与 份亚甲基蓝乙醇溶液（ ）临用时混合。也可用 份甲基红乙醇溶液（ ）与 份溴甲酚绿乙醇溶液（ ）临用时混合。

仪器和设备：
1、 天平：感量为。
2、 消化单元
3、 蒸馏单元
分析步骤：
1、 样品的处理。花生米切碎称量0.5g左右，奶粉称量0.5g 左右，花生露 左右（约相当于—氮），精确至 ，移入消化管中，加入 硫酸铜、 硫酸钾及硫酸。在加硫酸前先打开消化炉（）的电源开关并开至最大加热档。硫酸加完，安好装置，把冷却水开关打开，加热档由最大改为档，先慢慢加热然后逐渐升温，观察别让样品泡沫飞溅到上横梁上，先慢后快调解加热档，直至最后调到最大加热档。观察样品由黑色变成完全澄清透明绿色状态，再消化半小时后即完成消化过程，关闭电源，取下消化管放在支架上冷却，冷却后，每个消化管中加入蒸馏水，待蒸馏。
2、 蒸馏。先打开蒸馏单元的电源预热，打开冷却水开关。听到响声预热结束，先按加碱键进行碱洗。向接收瓶（锥形瓶）中加入的硼酸溶液,并加入—滴指示剂。碱洗结束，开始蒸馏样品。先按开始→加碱→开始→蒸馏分钟结束→取下接收瓶→滴定至灰色为滴定终点→计算。
3、 计算：
试样中蛋白质的含量按下式进行计算。

式中：
——试样中蛋白质的含量，单位为克每百克（ ）；
——试液消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积，单位为毫升（）；
——试剂空白消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积，单位为毫升（）；
——硫酸或盐酸标准滴定溶液浓度，单位为摩尔每升（）；
—— 硫酸[ ( )＝ ]或盐酸[ () ＝ ]标准滴定溶液相当的氮的质量，单位为克（ ）；
——试样的质量，单位为克（ ）；
——氮换算为蛋白质的系数。一般食物为 ；纯乳与纯乳制品为 ；面粉为 ；玉米、高粱为 ；花生为 ；大米为 ；大豆及其粗加工制品为 ；大豆蛋白制品为 ；肉与肉制品为 ；大麦、小米、燕麦、裸麦为 ；芝麻、向日葵为 ；
复合配方食品为 。
以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，蛋白质含量≥ 时，结果保留
三位有效数字；蛋白质含量＜ 时，结果保留两位有效数字。
精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 。

九、蛋白质回收率的测定：

测蛋白质的消化过程，就是让样品中的氮游离出来与硫酸结合生成硫酸铵，通过碱化蒸馏再测定蛋白质含量。检测回收率，就用硫酸铵直接蒸馏的办法。
根据我们实验室测蛋白所用的盐酸标准溶液的浓度，硫酸铵的量称量克（精确到0.0001g）,加少量水使其溶解，其它与我们测样品的蛋白质的蒸馏是一样，并同时做空白，只是在计算时，公式中不用乘以系数，得出的结果与硫酸铵的蛋白质之比，即为仪器的回收率（以上）。（、）

