传染性脾肾坏死病毒灭活疫苗对鳜肠道微生物的影响研究.pdf

D O I:1 0.1 6 3 7 8/j.c n k i.1 0 0 3-1 1 1 1.2 1 1 4 3第4 2卷第5期2 0 2 3年9月水产科学F I S HE R I E S S C I E N C EV o l.4 2N o.5S e p.2 0 2 3传染性脾肾坏死病毒灭活疫苗对鳜肠道微生物的影响研究何润真,朱凝瑜,梁倩蓉,郑晓叶,陈小明,姚高华,丁雪燕(浙江省水产技术推广总站,浙江 杭州3 1 0 0 2 3)摘 要:为探究接种传染性脾肾坏死病毒灭活疫苗对鳜肠道微生物的组成结构及相关功能基因的影响,对体质量(2 01.8)g的鳜进行腹腔注射传染性脾肾坏死病毒灭活疫苗,对照组注射等体积无菌生理盐水。对照组和免疫组放入用纱网隔开的同一池塘中养殖,2 8d后每组各采集1 0尾肠道粪便样本,用高通量测序,构建文库。高通量测序共获得9 6 6 9条序列,平均长度为5 4 3b p。A l p h a多样性分析结果显示,C h a o 1指数在对照组中更高,香农指数和辛普森指数在免疫组中更高,表明免疫后肠道微生物的多样性和丰度增加。在门水平上,对照组肠道微生物以变形菌门为优势菌门,相对丰度为7 2.2 3%;免疫组以变形菌门和衣原体门为优势菌门,相对丰度分别为2 8.5 7%和1 1.1 3%。在属水平上,对照组以气单胞菌属为主要优势属,相对丰度高达7 1.7 3%;免疫组以衣原体属和埃希氏杆菌属为主要优势属,相对丰度分别为1 1.5 7%和8.7%。免疫组与对照组相比,共筛选到9 6 5 6个差异丰度基因,其中有8 4 0个基因高丰度,8 8 1 6个基因低丰度。差异基因主要富集在双组分系统、A B C转运子、嘌呤代谢、群体感应、细菌趋药性、鞭毛组装和细菌分泌系统等通路,通路中的绝大部分基因的丰度在免疫组中均降低。上述结果表明,传染性脾肾坏死病毒灭活疫苗免疫后鳜肠道微生物的组成和功能基因变化明显,可引起致病菌维氏气单胞菌和嗜水气单胞菌比例的减少,同时引起乳酸菌属、芽孢杆菌属和类芽孢杆菌属等有益细菌比例增加,这可为了解疫苗的作用机制提供新思路。关键词:鳜;传染性脾肾坏死病毒;灭活疫苗;肠道微生物;宏基因组中图分类号:S 9 4 1.8文献标识码:A文章编号:1 0 0 3-1 1 1 1(2 0 2 3)0 5-0 8 6 2-0 9收稿日期:2 0 2 1-0 7-2 9;修回日期:2 0 2 2-0 2-1 1.基金项目:国家特色淡水鱼产业技术体系项目(C A R S-4 6);浙江省科技厅公益技术研究计划资助项目(L GN 2 0 C 1 9 0 0 1 0);浙江省“十四五”水产新品种选育重大科技专项(2 0 2 1 C 0 2 0 6 9-2).作者简介:何润真(1 9 9 1),男,工程师,博士;研究方向:水产动物病害防控.E-m a i l:5 6 8 8 1 8 6 9 2q q.c o m.通信作者:丁雪燕(1 9 6 6),女,研究员;研究方向:水产养殖.E-m a i l:d i n g x y_s c s i n a.c o m.鳜(S i n i p e r c ac h u a t s i)是我国具有重要经济价值的优质淡水品种,有“淡水石斑”之美称。随着鳜养殖规模的扩大和养殖密度的提高,鳜养殖中的疾病增多,其中病毒病由于传播快、发病率高、死亡率高、无特效药等特点危害最大。传染性脾肾坏死病毒病是自1 9 9 4年以来在鳜养殖中暴发的一种流行性疾病,病原是一种双链D NA病毒,直径约1 5 0n m,主要感染鳜的脾脏和肾脏1-2。感染该病的鳜主要临床症状包括:头、下颌、鳃盖、鳍条基部、体表等有点状或片状出血,鳃贫血,肝脏有出血点,脾脏和肾脏肿大,肠道内有黄色液体等2。病毒可以在鳜体内长期潜伏,发病1 0d内致死率高达9 0%以上3。因此,有必要对其开展深入研究,探索该病的防治方法。疫苗是预防和控制鱼类病毒性疾病最为有效的方式,目前主要有灭活疫苗、重组亚单位疫苗和D NA疫苗3种病毒疫苗,其中灭活疫苗因为安全性高、免疫效果稳定、制备方式成熟等优点是当前研发重点。D o n g等4建立病毒敏感的鳜仔鱼细胞系,研制出传染性脾肾坏死病毒灭活疫苗在实验室和大塘两种环境下,疫苗对鳜的免疫保护率均超过9 0%。F u等5用鳜脑细胞敏感细胞系制备的病毒灭活疫苗也获得了较好的免疫保护效果。