《微生物学检验》复习思考题参考答案(1).doc

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《微生物学检验》复习思考题参考答案

绪论

1、微生物的概念、特点，微生物分哪三型八大类？
微生物：是存在于自然界的一大群体形微小、结构简单、肉眼直接看不见，必须藉助光学显微镜或电子显微镜放大数百倍、数千倍，甚至数万倍才能观察到的微小生物。包括细菌、病毒、真菌等三类。
特点：
⑴ 个体微小，结构简单
⑵ 比表面积大、吸收多、转化快
⑶ 代谢旺盛，繁殖迅速
⑷ 种类繁多，分布广泛
⑸ 适应力强，容易变易
按结构和组成不同，可分为三型八大类
⑴ 非细胞型微生物：病毒
⑵ 原核细胞型微生物（广义的细菌）：包括细菌（狭义的细菌）、支原体、立克次体、衣原体、螺旋体及放线菌。
⑶ 真核细胞型微生物：真菌

2、简述临床微生物学检验的主要任务有哪些？
⑴ 研究感染性疾病的病原体特征
⑵ 提供快速、准确的病原学诊断
⑶ 指导临床合理使用抗生素
⑷ 监控医院感染

3、简述临床微生物学检验的目的和核心任务是什么？
临床微生物学检验的目的是为感染性疾病提供微生物学诊断，以达到治疗、控制和预防感染性疾病的扩散。
微生物学检验的核心任务是快速、准确地进行病原学诊断和药敏检测，为临床感染性疾病的诊断、治疗提供依据。

4、简述临床微生物检验的原则。
⑴ 确保临床标本可靠；
⑵ 全面了解机体正常菌群；
⑶ 保证检验质量、快速准确提供信息；
⑷ 微生物学定性、定量和定位分析，并结合病情（三定一结合）；
⑸ 加强与临床联系。

5、填空题
⑴ 根据微生物能耐受不同的温度，人们常用 、 、 和 来保存菌种。细菌的 具有高度抗热性，这常给消毒带来困难。
⑵ 生物学性状基本相同的细菌群体构成一个菌种，不同来源的同一菌种的细菌称为该菌的不同_____；性状相近关系密切的若干菌种构成____；具有某种细菌典型特征的菌株称该菌的____。

⑴ 普通冰箱（4 ºC）；低温冰箱（-20 ºC）；干冰（-70 ºC）；液氮（-196 ºC）；芽胞
⑵ 菌株、菌属、标准菌株（典型菌株）

细菌的形态与结构

1、名词解释：细菌L型；中介体；质粒；芽胞；荚膜肿胀试验
⑴ 细菌L型：是指细胞壁缺陷型的细菌。1935年Klieneberger首先在Lister研究所发现而得名。
⑵ 中介体：细菌细胞膜向细胞质内陷、折叠、卷曲形成的囊状物，多见于G+菌。中介体参与细菌的分裂和能量的产生，有类似于真核细菌纺锤丝与线粒体的作用。
⑶ 质粒：存在于细胞质中的带有遗传信息、控制细菌的某些特定遗传性状、能够自我复制的染色体以外的闭环双链DNA。或：细菌的胞质DNA。
⑷ 芽胞：某些细菌在一定的环境条件下，胞质脱水浓缩，在菌体内形成一个圆形或卵圆形小体，是细菌的休眠形式，即为芽胞。其抵抗力强，衡量灭菌效果时，常以杀死芽胞作为判断指标。芽胞的大小、形态、位置等随菌种而异，有助于细菌鉴别。
⑸ 荚膜肿胀试验：某些细菌的荚膜与同型抗血清作用后增厚变宽，此试验为荚膜肿胀试验。可作为肺炎链球菌等细菌的血清学诊断。

2、细菌的基本结构与特殊结构以及它们的主要功能。G+菌与G-菌的细胞壁的比较。G+菌与G-菌细胞壁差异的临床意义。
基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、核质
细胞壁的功能：
⑴ 维持菌体的固有形态，保护细菌抵抗外界低渗环境（主要功能）；
⑵ 参与菌体内外物质交换；
⑶ 带有多种抗原，决定细菌的免疫原性。诱发机体产生免疫应答并与血清分型有关。
⑷ G-菌外膜是一种屏障结构，阻止某些抗生素的进入，成为细菌耐药的机制之一。
⑸ 某些G+有表面蛋白、G-菌内毒素等与细菌的致病性有关。
⑹ 与细菌染色性密切相关。
细胞膜的功能：
⑴ 物质转运；⑵ 生物合成；⑶ 细胞呼吸；⑷ 形成中介体，参与细菌分裂等。
细胞质的功能：是细菌合成蛋白质和核糖核酸的场所；是细菌进行新陈代谢的场所。
核质的功能：是细菌的遗传物质，控制细菌的各种遗传性状。

