标准氨基酸混合样品的制备.doc

标准氨基酸混合样品制备(稀释后标准样品放入冰箱可稳定大约1个月)方法一 从含有18种标准氨基酸组分（2.5mol/mL）混合氨基酸校准混合液中小玻璃瓶中（味之素株式会社生产, 每瓶5.0mL）取出2mL,用0.02N-HCL稀释定容50mL, 即为0.10mol/mL(100nmol/mL)氨基酸标准液。方法二 取0.04mL,用0.02mol/L溶液稀释定容1mL。20l配制好氨基酸校准混合液中多种氨基酸浓度为2nmol。（100nmol/mL=100nmol/1000l=0.nmol/1l）蛋白质水解分析缓冲液组成序号名称pH-1pH-2pH-3pH-4RH-RG1容器（缓冲液）B1B2B3B4B52PH(公称值)3.33.24.04.9-3Na浓度（mol/L）0.160.20.21.20.24蒸馏水（大约）700mL700mL700mL700mL700mL5柠檬酸钠（2H2O）6.19g7.74g13.31g26.67g-6氢氧化钠-8.00g7氯化钠5.66g7.07g3.74g54.35g-8柠檬酸（H2O）19.80g22.00g12.80g6.10g-9乙醇130.0mL20.0mL40.0mL-100.0mL10苯甲醇*-5.0mL-11硫二甘醇*5.0mL5.0mL5.0mL-12聚氧乙烯十二烷基醚（Brij-35*）4.0mL4.0mL4.0mL4.0mL4.0mL13全量（调整）1.0L1.0L1.0L1.0L1.0L14辛酸0.1mL0.1mL0.1mL0.1mL0.1mL注*取25g Brij-35溶于100mL蒸馏水中（需加热）注*苯甲醇可不加（易产生乳化现象）。注*硫二甘醇可不加。注*B1定容前加入1mol/LNaOH溶液9mL; 乙醇25mL; B2定容前加入1mol/LNaOH溶液15mL; B3定容前加入1mol/LNaOH溶液4mL。R3加入5%色谱乙醇。注*C1: 水R3: 5%乙醇+水。注意: 称量这些试剂时, 根据组分表用天平或者玻璃量器称取。制备优良再现性缓冲液, 不需要调整pH值。缓冲液配好后用50mm,0.45m有机相滤膜过滤（B5用50mm,0.45m水相滤膜）。茚三酮试剂组成容器显示步骤试剂计量R2茚三酮缓冲液123456蒸馏水醋酸钠（三水）冰醋酸乙二醇甲醚TotalN2鼓泡（沸腾）336mL204g123mL401mL1000mL10分钟以上R1茚三酮12345乙二醇甲醚茚三酮N2鼓泡, 溶解硼氢化钠N2鼓泡979mL39g最少5分钟81*（82.7）mg最少30分钟注* 硼氢化钠纯度为98%。请不要使用以上指定以外茚三酮试剂。R1和R2配好后分别用50mm,0.45m有机相滤膜过滤。N2气体鼓泡方法（1）往专用容器R1和R2中加入试剂并充足溶解。（2）连接标注R1和R2管路, 将盖子牢牢拧紧。（3）用调整器（参考图2-6）调整N2压力到3440KPa(0.350.4kgf/cm2 )。 将N2气转换开关置于BUBBLING位, 鼓泡30分钟。（4）将N2气转换开关扳到ANALY位, 确保N2压力为3440KPa(0.350.4kgf/cm2 )。 图7-1表明N2转换开关位置和N2流路系统之间关系。BUBBLING 制备茚三酮试剂后, 通N2鼓泡（N2混合置换）。 ANALYSIS 分析时, 用N2加压到3440KPa(0.350.4kgf/cm2 )。OPEN 更换试剂时释放瓶内N2。注意: 1.鼓泡时, 请不要开放N2钢瓶总压力（气瓶主压和次压）。2.鼓泡时, 请不要进行泵送液, 不然, 因为N2气压力降低, 在泵送液过程中发生错误操作。柠檬酸三钠优级纯GR 500g国药集团化学试剂有限企业结晶乙酸钠分析纯AR 500g上海埃彼化学试剂有限企业硼氢化钠分析纯AR 100g上海埃彼化学试剂有限企业氯化钠优级纯GR 500g国药集团化学试剂有限企业冰乙酸优级纯GR 500ml国药集团化学试剂有限企业乙二醇甲醚分析纯AR 500ml天津市瑞金特化学品有限企业乙醇（无水乙醇）优级纯GR 500ml国药集团化学试剂有限企业氢氧化钠优级上海山海工学团试验二厂正辛酸气相色谱纯 2ml国药集团化学试剂有限企业聚氧乙烯月桂醚进分 500g国药集团化学试剂有限企业柠檬酸优级纯GR国药集团化学试剂有限企业