NY∕T 3060.8-2016 大麦品种抗病性鉴定技术规程 第8部分：抗条锈病(农业).pdf

ICS 65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 3060.8一2016大麦品种抗病性鉴定技术规程第8部分:抗条锈病Code of practice for evaluation of barley varieties for resistance to disease一Part 8: Stripe rust 2016一2 -23发布2017 -04-01实施中华人民共和国农业部发布目IJ NY / T 3060 (大麦品种抗病性鉴定技术规程分为8个部分:第1部分:抗条纹病;一一第2部分:抗白粉病;一一第3部分:抗赤霉病;一一第4部分:抗黄花叶病;一一第5部分:抗根腐病;第6部分:抗黄矮病;第7部分:抗网斑病;第8部分:抗条锈病。本部分为NYjT3060的第8部分。本部分由农业部种子管理局提出井归口。NY/T 3060.8-2016 本部分起草单位:中罔农业科学院植物保护研究所、全国农业技术推广服务中心、西藏自治区农牧科学院、西藏大学。本部分主要起草人:王凤涛、商瑞明、邱军、冯品、强小林、王文峰、王翠玲、彭岳林、陈万权、徐世昌。I 1 范围本部分规定了大麦本部分适用于大麦(2 术语和定义2. 1 2. 2 抗病性植慢锈在适速度相对2. 3 2. 4 2. 5 2. 6 致病性病原物大麦品种抗病性鉴定技术规程第8部分:抗条锈病抗性评价evaluation of resistance 根据采用的技术标准判别寄主植物对特定病虫害抵抗水平的定性描述。2. 8 分离物isolate 采用人工方法从植物发病部位分离获得的病原物。2. 9 接种体inoculum 能够侵染寄主并引发病害而表现出病症的病原体。2. 10 NY/ T 3060.8-2016 田间病害发展NY/T 3060.8十2016接种悬浮液suspension 由一定量接种体配制成的悬浮水榕液。2. 11 生理小种Iphysiological race 病原菌种l变种或专化型内的分类单位。各生理小种之间形态上无差异，但对具有不同抗病基因的鉴别品种的致病力存在差异。2. 12 2. 13 鉴别寄主Idifferential host 用于鉴定阳区分特定病原菌生理小种或菌系的一套带有不同抗性基因的寄主品种。普遍率incidence 发病率发病植物!体单元数占调查植物体单元总数的百分率，用以表示发病的普遍程度。在本部分中植物体单元为叶片L2. 14 严重度Iseverity发病植树单元上发病面积或体积占该单元总面积或体积的百分率。严重度用分级法表示，即将发病的严重程围由轻到重划分出几个级别，分别用各级的代表值或百分率表示，说明病害发生的严重程度。2. 15 病情指数disease index 全面考虑发病率与严重度两者的综合指标。2. 16 侵染型Iinfection type 根据条锈菌f雯染大麦品种后有无细胞过敏性坏死反应、条锈菌夏子包子堆大小及夏抱子新鲜程度划分的反应级剔，用以表示大麦青裸品种抗条锈病程度。2. 17 潜育期Ilatent period 病菌与太麦建立寄生关系后到表现症状之前的时期。2. 18 大麦条锈病barley stripe rust 由大麦条锈病菌Pucci77iastriiformis West. f. sp. h07-dei Eriks引起的大麦真菌病害。当地残存和随气流远距离传播而来的夏子包子是大麦条锈病初侵染源。主要症状:夏抱子堆呈黄色，主要发生在叶片，偶尔发生旦在穗部。多个夏子包子堆在成株的叶脉间呈直线排列，其长度逐步延伸，最后可扩展到整个叶片。在麦苗叶片上夏子包子堆单个散状分布，很快在寄主上形成黑色的冬抱子。3.1 条锈菌分离从发病桓株叶片的典型病斑上刮取条锈菌抱子堆中的夏抱子，涂抹于盆播感病品种一叶期幼苗叶片上。goC斗130C保湿18h24 h之后，置于150C 180C温室内生长发病，获得条锈病初繁菌源。经形态学鉴定确认为P.striiformis West. f. sp. hordei Eriks后，进行单抱分离纯化、扩繁，保存备用。3. 2 条锈菌生理小种鉴定NY/ T 3060.8-2016 对用于抗性鉴定接种的条锈菌生理小种先进行小种鉴定。