细菌的特殊结构：荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢。
荚膜的功能：
⑴ 抗吞噬作用 ；⑵ 黏附作用；⑶ 抗有害物质的损伤；⑷ 具有抗原性。
荚膜染色特点：不易着色。常用墨汁负染法染色，可见菌体周围一圈未着色的透明圈 ，也可用荚膜染色法。
鞭毛的功能：
⑴ 是细菌的运动器官；⑵有些鞭毛（如霍乱弧菌、空肠弯曲菌）与细菌的致病性密切相关；⑶ 具有抗原性，可籍此鉴定细菌及对细菌分类
鞭毛的检测方法：
⑴ 电子显微镜观察；
⑵ 经特殊染色（鞭毛染色）使鞭毛变粗后用光学显微镜观察；
⑶ 半固体培养基穿刺接种观察生长情况间接判断该菌有无鞭毛（这是鉴定细菌是否有动力最简单的常用的方法）。
⑷ 悬滴法或压滴法观察细菌的动力间接判断该菌有无鞭毛；
菌毛的功能：
⑴ 普通菌毛：细菌的黏附结构，与细菌的致病性有关。
⑵ 性菌毛：介导接合，细菌的毒力、耐药性等性状可通过此方式传递
⑶ 为某些噬菌体的受体。
芽孢的功能：
⑴ 根据芽孢形态、大小以及在菌体中的位置，有利于细菌的鉴别；
⑵ 杀死芽孢为灭菌的可靠指标（杀灭芽胞最可靠的方法是高压蒸气灭菌法）；
⑶ 可以成为某些传染病潜在的传染源：芽孢本身不致病，但当它发芽转变为繁殖体后，可引起疾病。在人类，有四种常见的严重的传染病是由能形成芽孢的细菌引起的——炭疽杆菌、肉毒梭菌、破伤风梭菌和产气荚膜梭菌。
革兰阳性菌与革兰阴性菌细胞壁结构比较如下：
细胞壁 革兰阳性菌 革兰阴性菌
组成 聚糖骨架、肽侧链和肽交桥 聚糖骨架、肽侧链
结构类型 三维空间结构 二维平面结构
强度 较坚韧 较蔬松
厚度 厚，20－80nm 薄，10－15nm
肽聚糖层数 多，可达50层 少，1－２层
肽聚糖含量 多，占细胞干重50－80% 少，占细胞干重5－20%
磷壁酸 ＋ －
外膜 － ＋
对溶菌酶、青霉素的敏感性 敏感 不敏感
革兰染色性 紫色 红色

G+菌与G-菌细胞壁差异的临床意义：体现在细菌染色性、抗原性、致病性、对抗生素敏感性的不同。
项目 革兰阳性菌 革兰阴性菌 与细胞壁的关系
染色性 紫色 红色 细胞壁对酒精的通透性
抗原性 主要为磷壁酸 主要为外膜 细胞壁的化学组成不同
毒性 无内毒素（以外毒素为主）有内毒素 内毒素为阴性菌细胞壁成分
对青霉素的作用 有效 无效 作用部位为肽聚糖 五肽交联桥
对溶菌酶的作用 有效 无效 作用部位为肽聚糖 聚糖骨架

3、简述细菌L型的形成、主要生物学性状及其临床意义。
形成：
细菌细胞壁的肽聚糖结构受到理化或生物因素（溶菌酶、溶葡萄球菌素、青霉素、胆汁、抗体、补体等）的直接破坏或合成受到抑制后形成。G+菌原生质外仅有细胞膜包住称原生质体，G-菌尚有外膜保护称原生质球。
主要生物学性状：
⑴ 高度多形性；
⑵ 着色不匀，大多染成革兰阴性；
⑶ 培养条件要求高，必须在高渗低琼脂含血清的培养基中生长；
⑷ 生长缓慢（2～7天），菌落呈荷包蛋样；
⑸ 去除诱发因素后，有些L型可回复为原菌；
⑹ 生化反应与原菌有明显差异；
⑺ 存在于细胞壁的抗原减弱或丢失；
临床意义：可引起慢性和反复发作的感染，如尿路感染、骨髓炎、心内膜炎等，并常在使用作用于细胞壁的抗菌药物治疗过程中发生。
治疗：对作用于细胞壁的抗生素耐药性，而对作用于核酸或蛋白质合成的抗生素仍敏感。

