NY∕T 3145-2017 饲料中22种β-受体激动剂的测定 液相色谱-串联质谱法(农业).pdf

ICS 65.120 B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 3145一2017饲料中22种受体激动剂的测定液相色谱-串联质谱法Determination of 22 -agonists in feeds一Liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS ) 2017 -12-22发布2018-06-01实施中华人民共和国农业部发布目。昌本标准按照GB/T 1. 1-2009给出的规则起干。本标准由农业部畜牧业司提出。本标准由全同饲料工业标准化技术委员会CSAC/TC76)归口。NY/T 3145-2017 本标准起草单位:中罔农业科学院农业质量标准与检测技术研究所同家饲料质茧监督检验中心(北京)J。本标准主要起草人:王培龙、索德戚、李阳、王瑞罔、程前、张苏、赵根龙、苏晓鸥、李宏、周炜、冯三令、黄士新。I NY/T 3145-2017 饲料中22种p一受体激动剂的测定液相色谱一串联质谱法范围本标准规定了饲料中22种自受体激动剂含量测定的液相色谱-串联质谱方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料及精料补充料中克仑特罗(Clenbuterol)、沙丁胶醇(SalbutamoD、莱克多巴胶(Ractopa电巳L二丘主旦旦ilpaterol)、氯丙那林(Clorprenaline)、特布他林(Terb川aline)、两马特罗CCi-恤马布特罗CMabuterol)、澳布特罗(Brombuterol)、班布特罗(Ba咀回(UeIij#监持罗(Tulobutero)、利托君(Ritodri川美特罗如咱也)/录用.r:、福莫特罗CFormoterol)、苯乙醇胶:A(P! ibnol直iA)品亟品比JSOI:)气.C Clencyclohexerol)、拉贝特罗CLabetalo).民球也j姆鬓蜜意覆勤、二勾本标准方法检咀R，jfl睡醒搓疆噩噩噩搓搓M居费、2舰在性刊立.r路t1面眩下列文件。凡是不注GB/ T 6 GB/ T 1 GB/ T 2 3 原理饲料样品质谱仪检测，4 除非另有说4. 1 甲醇:色谱纯。4.2 甲酸:色谱纯。4.3 0. 1 mol/L盐酸溶4. 4 盐酸甲醇提取液:取O.1 4. 5 氨水甲醇榕液:取5mL氨水4. 6 样品稀释溶液:取甲酸0.1mL，乙腊10mL，牙切mr:-7j(昆匀。色谱-串联4. 7 克仑特罗、沙丁胶醇、莱克多巴胶、齐帕特罗、氯丙那林、特布他林、两马特罗、阿布特罗、马布特罗、澳布特罗、班布特罗、克仑普罗、妥布特罗、利托君、沙美特罗、喷布特罗、马喷特罗、福莫特罗、苯乙醇胶A、异克旬令、克伦塞罗、拉贝特罗对照品:纯度二95%。4. 8 一受体激动剂储备液:分别精密称取各种自-受体激动剂对照品至棕色容茧瓶中，用甲醇(4.1)配成浓度各为1mg/mL的储备液，20C80C冷藏保存，有效期12个月。4. 9 混合标准品工作液:分别吸取各种-受体激动剂储备液(4.肘，用样品稀释榕液(4.6)稀释成浓度为1g/mL的标准品工作液。20C80C冷藏保存，有效期3个月。1 NY/T 3145-2017 4. 10 氮气:纯度99.9%。4. 11 滤膜:0.22m，有机系。4.12 同相京取小柱:混合型阳离子交换柱(3mL, 60 mg) ，或其他性能类似的小柱。5 仪器和设备5. 1 液相色谱串联质谱仪:配有电喷雾电离源。5. 2 氮吹仪。5. 3 离心机:转速不低于8000r/min。5. 4 粉碎机。5. 5 涡旋振荡器。5. 6 恒温水浴振荡摇床。5. 7 罔相萃取装置。5. 8 天平:感量0.01g;感茧0.00001g。6 采样和试样的制备按GB/T14699. 1的规定抽取有代表性的样品，用四分法缩减取样，按照GB/T20195的规定制备样品，粉碎过0.45mm孔径筛，混合均匀，备用。7 分析步骤7. 1 提取称取配合饲料5g，浓缩饲料、添加剂预混合饲料及精料补充料2g(精确至0.01g)样品于50mL离心管中，准确加入20mL盐酸甲醇提取液(4.的，涡旋?昆合30s，超声提取30min，然后于8000r/min离心5min，上清液备用。7. 2 净化同相萃取小柱依次用3mL甲醇、3mL Jt?i化。取适量或全部上清液过柱，用3mL 水和3mL甲醇淋洗，抽干，用氨水甲醇溶液(4.5)3mL洗脱，收集洗脱液，速度控制在约1滴/S，用氮吹仪在500C条件下吹干，用1.0 mL样品稀释液(4.6)榕解，过O.22m滤膜，上机测定。如果检测含量超出线性范围clg/L100g/U，应适当减少称样盐重新处理或减少过网相京取小柱的溶液茧，将上机溶液所含药物的浓度稀释至线性范围内上样。7.3 空白基质曲线的制备选取与待测饲料样品类型相近、混合均匀程度较高的空白饲料，称取6份，每份2g(精确至0.001 g)，于50mL离心管中，按7.1和7.2步骤处理，在净化、吹干后的残渣中，分别添加适量的混合标准品工作液，配置成不同浓度clg/L100g/U的基质添加标准曲线或双平行单点标准溶液，供液相色谱串联质谱测定，进行定盐。也可利用待检测样品，添加适量的混合标准品工作液，配置成相应浓度。g/L100g/L)的基质添加标准榕液，按7.1和7.2步骤处理、通过扣除待测样品检测值进行定量。7.4 参考液相色谱条件2 色谱柱:C18柱，柱长150mm，内径4.6mm，粒径2.1m(或其他效果等同的C8柱)。柱温:30oC。