NY∕T 2720-2015 水稻抗纹枯病鉴定技术规范(农业).pdf

ICS 65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 2720一2015水稻抗纹枯病鉴定技术规范Rules for evaluatioo of rice for resistaoce to sheath blight (Rhizoctonia solani K旧10)2015-05-21发布2015-08-01实施中华人民共和国农业部发布前言本标准按照GB/T1. 1二2009给出的规则起草。本标准由农业部种植业管理司提出并归口。NY/T 2720-2015 本标准起草单位:中国水稻研究所、中国农业大学、扬州大学、华南农业大学、福建农林大学、浙江大学。本标准主要起草人:黄世文、王玲、刘连盟、郭泽建、潘学彪、周而勋、鲁国东、王政逸、陈旭君、左示敏。I NY/T 2720-2015 水稻抗纹枯病鉴定技术规范范围本标准规定了水稻品种、材料苗期和成株期对纹枯病的抗性鉴定方法和评价方法。本标准适用于水稻品种、材料抗纹枯病鉴定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB 4285 农药安全使用标准GB 4404.1粮食作物种子第1部分:禾谷类GB 5084 农田灌溉水质标准GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 8321(所有部分)农药合理使用准则GB 15618 土壤环境质量标准NY/T 496肥料合理使用准则通则NY 5117无公害食品水稻生产技术规程3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1 水稻纹枯病rice sheath blight 由立枯丝核菌Rhizoctoniasolani Khn所引起的为害地上部分以叶鞠、叶片为主产生云纹状病斑症状的水稻病害。3.2 融合群anastomosis group 引起水稻纹枯病的立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani Khn)是以菌丝融合型为基础所构成的群体，凡是两个菌株的菌丝能发生融合的则归于相同的融合群。3.3 苗挺高straighted seedling height 从土表至水稻秧苗拉直后最高叶尖的高度。4 试剂与材料本标准所用试剂在未加说明时均采用分析纯试剂。实验室用水应符合GB/T6682中规定的三级水要求。4.1 PDA培养基称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加入1000mL水，煮沸20min30 min，纱布过滤，补水至1000mL，再加入18g琼脂和18g葡萄糖，搅拌均匀，高压灭菌(1210C,20 min)。4.2 PDB培养基NY/T 2720一2015称取200 g马铃薯，洗净去皮切碎，加入1000mL水，煮沸20min30 min，纱布过滤，补水至1000mL.加入18g葡萄糖，搅拌均匀，高压灭菌(1210C,20 min)。4. 3 培养基A稻谷用清水浸泡24h后，冲洗干净，装入250mL锥形瓶中，每瓶中装人稻谷占瓶体积的1/3，高压灭菌(1210C,20 min)。4.4 培养基B将木质牙签剪成O.8 cml. 0 cm长，纵劈为二，单层平排于直径9cm培养皿中，每皿加入适量的PDB培养基(液面高度刚好淹没短牙签)，高压灭菌(1210C,20 min)。5 仪器设备5. 1 恒温培养箱:(28十2)oC。5. 2 显微镜:物镜头10倍100倍。5. 3 电子天平:感量0.01g。5. 4 高压灭菌器。5. 5 超净工作台。6 苗期抗病性鉴定6. 1 接种体接种体为立枯丝核菌AG1-IA菌丝融合群，应符合附录A的规定。6. 2 试验材料6.2. 