此外,潘厚军等6采用感染传染性脾肾坏死病毒的鳜病变组织制备的 匀浆疫苗也获 得了较强的 免疫保护效果。已有的研究表明,肠道微生物群落通过参与物质代谢、营养吸收、免疫应答和疾病防御来维持宿主的健康7-8。肠道微生物的组成与丰度受到养殖环境9、水质1 0、饲料1 1、性别1 2、生长阶段1 3和病原感染1 4的影响。正常生理状态下,肠道微生物可以通过脂多糖、脂蛋白和代谢产物等特定组分调控宿主的免疫反应,促进免疫系统发育1 5。肠道微生物可以刺激杯状细胞分泌黏蛋白,维持肠道黏液层的完整1 6-1 7。在哺乳动物中发现肠道菌群可以通过树突状细胞刺激肠道黏膜相关淋巴组织的发育成熟1 8-1 9。部分肠道细菌被证实直接调控宿主的免疫反应,如分节丝状菌能够诱导T h 1 7细胞分化2 0,脆弱拟杆菌产生的多糖A能刺激T r e g细胞分化2 1,梭状芽孢杆菌簇和 a簇能诱导T细胞分化为T r e g细胞2 2。大量的研究表明,肠道微生物在调节免疫方面发挥了重要的作用,但目前对水产用疫苗免疫引起的宿主肠道微生物的变化方面的研究较少。笔者拟通过宏基因组高通量测序技术探究传染性脾肾坏死病毒灭活疫苗免疫后鳜肠道微生物的结构变化和功能基因筛选,旨在揭示疫苗对肠道微生物的影响机制。1 材料与方法1.1 试验材料试验用鳜来自浙江嘉善县新源水产种业养殖场,体质量(2 01.8)g,共8 0 0尾。养殖水温(2 52),p H8.0,溶解氧(61)m g/L。日投喂2次,饲料为普通商业饲料。将鳜暂养1 4d后,随机选取1 0尾用于细菌和病毒检测,确保鱼体健康无病。免疫试验用传染性脾肾坏死病毒灭活疫苗为中山大学何建国教授研究团队馈赠。1.2 免疫试验将鱼均分为对照组和免疫组2组,每组5 0尾,在免疫前1d暂停饲料投喂。疫苗使用前混合均匀,免疫组鳜进行腹腔注射免疫,0.1m L/尾;对照组注射等体积无菌生理盐水。对照组和免疫组放入同一池塘中养殖,池塘中间用纱网隔开确保将2组鱼分隔开。试验过程中每日投喂2次,并根据天气情况进行适当调整。1.3 肠道微生物基因组D NA提取在免疫后2 8d取对照组和免疫组鳜各1 0尾收集肠道粪便样本,将每组样本分别混合,液氮冷冻后-8 0 保 存 备 用。按 照Q I A a m pF a s tD NAS t o o lM i n iK i t(德国)的使用说明提取粪便样品中的微生物基因组D NA,提取的D NA用微量分光光度计检测D NA纯度,并通过0.8%琼脂糖凝胶电泳检测D NA片段的完整性。1.4 文库构建及高通量测序采用I l l u m i n a试剂盒进行双末端文库构建,文库质检合格后用N o v a S e q6 0 0 0P E 1 5 0进行高通量测序分析。将测序得到的原始数据经过预处理后进行组装得到重叠群,利用M e t a G e n e M a r k对各个样本及混合组装的重叠群(5 0 0b p)进行编码区预测,并且根据预测结果将编码区长度小于1 0 0n t的序列进行过滤。随后根据编码区预测结果,利用C D-H I T软件进行去冗余,获得非冗余的基因,同时以9 5%一致性、9 0%覆盖度进行聚类,并选取最长的序列为代表性序列;利用B o w t i e 2将各样本的有效数据比对到基因序列上,计算各个基因在各样品中比对上的读长数目;过滤掉在所有样品中比对上读长数目2的基因,获得最终用于后续分析的序列。根据比对上的读长数目及各个基因长度,计算各基因在每个样品中的丰度信息,计算公式如下:Gk=rkLk1ni=1riLi1 06式中,Gk是某个基因在样本中的T PM(T r a n s c r i p t sP e rM i l l i o n)值,k代表某个基因,n是检测到有读长覆盖的基因数目,r为比对上基因的读长数目,L为基因的长度。利用D I AMON D软件将序列与N R_m e t a库进行比对(B L A S T P,e1 0-5);比对后对每个U n i-g e n e的比对结果,选取比对指标最好的比对结果进行物种分类。结合美国国家生物技术信息中心的物种分类系统可以得到不同分类学水平的具体物种注释信息。将物种分类信息与U n i g e n e的丰度信息结合,可以得到各个分类等级的丰度信息,某个分 类 等 级 的 丰 度 等 于 注 释 到 该 分 类 等 级 的U n i g e n e丰度的加和。经过种水平注释信息统计,计算A l p h a多样性、B e t a多样性。