生理小种鉴定采用Topper、Hei!sFran-ken、Emir、Astrix、Hiproly、Varunda、AbedBinder 12、Trumpf、Mazurka、Bigo、15和Bancroft12个品种作为鉴别寄主。根据条锈菌与鉴别寄主相互作用产生的抗病或感病模式，确定不同菌株所属的生理小种。3. 3 条锈菌生理小种繁殖3.3.1 繁茵茵种植用于鉴定的条锈菌在高感品种上繁殖，可选用普通花盆播种感病品种，置于150C 180C温室内培养6d8 d，待一叶期接菌。3. 3. 2 接种和保湿接种在接种问(90C 130C)内进行。首先，用喷雾法净化接种间空气，再用75%乙醇水溶液对操作台、接种针和手进行消毒。菌种繁殖分为初繁和扩繁。在初繁前，应对供试菌系用鉴别寄主(参见附录A)进行小种鉴定。3.3.2.1 初繁待繁菌苗第1叶片全部展开后，从液氮中取出菌种(夏子包子)，在400C450C温水中活化5min，之后置于盛有湿润滤纸的培养皿中于80C 100C下黑暗水化10h12 h。采用涂抹法接种，即先用手指蘸清水(自来水)轻轻脱除叶片表面蜡质，再用接种针将条锈菌夏子包子轻涂于叶片正面。接种后用清水喷雾，使叶片表面附着一层均匀的雾滴，置于接种桶内，密封，于90C130C的接种间内黑暗保湿18h24 h。3. 3. 2. 2 扩繁3.3. 2. 2. 1 扩繁可采用扫抹法、喷(撒)粉法和喷雾法接种。具体如下:a) 扫抹法:先将一叶期的接菌苗置于接种桶内，叶片均匀喷施0.05%Tween -20水溶液，然后将待用的菌种(夏抱子)直接扫抹于接菌苗叶片上，再均匀喷施0.05%Tween - 20 水溶液，使叶片表面附着一层均匀的雾滴，密封，置于90C130C的接种间内黑暗保湿24h。b) 喷(撒)粉法:小喷粉器(或用双层纱布封口的玻璃试管)经消毒、干燥后，加入适当的滑石粉，再加入少量新采集的条锈菌夏抱子混合均匀待用。滑石粉与夏抱子比例为(2030): 1。接种前，先用O.05 %Tween - 20 水溶液叶面喷洒，随后用喷粉器(或用双层纱布封口的玻璃试管)将上述稀释的抱子粉均匀喷洒或抖落在叶片上，再用O.05%Tween -20水溶液喷雾，使叶片表面附着一层均匀的雾滴，密封，置于90C130C的接种间内黑暗保湿24h。c) 喷雾法:用小型喷雾器将新配制好的子包子悬浮液均匀喷洒在叶片上，密封，置于90C130C的接种间内黑暗保湿24h。3. 3. 2. 2. 2 抱子悬浮液配制方法:在小烧杯里加入接种的条锈菌夏子包子，先用少量的O.05%Tween-20 水溶液湿润并搅成糊状，再按照1: 1 OOO(g/ L)比例加入O.05 % Tween - 20 水榕液。3.3.3 潜育发病取出接种苗，置于可控温度的温室内潜育发病。温室温度:昼150C 190C /夜lOOC140C;光照强度:6 000 lx 10 000 lx;光照时间:16 h。待叶片现斑时(接种条锈菌后约7d)，剪去心叶，加玻璃罩隔离保纯。接种后15d17d，夏抱子即可成熟，待用。3.3.4 菌种收集用喷雾法喷雾净化采菌室空气中可能存在的条锈菌夏抱子。备好喷雾器、接种针、75%乙醇水榕液、采菌试管(注明菌种编号及采菌日期)等。用75%乙醇水溶液消毒手和采菌操作舍，然后将产抱麦茵轻轻取至采菌室(不要震动)，将产抱幼苗小心横放，用接种针轻轻抖动叶片，使菌种(夏抱子)散落到玻璃罩内，移去麦苗，再轻敲玻璃罩，将夏子包子集中，装管。3.3.5 菌种保藏3 保藏子)在5d6 d内使用时，可进行短期保藏。即将采菌试管置于盛有变色硅胶的干燥器内，置于OOC才50C冰箱中待用。3. 3. 5. 2长当菌种(夏子包子)准备在第2年或更长时间使用时，需进行长期保藏。长期保藏将采集的抱子置于盛有变色硅剧的干燥器内，放在OOC50C冰箱中干燥3d5 d.移至安培管中，抽真空后封管，置于一200C冰箱内，或不需真空抽气直接封管置于液氮中，待用。平坦、土壤肥沃的0.30 m, 4. 3. 2. 1 播种时气候条件(4 a) 用的夏抱子粉用数滴0.05%Tween -20 水溶液调成糊状，然后按1: 1 OOOCg/ L)比例稀子包子悬浮菌液。利用手持式喷雾器将夏抱子悬浮菌液均匀喷洒在接种段的麦株叶片上快速覆盖塑料薄膜，并四周用土压严，以便大麦叶片结露，第2d 8 :00前揭开塑料膜。b) 注目才法:此法多用于麦苗有一定生长高度的拔节期。