4、填空题
⑴ 细菌根据外形，主要有------、------、------三大类。
⑵ 细菌的基本结构为------- 、-------、-------、-------。
⑶ 细菌的特殊结构为------- 、-------、-------、-------。
⑷ G+菌细胞壁的肽聚糖由-------、---------、---------组 成。G- 菌细胞壁的肽聚糖由-------、 -------组成；G- 菌的内毒素为-------。
⑸ 细菌细胞质中有--------、-------、--------等重要结构。
⑹ 细菌荚膜的功能是--------、--------、-------，普通菌毛的功能为---------，鞭毛的功能为--------。
⑺ 细菌的测量单位为--------。
⑻ 革兰染色的步骤为---------、---------、----------、-----------，---------色为革兰染色阳性，---------色为革兰染色阴性。
⑼ 中介体的功能为-----------、-----------。
⑽ 能在光学显微镜下观察到的细菌特殊结构有 、 和 。
⑾ 荚膜具有 、 作用和 作用。
⑿ 荚膜一般在 或 形成。
⒀ 鞭毛与细菌的 有关，霍乱弧菌的鞭毛还与 有关。
⒁ 芽胞不是细菌的 ，而是细菌的 。1个繁殖体只形成 个芽胞，1个芽胞发芽也只生成 个繁殖体。
⑴ 球菌 杆菌 螺形菌
⑵ 细胞壁 细胞膜 细胞质 核质
⑶ 荚膜 鞭毛 菌毛 芽孢
⑷ 聚糖骨架 肽侧链 肽交桥 聚糖骨架 肽侧链 脂多糖
⑸⑹⑺⑻⑼
⑽ 荚膜 鞭毛 芽胞
⑾ 抗吞噬 粘附 抗有害物质的损伤
⑿ 机体内 营养丰富的环境中
⒀ 运动器官 致病性
⒁ 繁殖方式 休眠状态 1个 1个

细菌的生理

1、名词解释：热原质；细菌素；内毒素；外毒素。
⑴ 热原质：又称致热原，是细菌合成的一种注入人体或动物体内能引起发热反应的物质。
⑵ 细菌素：某些细菌菌株产生的一类仅对近缘细菌具有抗菌作用的蛋白质称为细菌素。
⑶ 内毒素：即革兰阴性菌细胞壁的脂多糖，其毒性成分为脂质A，当菌体死亡裂解后才释放，是革兰阴性菌的主要致病物质。
⑷ 外毒素：是多数革兰阳性菌和少数革兰阴性菌在生长繁殖过程中释放到菌体外的蛋白质，其毒性强，为细菌重要的致病物质。

2、简述细菌生长繁殖的基本条件有哪些？为什么专性厌氧菌在有氧环境中不能生长繁殖？
细菌个体的生长繁殖方式：二分裂繁殖；繁殖速度：细菌分裂数量倍增所需时间，即代时，多数为20-30分钟。TB（结核杆菌）约18小时，产气荚膜梭菌为8分钟。
细菌生长繁殖的基本条件：
⑴ 充足的营养物质：包括水、碳源、氮源、无机盐、生长因子等；
⑵ 合适的pH值：大多病原菌的最适pH值为7.2-7.6；
⑶ 适宜的温度：大多数病原菌的最适温度为37ºC；
⑷ 必要的气体环境。
专性厌氧菌不能在有氧环境中生长繁殖的原因：
⑴ 缺乏Eh高的呼吸酶（细胞色素和细胞色素氧化酶）；
⑵ 缺乏分解有毒氧基团的酶（超氧化物歧化酶SOD、触酶、过氧化物酶）

3、细菌的合成代谢产物种类及其在医学上的意义？
⑴ 与致病性有关的合成代谢产物：热原质/致热原、毒素和侵袭性酶；
⑵ 供治疗用的合成代谢产物：抗生素、细菌素、维生素；
⑶ 与鉴别细菌有关的合成代谢产物：色素。

4、细菌的生长曲线可分为几期？各自的主要特点是什么？
细菌生长曲线：是将一定量的细菌接种于适宜培养基中进行培养，连续检测细菌在不同培养时间的活菌数目（以菌落形成单位cfu表示），以cfu为纵坐标，培养时间为横坐标，可以作出一条反映细菌生长数变化规律的曲线，即生长曲线。包括迟缓期、对数期、稳定期、衰退期这四个时期。
⑴ 迟缓期：代谢活跃，菌体增大，积累酶、辅酶和中间代谢产物，不分裂繁殖，为细菌大量繁殖作好物质准备。
⑵ 对数期：细菌繁殖迅速，菌数呈几何级数增长，细菌的生物学性状典型，对外界环境作用敏感，适用于研究细菌的生物学性状和进行药物敏感实验，一般在培养后8-18小时。
⑶ 稳定期：细菌数仍在增加，死菌数与活菌数形成一种动态平衡。其特点：形态、染色性等生物学性状常有改变；芽孢，毒素、抗生素等产生；若向培养系统补充营养物质，取走代谢产物，改善培养条件则可延长稳定期。
⑷ 衰亡期：死亡菌数增多，超过活菌数，细菌形态显著改变，生理活动趋于停止。一般不用该期细菌作鉴定和研究工作。

5、根据细菌代谢时对分子氧的需求与否，可将细菌分为哪几类？
根据细菌代谢时对氧气要求的不同，可将细菌分为专性需氧菌；微需氧菌；兼性厌氧菌；专性厌氧菌四大类。
专性厌氧菌不能在有氧环境中生长繁殖的原因：缺乏Eh高的呼吸酶（细胞色素和细胞色素氧化酶）；缺乏分解有毒氧基团的酶（超氧化物歧化酶SOD、触酶、过氧化物酶）。