将序列在物种分类、功能注释、基因水平上进行丰度统计及差异比较分析,并进行GO和K E G G数据库富集分析。该部分主要由杭州联川生物技术股份有限公司完成。2 结果与分析2.1 鳜肠道微生物A l p h a多样性分析对测序获得的序列进行组装后共获得8 1 3 3条重叠群,其中:对照组有7 1 6 6条重叠群,总长度为67 7 56 5 7b p,N 5 0为9 7 3b p;免疫组有9 6 7条重叠群,总长度为7 5 65 4 9b p,N 5 0为7 5 3b p。对样本的重叠群(5 0 0b p)进行编码区预测,过滤掉小于1 0 0n t的序列,去除冗余序列,最终获得有效的序列。以9 5%一致 性、9 0%覆盖度进 行聚类分析,2组样本共获得9 6 6 9条序列,平均长度为5 4 3b p,其中对照组有8 7 3 6条序列、免疫组有9 3 3条序列,2组样本共有序列为9 3 3条(图1)。A l p h a多样性分析结果表明,C h a o 1指数在对照组中更高,G o o d s_c o v e r a g e指数免疫组和对照组相同,香农指数和368第5期何润真等:传染性脾肾坏死病毒灭活疫苗对鳜肠道微生物的影响研究辛普森指数在免疫组中更高,这些结果表明,免疫组中微生物的多样性和丰富度更高(图2)。2.2 鳜肠道微生物组成结构分析物种丰富分析结果显示,在门水平上共鉴定出3 7个门。其中:对照组肠道微生物以变形菌门和厚壁菌门为优势 菌门,相对 丰度分别为7 2.2 3%和1.9 9%;免疫组肠道微生物以变形菌门、衣原体门、厚壁菌门、放线菌门和蓝细菌为优势菌门,相对丰度分别为2 8.5 7%、1 1.1 3%、6.3 8%、3.1 3%和1.0 0%(图3)。在属水平上对照组肠道微生物以气单胞菌属(A e r o m o n a s)、梭菌属(C l o s t r i d i u m)、伯克霍尔德氏菌属(P a r a b u r k h o l d e r i a)和衣原体属(C h l a m y d i a)为主要优势属,其中气单胞菌属相对丰度最高达7 1.7 3%;免疫组肠道微生物以衣原体属、埃希氏杆菌属(E s c h e r i c h i a)、不动杆菌属(A c i n e t o b a c t e r)、假单胞菌属(P s e u d o m o n a s)、克雷伯氏菌属(K l e b-s i e l l a)和肠球菌属(E n t e r o c o c c u s)为主要优势属,相对丰度分别为1 1.5 7%、8.7 0%、6.1 8%、5.4 8%、5.1 4%和3.5 3%(图3)。在种水平上对照组肠道微生物主要包括维氏 气单胞菌(A.v e r o n i i)和嗜水 气单 胞 菌(A.h y-d r o p h i l a),相对丰度分别为5 1.6 7%和1.7 3%;免疫组肠道微生物主要包括沙眼衣原体(C.t r a c h o m a-t i s)、大肠杆菌(E.c o l i)、鲍曼不动杆菌(A.b a u-m a n n i i)、粪肠球菌(E.f a e c i u m)、绿脓假单胞菌(P.a e r u g i n o s a)和肺炎克雷伯氏菌(K.p n e u m o n i a e),相对丰度分别为9.0 5%、8.9 1%、4.7 0%、3.6 1%、3.3 9%和3.2 0%(图3)。图1 肠道微生物序列数量韦恩图F i g.1 V e n nd i a g r a mo f t h en u m b e ro f i n t e s t i n a lm i c r o f l o r aU n i g e n e s图2 肠道微生物A l p h a多样性分析F i g.2 A l p h ad i v e r s i t ya n a l y s i s o f i n t e s t i n a lm i c r o f l o r a468水 产 科 学第4 2卷图3 肠道菌群组成结构分析F i g.3 T h ec o m p o s i t i o no f i n t e s t i n a l b a c t e r i a l c o mm u n i t y2.3 差异基因功能注释分析免疫组与对照组相比,共筛选出9 6 5 6个差异丰度基因,其中有8 4 0个基因高丰度,8 8 1 6个基因低丰度。