C柱使用手册.doc

正相、 反相和极性胶联柱使用手册
注意
此色谱柱填充是改性硅胶材料。向柱内导入碱性溶剂（pH>7.0）或酸性溶剂（pH<2.0）会造成柱子损坏。在使用这个柱子之前, 你要充足地熟悉这本手册讲述内容。未正确地使用不能享受保修待遇。
1． 介绍
此柱填充是反相或者极性胶联型态硅胶基质材料硅胶。硅胶形态柱子用于正相（非水）条件。
反相（C8, C18, ODS, RP-8和RP-18）通常见于反相条件（水相）。
极性胶联型（APS, diol, CN和NH2）依据应用目, 能够用于正相和反相条件。提议不要将一个相同柱子用于差异非常大条件下, 这是因为柱子在特定条件下, 固定相性质会发生改变, 所以在其她条件下, 会影响柱效。也不提议将硅胶柱用在反相条件下或者将反相柱用在正相条件下, 这是因为这种过程会发生反复性差问题（每一次注射之间和柱与柱之间比较）。
2． 色谱柱老化
在开始分析工作以前, 柱子必需经过正确老化。一个没有正确老化柱子可能会带来问题, 诸如很差柱效或者分离情况发生改变等等。
A．在反相条件下老化
要老化这类柱子, 首先要使用乙腈或者甲醇淋洗, 然后你选择洗脱液进行平衡。
在发货以前, 每根柱子都已经测试过并进行了老化。所以没有必需在第一次使用时用水冲洗）。
假如流动相中使用了添加物（比如缓冲液或离子对试剂）, 提议使用正确百分比但不含此添加物流动相进行缓冲冲洗。缓冲冲洗应该首先以低流速进行, 最终再使用正常流速。
B．在正相条件下老化
柱效可能会受水与固定相键合严重影响。柱子干燥（激活）或润湿（失活）可能是需要。使用溶剂可能是水饱和或者是无水。干燥柱子能够使用无水二氯甲烷。
C．对于极性键合柱特殊说明
因为这些柱子能够用于反相或者正相条件, 在进行老化以前, 一定要首先检验你要使用淋洗溶剂或洗脱液是否能够与封装在柱子里溶剂相混溶。假如这些溶剂不能混溶, 必需先使用一个适宜缓冲溶剂进行冲洗。

3． 洗脱液
注意第1节和第2节。一定不要使用pH低于2或者高于7缓冲液, 这是因为它们会改变固定相性质。极性键合柱最好使用在3到5 之间。在使用以前, 洗脱液要进行脱气, 以及使用0.5微米滤膜过滤, 以免发生检测和泵送问题。
一定要在开始使用系统以前检验水溶液中有否微生物生长, 不然你柱子会堵塞, 柱压会升高到无法接收水平。
4． 流量和压力
柱内径（毫米）
流速
（ml/min）

最好
最高
2.0
0.2
1.0
3.0
0.4
2.0
4.6
1.0
4.0
10.0
4.7
18.0
注意: 最高压力: 不锈钢柱: 4500psi; 玻璃柱: 3000psi
增加流速或者降低流速要采取小间隔改变以预防填充床扰动。
假如你想更换柱子, 要降低流量至0, 等候洗脱液完全流出柱子为止（2分钟）。
拆除柱子而没有等候压力降低会损坏柱子。
高柱压产生通常是因为不正确地使用柱子结果。
使用保护柱（见第6节）会预防污染物沉积在分析柱上。
5． 样品准备
保持柱子长寿关键是进样前合适样品处理。你必需预防将疏水性/与流动相极性差异很大化合物泵入色谱柱, 不管是来自流动相还是样品。尤其地, 要严禁导入颗粒杂质。这些最终都会造成操作压力增高而且非常困难或者不可能去除。
6． 保护柱
一定要使用保护柱, 因为样品和洗脱液污染可能会造成柱压力增高而且影响选择性。通常保护柱选择以同型号为标准, 这么柱子填充材料与用于分析色谱柱材料相同。当柱压增高或者观察到柱效降低时候就需要更换保护柱了。
7． 进样量和浓度
柱子最大载样量取决于: 柱子型号, 使用条件和样品类型。极难给出一个通常指示。对于进样体积提议则比较轻易（见表中经典值）。
注射了太大致积或太浓样品会使峰展宽或者峰融合。
柱尺寸（长度*内径）
最大样品体积
250×2.0mm
±10μl
200×3.0mm
±15μl
250×4.6mm
±50μl
250×10.0mm
±250μl
8． 温度
HPLC柱最好在柱温箱中使用。反复性取决于温度控制。最好温度与特定应用相关。温度影响洗脱液流动线速度。在使用ChromSep玻璃柱时候, 一定要调整流速使压力保持在3000psi以下。
9． 贮存
一定不要在柱子内充满缓冲液或者其她含盐类洗脱液情况下贮存色谱柱。 贮存溶剂应该含有最少20%有机溶剂, 以预防有细菌生长。
10． 柱效损失可能原因
1． 额外峰展宽。当使用小直径或者长度较短柱子时, 峰展宽情况可能比较显著。要确保管路长度和内径都保持最小。检验进样体积和检测器检验池体积是否适适用于柱体积。
2． 洗脱平衡时间不够。
3． 不正确柱温。
4． 不正确修正浓度。
5． 床压缩。使用了过大洗脱流速。将柱子反向, 使用低流速。
11.柱效丧失和/或高背压
1． 颗粒物积聚在烧结物或者树脂床上（它们都会使背压增高）。假如柱压增高了, 将柱子与进样器断开, 运行泵, 以验证背压起源确实是来自柱子颗粒污染（样品、 洗脱液和系统）。倒转柱子, 以反向流动来冲洗柱子。假如这么不能处理问题, 更换进口过滤器或者筛板。
2． 微生物在洗脱液中生长。倒转柱子, 尝试以反向流动来将污染物冲洗出柱子。更换进口过滤器或者筛板。
3． 有蛋白质脂肪, 油脂污染或者极性化合物等污染。再生柱子（见第12节）。
12.再生
1． 再生反相色谱柱
a． 首先倒转柱子。
b． 以大约最好流速40%流速冲洗柱子大约45-60分钟, 使用溶剂次序要根据水—甲醇—异丙醇—二氯甲烷—异丙醇—甲醇—水进行。
c． 柱子转回正常方向, 使用分析所用洗脱液平衡。
注意: 在使用另外淋洗方法时候, 一定要先用水开始冲洗以去除缓冲液, 确保其后洗脱液能够混溶。
2． 再生硅胶柱
a． 首先倒转柱子。
b． 以大约最好流速40%流速冲洗柱子大约45-60分钟, 使用溶剂次序要根据异辛烷（或己烷）—乙酸乙酯—干燥异辛烷（或己烷）进行。
c． 柱子转回正常方向, 使用分析所用洗脱液平衡。
3.再生极性键合柱
取决于使用条件, 能够使用反相条件, 也能够使用硅胶柱条件。
注意: 再生会造成柱效降低, 另外绝对不要使用酮类或醛类冲洗氨基柱, 因为可能与固定相发生反应。四氢呋喃作为替换能够使用。