细菌检验技术

1、名词解释：培养基；分离培养；纯培养；菌落；细菌的生化反应；IMViC试验；KIA试验；CAMP试验；荚膜肿胀试验。
⑴ 培养基：由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品称为培养基。
⑵ 分离培养：临床标本中含有多种细菌，可经过划线接种到固体培养基表面分散开，经过18-24小时培养后可得到单个菌落。这种将混杂的细菌在固体培养基表面分散开的培养方法称为分离培养。或：将增菌培养物或含菌量多的标本如粪便、脓汁等，直接在平板上划线分离，将其中的目的菌分离出来的培养方法。
⑶ 纯培养：挑取一个菌落移种到另一培养基中，长出的细菌为纯种，该方法称为纯培养。
⑷ 菌落：单个细菌在固体培养基上生长繁殖形成的单一的肉眼可见的细菌集团，称菌落。许多菌落融合在一起形成菌苔。
⑸ 细菌的生化反应：用生化试验的方法，检测细菌对各种基质（糖、蛋白质等）的代谢作用以及形成的代谢产物，从而对细菌鉴别的反应。（原理：细菌内所具有的酶不同，因而对营养物质的分解能力也不同，产生的代谢产物也不同，据此可鉴别不同细菌。）
⑹ IMViC试验：吲哚（I）、甲基红（M）、VP（V）及枸橼酸盐利用（C）四种试验，常用于肠道杆菌的鉴定，合称IMViC试验。如大肠埃希菌的结果是 ：+ + - -；产气杆菌的结果是：- - + +。
⑺ KIA试验：即双糖铁—半固体培养基，它是一种复合性的检查生化反应的培养基，可检查4种反应，即葡萄糖、乳糖的发酵反应，是否产生H2S，有无动力等。目前多使用国产双糖铁琼脂粉（KIA），比较方便，效果也好，但只能配制成斜面培养基，不能配成半固体培养基，因而无法观察细菌的动力。KIA试验主要用于肠杆菌科细菌的鉴定和鉴别。
⑻ CAMP试验：B群链球菌产生一种细胞外CAMP因子，可增强金黄色葡萄球菌β-溶血素的活性，因此，血平板上，在两菌（B群链球菌与金黄色葡萄球菌）交界处出现箭头状溶血区。该试验主要用于B群链球菌的鉴定。
⑼ 荚膜肿胀试验：某些细菌的荚膜与同型抗血清作用后增厚变宽，此试验为荚膜肿胀试验。可作为肺炎链球菌等细菌的血清学诊断。

2、简述细菌染色标本检查的基本程序、复染色法基本程序与常用方法。
细菌染色标本检查的基本程序：涂片－→干燥－→固定－→染色。
复染色法基本程序：初染→媒染→脱色→复染
常用方法：革兰染色法和抗酸染色法，尤其是革兰染色法在细菌学检验中有重要意义。

3、革兰染色的原理、染液组成、染色方法、结果判断、影响因素与临床意义。
革兰染色原理：
⑴ 通透性说：主要是由于两类细菌的细胞壁成分和结构的不同。革兰阴性菌细胞壁中含有较多类脂质，而肽聚糖含量较少。当用酒精脱色时，溶解了类脂质，增加了细胞的通透性，使结晶紫和碘的复合物易于渗出，细胞脱色，经复染后，染上复染液(复红)的颜色；而革兰阳性菌细胞壁中肽聚糖含量多且交联度大，类脂质含量少，经酒精脱色后，肽聚糖层的孔径变小，通透性降低，酒精不易进入菌体脱色，故细胞仍保留初染液(结晶紫)的颜色。
⑵ 化学说：G+菌菌体含有大量的核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫牢固结合，使已着色的菌体不易脱色。
⑶ 等电点说：G+菌（PI2-3）低于G-菌（PI4-5），G+菌带负电荷比G-菌要多，G+菌易与带正电荷的碱性染料（结晶紫）结合牢固，因而不易脱色。
革兰染色染液组成：结晶紫染液、卢戈碘液、 95％乙醇、稀释石炭酸复红。
染色方法：结晶紫染液（初染） 1 分钟，水洗――卢戈碘液（媒染） 1 分钟，水洗――95％乙醇（脱色） 30 秒至 1 分 钟，水洗――稀释石炭酸复红（复染 ）1 分钟 ，水洗后，待干后用油镜进行观察。
结果判断：革兰阳性菌呈紫色，革兰阴性菌呈红色。
影响革兰染色的因素：
⑴ 操作因素：涂片的厚、薄；标本是否固定好；染色与脱色时间的长短。
⑵ 染液因素：卢戈碘液放置时间过长； 95％乙醇挥发；结晶紫与草酸铵混合时间太长等。
⑶ 细菌因素：细菌种类；细菌菌龄。
影响革兰染色的关键步骤是脱色。
革兰染色的临床意义：⑴ 鉴别细菌；⑵ 选择药物；⑶ 与致病性有关。