GO富集分析结果显示,差异基因在生物学过程、细胞组分和分子功能上均有富集,其中:生物学过程主要包括D NA的转录调控、磷酸化信号传递系统、氧化还原过程、趋化性、蛋白水解作用等过程;细胞组分主要包括细胞溶质、质膜、细胞质和膜等组分;分子功能主要包括蛋白结合、D NA结合转录因子活性、核糖体的结构成分、AT P结合和D NA结合等功能(图4)。对差异基因进行K E G G富集分析,前2 0位的分析结果显示,差异基因主要富集在双组分系统、A B C转运子、嘌呤代谢、群体感应、细菌趋药性、鞭毛组装和细菌分泌系统等通路,通路中的绝大部分基因在免疫组中的丰度均低于对照组(表1)。568第5期何润真等:传染性脾肾坏死病毒灭活疫苗对鳜肠道微生物的影响研究图4 差异基因GO富集分析F i g.4 G Oe n r i c h m e n t a n a l y s i so fd i f f e r e n t i a l g e n e s表1 注释到序列数目最多的2 0条K E G G通路 T a b.1 T h e2 0K E G Gp a t h w a y sw i t ht h em a x i m a l n u m b e ro fU n i g e n ea n n o t a t i o n s通路名称P a t h w a yD e f i n i t i o n低丰度基因数量N o.o f l o w-a b u n d a n c eg e n e s高丰度基因数量N o.o fh i g h-a b u n d a n c eg e n e s双组分系统T w o-c o m p o n e n t s y s t e m3 8 02A B C转运子A B Ct r a n s p o r t e r2 4 10嘌呤代谢P u r i n em e t a b o l i s m2 1 14核糖体R i b o s o m e1 0 58 2群体感应Q u o r u ms e n s i n g1 6 50细菌趋药性B a c t e r i a l c h e m o t a x i s1 5 70嘧啶代谢P y r i m i d i n em e t a b o l i s m1 3 73糖酵解/糖异生G l y c o l y s i s/G l u c o n e o g e n e s i s1 0 43 0氨基糖和核苷酸糖代谢Am i n os u g a ra n dn u c l e o t i d es u g a rm e t a b o l i s m1 2 93丙酮酸代谢P y r u v a t em e t a b o l i s m1 1 75鞭毛组装F l a g e l l a ra s s e m b l y1 1 70氧化磷酸化O x i d a t i v ep h o s p h o r y l a t i o n8 31 8丁酸甲酯代谢B u t a n o a t em e t a b o l i s m9 40乙醛酸和二羧酸代谢G l y o x y l a t ea n dd i c a r b o x y l a t em e t a b o l i s m7 31 9丙酸代谢P r o p a n o a t em e t a b o l i s m8 70甲烷代谢M e t h a n em e t a b o l i s m6 81 8丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸代谢A l a n i n e,a s p a r t a t ea n dg l u t a m a t em e t a b o l i s m7 88淀粉和蔗糖代谢S t a r c ha n ds u c r o s em e t a b o l i s m8 04半胱氨酸和蛋氨酸代谢C y s t e i n ea n dm e t h i o n i n em e t a b o l i s m7 17细菌分泌系统B a c t e r i a l s e c r e t i o ns y s t e m7 80668水 产 科 学第4 2卷3 讨 论3.1 疫苗接种对鳜肠道微生物组成的影响由于水生动物所处的水体环境以及食性的不同,其肠道微生物的主要类群也各不相同。