SC∕T 2028-2016 紫贻贝(水产).pdf

ICS 65.150 B 51 :才叫中华人民共和国水产行业标准SC/ T 2028-2016 紫贻贝Blue mussel 2016-1个01发布207-04一01实施发布SC/ T 2028-2016 目。吕本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由农业部植业渔政管理局提出。本标准由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会CSAC/TC156/SC 2)归口。本标准起草单位:中同海洋大学、中国水产科学研究院。本标准主要起草人:高天翔、宋娜、刘琪、王琦、张辉、毛阳丽。I SC/ T 2028-2016 紫贻贝范围本标准规定了紫贻贝CMytilus。rOVl肝ialisLamarck，1819)的名称与分类、分布、主要形态特征、生长与繁殖、遗传学特征、检测方法和判定规则。本标准适用于紫贻贝的种质检测2 规范性引用文件下列文件对于本件。凡是不注日期的GB/ T 18654. GB/ T 1865 3 3.1 学名紫贻贝(3.2 分类软体动(儿1ytilus)。4 下列术4. 1 壳长前后4.2 壳高shell 从壳顶4. 3 壳宽shell width(SW) . 捏紧两边贝壳使其间距不再变小5 分布ae)，贻贝属紫贻贝为世界性广泛分布的种类，分布于南北两半球中高纬度海域的沿岸带。在中同，主要分布于黄海、渤海。多栖息于低潮线至水深2m浅海区，以足丝附着岩礁等处。6 主要形态特征6. 1 外部形态特征6. 1. 1 外形SCj T 2028-2016 贝壳呈模形，壳质较轻薄。壳长不及亮高的2倍，壳宽为壳长的1/31/20壳顶位于贝壳的最前端，较尖细;腹缘稍直，背缘弧形。壳表为黑褐色，内面灰白色而边缘部分蓝色，有珍珠光泽。外套痕与闭壳肌痕明显，前闭亮肌痕小，位于壳顶内侧的腹面，后闭壳肌痕大，卵圆形，与前方缩足肌痕相连。紫贻贝外形见图10图1紫贻贝外形6. 1. 2 可量性状壳长17.1 mm73. 3 mm，湿重O.57 g27. 26 g。壳高/壳辰、壳宽/壳长见表l。项目最大值最小值平均值6.2 内部构造6.2. 1足表1紫贻贝可量性状结果壳高/壳长O. 62 O . 53 O . 57 壳宽/壳长0. 41 O . 34 O . 39 足细长，位于腹面，不发达，能自由伸缩;腹面具足丝沟，基部的足丝腺发达，能分泌韧性强的足丝。6.2.2 外套膜外套膜为两孔型，包围整个软体。左右两片外套膜合抱形成一个外套腔，外套膜后端肌肉发达，分布较多触手。6. 2. 3 闭壳肌外套痕与闭壳肌痕明显，前闭壳肌痕小，位于壳顶内侧的腹面，后闭亮肌痕大，卵圆形，与前方缩足肌痕相连。7 生长与繁殖7. 1 生长l龄2龄的紫贻贝生长速度最快，随着年龄的增长，壳长和体重增长速度显著减慢，其体重与壳长的关系见式1。w = O . 0005X2. 5185 (r2 = O . 99， O . 01)(1) 式中:W一一体重，单位为克(g); X一一壳长，单位为毫米(mm)。7. 2 繁殖7.2. 1 性成熟年龄与性腺特征SC/T 2028-2016 大多数雌雄异体，1龄性成熟，雌雄在外观上无区别。性成熟时，雄性个体生殖腺呈乳白色，雌性个体呈橙黄色或情红色。7.2.2 繁殖期与产卵量繁殖季节依地区而异，有春、秋两个繁殖盛期。壳长40mm60 mm的个体产卵量为3X 105粒6X 106粒，壳长超过80mm的个体产卵量为8X106粒1. 5 X 107粒。8 细胞遗传学特征二倍体体细胞染色体数:2=28。染色体核型公式是:2n=28=10m+ 10sm+6st十2tNF=48 紫贻贝核型见图20笋.民衍 . 比3龟孙M， ,. ,. ft矶，、., 图2紫贻贝的核型9 分子遗传学特征9. 1 线粒体COI基因序列线粒体COI基因片段序列长度为661bp，存在雌性(F)与雄性(M)两种类型。F型基因组内净遗传距离为O.OOOO. 002, M型基因组内净遗传距离为O.OOOO. 006, F型和M型基因组间序列差异度为O . 1960. 215。9. 2 F型序列紫贻贝线粒体DNACOI基因片段的F型序列为:GACTCTTTAT CTATATAGTG GGGTCTGAGG AGGTTTGTTC GGGGCAAGGT 50 TAAGTCTGAT AATTCGGATA CAGTTAGGGC ATCCTGGAGC AGTATTTTTA 100 AAAAGAGATT GGTTTTATAA TGTGGTTGTT ACAACACACG CCTTAATAAT 150 AATTTTCTTT GCTGTAATAC CCATTCTAAT CGGAGCTTTC GGT AA TTGGC 200 TGATTCCTCT ATTAGTAGGT GGTAAAGATA TAATTTATCC GCGGATAAAT 250 AA TTTGAGCT A TTGGTT A TC TCCTAATGCG CTATACTTAC TTATATTATC 300 TTTTAGAACG GATAAAGGGG TAGGTGCTGG