十、 乳品分析仪
简单介绍

China

年月
乳品分析仪
一、目的：用于测定含乳饮料、植物蛋白饮料等液体物质的蛋白质含量和脂肪含量等。
二、范围：测值范围：脂肪： 蛋白质： 总固形物： 碳水化合物
三、本工序的流程图
开机 →清洗 →调零 →稳定性样品测试 → 样品测定 → 清洗 →记录或保存数据→关机→填写使用记录及清洁设备
四、 操作内容
设定条件：样品温度-55℃
工作环境：通风干燥，工作台面保持清洁干净。
仪器操作过程
（）测试前准备工作：先打开仪器盖板，检查瓶内—调零液和—清洗液是否充足。
（）开机：连接好电源后，（一般情况下，仪器的电源应该一直打开，至少在测量前应打开一小时）打开仪器后面的开关，然后打开电脑及软件，预热分钟。
（）清洗：敲清洗按钮或从“”菜单中选择“”。仪器会进行自动清洗。
（）调零：按钮板中敲“—”按钮或者键，仪器会自动完成调零工作。
（）稳定性样品测试：每天使用前用有“固定值的稳定性样品”选择相应的模块进行测量，测值显示结果在精确度范围内，说明仪器在受控状态。
（）样品测定：首先要轻轻摇均样品，选择对应的模块，进行测量。
测量步骤：选择产品程序即对应产品的模块将混合均匀的样品放在吸液器下按开始按钮（或按按钮，或者按屏幕上方程序的测试按钮）即可开始测试测试完毕拿下样品—进行第二个样的测试—记录结果窗口显示的测试结果。
（）清洗。敲按钮板上的“”按钮或敲键即可开始进行清洗。
（）关机。
仪器闲置时必须要求调零液充满在流路系统中，或者当强力清洗时用清洗液进行强力清洗，然后将洗液取走。
五、注意事项：
联不上机时拔下开关，重插。屏幕上“ ”变成绿色后，即可进行分析测试。
清洗液和调零液不能配置反，也不能放错位置。
改截矩时要对应好产品模块。
六、样品的选择与保存：
不能用变质、结块、分层、带有杂质、气泡和颗粒状样品。
稳定性样品（带有准备数值的样品）用完后可以冰箱中保存不超过天。并在小时内测定。
样品准备要充足。每次仪器会自动测定两次，单次测定样品量： 标准为 （可选择合适测量容器，使吸管有效吸入）
七、仪器保养：
酶标液即清洗液每周使用清洗一次。
平时清洗很关键，软管有问题时及时更换。
废液桶每班倾倒，并刷洗干净。
仪器的电源应该一直打开，至少要测量前要打开一小时。
排除流量中的空气：在菜单拦中选择“ ”选项来排除。
要经常检查清洗液和调零液的液位，液位不足时，在测试过程中，仪器会自动提示不足状态，影响测试的连续性。
选定模块，必须对应相应的产品。
延长仪器使用寿命：关闭激光光源，如果在晚上或长时间不测试时，可以在菜单中选“ ”按钮关闭激光，可增加设备使用寿命。如果重新启动可以按钮板上的“ ”按钮可以重新打开激光，仪器重新调零后即可正常测试。
一般情况下，仪器的电源应该一直打开，至少在测量前应打开一小时。
八、清洗及调零需知事项
清洗液的配制：克蒸馏水混匀清洗剂 保存在度环境中。
—调零液清洗的配制：一袋—标准试剂5L蒸馏水
—清洗液清洗配制： 一袋—标准试剂5L蒸馏水
清洗步骤：—调零液清洗—清洗液清洗—调零液清洗。
特殊情况下要进行一次完全循环清洗：测试中断分钟时；测试过程中每分钟进行一次清洗;每天工作结束后—高粘度样品或污染容器的样品。
调零时：仪器用调零液会自动测量次，如果结果在程序设计的范围内，仪器将完成调零。如果超出范围，须在清洗仪器，然后在重新调零接受。

十一、食品中塑化剂的检测
固相萃取—高效液相色谱法
原理：样品通过甲醇超声提取，硅胶柱净化，氮吹浓缩后，以乙腈水为流动相，经液相色谱柱分离，进行分析。方法线性相关系数＞，检出限为～。该方法灵敏、快速、高通量。
仪器与试剂：
高效液相色谱 固相萃取装置 固相萃取柱 超声 离心机 混合震荡器
标准储备溶液：分别准确称取适量的邻苯二甲酸酯标准品，用甲醇溶解并定容，配制成1g的标准储备液，置于冰箱中4℃保存备用。
样品前处理：
以饮料为例
固相萃取柱： ()
活化：二氯甲烷，甲醇，纯水
上样：饮料样品，减压过柱，流速＜，上样后抽干柱
清洗：甲醇水溶液
洗脱：丙酮：乙酸乙酯（：）洗脱收集，将洗脱液氮气吹干后，使用甲醇重新定容后进样。
检测方法
柱温：35℃；流动相：水（）甲醇（）；梯度：（～）→(～) ～(～)；流速：,进样量：μ。
操作：
相对于三聚氰胺的检测，塑化剂的检测有些简单，因为它的流动相不是缓冲盐，不需要甲醇水的过渡，但它的标样多，有种。
打开电脑和仪器的各开关，打开软件，确认都连接好，放上过滤超声的纯甲醇、纯水各一瓶，把两个吸滤头分别移入两个瓶内，并确认好两瓶对应的、标识，按下两个泵的“”键，先排下气泡，三分钟后“”结束，把“”键拧回原位，这时打开软件上菜单栏的仪器开关。修改参数，点击下载，仪器开始按设置的方法运行。基线走平后，打开时间程序，按所需要的参数填写表格各项。

时间()
单元
操作
值()

要切记两点，第一、做样结束要填写，否则实验不让停止；第二、进行下一个样前一定要使流动相的浓度回到最初的浓度，这样方便基线走平。开始批处理分析，作标准曲线，检测样品，查看结果，打印报告。