GB 23200.109-2018 食品安全国家标准 植物源性食品中二氯吡啶酸残留量的测定 液相色谱-质谱联用法.pdf

质参考件PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 25中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准备案号： XXXX-XXXX陨悦杂65.100G食品安全国家标准植物源性食品中二氯吡啶酸残留量的测定液相色谱-质谱联用法2018 06 21发布原原2018 12 21原原实施National food safety standard要Determination of clopyralid in foods of plant origin要Liquid chromatography-mass spectrometry23200.1092018GB发 布国 家 市 场 监 督 管 理 总 局中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部中华人民共和国国家卫生健康委员会PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 G B2 3 2 0 0 灡 1 0 82 0 1 8暋暋暋食品安全国家标准植物源性食品中草铵膦残留量的测定液相色谱 质谱联用法1暋范围本标准规定了植物源性食品中草铵膦残留量的液相色谱 质谱联用方法。本标准适用于植物源性食品中草铵膦残留量的测定。2暋规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件, 仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件, 其最新版本( 包括所有的修改单) 适用于本文件。G B2 7 6 3暋食品安全国家标准暋食品中农药最大残留限量G B/T6 6 8 2暋分析实验室用水规格和试验方法3暋原理试样中的草铵膦用水和甲醇提取, 再经固相材料分散净化处理, 净化液与氯甲酸9芴基甲酯(9 f l u o r e n y l m e t h y l c h l o r o f o r m a t e) 反应后生成的衍生物草铵膦FMO C(g l u f o s i n a t e 灢 FMO C) 经液相色谱 质谱联用法检测, 外标法定量。4暋试剂和材料除另有说明外, 在分析中仅使用分析纯试剂和G B/T6 6 8 2中规定的一级水。4 灡 1暋试剂4 灡 1 灡 1暋乙腈(CH3C N,C A S号:7 5 0 5 8) : 色谱纯。4 灡 1 灡 2暋甲醇(CH3OH,C A S号:6 7 5 6 1) : 色谱纯。4 灡 1 灡 3暋乙酸铵(CH3C O ONH4,C A S号:6 3 1 6 1 8) 。4 灡 1 灡 4暋硼酸钠(N a2B4O71 0 H2O,C A S号:1 3 0 3 9 6 4) 。4 灡 1 灡 5暋氯甲酸9芴基甲酯(C1 5H1 1C l O2,C A S号:2 8 9 2 0 4 3 6) : 纯度9 9 灡 0%,0曟4曟保存。4 灡 2暋溶液配制4 灡 2 灡 1暋硼酸盐缓冲溶液(5 0 灡 0g/L,p H=9) : 称取5g硼酸钠(N a2B4O71 0 H2O) , 用水溶解并定容至1 0 0m L。4 灡 2 灡 2暋氯甲酸9芴基甲酯乙腈溶液(1 0 灡 0g/L) : 称取1g氯甲酸9芴基甲酯, 用乙腈溶解并定容至1 0 0m L。4 灡 2 灡 3暋乙酸铵水溶液(5mm o l/L) : 称取0 灡 3 8 5g乙酸铵溶解于适量水中, 用水定容至10 0 0m L。4 灡 3暋标准品草铵膦(C5H1 8N3O4P,C A S号:7 7 1 8 2 8 2 2) 标准品: 纯度曒9 9 灡 0%。