红光照射对创伤愈合的影响.doc

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红光照射对创伤愈合的影响【摘要】目的：建立双抗体夹心 ABC ELISA 法，研究红光照射对创伤愈合的作用机制. 方法： 40 名受使者随机分为 4 组，每组 10 人，A 组：20 mW/cm2；B 组：30 mW/cm2；C 组：40 mW/cm2；D 组：对照组. 红光照射 45 min/次，1 次/d，连续 10 d，采用双抗体夹心 ABC ELISA 法测定受试者 VEGF，PDGF，TGF b1，bFGF 含量变化情况. 结果：双抗体夹心 ABC ELISA 法检测 VEGF，PDGF，TGF b1， bFGF 具有很好的特异性，红光照射组 VEGF，PDGF，TGF b1，bFGF 含量高于对照组（P<0.05），在 30 mW/cm2 红光照射时，bFGF 含量最高. 结论：红光照射加快创伤愈合与促进 VEGF，PDGF，TGF b1， bFGF 分泌有关，有利于临床推广应用. 【关键词】红光创伤愈合双抗体夹心法酶联免疫吸附实验 0 引言红光是指波长 600~700 nm，可以对生物体产生光化学作用的光线. 红光可直接作用于血管、淋巴管、神经末梢和皮下组织等而发挥着相应的治疗作用. 近年来有关红光的临床研究正越来越多被人们认识和重视. Reddy 等［1］应用红光照射糖尿病小鼠的实验研究中发现，632 nm 的红光可以使照射组小鼠的伤口愈合强度、拉力、负重力和坚韧度比对照组明显提高，总胶原浓度也明显升高. Schindl 等［2］ 1 应用红光照射不同原因导致的难治性溃疡患者，所有患者的溃疡在足够的照射后均能愈合，且无明显毒副作用. 我们采用双抗体夹心法（ABC ELISA）测定了红光照射对 40 名志愿者血管内皮细胞生长因子（VEGF）血小板衍生生长因子（PDGF）转化生长因子（TGF ，， b1），碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）含量的影响，进一步从分子生物学角度证实红光对软组织创伤及伤口愈合的影响，为红光照射治疗软组织创伤及伤口愈合适应症提供了理论依据. 1 材料和方法 1.1 材料 2006 09/2007 08 选取本院 40 名志愿者，无光过敏史及近期服用光过敏剂者；无慢性溶血，出凝血功能异常者和无明显出血倾向者及卟啉病者. 将 40 名志愿者随机分为 4 组，每组 10 人. A 组：20 mW/cm2；B 组：30 mW/cm2；C 组：40 mW/cm2；D 组：对照组. 红光照射组照射 1 次/d，每次 45 min，10 次，对照组用日光灯照射，照射时间、次数和实验组相同. VEGF，PDGF，TGF b1，bFGF 标准品和单克隆抗体，生物素标记的 VEGF，PDGF，TGF b1，bFGF 单抗均由本实验室制备；辣根过氧化物酶标记 Streptavidin（华美生物技术有限公司）预包被的 96 孔微孔检测板（Pierce 公司）色；；显酶底物 OPD(Sigma 公司)，紫外分光光度计（Amersham 公司） 680 型，酶标仪（BioRad 公司） HG ， 675 型红光治疗机（深圳一体智能技术有限公司）受试人血样 40 份. ， 2 1.2 方法 1.2.1 样本采集受试者采集全血 5 mL，不加抗凝剂，直接分离血清，放置-20℃冰箱备用. 1.2.2VEGF，PDGF，TGF b1，bFGF 含量的测定将 450 mL 样本稀释液加入到 1.5 mL 进口聚丙烯管中，再加入 10 mL 血清样本，加入 20 mL(1 mol/L) HCL，2～8℃放置 60 min，后再加入 20 mL(1 mol/L) NaOH，上下混匀既用或放置-20℃冰箱备用. 单克隆抗体的生物素化标记方法，参照常规方法［4-5］. 双抗体夹心 ABC ELISA 法测定 VEGF，PDGF，TGF b1，bFGF 含量，在配置好的标准溶液中各加入 25 mL 待测试样品，充分混匀，37℃孵育 30 min，洗涤液洗涤；加入生物素化抗体 50 mL，充分混匀，37℃孵育 30 min，洗涤液洗涤；加入辣根过氧化物酶标记 Streptavidin 液 100 mL，充分混匀， 37℃孵育 60 min，洗涤；后再加入酶底物 OPD 100 mL，37℃暗处反应 5～10 min，使底物显色；最后加入 2 mol/L 硫酸 50 mL，终止反应. 在 BioRad680 型酶标仪上测量吸光度（A492 nm）值. 统计学处理：计量数据以 x±s 表示，应用 SPSS11.0 统计软件进行统计学分析，统计方法采用方差分析及 Dunnett t 检验. 3

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