化妆品微生物检验培训.pptx

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,化妆品微生物检验培训,化妆品微生物检验培训,第1页,选取和设计培养基标准、方法,及制备过程：,标准：目标明确、营养协调、经济节约,物理化学条件适宜,方法：生态模拟、查阅文件,精心设计、,试验比较,步骤：称量、熔化、调,PH,、,过滤,、分装、,加塞、包扎、灭菌、冷却、无菌检验,化妆品微生物检验培训,第2页,培养基种类：,一、按成份不一样分,天然培养基、合成培养基、半合成培养基,二、按培养基物理状态分,固体培养基、液体培养基、半固体培养基,三、按培养基用途,基础培养基、选择培养基,加富培养基、判别培养基,化妆品微生物检验培训,第3页,消毒与灭菌,消毒：毁灭病原菌和有害微生物营养体,灭菌：杀灭一切微生物营养体，芽胞和孢子。,方法：,一、物理方法：加热、过滤、辐射,二、化学方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药品及抗生素等。,化妆品微生物检验培训,第4页,加热法：,干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌。,1,、火焰灼烧适合用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。,2,、热空气灭菌利用高温干燥空气（,160,170C,）加热灭菌,1,2h,，适合用于玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质变性，与水含量相关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。,3,、注意事项：,1,）,培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法；,2,）,温度控制在,180,；,3,）,物品不能太挤；,4,）,温度降至,70,时才开箱门。,化妆品微生物检验培训,第5页,湿热法,：,原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质轻易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热好。,高压蒸汽灭菌法：,1,、设备：高压灭菌锅,2,、时间长短依据灭菌物品种类和数量不一样有所改变。,3,、适合用于培养基、工作服、橡胶物品等灭菌，也可用于玻璃器皿灭菌。,4,、注意事项：,1,）,冷空气彻底排除；,2,）加水；,3,）压力降为“,0,”,时方可打开。,化妆品微生物检验培训,第6页,常压蒸汽灭菌,：,对于不宜用高压蒸汽灭菌培养基如明胶培养基、牛乳培养基，含糖培养基等可采取此法。彻底灭菌则采取间歇灭菌方法。,煮沸灭菌法：,适用注射器和解剖器皿，时间,10,15min,，,超高温杀菌,135-150,C,和,2-8s,对牛乳和其它液态食品。,优点,：,保持食品价值和营养成份。,化妆品微生物检验培训,第7页,过滤除菌,：,原理,：介质在有压力时阻隔微生物。,适用范围,：许多材料如血清、抗生素及糖溶液采取此法。,设备,：蔡氏过滤器，滤膜过滤器。,优缺点,：不破坏培养基成份，只适用少许滤液。需 大量无菌空气以及净化工作台。,注意事项,：,1,、压力适当；,2,、无菌条件下进行；,3,、预防渗透现象。,化妆品微生物检验培训,第8页,辐射灭菌,：,原理：紫外线波长在,200,300nm,，含有杀菌作用，以,265-266,杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收；可产生臭氧和过氧化氢。杀菌效力与强度和时间乘积成正比。,缺点：穿透力不大。距照射物,1.2m,为宜。,应用：无菌室，医院。,注意事项：对眼睛和皮肤有刺激作用。,射线灭菌：,r,射线，穿透力强，适合用于堆积物品灭菌。,化妆品微生物检验培训,第9页,化学药品灭菌,：,原理：应用化学制剂破坏细菌代谢机能。,杀菌剂如重金属离子；,抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。,注意：与药品浓度高低，时间长短，微生物种类以及微生物所处环境相关。