骨髓细胞微核实验专家讲座.pptx

,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,L o g o,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,骨髓细胞微核试验,骨髓细胞微核实验专家讲座,第1页,微核试验是用于染色体损伤和干扰细胞有丝分裂化学毒物快速检测方法。,微核,(,Micronucleus,MCN),是指细胞中主核之外颗粒，染色与细胞核一致，相当于细胞直径,1/20-1/5,，呈圆形或杏仁状。是细胞内染色体断裂或纺锤丝受影响而在细胞有丝分裂时滞留在细胞核外遗传物质。,试验原理,骨髓细胞微核实验专家讲座,第2页,机理：,1,有丝分裂毒物作用使个别染色体或带着丝点染色体环和断片在细胞分裂后期被滞留在细胞质中,2,断片或无着丝点染色体在细胞分裂后期不能定向移动，从而遗留在细胞质中,结论：,微核试验能检测化学或其它物质原因诱导产生,染色体完整性改变,和,染色体分离改变,这两种遗传学终点,试验原理,骨髓细胞微核实验专家讲座,第3页,无核细胞,红细胞,有核细胞中,微核难与正常核分叶,及核突出物区分,微,核,实,验,骨髓细胞微核实验专家讲座,第4页,红细胞分化成熟过程,骨髓细胞微核实验专家讲座,第5页,骨髓细胞微核实验专家讲座,第6页,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核形成,骨髓细胞微核实验专家讲座,第7页,8,环磷酰胺（,CTX,）,最惯用烷化剂类抗肿瘤药。,在体外无抗肿瘤活性，进入体内经转化、分解，生成酰胺氮芥对肿瘤细胞有细胞毒作用。,副作用显著，有恶心、食欲减退、脱发、白细胞降低、中毒性膀胱炎、肝功效损伤等。,含有显著遗传、生殖毒性：停经或精子缺乏，妊娠早期时给予可致畸胎。,用药后,24-30,小时，骨髓中微核形成达峰。,骨髓细胞微核实验专家讲座,第8页,9,结果,示小鼠骨髓嗜多染红细胞中一个微核,示小鼠骨髓正常嗜多染红细胞,骨髓细胞微核实验专家讲座,第9页,10,示小鼠骨髓嗜多染红细胞中两个微核,骨髓细胞微核实验专家讲座,第10页,11,示小鼠骨髓嗜多染红细胞中多个微核,骨髓细胞微核实验专家讲座,第11页,Giemsa,染色,PCE,胞质内含有核糖体，染色呈灰蓝色；,MCN,多数为圆形，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色,NCE,核糖体已消失，被染成淡桔红色。,NCE,PCE&MCN,骨髓细胞微核实验专家讲座,第12页,试验目标,用化疗药（环磷酰胺）制备突变模型,观察小鼠骨髓嗜多染红细胞（,PCE,）微核,骨髓细胞微核实验专家讲座,第13页,【Animal】,小鼠是微核试验常规动物，通惯用,7,12,周龄，体重,18,20g,小鼠。,【Reagents】,小牛血清,Giemsa,染液,环磷酰胺,试验动物及试剂,骨髓细胞微核实验专家讲座,第14页,试验分组和染毒方法,环磷酰胺,40mg/kg,模型组,等体积溶剂,对照组,染毒方法（,30h,两次给药法）：两次给受试物间隔,24h,，第二次给药后,6h,取材,骨髓细胞微核实验专家讲座,第15页,处死,：小鼠颈椎脱臼处死；,取股骨,：预防出血；,取骨髓,：小牛血清,1,滴,推片,：,30,度角；,晾干,：一定要干；,固定,：甲醇固定,10min,需要晾干；,染色,：,Gimesa,染液染色（,1015min,）,冲洗：,蒸馏水冲洗，晾干,阅片,:,观察微核。,染毒后操 作步骤,骨髓细胞微核实验专家讲座,第16页,推 片 方 法,骨髓细胞微核实验专家讲座,第17页,观察与计数：低倍镜下选择分布均匀，染色很好区域,油镜下观察计数,多染红细胞（,PCE,）呈灰蓝色，正染红细胞（,NCE,）呈橘黄色。经典微核多为单个、圆形、边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色。,计数,1000,个,PCE,中含微核,PCE,数，而且计数,200,个细胞中,PCE,与,NCE,比值。,微核率（,）,=,含微核,PCE,细胞数,PCE,细胞总数,1000,试验方法和步骤,骨髓细胞微核实验专家讲座,第18页,试验结果,组别,动物数,受检,PCE,总数,含微核,PCE,数,微核率,阴性对照组,模型组,骨髓细胞微核实验专家讲座,第19页,结果分析与评价,本试验中只计数,PCE,中微核，微核率以千分率表示,.,PCE/NCE,为评价细胞毒性指标：,正常,PCE/NCE,比值约为,l(,正常范围为,0.6,1.2),；,如,PCE/NCE,0.1,，则表示,PCE,形成受到严重抑制；,如,PCE/NCE,0.05,，则表示受试化学毒物剂量过大，试验结果不可靠。,骨髓细胞微核实验专家讲座,第20页,