NY∕T 2179-2012 农作物优异种质资源评价规范 马铃薯(农业).pdf

ICS 65.020.20 B 05 中华人民共和国农业行业标准IT 2179-2012 农作物优异种质资源评价规范马铃薯Evaluating standards for elite and rare germplasm resources-Potato(Solanum tuberosum L.) 2012-06-06发布2012-09一01实施中华人民共和国农业部发布NY/T 2179-2012 前自本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出。本标准起草单位:中国农业科学院茶叶研究所、黑龙江省农业科学院克山分院.本标准主要起草人，JttJ喜才、张丽娟、江用文、李军、孙邦升、宋继玲、刘春生、来春苓.I NY/T 2179-2012 农作物优异种质资源评价规范马铃薯1 范围本标准规定了马铃薯(Solanumtuherosum L. )优异种质资源评价的术语和定义、技术要求、鉴定方法和判定.本标准适用于马铃薯优异种质资源的评价，其他种的评价参考此规范。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注目期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/ T 5009.5食品中蛋白质的测定GB/ T 5009. 7 食品中还原糖的测定GB/ T 5009. 9 食品中淀粉的测定GB/ T 5009.86 蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定(荧光法和2.4二硝基苯脐法GB 18133 马铃薯脱毒种薯NY/ T 1303农作物种质资源鉴定技术规程马铃薯3 术语和定义3. 1 3 2 3.3 NY/ T 1303中界定的以及下列术语和定义适用于本文件。优良种质资源elitegem甲t斟酌酬四届主要经济性状表现好且具有重要价值的种质资源.特异种质资源rare gennplasm re回阳晒性状表现特殊、稀有的种质资源。优异种质资源elite and rare gennpl描mre曲ur阳优良种质资源和特异种质资源的总称.4 技术要求4. 1 样本采集按NY/T1303的规定执行。4.2 鉴定戴据每个性状至少在同一地点同一生长季进行3年的重复鉴定.鉴定结果取其平均值.4. 3 指标4. 3. 1 优良种质资源指标优良种质资源指标见表1.I NY!T 2179-2012 表1马铃薯优良种质资源指标序号性状指标l 块茎产量在适宜种损区不低于当地同类型主裁品种2 结薯集中性集中3 块茎整齐度整齐4 串串形圆形、卵圆形、椭圆形、长形5 芽眼深浅浅6 花粉育性有效花粉率50%7 天然结实性弱或弱以上8 淀粉古拉二15.0% (早熟或中早熟), 注20.0%中晚熟或晚熟)9 还原糖吉量0.2%收获时).0.4%4C-9C贮藏3个月后回暖处理10 马铃薯X病毒抗性抗性类型为兔疫、过敏、抗侵染(个jjlJ植株发病.症状轻微，块茎产盘与对照元显著差异，块茎ELlS八反应呈阴性)其中1种11 马铃薯Y病毒抗性抗性类型为免疫、过敏、抗侵染(个别植株发病，症状轻微，块茎产量与对!照元显著差异，块茎ELlSA反应呈阴性其中l种12 马铃薯A病毒抗性抗性类型为免疫、过敏、抗侵染个别植株发病，症状轻微.块茎产量与对照元显著差异.块茎ELlSA反应呈阴性其中l种13 马铃薯s病毒抗性抗性类型为免疫、过敏、抗侵染个别植株发病，症状轻微，块茎产量与对照元显著差异，块茎ELlSA反应呈阴性)其中1种14 马铃薯M病毒抗性抗性类型为免疫、过敏、抗侵染(个别植株发病，症状轻微，块茎产盘与对照无显著差异，块茎ELlSA反应呈阴性)其中l种15 马铃薯卷叶病毒抗性0 1 20 16 马铃薯植株晚疫病抗性4级以上(吉4级)17 马铃薯块茎晚疫病抗性3级以上(吉3级18 鸟铃薯青枯病抗性0 135 4. 3. 2 特异种质资源指标特异种质资源指标见表20表2马铃薯特异种质资源指标序号性状指标生育期东农303的生育期2 块茎大小小(单薯重运75g.