肠道中含有大量的微生物,近年来的研究表明,肠道微生物对宿主的生命活动有重要的影响,在宿主的消化吸收、抗逆性、免 疫反应等方 面 均 具 有 一 定 的 作用2 3-2 4。肠道微生物可通过抑制病原微生物定殖,增强肠道免疫应答来保护机体免受感染与侵害2 5。鱼类肠道中一般有变形菌门、厚壁菌门和拟杆菌门3门 核 心 微 生 物。草 食 性 的 鱼 类 如 草 鱼(C t e n o p h a r y n g o d o ni d e l l u s)和 团 头 鲂(M e g a l o-b r a m aa m b l y c e p h a l a)肠道细菌主要来 自变形菌门、梭 杆 菌 门 和 厚 壁 菌 门2 6。杂 食 性 鱼 类 如 鲢(H y p o h t h a l m i c h t h y sm o l i t r i x)、鳙(A r i s t i c h t h y sn o b i l i s)肠 道 细 菌 主 要 来 自 变 形 菌 门 和 厚 壁 菌门2 7。肉 食 性 鱼 类 如 鳜 和 翘 嘴 鲌(C u l t e ra l b u r n u s)肠道微生物以盐单胞菌属(H a l o m o n a s)、梭杆菌属(F u s o b a c t e r i u m)等以产生蛋白酶为主要功能的微生物为优势肠道菌群2 8。虾肠道细菌主要来自厚壁菌 门、放线菌门、梭 杆 菌 门 和 变 形 菌门2 9.三角帆蚌(H y r i o p s i sc u m i n g i i)肠道优势细菌来自厚壁菌门、放线菌门和变形菌门3 0。肠道微生物的组成为揭示不同类型微生物在宿主生命活动中的作用提供了重要的参考依据。对健康和病变的圆口铜鱼(C o r e i u sg u i c h e n o t i)的肠道微生物进行1 6 Sr R NA测序分析,发现病变鱼肠道细菌多样性低于健康鱼,且病变鱼中变形菌门丰度显著高于健康鱼,其中占比最高的气单胞菌属可 能 是 造 成 疾 病 的 关 键 病 原3 1。采 用1 6 Sr D NA测序技术分析海藻希瓦氏菌感染对半滑舌鳎肠道菌群结构的影响,结果发现,健康半滑舌鳎肠道微生物丰度及多样性均高于感染后3 2。本试验结果显示:对照组肠道微生物以变形菌门为优势菌门,相对丰度达到7 2.2 3%;免疫组肠道微生物以变形菌门、衣原体门、厚壁菌门、放线菌门和蓝细菌门为主。对照组微生物的种类更多,而免疫组中微生物的多样性和丰富度更高,这与之前的研究结果类似。张正等3 3在患腹水病和皮肤溃烂病半滑舌鳎(C y n o g l o s s u s s e m i l a e v i s)、刘志刚等3 4在患链球菌病的尼罗罗非鱼(O r e o c h r o m i sn i l o t i c u s)的研究中也发现类似的结果。不同养殖环境的鱼类中肠道优势菌群不同,淡水鱼中主要以气单胞菌属、假单胞菌属 和 拟 杆 菌 属(B a c t e r o i d e s)为 主 要 优 势 菌群3 5。本试验结果显示,疫苗免疫后鳜的优势菌群从对照组的气单胞菌属(7 1.7 3%)转变为免疫组的衣原体属(1 1.5 7%)、埃希氏杆菌属(8.7%)、不动杆菌属(6.1 8%)、假单胞菌属(5.4 8%)和肠球菌属(3.5 3%)。肠道微生物多样性的提高有助于出现拮抗特性的菌群,从而帮助鱼体应对病原菌的入侵,而抗生素的不当使用则会降低肠道微生物的多样性,促使病原体的定殖3 6。肠道微生物的多样性已被用作鱼类健康的生物标志物3 7,大量研究发现,肠道微生物的多样化程度越高,对宿主的保护作用越大3 8-3 9。因此,本试验中传染性脾肾坏死病毒灭活疫苗免疫的鳜肠道微生物多样性增加,有利于减少感染致病性病原菌的风险。3.2 疫苗接种对鳜肠道益生菌组成的影响乳酸菌和芽孢杆菌是广泛使用的益生菌,它们通过调节肠道黏膜免疫、与共生菌群或潜在有害病原体相互作用、产生代谢产物(如短链脂肪酸和胆汁酸)、激活信号通路作用于宿主细胞来调节肠道微生态,这些机制有助于抑制和消除潜在病原体,改善肠道微环境,增强肠道屏障,减轻炎症,增强抗原特异性免疫应答4 0-4 1。L i u等4 2用枯草芽孢杆菌(B a c i l l u ss u b t i l i s)E 2 0饲喂点带石斑鱼(E p i-n e p h e l u s c o i o i d e s)4周后,其生长指标、固有免疫性能和疾病防御能力均有明显提高。