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書式設定,書式設定,第 2,第 3,第 4,第 5,*,本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。,第三章 细胞工程与食品产业,第一节 细胞工程概述,第二节 植物细胞工程,第三节 动物细胞工程,第四节,细胞工程在食品工业中应用,1/74,第三节 动物细胞工程,一、动物细胞培养,二、核移植、胚胎移植,三、动物细胞融合技术,四、单克隆抗体,2/74,动物细胞培养,动物细胞融合,单克隆抗体技术,核、胚胎移植,动物细胞工程惯用技术,3/74,动物细胞工程,动物细胞工程惯用技术伎俩有动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体、胚胎移植、核移植等。其中，,动物细胞培养技术,是其它动物细胞工程技术基础。,4/74,动物细胞培养,许多动物细胞能够分泌蛋白质，如抗体等。不过单个细胞分泌蛋白质量是极少，要取得大量分泌蛋白就要借助于大规模动物细胞培养了。,动物细胞培养液：,通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生,素和动物血清等；,培养动物细胞：,大都取自,动物胚胎,或出生很快,幼龄动物,器官或组织,。,动物细胞培养方式：,原代培养、传代培养,5/74,动物细胞培养,1.,发展历史,:,20,世纪初，人们不知道,神经纤维,是由神经细胞细胞质向外突出形成，还是由神经细胞周围其它细胞融合而成。生物学家们就这个问题展开了激烈争论。,1907,年,，,美国生物学家哈里森,(,Harrison),从,蝌蚪,脊索中分离出,神经组织,，把它放,在青蛙凝固淋巴液中培养,。蝌蚪神经组织存活了好几周，而且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森试验不但处理了神经纤维起源问题，,而且开创了动物组织培养先河,。,今后，在许多科学家不懈努力下，,动物组织培养,不停改进并逐步发展成为,动物细胞培养,。,6/74,2,、动物细胞培养应用和概念：,动物细胞培养,:,指从动物有机体中取出相关,组织,将它,分散,成单个细胞,然后,放在适宜培养基中,让这些,细胞生长,和,增殖,。,7/74,3,、动物细胞培养过程：,动物胚胎或幼龄动物组织、器官,细胞悬浮液,胰蛋白酶,10,代细胞,原代培养,50,代细胞,传代培养,细胞株,无限传代,细胞系,单个细胞,加培养液,遗传物质未改变,遗传物质已改变,动物组织细胞间隙中含有一定量弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成含有一定弹性和韧性组织和器官。,（分解弹性纤维）,8/74,3,、动物细胞培养过程：,动物胚胎或幼龄动物组织、器官,细胞悬浮液,胰蛋白酶,10,代细胞,原代培养,50,代细胞,传代培养,细胞株,无限传代,细胞系,单个细胞,加培养液,遗传物质未改变,遗传物质已改变,动物组织细胞间隙中含有一定量弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成含有一定弹性和韧性组织和器官。,（分解弹性纤维）,9/74,动物细胞培养过程,幼龄动物,取动物器官,和组织,剪碎组织,胰蛋白酶处理,细胞培,养,单个细胞,动物细胞培养技术是其它动物细胞工程技术基础。,10/74,原代培养：,初代培养亦称,“,原代培养,”,。指将欲待进行体,外无菌培养组织或器官从母体取下后，经表面灭菌后，切成,适当小块，置于培养基上进行培养过程。因为外植体是直,接取自母体，事前并未经过体外培养，所以将它们要求为第,一代培养物。经过继代培养，其体外繁殖体可供作第二、第三,乃至无数代培养物。,传代培养：,继代培养 亦称,“,传代培养,”,。