且块茎整齐)3 薯肉包情贫、红、紫、蓝4 休眠期大于150d或小于4 5d 5 淀粉古缉16.0%(早熟或中早熟), 二主22.0%中晚熟或晚熟)6 维生素C含量二到Omg!IOO g7 粗蛋白吉量注3.0%8 坯原糖古量0.4%4 C-9C贮藏3个月)9 马铃薯X病毒抗性免疫或过敏10 马铃薯Y病毒抗性免疫或过敏11 马铃薯A病毒抗性免疫或过敏12 马铃薯S病毒抗性免疫或过敏13 马铃薯M病毒抗性兔疫或过敏14 马铃薯卷叶病毒抗性Dl 3 15 马铃薯植株晚疫病抗性2级以上(吉2级16 马铃薯块茎晚疫病抗性1级以上肯1级17 马铃薯青枯病抗性0 1 15 2 NY/ T 2179-2012 5 鉴定方法5. 1 块茎产量小区采用随机区组设计.4行区，行长6m.行距0.7m，株距0.3m。鉴定方法按NY/T1303的规定执行.5.2 块茎大小小区采用随机区组设计.4行区，行长6m.行距0.7m，株距0.3mo鉴定方法按NY/T1303的规定执行.5. 3 错事集申性小区采用随机区组设计.4行区，行长6m.行距0.7m，株距。.3m。鉴定方法按NY/ T 1303的规定执行.5. 4 块茎整齐度小区采用随机区组设计.4行区，行长6m.行距。7m.株距0.3mo鉴定方法按NY/T1303的规定执行。5.5 薯肉色按NY/T1303的规定执行.5.6 薯形按NY/T1303的规定执行.5. 7 芽眼深浅按NY/T1303的规定执行.5 8 花粉盲性采集当日开放的新鲜花朵，每小区取20株，每株3朵，测定时，将待测样本的小量花粉置于载玻片上，加l滴醋酸洋红溶液洋红或脑脂红(Carmine)溶于45%冰醋酸中，加热至饱合蠢，将浴液用滤纸过滤.在酒精灯上轻微加热后，于显微镜下观察花粉染色状况和花粉粒形态有效花粉均被染成红色，呈圆形而粒饱满，元效花粉不着色，形状不规则，粒瘪缩).计数每个视野中有效花粉粒数和总粒数，再按有效花粉粒数/总花粉粒数比值计算有效花粉率。5.9 天然结实性按NY/T1303的规定执行.5.10 生育期按NY/T1303的规定执行。5. 休眠期按NY/T1303的规定执行.5. 12 淀粉含量按GB/T5009.9的规定执行.5. 13 维生素C含量按GB/T5009.86的规定执行。5. 14 粗蛋自含量按GB/T5009.5的规定执行.5. 15 还原糖含量按GB/T5009.7的规定执行.5. 16 马铃薯X病毒抗性3 NY/T 2179-2012 按NYjT1303的规定执行。5. 17 马铃薯Y病毒抗性按NYjT1303的规定执行。5. 18 马铃薯A病毒抗性按NYjT1303的规定执行。5 19 马铃薯s病毒抗性按NYjT1303的规定执行。520 鸟铃薯 M病毒抗性按照附录A执行。5.21 马铃薯卷肝病毒抗性按NYjT1303的规定执行。5.22 马铃薯植株晚疫病抗性按NYjT1303的规定执行。5. 23 马铃薯块茎晚瘦病抗性按NYjT1303的规定执行.5.24 马铃薯青枯病抗性按照附录B执行。6 判定6. 1 优良种质资源除同时符合表1中块茎产量、花粉孕性、天然结实性3项指标外，还应符合其他2项以上(含2项性状指标者.6.2 特异种质资源符合表2中任何1项以上(含1项)指标者。6. 3 其他具有除表1、表2规定以外的其他特异性和优良性状指标的种质资源.4 附录Al规范性附录马铃薯M病毒(Paracrinkle)抗性鉴定A. 1 适用范围本附录适用于马铃薯种质资源的马铃薯M病毒(Paracrinkle)抗性鉴定。A2 仪器设备A. 2. 1 温室A. 2. 2 花盆:口径30.0crn，高30.0cm, A. 2.3 ELISA金套仪器设备:按GB18133的规定执行。A. 2. 4 啧雾枪:1. 5 kg/ cm-2 kg/ cm压力。A.3试ll1JA. 3. 1 ELISA用所有试ll1J:按GB18133的规定执行。A. 3. 2 磁醺缓冲液:0.01 mol/ L, A4 鉴定步骤A.4. 1 基质的准备市售蛙石和草炭按1 1混合均匀，经高温蒸气灭菌后备用.A. 4. 2播种商苗NY!T 217子-2012抗性鉴定试验设在防虫温室内进行，供试材料均采用脱毒原原种小薯整薯擂。