4 灡 4暋标准溶液配制4 灡 4 灡 1暋草铵膦标准储备溶液(1 0 0m g/L) : 准确称取草铵膦标准品1 0 灡 0m g于5 0m L烧杯中, 用水溶解后转移到1 0 0m L容量瓶中, 并用水定容。放置于0曟4曟冰箱, 有效期6个月。1G B2 3 2 0 0 灡 1 0 82 0 1 84 灡 4 灡 2暋草铵膦标准中间溶液(1 0m g/L) : 吸取5 灡 0m L草铵膦标准储备溶液于5 0m L容量瓶中, 用水定容。放置于0曟4曟冰箱, 有效期1个月。4 灡 5暋材料4 灡 5 灡 1暋中性氧化铝(A l2O3,C A S号:1 3 4 4 2 8 1) :0 灡 0 7 5mm0 灡 1 5mm。4 灡 5 灡 2暋多壁碳纳米管(MWC NT s) : 粒径范围1 0n m2 0n m; 颗粒物长度5毺m1 5毺m; 比表面积(2 2 5暲2 5)m2/g。4 灡 5 灡 3暋滤膜:0 灡 2 2毺m, 有机系。5暋仪器和设备5 灡 1暋液相色谱 质谱联用仪: 配有电喷雾离子源(E S I) 。5 灡 2暋分析天平: 感量0 灡 0 0 01g、 感量0 灡 0 1g。5 灡 3暋组织捣碎仪。5 灡 4暋离心机: 转速不低于1 00 0 0 r/m i n。5 灡 5暋涡旋振荡器。5 灡 6暋恒温水浴锅。6暋试样制备蔬菜、 水果和食用菌样品按相关标准取一定量, 样品取样部位按照G B2 7 6 3的规定执行。对于个体较小的样品, 取样后全部处理; 对于个体较大的基本均匀样品, 可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理; 对于细长、 扁平或组分含量在各部分有差异的样品, 可在不同部位切取小片或截成小段后处理; 取后的样品将其切碎, 充分混匀, 用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆。匀浆放入聚乙烯容器中。取谷类样品5 0 0g, 粉碎后使其全部可通过4 2 5毺m的标准网筛, 放入聚乙烯瓶或袋中。取油料作物、 茶叶、 坚果和香辛料样品各5 0 0g, 粉碎后充分混匀, 放入聚乙烯瓶或袋中。植物油类搅拌均匀。试样于-1 8曟以下温度保存。7暋分析步骤7 灡 1暋提取7 灡 1 灡 1暋蔬菜、 水果、 食用菌类称取1 0g( 精确至0 灡 0 1g) 试样于5 0m L离心管中, 参见附录A补水, 然后加入1 0m L甲醇(4 灡 1 灡 2) , 涡旋振荡2m i n后, 以38 0 0 r/m i n离心5m i n, 待净化。7 灡 1 灡 2暋香辛料、 茶叶类称取2g( 精确至0 灡 0 1g) 试样于5 0m L离心管中, 参见附录A补水, 然后加入1 0m L甲醇(4 灡 1 灡 2) ,涡旋振荡2m i n后, 以38 0 0 r/m i n离心5m i n, 待净化。7 灡 1 灡 3暋谷物、 坚果、 油料作物、 植物油类称取5g( 精确至0 灡 0 1g) 试样于5 0m L离心管中, 参见附录A补水, 然后加入1 0m L甲醇(4 灡 1 灡 2) ,涡旋振荡2m i n后, 以38 0 0 r/m i n离心5m i n, 待净化。7 灡 2暋净化7 灡 2 灡 1暋蔬菜、 水果、 坚果、 食用菌类、 香辛料、 茶叶类、 谷物类准确吸取1m L提取液于称有5m g多壁碳纳米管(4 灡 5 灡 2) 的2m L离心管中, 涡旋1m i n后, 以1 00 0 0 r/m i n离心3m i n, 取上清液过0 灡 2 2毺m有机系滤膜(4 灡 5 灡 3) 于另一个2m L离心管中, 待衍生化。2G B2 3 2 0 0 灡 1 0 82 0 1 87 灡 2 灡 2暋油料作物类用吸量管准确吸取4m L提取液于5m L离心管中, 置于- 2 0 曟的冰箱中冷冻过夜, 然后取1m L上清液于称有5m g多壁碳纳米管(4 灡 5 灡 2) 和5 0m g中性氧化铝(4 灡 5 灡 1) 的2m L离心管中, 涡旋1m i n后, 以1 0 0 0 0 r/m i n离心3m i n, 取上清液过0 灡 2 2毺m有机系滤膜(4 灡 5 灡 3) 于另一个2m L离心管中, 待衍生化。