1 种子质量种子质量应符合GB4404.1常规稻或杂交稻一级种标准，不应带检疫性病虫。6. 2. 2 播种选择饱满度一致的试验材料种子，经3%过氧化氢榕液浸种1d后，用清水冲洗后再浸种2d，放入垫有两层滤纸的培养皿中，置于恒温培养箱中300C催芽。待胚根长至0.5cm时，选择芽长一致的种子播于装有灭菌土的塑料育苗箱中(长45cmX宽35cmX高10cm)。按宽窄行点播，同一品种窄行3cm，不同品种宽行5cm，种子表层覆1cm左右的灭菌土。每重复每份试验材料播10株苗。采用随机区组设计，重复3次。每50份试验材料设附录B中已知抗性的对照品种。6. 2. 3 育苗在180C280C的室外自然光照下育苗，幼苗应生长健壮、一致。苗床土保持湿润，不能有水层。6.3 接种体6.3. 1 接种体准备根据试验需要选取附录C的鉴别菌株作为接种体，将菌株移植到PDA培养基的正中央，菌丝面朝上，盖上皿，置于人工培养箱280C培养48h。6.3.2 接种体繁殖将培养好的病原菌，在无菌条件下用直径5mm的灭菌打孔器，自菌落边缘切取菌饼，接种于培养基A.在培养箱中280C培养7d 10 d, 1 d2 d摇动一次，待谷粒表面布满菌丝后作为接种物备用。6. 4 接种6.4. 1 接种方法在水稻秧苗4叶期，将带有菌丝的稻谷紧贴每株水稻小苗基部的两侧各放置1粒(参见图D.l)。6.4.2 接种后管理NY / T 2720-2015 接种后将塑料箱置于温度为250C300C，相对湿度80%85%的鉴定室内。每天光照12h14 h, 光照强度为35000 lx。常规秧苗管理，保持秧床温润。6.5 病情调查6.5. 1 调查时间当感病对照品种Lemont刚出现死亡时(一般接种后5d7 d)，迅速完成病情调查。6. 5. 2 调查与记载以水稻基部向上扩展的叶片或叶鞠最高病斑为准，测量病斑高度、苗挺高，计算发病度。发病度=(病斑高度/苗挺高)X 90 每份试验材料调查30株秧苗的发病度，取其平均值，保留两位有效数值。原始数据记载参见表E.L 6. 5. 3 病情级别划分标准苗期水稻纹枯病病情级别分级标准见表1。表1苗期7.1稻纹枯病病级分级标准病情级别严重度划分标准O级全株无病1级。发病度豆1.03级1.0发病度3.05级3. 0发病度5.07级5. 07.06. 6 病情记载根据病害症状描述，记载单株病情级别，计算每份试验材料的病情指数(DJ)。病情指数计算见式(1)。:(Bi X品l)DI = . 1. l X 100(1) MX几缸式中:DI 病情指数;Bi一一各级严重度病株数;Bd 各级严重度代表值;M-一调查总株数;Md一一严重度最高级代表值(此处为的。6. 7 抗病性评价6.7. 1 抗病性评价标准依据试验材料3次重复的病情指数(DJ)平均值确定其对纹枯病抗性水平，划分标准见表20表2苗期水稻绽桔病抗性评价标准病情指数.DI抗性评价DI=O 免疫(J)ODIlO 高抗CHR)10DI35 抗病CR)35DI55 中抗CMR)5575 芮感CHS)3 NY/T 2720一20156. 7. 2 抗病鉴定有效性判别感病对照品种达到其相应感病程度CDI75)时，该批次鉴定视为有效。6.8 抗性评价结果抗性评价结果记载参见表E.2，并对试验结果加以分析，原始资料应保存以备考察验证。7 成株期抗病性鉴定7. 1 田间鉴定病圃7. 1. 1 鉴定圄选择田间鉴定圃应设置在水稻纹枯病适发区。土壤肥力水平中等偏上、排灌方便、肥力均匀。士壤环境质量应符合GB15618中的二级标准。田间灌溉用水水质应符合GB5084的规定。7. 1.2 田间管理肥料施用应符合NY/T496的规定。移栽后20d和接种前1周各施尿素1次，纯氮用量为75kg/ hm2。农药使用应符合GB4285、GB/T8321 (所有部分)的规定。按当地大田生产习惯对虫、草害进行防治，应及时采取有效的防护措施防治鼠、鸟、畜、禽等对试验的为害。试验材料在全生育期内不使用杀菌剂，接种前后避免施用任何药剂。