S o n等4 3研究发现,在石斑鱼的饲料中添加植物乳杆菌可显著提高石斑鱼的 存活率、饲料 转 化 率 和 平 均 体 质 量。C a r n e v a l i等4 4从成年金头鲷(S p a r u sa u r a t a)中分离 出 的 两 株 食 果 糖 乳 杆 菌(L a c t o b a c i l l u sf r u c-t i v o r a n s)可 显 著 提 高 金 头 鲷 鱼 苗 的 成 活 率。B a g h e r i等4 5研究发现,饲料中添加枯草芽孢杆菌可显著提高虹鳟(O n c h o r h y n c h u sm y k i s s)幼苗的存活率。Z o k a e i f a r等4 6研究发现,枯草芽孢杆菌投喂8周后的凡纳滨对虾(L i t o p e n a e u sV a n n a m e i)具有更强的抵抗哈维氏弧菌的能力。益生菌具有增加肠道皱襞面积和厚度,提高肠道消化酶活性、促进肠道内双歧杆菌(B i f i d o b a c t e r i u m)或乳酸菌的生长的作用4 7。笔者发现,一些肠道益生菌如乳杆菌属、芽孢杆菌属和类芽孢杆菌属(P a e n i b a c i l l u s)的细菌在免疫组中均有显著上升。此外,免疫后的鳜肠道维氏气单胞菌和嗜水气单胞菌的数量明显减少,大肠杆菌和粪肠球菌等明显增加。维氏气单胞菌和嗜水气单胞菌是广泛存在于水体环境中的条件致病菌,在鱼体免疫力降低或体表损伤时容易侵入鱼体导致其发病。免疫组鳜肠道维氏气单胞菌和嗜水气单胞菌数量的明显减少可能与鱼体接768第5期何润真等:传染性脾肾坏死病毒灭活疫苗对鳜肠道微生物的影响研究种疫苗后免疫力增强有关。一些肠道微生物与T细胞分化有关,如克雷伯氏菌(K l e b s i e l l as p.)的异常定殖可以诱导树突状细胞吞噬作用并释放促炎细胞因子白细胞介素-6、白细胞介素-1 2、肿瘤坏死因子,促进辅助性T淋巴细胞1的极化作用4 8;脆弱拟杆菌(B.f r a g i l i s)是一种寄生于人体消化道的共生厌氧菌,它在肠道中定殖可预防小鼠肠道炎症性疾病4 9。笔者发现,克雷伯氏菌和脆弱拟杆菌在免疫组中均有显著增加,该变化可能有助于增强鱼体的炎症免疫应答。4 结 论已有的研究表明,肠道微生物在调节免疫方面发挥了重要的作用,笔者通过高通量测序技术发现,传染性脾肾坏死病毒灭活疫苗免疫后鳜肠道微生物的组成和功能基因出现明显变化,可引起致病菌维氏气单胞菌和嗜水气单胞菌比例的减少,同时引起乳酸菌属、芽孢杆菌属和类芽孢杆菌属等有益细菌比例增加,这为了解疫苗的作用机制提供了新的思路。此外,通过肠道微生物组成的改变有利于筛选出新的“疫生菌”,对于预防和控制疾病开辟新的治疗方案。参考文献:1 吴淑勤,李新辉,潘厚军,等.鳜暴发性传染病病原研究J.水产学报,1 9 9 7,2 1(增刊):5 6-6 0.2 何建国,翁少萍,黄志坚,等.鳜暴发流行病病毒性病原研究J.中山大学学报(自然科学版),1 9 9 8,3 7(5):7 4-7 7.3WANGYQ,L L,WE N GSP,e t a l.M o l e c u l a r e p-i d e m i o l o g ya n dp h y l o g e n e t i ca n a l y s i so fam a r i n ef i s hi n f e c t i o u s s p l e e n a n d k i d n e y n e c r o s i s v i r u s-l i k e(I S KNV-l i k e)v i r u sJ.A r c h i v e so fV i r o l o g y,2 0 0 7,1 5 2(4):7 6 3-7 7 3.4D ON GCF,X I ONGXP,L UOY W,e t a l.E f f i c a c yo faf o r m a l i n-k i l l e dc e l lv a c c i n ea g a i n s ti n f e c t i o u ss p l e e na n dk i d n e yn e c r o s i sv i r u s(I S KNV)a n di mm u n o p r o-t e o m i ca n a l y s i so f i t sm a j o r i mm u n o g e n i cp r