接种前，应配制好夏子包子悬浮液，配制方:将选用的夏子包子粉用数滴0.05% Tween -20 7.K洛液调成糊状，然后将1: 1000Cg/L)比释成夏抱子悬浮菌液。一般在诱发行上每隔1.0m左右选取10个20个单茎分别注射。其方法是，用注射器将夏子包子悬浮液从大麦心叶与其下展开叶叶辅相接处以下1cm处，针头向下倾斜刺人且不要刺穿，注入少量悬浮液，以见心叶处冒出水珠为宜。接种最好天傍晚进行。一般接种2次，间隔3d5 d.并选择在接种行不同接种段接种。NY/ T 3060.8-2016 4. 5 接种前后田间管理在接种前6d7 d先进行田间灌溉，或在雨后接种;接种后若遇持续干早，应及时进行田间浇灌，以满足病害发生所需条件。待鉴定的大麦不施用任何杀菌剂。4. 6 病情调查及记载标准4.6. 1 调查时间大麦进入乳熟期进行调查。4.6. 2 调查方法及项目调查时曰测每个鉴定项日为侵染型、严重度和位，当严重度用分级，逐份材料调查记载病情级别。调查次，间隔4d6 d。若以叶片为单(1) 式中:Xj S, 当(2) 式S 4. 6. 3 1。根据各级侵染型注:侵染型级别经常用如下符号进行精细划分.IP-表示夏抱子堆较其相应正常侵染型的夏抱子堆略小;.+表示夏子包子堆较其相应正常侵染型的夏子包子堆略大。4. 6. 3. 2 严重度记载及标准严重度用分级法表示，设1%、5%、10%、20%、40%、60%、80%、100%八级。调查时参照大麦条锈病严重度分级标准示意罔(图1)，日测估计严重度。4号份材料随机抽样50片叶，逐叶记载严重度，计算平均严重度。平均严重度按式(3)计算。3 NY / T 3060.8十2016式中:z一一病级数(On); X -i的单元数;Si -i缆的严重度值。5 s = (Xi X S;)/Xi. . (3) ，口，一。10 60 80 nu nu l 20 40 注:阁中数字表示严重度级别。图1大麦条锈病病害严重度级别划分标准示意图4.6.3.3 普遍率记载及标准普遍率以技病叶片数占总叶片数的百分比表示。每一个鉴定品种随机调查50片叶片，统计发病叶式中:1=好)大麦进AJ乳熟期调查记载鉴定品种对病原菌小种的侵染型、严重度和普遍率，鉴定结果记载表格见当鉴定闹中的感病或高感对照品种达到其相应感病程度(严重度60%)时，该批次抗条锈病鉴定结果视为有划。4. 8. 2 抗性诽价标准依据鉴沮品种发病程度(病情级别)确定其对条锈病的抗性水平，其评价标准见表2。若一个鉴定群体中出现明显的抗、感不同类型，应在调查表中注明抗性分离以j表示。表2大麦对条锈病抗性评价标准病情指数，%抗性评价。免疫型Immune(IM)0; 近免疫型NearlyImmune(NIM) 高度抗病型Highlyresistant(HR) 2 巾度抗病型ModeratelyrcsiSlant(MR) 3 三三30慢锈型Slowrust(SR) 3 3060 中度感病型Moderatclysusceptible(MS) 4 60 高度感病型Highlysusceptible( HS) 4. 8. 3 重复监定6 NY/ T 3060.8-2016 初次鉴定中表现为高抗、中抗的材料，翌年用相同的病原菌进行重复鉴定。4. 8. 4 抗性评价根据两年抗性鉴定结果对鉴定品种进行抗病性评价，抗性以记载的最高病情级别为准。5 检测质量控制标准5. 1 抗病性评价结论，每个品种需要鉴定2次，记录最高侵染型。5. 2 在每次接种前需对所用条锈菌生理小种进行鉴定，确保所用生理小种正确。5. 3 当鉴定品种首次出现中抗、高抗及免疫侵染型时，应于翌年进行重复鉴定1次。7 NY / T 3060.1 8-2016 附录A(资料性附录)大麦条锈病病原菌和生理小种A. 1 m双生有产个偶上7胞麦孔单大芽子在生散A.2 Binder 8 NY/ T 3060.8-2016 附录B(规范性附录)大麦品种抗条锈病鉴定结果记载表大麦品种抗条锈病鉴定结果记载表见表B.l。表8.1年大麦品种抗条锈病鉴定结果记载表病情级别编号111l种名称来源侵染型严巫度，%普遍来，%病情指数鉴定结果1 1 S 1101 201401601801100平均发病叶片数总叶片数平均注1:鉴定地点海拔高度经纬度。注2:播种日期。注3:接种病原菌分离物编号生理小种类型。注4:接种日期。注5:调查日期。鉴定负责人(等字)9