7 灡 2 灡 3暋植物油类准确吸取1m L提取液直接过0 灡 2 2毺m有机系滤膜(4 灡 5 灡 3) 于另一个2m L离心管中, 待衍生化。7 灡 3暋衍生化准确吸取0 灡 5m L净化后的提取液于2m L离心管中, 加入0 灡 5m L硼酸盐缓冲溶液(4 灡 2 灡 1) , 混匀后再加入0 灡 5m L氯甲酸9芴基甲酯乙腈溶液(4 灡 2 灡 2) , 涡旋1m i n, 于4 0曟水浴中衍生1h, 衍生后以1 0 0 0 0 r/m i n离心1m i n, 取上清液过0 灡 2 2毺m有机系滤膜(4 灡 5 灡 3) , 供检测。准确吸取草铵膦标准溶液(7 灡 5)0 灡 5m L按此方法同时进行衍生化。7 灡 4暋仪器参考条件7 灡 4 灡 1暋液相色谱参考条件a)暋色谱柱:C1 8,5 0mm暳2 灡 1mm, 粒径1 灡 7毺m, 或相当者;b)暋流动相:A为5mm o l/L乙酸铵水溶液,B为乙腈, 梯度洗脱程序见表1;c)暋流速:0 灡 2m L/m i n;d)暋柱温: 室温;e)暋进样体积:5毺L。表1暋流动相及梯度洗脱程序(VA+VB)时间m i n流动相VA流动相VB09 5547 03 067 03 06 灡 159 58 灡 059 58 灡 19 551 09 557 灡 4 灡 2暋质谱参考条件a)暋离子源: 电喷雾离子源;b)暋扫描方式: 正离子扫描;c)暋喷雾电压:35 0 0V;d)暋毛细管温度:3 2 0曟;e)暋气化温度:3 0 0曟;f)暋鞘气(N2) :4 5p s i;g)暋辅助气(N2) :1 0p s i;h)暋碰撞气氩气:1 灡 5mT o r r;i)暋检测方式: 多反应监测(MRM) , 多反应监测条件见表2。表2暋草铵膦衍生物g l u f o s i n a t e 灢 F M O C的保留时间和多反应监测(M R M) 条件中文名称保留时间m i n定量离子对m/z定性离子对m/z碰撞能量V草铵膦衍生物5 灡 54 0 4 灡 0/1 8 2 灡 04 0 4 灡 0/1 8 2 灡 01 54 0 4 灡 0/2 0 8 灡 01 03G B2 3 2 0 0 灡 1 0 82 0 1 87 灡 5暋标准工作曲线将草铵膦标准中间溶液用空白提取液稀释成质量浓度为0 灡 0 1m g/L、0 灡 0 5m g/L、0 灡 1m g/L、0 灡 5m g/L和1m g/L的系列基质匹配标准溶液, 经衍生化(7 灡 3) 后按参考色谱和质谱条件测定。以草铵膦质量浓度为横坐标、 其衍生物的峰面积积分值为纵坐标, 绘制标准曲线, 求回归方程和相关系数。基质匹配标准溶液应现配现用。7 灡 6暋定性及定量7 灡 6 灡 1暋保留时间被测试样中草铵膦衍生物g l u f o s i n a t e 灢 FMO C色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较, 相对误差应在暲2 灡 5%之内。7 灡 6 灡 2暋定量离子、 定性离子及子离子丰度比在相同实验条件下进行样品测定时, 如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致, 并且在扣除背景后的样品质谱图中, 目标化合物的质谱定性离子必须出现, 至少应包括1个母离子和2个子离子,而且同一检测批次, 对同一化合物, 样品中目标化合物的2个子离子的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比, 其相对偏差不超过表3规定的范围, 则可判断样品中存在草胺膦。