将培养动植物,细胞、组织或器官乃至植物小植株从原来培养基上转移到一,种新鲜培养基上继续培养过程称为继代培养。它是培养物,连续传代一个方法，每转移培养一次即称为一代。所以按转,移培养次数确定继代培养代数。经过继代培养能够使培养,细胞、组织或植物小植株能不停取得新鲜补充营养物质，,能够防止在原培养基中所积累一些有毒物质对培养物不利,影响，从而能够使培养物不停生长和增殖。,11/74,概念,原代培养,：从机体取出后马上培养细胞为原代细胞。培养第,1,代细胞与传,10,代以内细胞称为原代细胞培养。,传代培养：,将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上培养瓶中继续培养，称为传代培养。,12/74,细胞株：,原代细胞普通传至,10,代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到,4050,代，这种传代细胞为细胞株。,细胞系：,细胞株传代至,50,代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞因为遗传物质改变，使其在培养条件下能够无限制传代，这种传代细胞为细胞系。,细胞株和细胞系区分：,细胞系遗传物质改变，含有癌细胞特点，失去接触抑制，轻易传代培养。,13/74,思索讨论：在动物细胞培养过程中，为何要用胰蛋白酶对取出动物组织进行处理？,胰蛋白酶处理动物组织，能够使动物组织,细胞间胶原纤维和细胞外其它成份酶,解，取得单个细胞。,14/74,3.,动物细胞培养条件,1.,无菌无毒环境,2.,营养,3.,温度和,pH,4.,气体环境,15/74,（,1,）生产蛋白质生物制品,如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体,（,2,）检测有毒物质,（许多致畸、致癌物质加入培养液后，培养细胞会发生染色体结构和数目标变异。依据变异细胞占全部培养细胞百分数，能够判断某种物质毒性。）,（,3,）为烧伤病人植皮,怎样利用动物细胞培养技术，处理为烧伤病人植皮问题,?,（,利用动物细胞培养技术中细胞,贴壁生长,和,接触抑制,特点，能够用烧伤病人自己健康皮肤细胞培养出大量本身薄层皮肤细胞供植皮所需。）,（,4,）用于科学研究,（生理、病理、药理）,4.,动物细胞培养技术应用,16/74,Vero,细胞和狂犬病毒培养工艺,DMEM,培养基,胎牛血清,其它成份,锥形瓶逐层放大培养,加碱（碳酸氢钠）,加糖（葡萄糖）,灌注培养液,微载体,5L,种子罐培养,培养液,50L,生,物,反,应,器,接种狂犬,病毒,出液口,收获病毒,17/74,植物组织培养和动物细胞培养比较,比较项目,植物组织培养,动物细胞培养,原理,细胞全能性,细胞增殖,18/74,植物组织培养和动物细胞培养比较,比较项目,植物组织培养,动物细胞培养,培养基性质,固、液体培养基,液体培养基,19/74,植物组织培养和动物细胞培养比较,比较项目,植物组织培养,动物细胞培养,培养基特有成份,蔗糖 植物激素,葡萄糖 动物血清,20/74,植物组织培养和动物细胞培养比较,比较项目,植物组织培养,动物细胞培养,培养结果,植物体,细胞株、细胞系,21/74,植物组织培养和动物细胞培养比较,比较项目,植物组织培养,动物细胞培养,培养目标,快速繁殖、培育无病毒植株,取得细胞或细胞分泌蛋白等,22/74,植物组织培养和动物细胞培养比较,比较项目,植物组织培养,动物细胞培养,原理,细胞全能性,细胞增殖,培养基性质,固、液体培养基,液体培养基,培养基特有成份,蔗糖 植物激素,葡萄糖 动物血清,培养结果,植物体,细胞株、细胞系,培养目标,快速繁殖、培育无病毒植株,取得细胞或细胞分泌蛋白等,23/74,思索：,2,、为何选取动物胚胎或幼龄个体器官或组织做动物细胞培养材料？,1,、动物细胞培养液主要成份是什么？较植物组培培养基有何独特之处？,3,、为何培养前要将组织细胞分散成单个细胞？