六月青含药血清对HepG2.2.15细胞HBVcccDNA的抑制作用.doc

六月青含药血清对 HepG2.2.15 细胞 HBV
cccDNA 的抑制作用

作者：黄权芳，林兴，黄仁彬，张士军

【摘要】 目的观察六月青(Liuyueqing，LYQ)体外抗乙型肝炎病

毒(HBV)的作用。方法采用血清药理学方法，在 HBV 的体外细胞培养系

统中(2.2.15 细胞)进行 LYQ 抗 HBV cccDNA 作用观察。结果 LYQ 含药

血清在 HepG2.2.15 细胞培养中可有效地抑制细胞 HBV cccDNA 的复制，

其作用呈明显的量效和时效反应关系。结论 LYQ 在体外有明显的抑制

乙肝病毒的作用。

【关键词】 六月青; 乙型肝炎病毒; HepG2.2.15 细胞; HBV

cccDNA

Abstract ： ObjectiveTo study the anti-HBV activity of

Liuyueqing (LYQ) in vitro. MethodsThe HBV in vitro cell culture

system(HepG2.2.15 cell) was used for examining the anti-HBV

activity of LYQ with Serum-pharmacology. ResultsThe serum

containing LYQ could decrease the HBV DNA level in HepG2. 2. 15

cells, and its inhibitory effects were dose-and time-dependent.

ConclusionLYQ can inhibit HBV DNA in vitro significantly.

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Key words：Liuyueqing; HBV ; HepG2.2.15 cell; HBV cccDNA

六月青(Liuyueqing，LYQ)系爵床科(Acanthaceae)植物肖鸡

笼 ( 顶 花 马 兰 )Taraphochlamys affinis (Gr iff) Bremekhu

[Strobilanthes affinis (Griff) Y.C.Tang]的干燥地上部分[1]。本

课 题 组 前 期 研 究 发 现 ， 六 月 青 含 药 血 清 对 HepG2.2.15 细 胞 系

HBsAg-HBeAg 有明显抑制作用[2]，其总皂苷对 HBV-DNA 的复制有显著

的抑制作用[3]。本实验研究六月青含药血清对 HepG2.2.15 细胞 HBV

cccDNA 的作用，进一步探讨六月青抗乙肝作用机制。

1 材料与仪器

1.1 药物六月青(Liuyueqing，LYQ)采于广西灵山，由广西中

医学院一附院黄权芳中药师鉴定，其水提物由广西医科大学药理学教

研室和广西医学科学实验中心提取。

1.2 动物 Wistar 大鼠，雌雄各半，体质量(250±10)g，实验

动物使用许可证号： SYKG 桂 2003-0005;实验动物生产许可证号： SCXKG

桂 2003-0003;由广西医科大学实验动物中心提供。

1.3 细胞株 HepG2.2.15 细胞株(北京医科大学第一附属医院

病毒研究所)，本室自行传代，定期用 G418 筛选。

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1.4 试剂阿昔洛韦(Aciclovir，ACV 湖南迪诺制药有限公司

医药工业研究所产品，批号: 20070518);RPMI1640 培养基(美国 Gibco

公 司 ， Cat No.21202-016); 胎 牛 血 清 ( 美 国 Gibco 公 司 ， Cat

No.21607-042);G418(美国 Sigma 公司，Cat No.228527-72); QIAamp

DNA Mini Kit 试剂盒(Qiagen 公司，No.127141405);HBV DNA 荧光定

量 PCR 试 剂 盒 ( 深 圳 匹 基 生 物 工 程 股 份 有 限 公 司 ， 批 号 ：

20070613);SYBR Green PCR Kit(Qiagen 公司，No.127144035)。

1.5 仪器 iCycler FQ 实时荧光定量 PCR 仪(美国 Bio-Rad 公

司);CO2 孵箱(美国 Thermo Forma 公司，Model311)。

2 方法

2.1 LYQ 含药血清的制备 3 月龄 Wistar 大鼠 50 只，随机分

为 5 组，每组 10 只。①空白对照组：等量的生理盐水;②阳性对照组：

ACV 0.1 mg· · ③LYQH 组： g· · ④LYQM 组： g· ·
kg d-1; 6.6 kg d-1; 3.3 kg d-1;

⑤LYQL 组：1.7 g·kg·d-1。各组动物在同样条件下饲养，均以 2 次

/d，早晚各 1 次空腹灌胃，连续给药 7 d。于末次灌胃(灌胃前禁食不

禁水 12h)后 2 h，乙醚吸入麻醉，腹主动脉抽血，低速离心分离血清，

并将每组动物的血清混合。经 56℃ 30 min 灭活处理，经 0.45 mm

的微孔滤膜，再经 0.22 mm 微孔滤膜过滤除菌后，置-20℃冰箱保存

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