表3暋定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差单位为百分率相对离子丰度5 02 05 0( 含)1 02 0( 含)曑1 0允许相对偏差暲2 0暲2 5暲3 0暲5 07 灡 7暋测定将基质匹配标准溶液和待测溶液经衍生化后分别注入液相色谱 质谱联用仪中, 以保留时间和定性离子定性, 样品中草铵膦质量浓度应在标准工作曲线质量浓度范围内, 超过标准工作曲线质量浓度上限的样品应稀释后进样, 采用外标法定量。同时做空白试验。7 灡 8暋空白试验除不加试样外, 按照7 灡 17 灡 7的规定进行平行操作。8暋结果计算试样中草铵膦的残留量以质量分数w计, 单位以毫克每千克(m g/k g) 表示, 按式(1) 计算。w=A暳氀s暳vAs暳m(1)暋暋式中:w 试样中草铵膦残留量, 单位为毫克每千克(m g/k g) ;A 试样溶液中草铵膦衍生物的峰面积;As 标准溶液中草铵膦衍生物的峰面积;氀s 基质匹配标准工作溶液中草铵膦的质量浓度, 单位为毫克每升(m g/L) ;m 试样的质量, 单位为克(g) ;v 提取溶液总体积, 单位为毫升(m L) ,v=2 0。计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示, 保留2位有效数字。当结果大于1m g/k g时, 保留3位有效数字。9暋精密度9 灡 1暋在重复性条件下,2次独立测定结果的绝对差不大于重复性限(r) , 重复性限(r) 的数据为:4G B2 3 2 0 0 灡 1 0 82 0 1 8a)暋含量为0 灡 0 5m g/k g时, 重复性限(r) 为0 灡 0 1;b)暋含量为0 灡 1m g/k g时, 重复性限(r) 为0 灡 0 2;c)暋含量为0 灡 5m g/k g时, 重复性限(r) 为0 灡 0 9;d)暋含量为1m g/k g时, 重复性限(r) 为0 灡 1 9。9 灡 2暋在再现性条件下,2次独立测定结果的绝对差不大于再现性限(R) , 再现性限(R) 的数据为:a)暋含量为0 灡 0 5m g/k g时, 再现性限(R) 为0 灡 0 2;b)暋含量为0 灡 1m g/k g时, 再现性限(R) 为0 灡 0 4;c)暋含量为0 灡 5m g/k g时, 再现性限(R) 为0 灡 1 6;d)暋含量为1m g/k g时, 再现性限(R) 为0 灡 2 4。1 0暋其他香辛料和茶叶的定量限为0 灡 1m g/k g, 其他样品的定量限为0 灡 0 5m g/k g。1 1暋图谱1 1 灡 1暋5m g/L草铵膦衍生物标准溶液的全扫描质谱图见图1。?图1暋5m g/L草铵膦衍生物标准溶液的全扫描质谱图1 1 灡 2暋0 灡 0 1m g/L草铵膦衍生物标准溶液色谱图见图2。?图2暋0 灡 0 1m g/L草铵膦衍生物标准溶液色谱图5G B2 3 2 0 0 灡 1 0 82 0 1 8附暋录暋A( 资料性附录)所选基质含水量、 称样量及提取前补水量信息表暋所选基质含水量、 称样量及提取前补水量信息表见表A 灡 1。表A 灡 1暋所选基质含水量、 称样量及提取前补水量信息表基质名称含水量%称样量g提取前补水量g结球甘蓝8 51 01 灡 5芹菜9 51 00 灡 5番茄9 51 00 灡 5茄子9 01 01 灡 0马铃薯8 01 02 灡 0萝卜9 51 00 灡 5菜豆7 51 02 灡 5韭菜8 51 01 灡 5苹果8 51 01 灡 5桃9 01 01 灡 0葡萄8 01 01 灡 5柑橘8 51 01 灡 5香蕉7 51 02 灡 5木瓜9 01 01 灡 0香菇9 01 01 灡 0杏仁1 051 0大豆油1 051 0糙米1 051 0小麦1 051 0玉米1 051 0花生1 051 0绿茶1 021 0花椒1 021 0注1: 不包含在本表中的基质可根据其含水量测试结果进行补水。注2: 按照基质含水量补水至1 0g。6