,4,、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？,主要成份：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：,1,、液体培养基,2,、成份中有动物血清等,因为这些组织或器官上细胞生命力旺盛，分裂能力强。,成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养。,不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新动物个体。,24/74,二、动物体细胞核、胚胎移植技术和克隆动物,动物核移植,：,指将动物一个细胞细胞核,移如入一个已经去掉细胞核卵母细胞中。使其重组并发育成一个新胚胎，这个新胚胎最终发育为动物个体。,25/74,胚胎移植技术,胚胎移植技术,指将一个生物体内胚胎移植到另一个生物体内繁殖技术，这么可能大量繁殖优良品种。先注射雌性激素在一雌性动物体内，促使其大量排卵，然后在体外人工受精后发育成为胚胎后再植入其它同类动物子宫内使其发育成为个体。大大提升了繁殖率。,26/74,胚胎移植技术,胚胎移植基本程序以下（以牛胚胎移植为例）,27/74,克隆技术,克隆羊培育过程,黑面绵羊去核卵细胞,白面绵羊乳腺细胞核,细胞核移植,重组细胞,电脉冲刺激,早期胚胎,胚胎移植,另一头绵羊子宫,妊娠、出生,克隆羊多利,28/74,多莉,克隆猴,29/74,克隆牛,30/74,体细胞核移植技术应用前景,31/74,(1),遗传素质完全一致克隆动物将更有利于开展对动物,(,人,),生长、发育、衰老和健康等机理研究；,有利于大量培养品质优良家畜,;,经转基因克隆哺乳动物，将能为人类提供源源不停廉价药品、保健品以及较易被人体接收移植器官；,(4),科学家将很快地从当前同种克隆技术推进到异种克隆,即借腹怀胎新领域,这无疑将大大促进对濒临灭种哺乳动物保护工作。,克隆技术将对,21,世纪产生重大影响,32/74,三、动物细胞融合,动物细胞融合与植物原生质体融合基本原理是相同，诱导融合方法也相类似，动物细胞融合还常惯用到灭活病毒作为诱导剂。,很多不一样种类动物细胞之间或动物与人细胞之间都能进行融合，形成,杂种细胞,，比如人,鼠、人,兔、人,鸡、人,蛙、鼠,鸡、鼠,兔、鼠,猴等细胞都能进行融合。,动物细胞融合技术最主要用途，是制备,单克隆抗体,。,33/74,细胞融合是用自然或人工方法，使两个或更多个不一样细胞融合成一个细胞过程。,植物细胞因为含有细胞壁，在进行人工诱导融合之前，必须先脱除其细胞壁释放出原生质体才能进行融合。,动物细胞可直接用于融合。,人工诱导动物细胞融合方法有病毒诱融法、化学诱融法和电刺激诱融法等。,植物原生质体人工诱融法见,“,原生质体融合,”,。细胞融合过程应包含核基因和胞质基因,(,如线粒体和叶绿体基因,),融合。,34/74,动物细胞融合,细胞融合是正常生命活动,两个细胞正在融合,受精作用,35/74,动物细胞融合,36/74,细胞,A,细胞,B,杂种细胞,灭活病毒,物理法,化学法,仙台病毒,疱疹病毒,新城鸡瘟病毒,37/74,用灭活病毒诱导动物细胞融合过程,细胞核,病毒颗粒,细胞核,38/74,细胞融合与融合诱导细胞融合物质,诱导剂：仙台病毒、聚乙二醇 诱导细胞融合仙台病毒必须灭活。,思索讨论：为何细胞融合过程中使用病毒需要灭活？,39/74,动物细胞融合,（,1,）基本原理：,细胞膜流动性。,（,2,）诱导剂：,灭活仙台病毒、,PEG,等。,（,3,）用途：,制备单克隆抗体。,40/74,动物细胞融合,（总结）,2.,诱导融合方法：,1.,自然条件下细胞融合现象,3.,融合详细过程：,先是细胞质融合，细胞核融合是在第一次有丝,分裂时完成。