4、请写出抗酸染色的染液组成、染色方法及染色结果、原理。
染液组成与染色方法：
固定 加温3-5min 脱色
标本 —→ 5%石碳酸复红 —→ 3%盐酸酒精—→美蓝复染—→ 镜检
染色结果：
红色：抗酸性细菌如结核杆菌
兰色：非抗酸性细菌
原理：由于结核杆菌细胞壁中含大量脂质，一般不易着色，若经加温或延长染色时间而着色后又能抵抗强脱色剂盐酸酒精的脱色，故又称抗酸杆菌。

5、简述细菌细胞壁染色的方法与结果。
方法：
自然干燥 固定15min 3～5min
制片 →→→→ 10%鞣酸 →→→→ 0.5%龙胆紫 →→→→ 镜检
水洗 水洗
结果：有细胞壁的细菌仅菌体周边染成紫色，菌体内部无色；无细胞壁的细菌（如L型细菌）可见整个菌体浓染呈紫色。

6、简述细菌不染色标本镜检的常用方法与用途。
常用方法：压滴法、悬滴法、（暗视野聚光法、相差显微镜检查法等）。
应用：主要用于观察活菌的动力和运动方式。
注意事项：检测细菌动力时需注意其真正运动还是分子运动，前者时由于鞭毛引起的有方向性的位移，而后者只是在原地颤动，是由于水分子撞击细菌而引起的布朗运动，无鞭毛的细菌也可有此种分子运动。

7、简述培养基制备的一般程序与原则。
不同的培养基制备程序不尽相同，但配制一般培养基的程序基本相似，分为以下几个步骤：
调配 → 熔化 → 矫正pH值 → 过滤澄清 → 分装 → 灭菌 → 检定/质量检验 → 保存。
培养基的种类很多，但一般制备原则有三条：⑴ 足够和适当的营养成份。⑵ 合适的酸碱度。⑶ 绝对无菌。
培养基灭菌要求：
⑴ 基础培养基：121℃高压蒸汽灭菌15~30min。
⑵ 含糖/明胶培养基：113 ℃灭菌15min。
⑶ 鸡蛋、血清培养基：血清凝固器间歇灭菌3天3次（75 ℃30min → 80 ℃30min → 85 ℃30min）。
⑷ 不耐高温的液体成分如血清、尿素、细胞培养液等：滤过除菌。

8、简述在细菌学检验中常用的接种方法有哪些？
细菌接种时，应根据待检标本的种类、检验目的及所用培养基的类型选择不同的接种方法。
⑴ 平板划线接种法……分离培养，主要用于固体培养基的接种。
★目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。
★方法：
★分区划线法：适用于含菌量较多的标本如粪便、脓汁
★连续划线法：适用于含菌量较少的标本.
⑵ 琼脂斜面接种法：用于纯种增菌、保存菌种或生化反应。
⑶ 半固体培养基接种法（穿刺接种法）：用于观察细菌动力或生化反应。
⑷ 液体培养基接种法：用于纯种增菌或生化反应。
⑸ 倾注平板法：用于水、牛乳、饮料、尿液等液体标本及药物、化妆品等的细菌计数。
方法：是将经灭菌生理盐水适量稀释(通常作10-1～10-5稀释)的标本lml，置于灭菌平皿内。注入10～15ml已融化并冷至50℃左右的适宜培养基，凝固后，将平板倒置于37℃培养18～24h，计算菌落形成单位（colony forming unit, CFU）。求出每毫升或每克标本中所含活菌数。1ml 标本中活菌数= 全平板CFU×稀释倍数。
我国规定生活饮用水的标准是：1 ml 水中细菌总数≤100cfu。
⑹ 涂布接种法 ：用于纸片药敏试验和生物制品菌苗的生产。

9、简述细菌的培养方法有哪些？
根据不同标本及培养目的的不同，可采取不同的方法进行培养，常用的有普通（一般）培养法（又叫需氧培养法）、二氧化碳培养法、微需氧培养法及厌氧培养法。
⑴ 普通培养（需氧培养）：
★培养温度：35~37 ℃ （采用恒温培养箱）
★培养时间：18~24h（个别细菌例外）
⑵ 二氧化碳培养法：5~10%CO2。
★ 烛缸培养法：能自动调节CO2的含量和温度，使用较为方便。
★ 二氧化碳培养箱：取有盖磨口标本缸或玻璃干燥器，在盖及磨口处涂以凡士林。将接种细菌的培养基放入缸中，加盖密封。随燃烧产生的CO2增加，蜡烛自行熄灭，此时缸内CO2浓度约为5%～10%。置37℃孵箱孵育。
★ 化学法（重碳酸钠-盐酸法）：按每升容积重碳酸钠0.4g与1mol/L盐酸0. 35ml比例，分别取两试剂置于容器内，放置于标本缸或干燥器内，密封后倾斜容器，使盐酸与重碳酸钠接触产生CO2。
⑶ 微需氧培养法： 5~6 %O2 、5~10%CO2和85%N2
有些微需氧菌，如空肠弯曲菌、幽门螺杆菌等，在低氧分压的条件下生长良好。可用抽气换气法即用真空泵先将容器内的空气排尽，然后注入5~6%O2、5~10%CO2、85%N2气体，然后放入37℃孵箱孵育。
⑷ 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等。