ATGGACTATT TACCCGCCAT 350 TGTCTGTATA TCCTTATCAT AGCGGGCCGA GGATAGATGT TCTTATTGTG 400 TCCTTGCATT TAGCTGGGTT AAGTTCTTTG GTGGGTGCTA TTAATTTTGC 450 TAGTACCAAC AAAAACATAC CAGTTTTAGA GATAAAAGGA GAACGAGCTG 500 AGCTTTATGT CCTAAGGATT AGAGTTACTG CCGTATTACT AATTATTTCT 550 ATTCCGGTTT TAGGAGGGGG TATCACAATA ATTCTGTTTG A TCGGAACTT 600 TAACACAACA TTTTTTGATC CAGCAGGAGG GGGTGACCCT GTCTTGTTTC 650 AACATTTGTT C 661 9. 3 M型序列3 SC/T 2028一2016紫贻贝线粒体DNACOl基因片段的M型序列为:TACCCTTTAT CTCTATAGAG GGGTGTGAGG AGGCCTATTT GGGGCAAGGC 50 TAAGTTTAAT AATCCGTATA CAACTTGGTC ACCCTGGGGC CGTATTCCTC 100 AAAAGAGACT GGTTTTTTAA TGTAGTGGTT ACAACACATG CTTTAGTGAT 150 GATTTTTTTT GCTGTAATAC CAATCTTAAT CGGGGCTTTT GGCAATTGGC 200 TTATCCCGTT ACTGGTAGGA GGTAAGGACA TAATTTACCC TCGGATAAAT 250 AATTTGAGAT ATTGACTGTC TCCAAACGCA TTGTACTTAC TCATACTATC 300 TTTTAGGACA GATAAAGGGG TGGGTGCTGG ATGGACTGTA TACCCCCCAT 350 TGTCTAGATA CCCCTATCAT AGAGGGCCAA GAATAGACGT TCTTATTGTG 400 GCGCTTCATT TAGCTGGAGT TAGATCCTTA GTAGGAGCTA TTAATTTTGC 450 CAGGACTAAC AAAAACATAC CAGCTTTGGA GATAAAAGGG GAGCGAGCTG 500 AGCTTTATGT TTTAAGAATT AGGGTCACCG CAGTGCTTCT AATTATTTCT 550 ATTCCGGTTT TAGGAGGAGG AATTACAATA ATTTTGTTCG ACCGCAACTT 600 TAACACTACA TTTTTTGACC CTGCAGGGGG TGGGGACCCT AACATTTATT T 10 检测方法10. 1 抽样按GB/T 18654. 2的规定执行。10.2 可量性状的测定用游标卡尺测量壳长、壳高、壳宽等数值，电子天平称量，精确至IJO. 1 g。10.3 染色体和核型检测10. 3. 1 染色体标本的制备GTTCTGTTTC 650 661 实验用贝于0.005%秋水仙素(海水配制)中充气暂养8h10 h，割断闭壳肌，剪取一小块鲤组织;用50%的过滤海水低渗处理30min;用0.075mol/ L KCI低渗25min;用Carnoy氏液固定3次，每次15 min20 min;50%冰醋酸解离20min30 min，轻轻吸打;500C左右温片滴片;烘干后用10%Giemsa 染液(pH6.的染色30min;自来水冲洗，自然干燥后镜检。10.3.2 核型分析按GB/T 18654. 12的分类标准对染色体分类。11 判定规则被检样品符合第6章和第8章要求的为合格样品。如果有一项不符合的可以复检，复检不合格的判定为不合格，复检合格的判定为合格。4 SCjT 2028一2016附录A(规范性附录)线粒体COI序列分析方法取肌肉组织剪碎并用10%蛋白酶K消化后，按照标准的盼一氯仿抽提法或者使用试剂盒进行总DNA的提取。扩增引物序列为COI- F(5 -GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG -3)和COI-R(5 - T AAACTTCAGGGTGACCAAAAAA TCA -3)。反应体系为50L，每反应体系包括1.25 U的Tq DNA聚合酶;各种反应组分的终浓度为200nmol/ L的正反向引物;200mol/L的每种dNTP，10XPCR缓冲液200mmol/ L Tris - HC1, pH 8.4; 200 mmol/ L KC1; 100 mmol/ L (NH4) 2 S04; 15 mmol/L MgC12J5L，加Milli-Q H20至50L。基因组DNA约为20吨。每组PCR均设阴性对照用来检测是否存在污染。PCR参数包括940C预变性4min，940C变性40s，520C退火30s，720C延伸lmln，循环35次，然后720C后延伸7min。所有PCR均在热循环仪上完成。扩增产物经纯化后经测序仪直接测序，为了保证序列的准确性，对所有样品均进行双向测序。5