7.2 接种体接种体为立枯丝核菌AG1-IA菌丝融合群，应符合附录A的规定。7.3 试验材料的种植7. 3. 1 种子质量试验种子质量应符合GB4404.1常规稻或杂交稻一级种标准，不应带检疫性病虫。7.3.2 播种及田间排布试验材料经浸种催芽后，播于田间秧板上，温润育苗。待秧龄25d30 d，按照NY5117的规定进行移栽。同一组试验同期移栽，移栽后应及早进行查苗补缺。每重复每份材料栽植3行，每行10株。采用随机区组设计，重复3次。每50份试验材料设附录B中已知抗性的对照材料。7. 3. 3 保护行设置在试验材料四周均应设置保护行，栽插2行，株行距与试验材料相间。保护行品种选择株高相仿、且相对抗病的对照品种。7. 4 接种体7.4. 1 接种体准备根据试验需要选取附录C的鉴别菌株作为接种体，将菌株移植到PDA培养基的正中央，菌丝面朝上，盖上皿，置于人工培养箱280C培养48h。7. 4. 2 接种体繁殖将培养好的病原菌，在无菌条件下用直径5mm的灭菌打孔器，自菌落边缘切取菌饼，接种于培养基B，在培养箱中280C培养5d，待牙签表面布满菌丝后作为接种物以备用。7. 5 接种7.5. 1 接种方法在水稻分囊末期，将带有菌丝的牙签插入稻株茎忏自上而下第3叶鞠内侧(图D.2)。每个稻株接种1个茎秤，并确保接种后叶鞠抱茎状态不变，每个重复接种10株。7. 5. 2 接种后灌溉水管理接种后使田间保持1cm2 cm 厚的薄水层，3d4 d后观察稻株，待大部分稻株出现初期侵染症状后，灌水保持5cm左右水层。NY/T 2720-2015 7. 6 病情调查7.6. 1 调查时间水稻抽穗后30d。7.6.2 调查与记载对试验材料每个接种分囊的叶片及叶鞠进行调查，原始数据记载参见表E.3。7. 6. 3 成株期妓枯病病情级别划分成株期水稻纹枯病病情分级标准描述见表3。表3成株期水稻纹枯病病级分级标准病级症状O 植株叶辑和叶片未见症状1 稻株基部有少数零星病斑2 病斑延伸到倒5叶销或相应叶片(剑叶为倒1日十)3 病斑延伸到倒4叶鞠或相应叶片4 病斑延伸到倒3叶韬或相应叶片5 病斑延伸到倒2叶销或相应叶片6 病斑延伸到剑口十黯一半以下7 病斑延伸到剑叶稍一半以上8 剑叶出现病斑或失水枯黄9 发病茎秤稻穗局部或全部非正常枯死7. 7 病情记载根据病情症状描述，记载单株病情级别，计算病情指数CDJ)。病情指数计算见式(1)。7. 8 抗病性评价7.8. 1 抗病性评价标准依据试验材料3次重复的病情指数CDn的平均值确定其抗病性水平，划分标准见表40表4成株期水稻纹枯病抗性评价标准病情指数.DI抗性评价DI=O 免疫(l)ODh(lO 高抗HR)lODI35 抗病(R)35DI55 中抗(MR)5575 高感HS)7.8.2 抗病鉴定有效性判别感病对照品种病情指数CDJ)大于75以上时，该批次鉴定视为有效。7. 9 抗性评价结果抗性评价结果记载参见表E.4，并对试验结果加以分析，原始资料应保存以备考察验证。8 鉴定后材料的处理剩余接种体带回实验室灭菌处理。将鉴定后的田间病株无害化处理。作为抗病鉴定圃的田间土壤予以深耕，以压低病圃内土壤的带菌量。5 NY / T 2720-2015 A.1 学名和形态描述A. 1. 1 学名附录A(规范性附录)水稻纹枯病病原菌水稻纹枯病病原菌的无性阶段属半知菌亚门，无抱目，立枯丝核菌AG1-IA融合群CRhizoctoniaso-lani Khn AG1-IA) 0其有性阶段为担子菌亚门，胶膜菌目，瓜亡革菌Thanatephoruscucumeris CTrank) DonkJ。A. 1.2 形态描述病原菌菌丝细胞多核，每个细胞具3个或3个以上的细胞核。菌丝直径大于5m，大多数为5m14m。菌丝幼嫩时元色，老熟时浅褐色。幼期营养菌丝中远基的细胞隔膜附近分枝、老熟分枝与再分枝般呈直角，分枝发生点附近缝缩并形成一隔膜。菌核由菌丝体交织而成，初为白色后变成暗褐色，球形、或不规则形，面粗糙。