10、按物理性状不同可将培养基分哪几种？各有何主要用途并简述细菌在其中的生长现象。
培养基按其物理性状可分为固体培养基、半固体培养基与液体培养基三种。分别观察下列生长现象：
⑴ 固体培养基：细菌得以分离培养生成菌落从而获得纯种，主要用于细菌的分离纯化、鉴定以及药敏试验。菌落分为三型：① 光滑型菌落（S型菌落）；② 粗糙型菌落（R型菌落）；③ 粘液型菌落(M型菌落)。
⑵ 半固体培养基：多用来检查细菌的动力和短期保存细菌。有鞭毛的细菌可由穿刺线向四周运动播散，培养后穿刺线模糊不清，呈羽毛状或云雾状混浊生长；无鞭毛的细菌，不能运动，仅沿穿刺线生长，穿刺线清晰，穿刺线以外的培养基仍透明澄清。
⑶ 液体培养基：主要用于大量繁殖细菌（增菌培养）和观察某些细菌的生化反应。细菌在液体培养基中生长呈三种状态。①混浊生长，见于大多数细菌；②沉淀生长；③菌膜生长，多为专性需氧菌，在培养液表面生长，形成菌膜。

11、按用途不同可将培养基分为哪几种？请各列出一种常用的培养基。
⑴ 基础培养基：如营养肉汤、营养琼脂、蛋白胨水等
⑵ 增菌培养基：
① 通用增菌培养基：如血平板、血清肉汤等。
② 专用增菌培养基：如碱性蛋白胨水用于霍乱弧菌的增菌。
⑶ 选择培养基：如SS平板、伊红-美兰琼脂平板、亚碲酸钾血琼脂平板、TCBS等。
⑷ 鉴别培养基：如糖发酵管、双糖铁培养基等。
⑸ 厌氧培养基：如庖肉培养基、硫乙醇酸盐肉汤等。

12、简述甲基红试验、V-P试验、七叶苷水解试验、靛基质（吲哚）试验、硫化氢试验、尿素酶试验、枸橼酸盐利用试验的原理、培养基、方法、结果与应用。
甲基红试验：
原理：葡萄糖 → 丙酮酸 → 大量混合酸 → pH降至4.4以下 → 加入甲基红试剂，培养基变红为阳性。
培养基：葡萄糖蛋白胨水
试剂：甲基红试剂
方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，培养2-4d，于培养基内加入甲基红指示剂2d，立即观察结果。
结果：呈现红色为阳性；橘红色为弱阳性；黄色为阴性。
应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴别。如大肠埃希菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。
V-P试验：
原理：葡萄糖 → 丙酮酸 → 脱酸生成中性的乙酰甲基甲醇 → 在碱性环境中被空气中的氧氧化成二乙酰 → 二乙酰再与培养基内蛋白胨中的精氨酸所含的胍基反应，生成红色化合物为阳性。
培养基：葡萄糖蛋白胨水
方法：将待检菌接种于上述培养基中，于35 ℃培养48h后加入甲液(5％α-萘酚酒精溶液)和乙液(40％KOH溶液+0.3 ％肌酐)，振摇。
结果：在数分钟内出现红色为阳性；如无红色出现且于35℃4h后仍如故者即为阴性。
应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴别。该试验常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的细菌，后者通常为阴性。
七叶苷水解试验：
原理：某些细菌可将七叶苷分解成葡萄糖和七叶素，七叶素与培养基中枸橼酸铁中的二价铁离子反应，生成黑色的化合物，使培养基呈黑色。
培养基：七叶苷培养基、胆汁七叶苷培养基。
方法：将待检菌接种于七叶苷培养基中于35℃培养48h后观察结果。
结果：培养基变为黑色为阳性，不变色者为阴性。
应用：主要用于D群链球菌与其它链球菌的鉴别，前者阳性，后者阴性。也可用于革兰阴性杆菌（克雷伯菌属、肠杆菌属和沙雷菌属）、肠球菌及厌氧菌的鉴别。
靛基质（吲哚）试验：
原理：细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。
培养基：蛋白胨水培养基
试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛）
方法：挑取纯培养物接种蛋白胨水培养基，于35℃培养24 ~48h后，沿管壁徐徐加入靛基质试剂0.5ml，使成两层，观察结果。
结果：加入试剂后，两者液面接触处出现红色为阳性；无色为阴性。
应用：用于肠杆菌科细菌的鉴定。
硫化氢试验：
原理：某些细菌分解蛋白质中的含硫氨基酸（如胱氨酸、甲硫氨酸），生成硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐（硫酸亚铁）或铅盐（醋酸铅）结合生成黑色硫化物（硫化亚铁或硫化铅）。
培养基：克氏双糖铁培养基或醋酸铅培养基
结果：培养基变黑为阳性，不变为阴性。
应用：常用于肠道杆菌的鉴别。沙门菌属（甲型副伤寒沙门菌为阴性）、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸橼酸杆菌属和变形杆菌属等多为阳性，其他菌书呈阴性。
尿素酶试验：
原理：产生脲酶的细菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨使培养基呈碱性变色。
培养基：尿素培养基（pH6.5-6.8）
试剂：酚红指示剂
方法：将被检菌接种于相应的尿素培养基，于35℃培养18 ~24h后观察结果。阴性时应继续观察4天。
结果：培养基变红者为阳性；培养基不变色者为阴性。
应用：肠杆菌科中的变形杆菌属、摩根菌属和普罗威登菌属的鉴定。奇异变形杆菌和普通变形杆菌、雷极普罗威登菌和摩根菌为阳性；克雷伯菌为弱阳性；大肠埃希菌、斯氏和产碱普罗威登菌为阴性。
枸橼酸盐利用试验：
原理：某些细菌能利用培养基中的枸橼酸盐作为唯一的碳源，也能利用其中的铵盐作为唯一氮源，细菌生长过程中分解枸橼酸盐产生碳酸盐和分解铵盐生成的氨，使培养基变碱，使指示剂呈碱性反应。
培养基：枸盐酸盐琼脂斜面培养基
试剂：溴麝香草酚蓝（pH6.0以下呈黄色，pH7.6以上呈蓝色）
方法：在枸盐酸盐琼脂斜面上浓密划线，大量接种被检菌，于35 ℃培养1~ 4天，逐日观察结果。
结果：枸盐酸盐琼脂斜面上有细菌生长，培养基变成深蓝色为阳性；无细菌生长，培养基颜色不变（淡绿色）为阴性。
应用：有助于肠杆菌科属间的鉴别。埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌属和耶尔森菌属均为阴性；产气肠杆菌、沙门菌属、克雷伯菌属、黏质和液化沙雷菌、某些变形杆菌以及枸橼酸杆菌为阳性。