,仙台病毒,紫外线,丧失感染活性（不感染细胞）,保留融合活性（诱导细胞融合）,41/74,动物细胞融合和植物体细胞杂交比较中，正确有,（）,A,诱导融合方法完全相同,B,所用技术伎俩完全相同,C,所采取原理完全相同,D,都能形成杂种细胞,解析,所用诱导方法略有不一样：除了植物细胞融合所用诱导方法外，动物细胞融合还惯用灭活仙台病毒做诱导剂。动物细胞融合和植物体细胞杂交，这两项细胞工程技术中都包含了细胞融合过程，两种细胞融合所用技术伎俩基本相同，但不完全相同。动物细胞融合采取原理是细胞膜流动性，植物体细胞杂交采取原理是细胞膜流动性和细胞全能性。动物细胞融合和植物体细胞杂交过程中均能产生杂种细胞，只不过是动物杂种细胞在现有技术条件下，还不能发育成一个个体，它全能性还不能表现出来，植物杂种细胞就不一样了，植物杂种细胞能够经过组织培养技术形成杂种植株。,D,42/74,四、单克隆抗体,在动物发生免疫反应过程中，体内每一个,B,淋巴细胞分泌一个特异性抗体。所以，要想取得大量单一抗体，必须用单个,B,淋巴细胞进行无性繁殖，也就是经过克隆，形成细胞群，这么细胞群就有可能产生出化学性质单一、特异性强抗体,单克隆抗体,。,免疫系统,是由机体内淋巴细胞组成，包含,T,淋巴细胞和,B,淋巴细胞。,抗原,(,如病毒、细菌等非本身物质,),进入身体后，,T,淋巴细胞产生各种淋巴因子排斥抗原，,B,淋巴细胞在,T,淋巴细胞帮助下，分化出许多浆细胞。每个浆细胞能生产无数杀伤癌变细胞或病毒物质，即,抗体,。由一个,B,淋巴细胞分化,一群浆细胞,称为,“,纯系,”,或,“,克隆,”,。由一个克隆产生抗体即为,单克隆抗体,。,43/74,什么是抗体？,抗体是机体受抗原刺激后产生、并能与该抗原发生,特异性结合,含有,免疫功效球蛋白,。,B,淋巴细胞产生抗体。,44/74,B,淋巴细胞与抗体,B,淋巴细胞受抗原刺激后，能够产生,抗体。,动物体内,B,淋巴细胞能够产生百万,种以上抗体，每种抗体对特定抗,原含有特异性免疫作用。,每一个淋巴细胞只能产生一个抗体。,45/74,单克隆抗体,由单个,B,淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同细胞群，这一细胞群所产生化学性质单一、特异性强抗体 称,为单克隆抗体,。,特点：,特异性强、灵敏度高,46/74,怎样大量生产单克隆抗体？,利用淋巴细胞产生抗体功效,利用肿瘤细胞无限增殖特征,利用细胞融合技术将两种细胞融合取得含有淋巴细胞和肿瘤细胞特征,杂交瘤细胞,利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞,47/74,单克隆抗体制备,英国科学家米尔斯坦,和,德国科学家柯勒,在前人工作基础上，继续探索和尝试，而且充分发挥想象力，设计了一个极富创造性试验方案。,他们首先将抗原注射入小鼠体内，然后从小鼠脾脏中取得能够产生抗体,B,淋巴细胞，与小鼠骨髓瘤细胞在灭活仙台病毒或聚乙二醇诱导下融合，再在特定选择性培养基中筛选出杂交瘤细胞。因为杂交瘤细胞继承了双亲细胞遗传物质，所以，它不但含有,B,淋巴细胞分泌特异性抗体能力，还有骨髓瘤细胞在体外培养条件下大量增殖本事。,他们培养杂交瘤细胞，从中挑选出能够产生所需抗体细胞群，继续培养，以取得足够数量细胞，在体外条件下做大规模培养或注射到小鼠腹腔内增殖。这么，从细胞培养液或小鼠腹水中，就能够提取出大量单克隆抗体。,48/74,49/74,单克隆抗体制备过程,注射抗原,B,淋巴细胞,骨髓瘤细胞,细胞融合、筛选,杂交瘤细胞,细胞培养,筛选，继续培养,足够数量、能产生特定抗体细胞群,体外培养,注射到小鼠腹腔,单克隆抗体,50/74,51/74,1,、本过程利用了哪些原理？,免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理,2,、为何选取小鼠骨髓瘤细胞与,B,细胞融合？,小鼠骨髓瘤细胞能够在体外培养条件下大量增殖，,B,淋巴细胞能够产生抗体，细胞同源性越近，融合形成杂种细胞越易成活。这么融合成杂交瘤细胞，继承了双亲细胞遗传物质，不但含有,B,细胞分泌抗体能力，而且还有没有限增殖本事，因而能够取得大量单克隆抗体。