,常见化学杀菌剂有：乙醇、醋酸、石碳酸,福尔马林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等,化妆品微生物检验培训,第10页,试验二、微生物分离、纯化及培养技术,分离与纯化：从混杂微生物群体中取得只含某一个或某一株微生物过程。,为何要进行纯培养：平板上单一菌落并不一定确保是一个菌。,常见分离、纯化方法,：,单细胞挑取法,稀释涂布平板法,稀释混合平板法,平板划线法,化妆品微生物检验培训,第11页,稀释涂布平板法：,原理：,步骤：,1,、倒平板：牛肉膏蛋白胨培养基，高氏,I,号培养基，查氏培养基冷却至,55-60,时，混匀后倒平板，牛肉膏蛋白胨培养基倒,4,皿，高氏,I,号培养基和查氏培养基各倒,3,皿。,2,、制备污水稀释液：,10g,土样，加入,90ml,无菌水中，在三角瓶中振摇,20min,。取,0.5ml,加入盛有,4.5ml,无菌水试管中，以这类推，制成不一样稀释度。,3,、涂布：将上述每种培养基平板底面标识稀释度，然后用无菌吸管从最终三种稀释度，即,10,-4,、,10,-5,和,10,-6,试管中吸收,0.1ml,对号放入平板上，用玻棒涂布。,4,、培养：高氏,I,号和查氏倒置培养于,28,培养箱中培养,3-5days,，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在,37,培养,1-2days,。,5,、挑菌落：转至斜面，检验是否一致，保留。,化妆品微生物检验培训,第12页,化妆品微生物检验培训,第13页,平板划线法：,1,、倒平板，标识培养基名称，编号和试验日期。,2,、划线方法,稀释混合平板法,：,1,、先加菌,2,、倒平板时注意培养基温度,3,、混合均匀,化妆品微生物检验培训,第14页,微生物培养技术,1,、斜面接种,2,、液体培养基接种,3,、穿刺接种,4,、将已接种斜面、半固体和液体培养 基放置培养箱中培养,5,、将生长好菌种用牛皮纸包好，置,4,冰箱中保留。,化妆品微生物检验培训,第15页,试验三、菌种保藏,几个常见保藏方法：,1,、传代培养法,保藏菌种经过斜面、穿刺或疱肉培养基（用于厌氧细菌）培养好后，置,4C,冰箱中存放，定时进行传代培养、再存放。,可用胶塞代替棉塞或在斜面上覆盖一层无菌液体石蜡来深入延长保留期。,2,、载体法,使生长适当微生物吸附在一定载体上进行干燥。,常见载体有土壤、砂土、硅胶、明胶、麸皮、磁珠和滤纸片等。,化妆品微生物检验培训,第16页,3,、悬液法,将细菌、酵母菌细胞悬浮在一定溶液中保留。,溶液包含蒸馏水、糖溶液、磷酸缓冲液、食盐水等。,4,、冷冻法,使菌种一直存放在低温环境下保藏方法。包含低温法和液氮法。,此法关键是要克服细胞冷冻损伤。注意控制降温速率及保护剂使用。,5,、真空干燥法,这类方法包含冷冻真空干燥法和,L,干燥法。,冷冻真空干燥法是将要保藏微生物样品先经低温预冻，然后在低温状态下进行减压干燥。,L-,干燥法则不需要低温预冻样品，只是使样品维持在,10,20C,范围内进行真空干燥。,化妆品微生物检验培训,第17页,操作方法,1,、斜面保藏法,将菌种转接在适宜固体斜面培养基上，待其充分生长后，用牛皮纸将棉塞个别包扎好（棉塞换成胶塞效果更加好），置,4C,冰箱中包藏。,保藏时间依微生物种类而定。霉菌、放线菌及芽孢菌保留,2,4,个月移种一次，酵母菌间隔两个月，普通细菌一个月，假单胞菌两周传代一次。,此法优点是操作简单、使用方便，缺点是保藏时间短、易被污染。,化妆品微生物检验培训,第18页,2,、液体石蜡保藏法,将无菌石蜡加在已长好菌斜面上，其用量以高出斜面顶端,1CM,为准，使菌种与空气隔绝。,将试管直立，置低温或室温下保留。,此法实用且效果很好。霉菌、放线菌、芽孢菌可保藏两年以上，酵母菌可保藏,1,2,年，普通细菌也可保藏,1,年左右。,3,、穿刺保藏法,按穿刺接种方式培养菌种，菌种长好后用胶塞封严，置,4,冰箱存放。,化妆品微生物检验培训,第19页,4,、砂土管保藏法,（,1,）河砂处理,取河砂若干加入盐酸,10%,，加热煮沸,30min,除去有机机质。倒去盐酸溶液，用自来水冲洗至中性，最终一次用蒸镏水冲洗，烘干后用,40,目筛子过筛，弃去粗颗粒，备用。,（）土壤处理,取非耕作层不含腐殖质痩黄土或红土，加自来水浸泡洗涤数次，直至中性。烘干后碾碎，用,100,目筛子过筛，粗颗粒个别丢掉。