13、填空题
⑴ 在形态和染色性上具有特征的致病菌常用＿＿＿方法作初步诊断。如 和 菌。
⑵ 鉴定细菌常用 凝集试验。此方法是用已知 检测未知 。
⑴ 直接涂片镜检 结核分枝杆菌 白喉棒状杆菌
⑵ 直接玻片 抗体 抗原

14、综合分析题
实验室在对细菌培养时，需先制备培养基，根据所培养的细菌不同，选择不同类型的培养基，如培养营养要求高的细菌时，需制备含血清培养基（即在培养基中加入血清）。细菌的保存常用细菌保存液，有时也用牛奶保存，如幽门螺杆菌。
思考题：
⑴ 制备培养基过程中应注意什么？
⑵ 制备含血清培养基时，基础培养基和血清如何进行消毒灭菌？用于保存菌种的牛奶又如何进行消毒灭菌？
• 提示1：培养基制备过程中应注意无菌操作，以防止微生物的污染。
• 提示2：基础培养基通常使用高压蒸汽灭菌法灭菌，以杀灭包括细菌繁殖体和芽胞在内的所有微生物。含血清培养基和用于保存细菌的牛奶，既要对其进行灭菌处理，又不能破坏营养成分，故常用间歇蒸汽灭菌法。
• 提示3：在制备培养基过程中，应注意无菌操作，通常可在经紫外线照射后的无菌罩或实验室中进行培养基的分装。
• 提示4：在准备含血清培养液时，通常使用过滤除菌法除菌，以确保血清中的营养成分不被破坏。

细菌与环境

1、名词解释：正常菌群；条件致病菌；菌群失调症；重叠感染；消毒；灭菌；无菌；无菌操作；噬菌体；前噬菌体；毒性噬菌体；溶原性细菌；滤过除菌法
⑴ 正常菌群：定居于正常人体体表及其开放性腔道中的微生物群。在正常情况下对机体有益无害。由于在正常微生物群中以细菌为主，而且对细菌研究得较多而深入，所以将正常微生物群通称为正常菌群。
⑵ 条件致病菌：正常情况下不致病，在特定条件下可致病的正常菌群，称条件致病菌（或：机会致病菌）。
⑶ 菌群失调症：宿主某部位正常菌群中各菌种间的比例发生较大幅度改变并超出正常范围的状态称为菌群失调。由此而引起的病症称为菌群失调症。
⑷ 重叠感染：或称为二重感染，是一种后果较为严重的菌群失调症，即在抗菌药物治疗原感染性疾病或预防某些微生物感染的过程中，发生的一种新感染。
⑸ 消毒：杀死物体上或环境中的病原微生物的方法。但不一定能杀死含芽孢的细菌或非病原微生物。
⑹ 灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物。
⑺ 无菌：不存在活的微生物的意思。
⑻ 无菌操作：防止微生物进入人体或其他物品的操作技术。
⑼ 噬菌体：是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒。
⑽ 前噬菌体：整合在细菌染色体上的噬菌体基因。
⑾ 毒性噬菌体：能在宿主细胞内复制增殖，产生许多子代噬菌体，并最终裂解细菌的噬菌体，称毒性噬菌体。
⑿ 溶原性细菌：染色体上带有前噬菌体的细菌。
⒀ 滤过除菌法：用物理阻留的方法除去液体或空气中的细菌，达到无菌的目的。适用于不耐高温灭菌的物品如血清、毒素、抗生素及空气等的除菌。生物安全柜也是根据这个原理，利用高效空气过滤器的过滤作用，除去空气中的微生物，以达到保护操作对象、保护操作者、保护环境的目的。但滤过除菌法只能除去细菌，一般不能除去病毒、支原体、衣原体和细菌的 L 型。