A.2 水稻纹枯病田间典型症状纹枯病主要危害水稻叶鞠、叶片，严重时可侵人茎秤并蔓延至穗部。叶鞠发病先在近水面处出现水渍状暗绿色小点，逐渐扩大后呈椭圆形或云形病斑。病斑中央为灰绿色或淡绿色，后变成灰白色;病斑外围有晕圈，颜色为暗褐色。叶片病斑与叶黯病斑相似。发病严重时，病斑可相互连接成不规则的云纹状大斑，可导致叶黯干枯，叶片枯死。孕穗期前至抽穗后10 d左右为害，常稻株不能正常抽穗，即使抽穗，病斑蔓延至穗部，可造成整株枯死。6 NY/T 2720一2015附录B(规范性附录)水稻抗纹枯病鉴定对照晶种B.1 对照晶种5个水稻对照品种分别为:YSBR1 (抗病人C418(中抗)、Jasmine85 (J AS85 ，中抗)、武育梗3号(WYJ3，感病)和Lemont(LEMT，高感)。其中，L且4兰角扭讲洲+叫|地区主栽的迟熟中梗稻品种较感纹枯病;a臼smm肘e8臼5则是公认的相对抗病品种;C41四8为我国杂交梗稻中最重要的恢复系父本;厅YSBR阻1则是多年鉴定较抗病的新种质。B.2 纹桔病菌对水稻的致病力纹枯病菌接种对照品种后，根据对照品种的病情级别计算其病害严重等级从而确定病原菌的致病力。7 NY / T 2720-2015 附录C(规范性附录)水稻抗纹枯病鉴定鉴别菌株C.1 鉴别菌株5个纹枯病菌鉴别菌株分别为:GD118(强致病力)、C30(强致病力)、E67(中等致病力)、TN7C中等致病力)和YN3(弱致病力)0 C.2 水稻对纹枯病的抗病性鉴别菌株接种水稻材料后，根据奇主病情级别计算其病害严重等级从而确定水稻材料的抗性。8 D. 1 水稻苗期纹枯病接种示例见图0.1。附录D(资料性附录)水稻抗纹枯病鉴定图像示例图D.l布满水稻纹枯病菌的稻谷接种于4叶期小苗基部两侧D.2 水稻成株期纹枯病接种示例见图D.20 图D.2布满水稻纹枯病菌的牙签接种子稻株第3叶鞠内侧NY/ T 2720-2015 9 NY / T 2720-2015 附录E(资料性附录)水稻抗纹枯病鉴定数据记载表E.1 水稻抗纹桔病苗期鉴定原始数据记载表见表E.l。表E.l水稻抗纹枯病苗期鉴定原始数据记载表品种重复长度病斑长度(j株)编号名称区号cr口1 2 3 4 5 6 病斑高度I 苗挺高发病度病斑高度H 茵挺高发病度病斑高度回苗挺高发病度病斑高度I 苗挺高发病度病斑高度H 苗挺高发病度病斑高度皿苗挺高发病度1.播种日期:2.接种日期:3.接种生育期:4.接种病原菌分离物编号:5.菌株致病力类型:6.调查日期:鉴定人:年月日10 7 8 9 10 复核人:年月日E.2 水稻抗纹枯病苗期鉴定抗性评价记载表见表E.2。表E.2水稻抗纹枯病苗期鉴定抗性评价记载表重复病情级别编号品种名称区号O 1 3 5 7 9 I E 皿I H 皿I H 皿I E 回I E 田I E 田1.播种日期:2.接种日期:3.接种生育期:4.接种病原菌分离物编号:5.菌株致病力类型:6.调查日期:鉴定人:年月日NY/T 2720一2015病情平均抗性指数病指评价复核人:年月日11 NY/T 2720-2015 E.3 水稻抗纹枯病成株期鉴定原始数据记载表见表E.3o表E.3水稻抗纹枯病成株期鉴定原始数据记载表重复病情级别(/株)编号品种名称区号l 2 3 4 5 6 7 8 I E 田I H 田I H 田I H 皿I H 皿I E 皿1.播种日期:Z.接种日期:3.接种生育期:4.接种病原菌分离物编号:5.菌株致病力类型:6.调查日期:鉴定人2复核人:年月日年月12 9 10 日E.4 水稻抗纹枯病成株期鉴定抗性评价记载表见表E.4。NY / T 2720-2015 表E.4水稻抗纹枯病成株期鉴定抗性评价记载表编号品种名称重复病情平均抗性区号指数病指评价I E 田I H E I H 田I E 田I E 田I H 皿1.播种日期:2.接种日期:3.接种生育期=4.接种病原菌分离物编号:5.菌株致病力类型:6.调查日期:鉴定人2复核人2年月日年月日1:-3