进样量:10Lo流动相及参考梯度洗脱程序见表10表1流动相及参考梯度洗脱程序时间，IDln流速，mL/min0.1%甲酸溶液，%乙脯，%O 0. 3 1.0 0. 3 2.0 0. 3 6. 0 0. 3 7.0 O. 3 8.0 O. 3 9.1 O . 3 10 O. 3 7. 5 参考质谱条件离子源:电喷雾离子源。扫描方式:正离子模式。检测方式:多反应监测。95 5 95 5 80 20 70 30 10 90 10 90 95 5 95 5 NY/T 3145-2017 由线6 6 6 6 6 6 6 6 脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体，使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求。毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量等电压值应优化至最佳灵敏度。定性离子对、定量离子对及对应的锥孔电压和碰撞能量见表2。表222种仕受体激动剂的定性离子对、定量离子对及锥孔电压、碰撞能量的参考值被测物名称定性离子对，m/z定:IJ;!:离子对，m/z铮:孔电压，V碰撞能量，cV213. 9 153. 9 32 氯丙那林213. 9 153. 9 26 213. 990. 9 16 220. 1 202. 1 16 两马特罗220. 1 202. 1 23 220.1 160.0 10 226. 0 152. 0 特布他林226. 0 152. 0 226.0 170.0 20 25 20 228. 0 154.0 20 妥布特罗228. 0 154.0 26 228. 0 172. 0 20 234. 0 160. 0 15 两布特罗234. 0216.0 25 234. 0 216. 0 9 240.0 148. 0 20 沙丁胶醉240. 0148.0 25 240.0 222. 0 10 262.2 185. 0 24 齐帕特罗262.2185.0 24 262. 2 244. 0 13 克仑普罗263.1 203. 1 18 263. 1 203. 1 22 263. 1 245. 2 11 克仑特罗277. 0 203. 0 20 277. 0 203. 0 25 277. 0 259. 0 10 利托君288. 0 150. 0 20 288. 0150.0 19 288. 0 121. 2 20 喷布特罗292.2 236.2 20 292.2 236. 2 22 292.2 209.2 15 异克舒令302. 0150.0 20 302. 0 150. 0 22 302.0107.0 20 302. 2 163.9 16 莱克多巴胶302. 2 163. 9 20 302. 2 284.2 12 3 NY/T 3145-2017 表2(续)被测物名称定性离子对，m/zI 定盘离子对，m/z马布特罗克伦塞罗马I质特罗tL贝特罗福莫特罗苯乙醉胶A澳布特罗班布特罗沙美特罗7.6 7. 7 定量测定在仪器最佳工标，被测组分浓度为横榕液中待测物的响应、体激动剂标准榕液的液相色8 计算310.9236. 9 319.1202. 9 325. 2237.0 嘀嘀试样中待测-受体激动剂的质量分数Xj锋:孔电底，V30 22 19 碰撞能茧，eV外标法定量。样品仑特罗等22种r受Pj X V X Ci X V:l X 1000 Xj=(1) P. X m X V2 X 1000 4 式中:Pj一试样榕液中待测日-受体激动剂的峰面积值;V一一试样提取液体积，单位为毫升(mL);Ci一一待测-受体激动剂标准榕液浓度，单位为微克每毫升(g/mL); 只上机前定容体积，单位为毫升(mL);P.一一标准、溶液峰面积平均值;m 试样质茧，单位为克(g); 民一一净化时分取溶液的体积，单位为毫升(mL)。测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留3位有效数字。9 重复性NY /T 3145-2017 在重复性条件下，获得的2次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于这2个值算术平均值的20%。5 NY/T 3145-2017 附录A (资料性附录)22种-受体激动剂标准溶液的液相色谱-串联质谱离子流色谱图22种自受体激动剂标准溶液的液相色谱-串联质谱离子流色谱图见罔A.l。响应俏，%3.46 2:MRM of28 Cllannels ES+ 262.2244( QJATELUO) 4.4le5 5 1.00 2.00 3. 4.00 5.00 6 7 8.00 9. 2:M R M of 28 Channels :S+ 2 3.48 225.8151.8(TELJTALlN) 2.87e5 5 1.00 2. 3. 4.00 5. 6.00 7.00 8.00 9. 2:MRM of28 Ch.nnels ES+ 3 240148(SHA )INGANCHUN) 1.14e6 5 l朋2. 3. 4. 5) 6.00 7.00 8.00 9.00 2:MRM of28 Channels ES+ 4 3.55 220.1202.1 (XIMAn:LUO) 8.IOe5 5 1.00 2.00 3) 4.00 5.00 6.00 7.00 8) 9.00 2:MRM of28 Ch.nnels f:S+ 5 3.83 2342 16( XI HUTELUO) 1.33e6 5 l 2. 3.00 4. 5. 6 7. 8) 9. 2MRMof28.2C ( hannels ES+ 6 288121.2( L1TUOJUN) 4.39.5 5 l 2.00 3) 4.00 5. 