播前于室温15(;左右散射光下催芽，待芽长1.0 crn时，将其播于花盆内，每盆1个块茎，每材料重复3次，每重复60株苗。20(; (:J:2(;)温室内育苗.设Alpha为抗病对照，内薯3号为感病对照。A. 4. 3 接种液的制备接种毒源马铃薯M病毒在普通烟上繁殖，于温度25C(土2(;)，自然光照培养20d-25 d后，采摘发病叶片，加入5倍于鲜病叶质量的0.01mol/ L磷酸缓冲液(pH=7.0)，捣碎后双层纱布过滤，滤液立即用于接种。A. 4. 4 接种方法马铃薯第6片叶展开时将混有金钢砂的马铃薯M病毒毒源混悬液用喷雾枪距植株5.0cm处喷射接种，第l次接种10d后，进行第2次接种.接种后，将温室温度控制在25(;(士2C)，按时浇水以保持湿度，打药防虫-A. 5 病情调查与评价标准在第1次接种3d后，开始调查发病情况，记录病株数及病级。对无症状表现的单株，采用ELISA法对槌株中上部叶片进行病毒检测。收获后测定块茎产簸，并采用ELlSA法对块茎进行病毒检测.根据病症和病毒检测结果按表A.l确定抗病性。5 NY/ T 2179-2012 表A.1 马铃薯 M病毒(Paracrinkle)抗性评价标准病级抗病性症状。免疫无病症，叶片及块茎ELlSA反应呈阴性1 过敏侵染点处形成局部病斑，正常叶片及块茎ELlSA反应呈阴性3 抗侵染个别植株发病，症状轻微，块茎产量与对照无差异或差异很小.ELISA反应呈阴性5 耐病植株症状较轻或元症状，块茎产量与对照元明显差异.ELlSA反应呈阳性7 感病植株症状较量，块茎产量明显低于对照9 离感植株症状童，布的叶片坏死，下部复叶脱落，植株早衰6 NY/T 2179-2012 附录B规范性附录)马铃薯膏枯病(Ralstoniasolanacearum )抗性鉴定Bl 范围本附录适用于马铃薯种质资源青枯病(Ralstoniasolanacearum Yabuuchi et al. )抗性鉴定.B. 2 仪器及设备B. 2. 1 普通显微镜。B. 2. 2 分光光度计。B 2. 3 普通生化培养箱.B 2. 4普通冰箱。B. 2. 5 温室.B.26花盆口径30.0cm，高30.0cm. B.3 菌种培养与扩繁将保存于灭菌去离子水中的青枯商3号小种菌株在TZC平板(普通NA培养基附加2，3，5氯化三苯基四氮哇)上划线培养，30C条件下培养48h.挑取典型的野生型青枯茵茵落(中央呈粉红色、外缘为白色奶汕状，形状不规则转移至NA培养平板或斜面上，30C培养48人B4 鉴定步骤B41 播种基质的准备鉴定试验用的土、花盆经高温蒸气灭商后，加入适当数量的肥料.B 4.2 播种育苗待测材料均采用脱毒原原种，播前于室温15C左右散射光下催芽，待芽长1cm时，将其播于花盆内，每盆1个块茎，每份种质60株苗。20C(:J: 2C)温室内育苗.设895010为抗病对照，克新1号为感病对照.B. 4.3 接种液事j备按照浊度计数法(方中达，1998)，挑取按且3步骤获得的纯培养供试菌株菌苔以灭菌水稀释成浓度为3X10 cfu/mL的菌悬液，作为接种体备用.B. 4. 4 接种方法当植株长至7片-8片叶展开时，离植株1cm处垂直向下切深15cm、宽5cm的切口，自切口处灌入30mL菌液。接种后保持温室室温30C(+ 2C) ，空气相对湿度70%以上，土壤湿度为土壤最大持水量的60%.B. 5 结果计算B. 5. 1 马铃薯膏枯病分级在接种后每天观察记录植株发病情况，连续观察25d.并按表B.1对病情进行分级。7 NY/T 2179-2012 表B.1 马铃薯青枯病病情分级标准病级病情o 无症状1 l片叫片萤瑞2 2片-3片叶萎藉3 4片以上叶片萎蒲4 植株全部叶片萎辑或死亡B. 5. 2病情指敏病情指数以Dl表示，按式(B.1)计算:亨丁(Sjnj)DT =主it7二X100. . .(B.1) 式中zS;一一发病级别$n ; 相应发病级别的株数，单位为株;z 病悄分级的各个级别，N 调查总株数，单位为株.计算结果表示到整数位。B.6 评价标准依据病情指数，按表且2标准确定抗性级别。表B.2马铃薯青精病抗性鉴定评价标准抗性级别级别描述病情指数0 1 l 高抗(HRl01 15 3 抗(Rl150135 5 中抗(MRl35;DI55 7 感(5)55Dl75 9 高感(H5)DI注758