2、正常菌群的生理作用有哪些？正常菌群转化为机会致病菌的条件有哪些？（简要说明微生态失调的主要原因有哪些？）
正常菌群的生理作用：
⑴ 生物拮抗；⑵ 营养作用；⑶ 免疫作用；⑷ 抗衰老作用；⑸ 抑肿瘤作用。
正常菌群转化为机会致病菌的条件有：
⑴ 抗生素的使用导致菌群失调；⑵ 正常菌群寄居部位改变；⑶ 宿主免疫功能低下如免疫抑制剂使用、激素、射线照射、细胞毒物的使用导致宿主免疫功能低下。

3、常用湿热灭菌方法的种类及其效果与适用范围。
⑴ 巴氏消毒法：用较低温度杀灭液体中的病原菌或特定微生物（如结核杆菌）、保持物品中所需不耐热成分不被破坏的消毒方法。
持续法: 61.1-62.8℃ 30分钟；
瞬间法: 71.7℃ 15-30秒；
常用于消毒牛奶、酒类。
⑵ 煮沸法：常用于消毒食具、刀剪、注射器等
繁殖体 ：煮沸100℃，5min；
芽孢：煮沸100℃，1～3h。
⑶ 流动蒸气消毒法：阿诺蒸锅或蒸笼。
繁殖体 ：煮沸100℃，15～30min
⑷ 间歇蒸气灭菌法：如血清培养基的灭菌。
⑸ 高压蒸气灭菌法：一种最有效、最彻底的灭菌方法。在103.4 kPa（1.05kg/cm2）蒸气压下，温度121.3℃，维持15-20min，可杀灭包括芽胞在内的所有微生物。是普通培养基、生理盐水、手术敷料等耐高温、耐湿物品的最佳灭菌法。

4、高压蒸汽灭菌法所要求的条件和用途各是什么？
高压蒸气灭菌法是一种最常用、最有效的灭菌方法，是在密闭的蒸气容器中进行。随着压力升高，蒸气的温度也相应升高，在103.4kpa 蒸气压下，温度达到121.3℃，维持15～20 min，可杀灭包括细菌芽胞在内的微生物。适用于耐高温、耐潮湿物品的灭菌，如一般培养基、生理盐水、手术用品等。但该温度还不足以灭活朊粒和热原质。

5、请叙述紫外线的杀菌作用机制、特点和注意事项。
⑴ 紫外线（UV）的杀菌机制主要是损伤细菌DNA构型，使一条DNA链上相邻的两个胸腺嘧啶共价结合而形成二聚体，从而干扰DNA的复制与转录，导致细菌死亡。
⑵ 特点与注意事项：
① UV的杀菌作用与波长有关：240-300nm波长的紫外线有杀菌作用，其中以265-266nm最强，因其正好与DNA的吸收光谱一致。
② 紫外线的穿透力极弱：不能透过玻璃或纸张等，故一般只用于空气消毒及物体表面消毒。
③ 杀菌波长的UV对人体皮肤、眼睛有损伤作用，使用时应注意防护。
④ 一般用低压水银蒸气灯做紫外线杀菌处理。

6、简述乙醇、碘酊、过氧化氢、过氧乙酸、戊二醛、环氧乙烷消毒灭菌的主要特点。
乙醇消毒灭菌的机制、特点及主要用途：
⑴ 机制：去除菌细胞膜中的脂类，并使菌体蛋白质变性与凝固。
⑵ 特点与主要用途：
① 以浓度为70% ～75%时杀菌力最强。
② 易挥发，需加盖保存，定期调整浓度。
③ 主要用于皮肤消毒和浸泡体温计。
2.0～2.5%碘酊、0.5%碘伏：多用于皮肤黏膜、体温计以及其他物品的表面消毒。
过氧化氢：
机理：导致酶蛋白-SH基转变为-S-S-，导致酶活性丧失。3％~ 6％过氧化氢 kill most bacteria;10%过氧化氢 kill all microorganism including spore.
用途：可用于物品表面和皮肤黏膜消毒（如口腔、创口的消毒、厌氧菌感染的消毒）。但对金属制品有腐蚀作用。
0.2%~0.3%过氧乙酸