6.00 7，(泊8.00 9.) 3:MRM of32 Ch.nnels ES+ 7 4.11 319.1202.9( KELUNSAILUO) 2.29e6 5 1.00 2.3，(沁4. 5.00 6 7.00 8.00 9.仪)3:M R M of 32 Channels ES+ 8 302.2 163.9( LA 1 KE)UOBAAN ) 3.21.5 5 l 2. 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.002:MRM9f似Channels ES+ 9 4.59 213.9153.9( LVHINGNALlN) 1.72e6 5 1. 2.00 3 4.00 5 6.00 7.00 8.00 9. 2:M RM of 28 Channels ES+ 10 4.60 263.1245.2( KELUNPUL 6.66e5 5 1. 2.00 3) 4. 5. 6 7.00 8 9. 3:MRM of 32 Channels ES+ 11 5.15 345 1 20.9( FUMATELUO) 3.6805 当5 1.00 2. 3.00 4.00 5.00 6.00 7创)8.00 9.00 5.19 2:M RM of 28 Ch.nnels ES+ 12 228 1 54(rUOUn:LUO) 5.15e5 5 1.00 2.00 3. 4.00 5. 6.创)7.00 8) 9.00 t，JO 图A.122种-受体激动剂标准溶液(浓度为10g/L)的液相色谱-串联质谱离子流色i昔图6 NY /T 3145-2017 响应值.%2:M RM or 28 Channels ES+ 13 277203 ( KE:LUNTELUO) 1.71e6 5 1.00 2.00 3.00 4. 5.00 6) 7.00 8.00 9创)3:MRM or32 Channels E:S+ 14 5.84 367293(XIlJBlJTELO) 7.93e5 5 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 71 8.00 9.00 3:MRM or32 Channels f:S+ 15 6.11 302150(YIKf:SULlN) 1.21e5 、，5 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8)90f020 8 2:M RM or 28 Channels E:S+ 16 6.19 36O.9294( babuleluo) 6.84e5 .一-国 5 l 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8. 9.00 3:M RM or 32 Channels E:S+ 17 329311 (LA BE:ITE:LUO) 1.06e6 5 l 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7 8) 9.00 6.39 3:M RM or 32 Channels ES+ 18 31 0.9236.9( mabuteluo) 3.72e6 5 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.) 8.创)9.00 3:M RM or 32 Channels E:S+ 7.46 325.2237( MAPENTELUO) 19 1.21e6 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.) 9.00 3:M B M 032 Channels ES+ 20 7.82 345ll502(2lm4ea5) 5 A -a -1.00 2.00 3.00 4创)5.00 6) 7 8.00 9.00 3:M RM or 32 Channels ES+ 21 941川3(SHAMEI川0)7.99 1 6.6Oe5 5 rime 1.00 2.00 3. 4. 5.00 6.00 7.00800M 9o r3 3:M R M or 32 Channels ES+ 22 8.01 2,92.2236.2( PENBUTELUO) 5 l 2.00 3 4 5.00 6.00 7.00 8. 9.00 t,mln 说明1 齐帕特罗，7 克伦塞罗，13一一先仑特罗;19一一马l质特罗;2一一特布他林;8 莱克多巴胶;14一一-澳布特罗;20一一苯乙醉胶八;3 沙丁胶醉;9 氯丙那林;15-一一异克舒令，21 沙美衍罗;4 四马丰!f;10-克仑普罗;16一一班布特罗;22-1愤布特岁。5一-四布特!f;11-福英特罗;17一一拉贝特罗，6-J托莉，12 妥布特罗;18一一马布特岁;图A.l(续)、，7 toN|的寸的同问Z 中华人民共和国农业行业标准饲料中22种!受体激动剂的测定液相色谱-串联质谱法NY/ T 3145-2017 关中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)(邮政编码100125网址.ccap. COlll. cn) 北京印刷一厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销头-x-关印张O.75 字数15千字2018年5月北京第1次印刷兴开本880rnrnX1230rnrn 1/16 2018年5月第1版书号16109 4388 定价18.00元说版权专有僵权必究举报电话[phone]