,(3),砂土混合,处理妥当河砂与土壤按,3,：,1,百分比掺合,(,或依据需要而用其它百分比，甚至可全部作砂或土,),均匀后，装入,10 x100mm,小试管或安瓿管中，每管分装,1g,左右，塞上棉塞，进行灭菌,(,通常采取间歇灭菌,2-3,次,),，最终烘干。,化妆品微生物检验培训,第20页,(4),无菌检验,每,10,支砂土管随机抽,1,支，将砂土倒入肉汤培养基中，,30,培养,40h,，若发觉有微生物生长，全部砂土管则需重新灭菌，再作无菌试验，直至证实无菌后方可使 用。,(5),菌悬液制备,取生长健壮新鲜斜面菌种，加入,2-3ml,无菌水,(,每,18x180mm,试管斜面菌种,),，用接种环轻轻将菌苔洗下，制成菌悬液。,(6),分装样品,每支砂土管,(,注明标识后,),加入,0,5ml,菌悬液,(,刚才使砂土润湿为宜,),，用接种针拌匀。,(7),干燥,将装有菌悬液砂土管放入干燥器内，干燥器底部盛有干燥剂。用真空泵抽干水分后火焰封口,(,也可用橡皮塞或棉塞塞住试管口,),。,(8),保留,置,4,冰箱或室温干燥处，每隔一定时间进行检测。此法多用于产芽孢细菌、产生孢子霉菌和放线菌。在抗生素工业生产中应用广泛、效果很好，可保留几年时间，但对营养细胞效果不佳。,化妆品微生物检验培训,第21页,5,、冷冻真空干燥法,（,1,）冻干管准备：中性硬制玻璃，烘干，灭菌。,（,2,）菌种培养：细菌芽孢脱落；放，霉孢子丰满。,（,3,）保护剂配制：配制，灭菌，检验,（,4,）菌悬液制备：,2-3ml,保护剂,（,5,）分装样品：菌悬液每管,0.2ml,（,6,）预冻：程序控温仪降温,（,7,）冷冻真空干燥：,-50,下抽真空,（,8,）取出样品：轻敲涣散即达标,（,9,）第二次干燥：,（,10,）熔封,（,11,）存活性检测：抽取一管进行存活性检验,（,12,）保留：,4,保留,化妆品微生物检验培训,第22页,试验三,1,、细菌形态和结构观察（简单染色）,一、目标要求,观察细菌菌落特征,掌握简单染色法,在油镜下观察细菌个体形态,学习环境中微生物检验方法，并加深对微生物分布广泛性认识,化妆品微生物检验培训,第23页,二、基础原理,形态观察主要包含群体形态和个体形态观察。,细菌基础形态主要分为球菌、杆菌、螺旋菌三大类，多年还发觉星状和四方形细菌等。细菌形态受培养时间、培养基成份、浓度、培养温度、培养时间等发生改变。,细菌菌落大多表面光滑湿润，有光泽，普通菌落较小，质地颜色均匀，同培养基结合不紧密。菌落特征与组成菌落细胞结构、生长情况、排列方式、好气性和运动性直接相关。,细菌个体微小，较透明，必须染色方可展现。依据细菌个体形态观察不一样要求，可将染色分为,3,种类型：简单染色、判别染色、特殊染色。,化妆品微生物检验培训,第24页,简单染色法原理,细菌在中性环境中带负电荷，用碱性染料（解离时带正电荷）如美兰、结晶紫等进行染色。,试验三,2,：放线菌形态结构观察,一、目标要求,掌握放线菌形态结构观察方法,观察放线菌菌落特征、个体形态及其繁殖方式。,二、原理,放线菌菌落在培养基上着生牢靠，与基质结合紧密，难以用接种针挑取。,放线菌细胞普通呈分枝无隔丝状，菌丝体分为在培养基内部,基内菌丝,和伸出培养基表面,气生菌丝,。气生菌丝上个别化成孢子丝，呈螺旋状、波浪状或分枝状。菌丝呈各种颜色，有能分泌水溶性色素到培养基内。孢子丝长出孢子，孢子形状各异。因为孢子存在使菌落表面呈干粉状。,化妆品微生物检验培训,第25页,三、试验内容,（一）菌落形态观察及菌苔特征观察,观察放线菌菌落表面形状、大小、颜色、边缘以及有没有色素分泌；并用接种环挑取菌落，注意在培养基上着生紧密情况。区分基内菌丝、气生菌丝及孢子丝着生部位。,（二）个体形态特征观察,可直接观察，也可置于载片上观察。注意放线菌菌丝直径大小，孢子丝形状。,（三）孢子形态观察,用印片法,（四）用插片法观察放线菌形态,化妆品微生物检验培训,第26页,试验三,3,：霉菌形态观察,一、目标要求,观察霉菌菌落特征,掌握霉菌制片方法,观察霉菌个体形态及各种无性孢子及有性孢子形态,二、基础原理,霉菌是由交织在一起菌丝体组成。菌丝呈管状，有有横隔将菌丝分割为多细胞（如青霉、曲霉），有菌丝没有横隔（如毛霉、根霉）。菌丝直径比普通细菌和放线菌菌丝大几倍到几十倍。菌落形态较大，质地疏松，颜色各异，有丝状、绒毛状或蜘蛛网状菌丝体。,将菌丝体放在水中易变形，将其置于乳酸石炭酸溶液中，保持菌丝体原形。,化妆品微生物检验培训,第27页,