标准氨基酸混合样品的制备.doc

标准氨基酸混合样品制备
(稀释后标准样品放入冰箱可稳定大约1个月)
方法一 从含有18种标准氨基酸组分（2.5μmol/mL）混合氨基酸校准混合液中小玻璃瓶中（味之素株式会社生产, 每瓶5.0mL）取出2mL,用0.02N-HCL稀释定容50mL, 即为0.10μmol/mL(100nmol/mL)氨基酸标准液。
方法二 取0.04mL,用0.02mol/L溶液稀释定容1mL。
20μl配制好氨基酸校准混合液中多种氨基酸浓度为2nmol。
（100nmol/mL=100nmol/1000μl=0.nmol/1μl）
蛋白质水解分析缓冲液组成
序号
名称
pH-1
pH-2
pH-3
pH-4
RH-RG
1
容器（缓冲液）
B1
B2
B3
B4
B5
2
PH(公称值)
3.3
3.2
4.0
4.9
--
3
Na浓度（mol/L）
0.16
0.2
0.2
1.2
0.2
4
蒸馏水（大约）
700mL
700mL
700mL
700mL
700mL
5
柠檬酸钠（2H2O）
6.19g
7.74g
13.31g
26.67g
--
6
氢氧化钠
--
--
--
--
8.00g
7
氯化钠
5.66g
7.07g
3.74g
54.35g
--
8
柠檬酸（H2O）
19.80g
22.00g
12.80g
6.10g
--
9
乙醇
130.0mL
20.0mL
40.0mL
--
100.0mL
10
苯甲醇**
--
--
--
5.0mL
--
11
硫二甘醇***
5.0mL
5.0mL
5.0mL
--
--
12
聚氧乙烯十二烷基醚（Brij-35*）
4.0mL
4.0mL
4.0mL
4.0mL
4.0mL
13
全量（调整）
1.0L
1.0L
1.0L
1.0L
1.0L
14
辛酸
0.1mL
0.1mL
0.1mL
0.1mL
0.1mL
注* 取25g Brij-35溶于100mL蒸馏水中（需加热）
注** 苯甲醇可不加（易产生乳化现象）。
注*** 硫二甘醇可不加。
注**** B1定容前加入1mol/LNaOH溶液9mL; 乙醇25mL;
B2定容前加入1mol/LNaOH溶液15mL;
B3定容前加入1mol/LNaOH溶液4mL。
R3加入5%色谱乙醇。
注***** C1: 水 R3: 5%乙醇+水。
注意:
称量这些试剂时, 根据组分表用天平或者玻璃量器称取。
制备优良再现性缓冲液, 不需要调整pH值。
缓冲液配好后用φ50mm,0.45μm有机相滤膜过滤（B5用φ50mm,0.45μm水相滤膜）。
茚三酮试剂组成
容器显示
步骤
试剂
计量
R2
茚三酮缓冲液
1
2
3
4
5
6
蒸馏水
醋酸钠（三水）
冰醋酸
乙二醇甲醚
Total
N2鼓泡（沸腾）
336mL
204g
123mL
401mL
1000mL
10分钟以上
R1
茚三酮
1
2
3
4
5
乙二醇甲醚
茚三酮
N2鼓泡, 溶解
硼氢化钠
N2鼓泡
979mL
39g
最少5分钟
81*（82.7）mg
最少30分钟
注* 硼氢化钠纯度为98%。
请不要使用以上指定以外茚三酮试剂。R1和R2配好后分别用φ50mm,0.45μm有机相滤膜过滤。
《N2气体鼓泡方法》
（1）往专用容器R1和R2中加入试剂并充足溶解。
（2）连接标注R1和R2管路, 将盖子牢牢拧紧。
（3）用调整器（参考图2-6）调整N2压力到34~40KPa(0.35~0.4kgf/cm2 )。
将N2气转换开关置于BUBBLING位, 鼓泡30分钟。
（4）将N2气转换开关扳到ANALY位, 确保N2压力为34~40KPa(0.35~0.4kgf/cm2 )。
图7-1表明N2转换开关位置和N2流路系统之间关系。
① BUBBLING
制备茚三酮试剂后, 通N2鼓泡（N2混合置换）。
② ANALYSIS
分析时, 用N2加压到34~40KPa(0.35~0.4kgf/cm2 )。
③ OPEN
更换试剂时释放瓶内N2。
注意:
1.鼓泡时, 请不要开放N2钢瓶总压力（气瓶主压和次压）。
2.鼓泡时, 请不要进行泵送液, 不然, 因为N2气压力降低, 在泵送液过程中发生错误操作。

柠檬酸三钠
优级纯GR 500g
国药集团化学试剂有限企业
结晶乙酸钠
分析纯AR 500g
上海埃彼化学试剂有限企业
硼氢化钠
分析纯AR 100g
上海埃彼化学试剂有限企业
氯化钠
优级纯GR 500g
国药集团化学试剂有限企业
冰乙酸
优级纯GR 500ml
国药集团化学试剂有限企业
乙二醇甲醚
分析纯AR 500ml
天津市瑞金特化学品有限企业
乙醇（无水乙醇）
优级纯GR 500ml
国药集团化学试剂有限企业
氢氧化钠
优级
上海山海工学团试验二厂
正辛酸
气相色谱纯 2ml
国药集团化学试剂有限企业
聚氧乙烯月桂醚
进分 500g
国药集团化学试剂有限企业
柠檬酸
优级纯GR
国药集团化学试剂有限企业