o t e i n sJ.V e t e r i n a r yM i c r o b i o l o g y,2 0 1 3,1 6 2(2/3/4):4 1 9-4 2 8.5F UX,L IN,L A IY,e ta l.An o v e l f i s hc e l l l i n ed e-r i v e df r o mt h eb r a i no fC h i n e s ep e r c hS i n i p e r c ac h u a t-s i:d e v e l o p m e n t a n dc h a r a c t e r i z a t i o nJ.J o u r n a l o fF i s hB i o l o g y,2 0 1 5,8 6(1):3 2-4 5.6 潘厚军,吴涉勤.鳜鱼疫苗预防鳜鱼病毒性暴发性传染病试验J.水产科技,2 0 0 0(6):1 8-2 1.7P R E ZT,B A L C Z A RJL,RU I Z-Z A R Z U E L AI,e ta l.H o s t-m i c r o b i o t ai n t e r a c t i o n sw i t h i nt h ef i s hi n t e s t i n a le c o s y s t e mJ.M u c o s a l I mm u n o l o g y,2 0 1 0,3(4):3 5 5-3 6 0.8L I NCS,CHAN GCJ,L UCC,e t a l.I m p a c to f t h eg u tm i c r o b i o t a,p r e b i o t i c s,a n dp r o b i o t i c so nh u m a nh e a l t ha n dd i s e a s eJ.B i o m e d i c a l J o u r n a l,2 0 1 4,3 7(5):2 5 9-2 6 8.9C O R N E J O-G R ANA D O SF,GA L L A R D O-B E C E R R AL,L E ONA R D O-R E Z A M,e t a l.A m e t a-a n a l y s i s r e-v e a l st h ee n v i r o n m e n t a la n dh o s tf a c t o r ss h a p i n gt h es t r u c t u r ea n df u n c t i o no ft h es h r i m p m i c r o b i o t aJ.P e e r J,2 0 1 8,6:e 5 3 8 2.1 0C O R N E J O-G R ANA D O SF,L O P E Z-Z AVA L A A A,G A L L A R D O-B E C E R R AL,e ta l.M i c r o b i o m eo fP a-c i f i cw h i t e l e gs h r i m pr e v e a l sd i f f e r e n t i a l b a c t e r i a l c o m-m u n i t yc o m p o s i t i o nb e t w e e n w i l d,a q u a c u l t u r e da n dAH P N D/EM So u t b r e a kc o n d i t i o n sJ.S c i e n t i f i cR e-p o r t s,2 0 1 7,7:1 1 7 8 3.1 1D UANYF,Z HAN GY,D ON G HB,e ta l.E f f e c t so fd i e t a r yp o l y-h y d r o x y b u t y r a t e(P H B)o n m i c r o b i o t ac o m p o s i t i o na n dt h e mTO Rs i g n a l i n gp a t h w a yi nt h ei n t e s t i n e so fL i t o p e n a e u sv a n n a m e iJ.J o u r n a lo fM i-c r o b i o l o g