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红光照射对创伤愈合的影响.doc

1、红光照射对创伤愈合的影响 【摘要】 目的: 建立双抗体夹心 ABC ELISA 法,研究红光照 射对创伤愈合的作用机制. 方法: 40 名受使者随机分为 4 组,每组 10 人,A 组:20 mW/cm2;B 组:30 mW/cm2;C 组:40 mW/cm2;D 组: 对照组. 红光照射 45 min/次,1 次/d,连续 10 d,采用双抗体夹心 ABC ELISA 法测定受试者 VEGF,PDGF,TGF b1,bFGF 含量变化情 况. 结果: 双抗体夹心 ABC ELISA 法检测 VEGF,

2、PDGF,TGF b1, bFGF 具有很好的特异性,红光照射组 VEGF,PDGF,TGF b1,bFGF 含量高于对照组(P<0.05) ,在 30 mW/cm2 红光照射时,bFGF 含量 最高. 结论: 红光照射加快创伤愈合与促进 VEGF,PDGF,TGF b1, bFGF 分泌有关,有利于临床推广应用. 【关键词】 红光 创伤愈合 双抗体夹心法 酶联免疫吸附实验 0 引言 红光是指波长 600~700 nm,可以对生物体产生光化学作用的

3、 光线. 红光可直接作用于血管、淋巴管、神经末梢和皮下组织等而发 挥着相应的治疗作用. 近年来有关红光的临床研究正越来越多被人们 认识和重视. Reddy 等[1]应用红光照射糖尿病小鼠的实验研究中发 现,632 nm 的红光可以使照射组小鼠的伤口愈合强度、拉力、负重力 和坚韧度比对照组明显提高,总胶原浓度也明显升高. Schindl 等[2] 1 应用红光照射不同原因导致的难治性溃疡患者,所有患者的溃疡在足 够的照射后均能愈合,且无明显毒副作用. 我们采用双抗体夹心法 (ABC ELISA

4、测定了红光照射对 40 名志愿者血管内皮细胞生长因 子(VEGF) 血小板衍生生长因子(PDGF) 转化生长因子(TGF , , b1) , 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)含量的影响,进一步从分子生物学 角度证实红光对软组织创伤及伤口愈合的影响,为红光照射治疗软组 织创伤及伤口愈合适应症提供了理论依据. 1 材料和方法 1.1 材料 2006 09/2007 08 选取本院 40 名志愿者,无光 过敏史及近期服用光过敏剂者;无慢性溶血,出凝血功能异常者和无

5、 明显出血倾向者及卟啉病者. 将 40 名志愿者随机分为 4 组,每组 10 人. A 组:20 mW/cm2;B 组:30 mW/cm2;C 组:40 mW/cm2;D 组:对 照组. 红光照射组照射 1 次/d,每次 45 min,10 次,对照组用日光灯 照射,照射时间、次数和实验组相同. VEGF,PDGF,TGF b1,bFGF 标准品和单克隆抗体,生物素标记的 VEGF,PDGF,TGF b1,bFGF 单抗均由本实验室制备;辣根过氧化物酶标记 Streptavidin(华美生 物技术有限公司) 预包被的

6、96 孔微孔检测板(Pierce 公司) 色 ; ;显 酶底物 OPD(Sigma 公司),紫外分光光度计(Amersham 公司) 680 型 , 酶标仪(BioRad 公司) HG , 675 型红光治疗机(深圳一体智能技术 有限公司) 受试人血样 40 份. , 2 1.2 方法 1.2.1 样本采集受试者采集全血 5 mL,不加抗凝剂,直接分 离血清,放置-20℃冰箱备用. 1.2.2VEGF,PDGF,TGF b1,bFGF 含量的测定将 450 m

7、L 样本稀释液加入到 1.5 mL 进口聚丙烯管中,再加入 10 mL 血清样本, 加入 20 mL(1 mol/L) HCL,2~8℃放置 60 min,后再加入 20 mL(1 mol/L) NaOH,上下混匀既用或放置-20℃冰箱备用. 单克隆抗体的生 物素化标记方法,参照常规方法[4-5]. 双抗体夹心 ABC ELISA 法测定 VEGF,PDGF,TGF b1,bFGF 含量,在配置好的标准溶液中 各加入 25 mL 待测试样品,充分混匀,37℃孵育 30 min,洗涤液洗 涤;加入生物素化抗体

8、 50 mL,充分混匀,37℃孵育 30 min,洗涤液 洗涤; 加入辣根过氧化物酶标记 Streptavidin 液 100 mL, 充分混匀, 37℃孵育 60 min,洗涤;后再加入酶底物 OPD 100 mL,37℃暗处反 应 5~10 min,使底物显色;最后加入 2 mol/L 硫酸 50 mL,终止反 应. 在 BioRad680 型酶标仪上测量吸光度(A492 nm)值. 统计学处理:计量数据以 x±s 表示,应用 SPSS11.0 统计软 件进行统计学分析,统计方法采用方差分析及 Dunnett t 检验. 3

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