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油浸食品中防腐剂反相高效液相色谱法测定

【关键词】 防腐剂检测

对于油浸食品中的防腐剂检测，国标 GB/T500929-2003 中没

有明确规定处理与检验方法，实验室一般采用酸性乙醚萃取、浓缩，

气相色谱法检测。该方法由于填充柱的吸附及柱效能差别较大，使标

准系列线性差，最低检出限较高，对于含量低或稀释倍数大的样品无

法检测。本方法采用乙醇氢氧化钠混合液萃取，反相液相色谱紫外检

测器检测，有效消除萃取中乳化现象，提高分析灵敏性和准确性。

1 仪器与试剂

11 主要仪器 L7000 型高效液相色谱系统(日本日立 HITACHI

公司)，配 L7420 型 UVVis 检测器，D7000 色谱数据处理系统；802 型

离心机(上海手术器械厂)；XK96B 型快速混合器(姜堰新康医疗器械有

限公司)。

12 试剂 苯甲酸和山梨酸标准储备液： 100mg/ml(国家标准物

质研究中心)；001mol/L 氢氧化钠乙醇溶液;008mol/L 氯化氢溶液；

002mol/L 乙 酸 铵 溶 液 ； 石 油 醚 乙 醚 混 合 液 ： 石 油 醚 (AR)+ 乙 醚

(AR)=3+1；甲醇：色谱纯。

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13 仪器条件 色谱柱：Kromasil C18(250×46mm，ID5mm)；

流动相：甲醇+002mol/L 乙酸铵溶液=5+95；流速：10ml/mim；进样量：

5ml;柱温：室温；检测波长：230nm。

14 方法 (1)样品处理:准确称取混匀后的样品 100g 于 10ml

的具塞离心管中，加入 50ml 的石油醚乙醚混合液,用快速混合器使油

脂溶解。加入 001mol/L 氢氧化钠乙醇溶液 40ml，上下振荡 20 次，静

置 15min 后，在离心机中 3500r/min 离心 5min，取下层溶液于 10ml

容量瓶中，按上述方法再萃取 1 次，合并 2 次萃取液，用 008mol/L

氯化氢溶液调节 pH»7，用双蒸水定容至 10ml，混匀，取适量定容液，

用 045mm 滤膜过滤，注入具塞小试管中，待测。同法做试剂空白。(2)

标准曲线的绘制及样品测定：分别取苯甲酸和山梨酸标准储备液配制

出 00，100，200，500，1000，1500，2000mg/ml 标准工作曲线浓度

系列,在上述仪器条件下，用 5ml 定量环取标准及样品溶液进行液相

色谱分析。以标准系列质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标

准工作曲线，样品测定结果由其峰面积经工作曲线计算得出。

2 结果

21 萃取剂的选择 利用苯甲酸和山梨酸的酸性，分别采用

Na2CO3、NaHCO3、NaOH 等碱性化合物配成一定浓度的萃取液，通过对

样品萃取效率、时间及样品的乳化情况进行综合比较，NaOH 溶液效果

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较好，但由于其碱性强，为减少样品萃取时的乳化及皂化，应严格控

制使用的浓度。通过食品中防腐剂最大使用限量与萃取效率计算，并

用不同浓度的 NaOH 溶液实际操作对比， 浓度在 001～005mol/L 时效果

较好。

22 样品的乳化与破乳 样品中含有大量的油脂，因此，在萃

取过程中会产生严重的乳化现象，为有效破乳，分别采用浓硫酸除脂、

氯化钠氢氧化钠混合液萃取、乙醇氢氧化钠混合液萃取、离心破乳等

不同方法对同一样品进行实验，结果表明，乙醇氢氧化钠混合液萃取

后再离心法破乳效果最好，使用中应注意乙醇浓度不易太高，否则将

有较多的有机杂质、色素等进入萃取剂中，使色谱柱分离困难。通过

对不同浓度的乙醇氢氧化钠体系萃取分离效果的对比，乙醇含量在

25％～35％为最佳，离心时转速越大，时间越长，破乳率越高，一般

在 2000r/min 以上，作用 2min 后，破乳率即可达 100％。

23 萃取的效率 液液萃取是利用样品中不同组分在不混溶 2

种溶剂中溶解度的不同来达到分离提取的目的，要获得较高的萃取效

率，可采用高分配系数的萃取剂、增大萃取剂用量、多次萃取等方法。

试验用 10ml 萃取剂分为 1 次、2 次、3 次对同一样品萃取效率进行比

较，分别为 945％，983％，986%，因此，采用 2 次萃取即可取得满意

的结果。 24 方法的线性范围及检出限量 本实验的线性范围苯甲

酸 0～200mg/ml，r=099996，回归方程 Y=17000X+7514；山梨酸 0～

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