y,2 0 1 7,5 5(1 2):9 4 6-9 5 4.1 2L IX M,YAN Q Y,R I NG E,e ta l.T h e i n f l u e n c eo fw e i g h t a n dg e n d e r o n i n t e s t i n a l b a c t e r i a l c o mm u n i t yo fw i l d l a r g e m o u t hb r o n z eg u d g e o n(C o r e i u sg u i c h e n o-t i,1 8 7 4)J.BMC M i c r o b i o l o g y,2 0 1 6,1 6(1):1 9 1.1 3L AU Z ON HL,GU DMUN D S D O T T I RS,P E TUR S-D OT T I RSK,e ta l.M i c r o b i o t ao fA t l a n t i cc o d(G a d u sm o r h u aL.)r e a r i n gs y s t e m sa tp r e-a n dp o s t h a t c hs t a g e sa n dt h ee f f e c to fd i f f e r e n tt r e a t m e n t sJ.J o u r n a lo fA p p l i e dM i c r o b i o l o g y,2 0 1 0,1 0 9(5):1 7 7 5-1 7 8 9.1 4YAN G HT,Z OUSS,Z HA ILJ,e t a l.P a t h o g e n i n-v a s i o nc h a n g e st h ei n t e s t i n a lm i c r o b i o t ac o m p o s i t i o na n d i n d u c e si n n a t ei mm u n er e s p o n s e si nt h ez e b r a f i s hi n t e s t i n eJ.F i s h&S h e l l f i s hI mm u n o l o g y,2 0 1 7,7 1:3 5-4 2.1 5THA I S SCA,ZMOR AN,L E VY M,e t a l.T h em i-c r o b i o m ea n di n n a t ei mm u n i t yJ.N a t u r e,2 0 1 6,5 3 5(7 6 1 0):6 5-7 4.1 6S HA RMAR,S CHUMA CHE R U,R ONAA S E N V,e t a l.R a ti n t e s t i n a lm u c o s a lr e s p o n s e st oam i c r o b i a lf l o r aa n dd i f f e r e n td i e t sJ.G u t,1 9 9 5,3 6(2):2 0 9-2 1 4.1 7P E T E R S S ONJ,S CHR E I B E R O,HAN S S ON GC,e ta l.I m p o r t a n c ea n dr e g u l a t i o no ft h ec o l o n i cm u c u sb a r r i e ri n a m o u s e m o d e lo fc o l i t i sJ.Am e r i c a nJ o u r n a l o fP h y s i o l o g y.G a s t r o i n t e s t i n a l a n dL i v e rP h y s-i o l o g y,2 0 1 1,3 0 0(2):G 3 2 7-G 3 3 3.1 8HAMA D A H,H I R O IT,N I S H I YAMA Y,e ta l.I-d e n t i f i c a t i o no fm u l t i p l ei s o l a t e dl y m p h o i df o l l i c l e so nt h ea n t i m e s e n t e r i cw a l lo ft h e m o u s es m a l li n t e s