,3,、骨髓瘤细胞是癌细胞吗,?,有,无限增殖,能力（失去凋亡机制，失去接触抑制等）细胞是肿瘤细胞，而含有,转移能力,肿瘤细胞，称为癌细胞，所以说，瘤细胞不能等于癌细胞。,52/74,注射抗原,B,淋巴细胞,骨髓瘤细胞,细胞融合、筛选,杂交瘤细胞,细胞培养,筛选，继续培养,足够数量、能产生特定抗体细胞群,体外培养,注射到小鼠腹腔,单克隆抗体,（,4,）整个制备过程为何要经过两次细胞筛选,?,53/74,（,4,）整个制备过程为何要经过两次筛选,?,第一次筛选得到杂交瘤细胞（各种），第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体细胞群。因为该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来，所以产生抗体必定是化学性质单一，特异性强单克隆抗体。这里,单克隆,确有,单个细胞,克隆含义，只不过克隆不是,B,淋巴细胞，而是,杂交瘤细胞,。,54/74,单克隆抗体应用,与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高，优越性十分显著,。,应用主要有：,1,、临床诊疗,2,、作为载体，运载抗癌药品，形成“生物导弹”治疗肿瘤,资料,：,当前世界各国已经研制出数以百计单克隆抗体。许多缺乏良好诊疗伎俩传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊疗伎俩，是一个必定趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊疗，借以判别和定位体内“病灶”也引发人们注意，当前，主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞诊疗。,55/74,第三章 细胞工程与食品产业,第一节 细胞工程概述,第二节 植物细胞工程,第三节 动物细胞工程,第四节,细胞工程在食品工业中应用,56/74,干细胞工程,干细胞定义,现在发觉哺乳动物许多已分化组织和器官中都保留了一些能够分裂形成该组织或器官未分化原始细胞，这些细胞称为,干细胞,。,干细胞形态特征：,圆形，椭圆型，体积小，核质比大，含有较强端粒酶活性，所以含有较强增殖能力。,57/74,干细胞增殖特征,迟缓性，自稳性,干细胞分类,人体干细胞基本分为三种类型：全能干细胞、多能干细胞和专能干细胞。,58/74,干细胞分化模式,胚胎干细胞,(embryo stem cell),：,含有分化成各种细胞类型及构建组织潜能。,造血干细胞,单能干细胞,（,monopotential cell,）,59/74,体内干细胞意义,在于源源不停地补充体内一些短命组织细胞起源，如血液细胞、皮肤细胞以及精巢等，或者组织或器官受到局部损伤时，它们能够再分裂形成新该组织和器官，是体内一个自我修复机制。,人类干细胞工程就是利用人体内干细胞特征来到达体外产生人类所需产物探索。主要用于器官修复，基因治疗等。,60/74,1.,动物细胞工程技术基础是：（）,A,动物细胞融合,B,胚胎移植,C,动物细胞培养,D,核移植,61/74,在动物细胞融合和植物体细胞杂交比较中，正,确是（,）,A,结果是相同,B,杂种细胞形成过程基本相同,C,操作过程中酶作用相同,D,诱导融合伎俩相同,62/74,.,单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和,B,淋巴细胞,诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，,在这种培养基上不能存活增殖细胞是（）,淋巴细胞,小鼠骨髓瘤细胞,B,淋巴细胞本身融合细胞,小鼠骨髓瘤细胞本身融合细胞,杂交瘤细胞,A,B,C,D,C,63/74,4.,单克隆抗体是指,A,单个骨髓瘤细胞增殖产生抗体,B,单个,B,淋巴细胞增殖产生抗体,C,单个杂交瘤细胞增殖产生抗体,D,单个抗体经过克隆化，产生大量抗体,C,64/74,5.,将小鼠骨髓瘤细胞与一个,B,淋巴细胞融合，可使融合细 胞经培养产生单克隆抗体，其依据是（多项选择）（）,A,B,淋巴细胞能够产生抗体，但不能无限增殖,B,B,淋巴细胞只有与骨髓瘤细胞融合后才能产生抗体,C,骨髓瘤细胞能够无限增殖，但不能产生抗体,D,骨髓瘤细胞能够产生抗体，但不能无限增殖,AC,65/74,要想取得大量单克隆抗体就必须用单个,B,淋巴细胞进行无性繁殖，形成细胞群。其原因是（）,A,在体外培养条件下,B,淋巴细胞能够无限增殖,B,在动物体内,B,淋巴细胞可产生多达百万种以上抗体,C,每一个,B,淋巴细胞都参加特异性免疫反应,D,每一个,B,淋巴细胞只分泌一个特异性抗体,D,66/74,7,、关于单克隆抗体，以下叙述不正确是（）,A,、能够制成诊疗盒用于疾病珍断,B,、能够与药品结合，用于病变细胞定向治疗,C,、能够利用基因工程技术生产,D,、能够在生物体内生产，不能体外生产,D,67/74,8.,由,A,、,B,两种细胞人工融合成,D,细胞过程中，惯用（）或（）作为诱导剂。融合过程包含（）和（）两方面，,D,细胞称为,(),细胞。,PEG(,聚乙二醇,),或（灭活病毒,),膜融合 核融合 杂种,68/74,9.,若由,D,细胞培育成植株，可用（,),技术，这一培养过程要经 过,和,两个阶段。当前，植物体细胞杂交还有许多理论和技术问题没有处理，如杂种植物还不能按照人们需要表现出亲代优良性状，从遗传学角度分析，其内在原因很可能是,。,植物细胞培养 脱分化 再分化 控制优良性状基因还不能表示,69/74,10.,如需制备单克隆抗体，则,D,细胞应含有,(,),和,(,),能力。,分泌特异性抗体 大量增殖,70/74,11.,近年来，有些人将巴龙霉素产生菌,(A,种,),和高产但为营养缺,陷型变种菌,(B,种,),进行细胞杂交，取得了巴龙霉素产量,比原始菌株大,56,倍新型菌种。试回答以下问题：,（,1,）在进行细胞融合时，首先应使用适当酶去除菌体,细胞壁，然后用理化方法促使,融合。,（,2,）在这一细胞杂交过程中，能形成,种类型融合细,胞，合乎人们要求是,(,用字母表示,),细胞。,(1),原生质体 （,2,）三,AB,型,71/74,12.,上图是单克隆抗体制备过程示意图。据图回答：,（,1,）经过过程得到,B,淋巴细胞从小鼠体内分离出之前，应对小鼠进行处理是,(,),，该处理实质是在小鼠体内发生,(,),反应。,注射对应抗原,体液免疫,（,2,）骨髓瘤细胞与进行原代培养细胞相比较，核内结构发生主要改变是,(),，从而违反了“程序性细胞死亡”规则，打破了细胞产生与死亡动态平衡。,遗传物质（原癌基因）发生了改变,72/74,上图是单克隆抗体制备过程示意图。据图回答：,（,3,）试构想利用生物工程其它领域技术制备单克隆抗体一条路径,(),。,利用基因工程方法制造含有某种抗体基因工程菌进行发酵生产,73/74,13.,下列图为某同学依据杂交瘤技术方法，设计生产破伤风杆菌试验方案,2,、该方案能到达预期效果吗？为何？,4,、图中,B,为,_,过程，惯用,_,作为诱导剂，该细胞继承,_,遗传特征，既能,_,又能,_,。,1,、该试验方案目标是,_,3,、,A,是从小鼠脾脏中取得,_,该细胞能够产生,_,5,、,C,过程指细胞培养，该过程包含,_,培养和,_,培养两个阶段，其中,_,代以内细胞属于细胞株。,制备单克隆抗体,B,细胞,抗体,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞,分泌抗体,无限增殖,原代,传代,50,B,体外培养,骨髓瘤细胞,杂交瘤细胞,足够数量细胞群,注射到,小鼠腹腔,A,C,74/74,
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