不同生长年限与采收季节对何首乌中14个成分含量的影响.pdf

Aug.2023 Vol.25 No.82023 年 8 月 第 25 卷 第 8 期中国现代中药Mod Chin Med不同生长年限与采收季节对何首乌中14个成分含量的影响李妍怡1，汪祺2a，杨建波2，王莹2，刘越1，文海若2，张玉杰1*，马双成2*1.北京中医药大学 中药学院，北京 102400；2.中国食品药品检定研究院，北京 100050摘要 目的：探究何首乌中成分含量随生长年限和采收季节的变化规律。方法：建立超高效液相色谱-三重四极杆质谱法（UPLC-QQQ-MS/MS），测定德庆地区何首乌药材中 14 个成分反式-2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-D-葡萄糖苷（trans-THSG）、顺式-THSG（cis-THSG）、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-(2-O-阿魏酰)-D-吡喃葡萄糖苷、虎杖苷、白藜芦醇、儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷、芦丁、没食子酸、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛、对香豆酸和决明酮-8-O-D-葡萄糖苷含量。结果：建立了准确可靠的 UPLC-QQQ-MS/MS 测定何首乌中 14 个成分含量的方法；随生长年限的增加，何首乌中二苯乙烯苷类、黄酮类、酚类化合物含量多降低；随采收季节的变化，二苯乙烯苷类、黄酮类、决明酮-8-O-D-葡萄糖苷成分多春季含量最高、秋季含量最低，酚类化合物多夏季含量最高、春秋含量低。结论：成分的含量与何首乌药材生长年限及采收季节密切相关，其中采收季节变化较为明显；以 trans-THSG、决明酮-8-O-D-葡萄糖苷作为潜在肝毒性物质，cis-THSG 作为有效成分，秋季为何首乌的适宜采收期，与中华人民共和国药典2020 年版规定相符。关键词 何首乌；超高效液相色谱-三重四极杆质谱法；二苯乙烯苷类成分；黄酮类成分；酚类成分；采收季节；生长年限中图分类号 R284 文献标识码 A 文章编号 1673-4890（2023）08-1769-07 doi：10.13313/j.issn.16734890.20230315002Influences of Growth Years and Harvest Seasons on Content of 14 Components in Polygoni Multiflori RadixLI Yan-yi1,WANG Qi2a,YANG Jian-bo2,WANG Ying2,LIU Yue1,WEN Hai-ruo2,ZHANG Yu-jie1*,MA Shuang-cheng2*1.School of Chinese Materia Medica,Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 102400,China;2.National Institutes for Food and Drug Control,Beijing 100050,ChinaAbstract Objective:To explore the change pattern of component contents of Polygoni Multiflori Radix(PM)with growth years and harvest season.Methods:Ultra-performance liquid chromatography-triple quadrupole mass spectrometry(UPLC-QQQ-MS/MS)was used to quantify 14 components in PM from Deqing area,including trans-2,3,5,4-tetrahydroxystilbene-2-O-D-glucoside(THSG),cis-THSG,2,3,5,4-tetrahydroxystilbene-2-O-(2-O-fluoroyl)-D-glucopyranoside,polygonin,resveratrol,catechin,epicatechin,hyperoside,rutin,gallic acid,p-hydroxybenzoic acid,p-hydroxybenzaldehyde,p-coumaric acid,and cassia-8-O-D-glucoside.Results:An accurate and reliable method was established for the determination of the content of 14 components in PM by UPLC-QQQ-MS/MS.The content of stilbene glycosides,flavonoids,and phenolic compounds was found decrease with the increase in growth years.Stilbene glycosides,flavonoids,and cassia-8-O-D-glucoside were the highest in spring and the lowest in autumn,phenolic was the highest in summer and the lowest in spring and autumn.Conclusion:The content of components was closely related to the growth years and harvest seasons of PM,and the influence of harvest seasons was greater.It was considered that trans-THSG and 中药农业 基金项目 国家自然科学基金项目（81973476）*通信作者 张玉杰，教授，研究方向：中药药代动力学；E-mail：马双成，研究员，研究方向：中药民族药物质基础与质量安全评价；E-mail：a 并列第一作者1769Aug.2023 Vol.25 No.82023 年 8 月 第 25 卷 第 8 期中国现代中药Mod Chin Medcassia-8-O-D-glucoside should be used as potential hepatotoxic substances and cis-THSG as the active component.It was suitable for harvesting PM in autumn,which was consistent with the provisions of the 2020 edition of Chinese Pharmacopoeia.Keywords Polygoni Multiflori Radix;UPLC-QQQ-MS/MS;stilbene glycosides;flavonoids;phenols;harvest season;growth years何 首 乌 为 蓼 科 植 物 何 首 乌 Polygonum multiflorum Thunb.的干燥块根，为常见的补益类中药，在临床中广泛应用，作为药物首次记载于何首乌传 中，后在历代本草中均有记载1。其性微温，味苦、甘、涩，生品解毒消痈、截疟通便；制品味滋腻，可补肝肾、化浊、调脂2-3。随着药材质量研究的深入，何首乌的规范采收季节和年限引起了人们的广泛关注。明代 本草品汇精要 记载：“春末、夏中、初秋，候晴明日取根”4。清代药物出产辨记载：“自立冬至立春为最适宜，成分亦好”5。中华人民共和国药典（以下简称中国药典）2020年版规定：“于秋、冬二季叶枯萎时采挖”2。由古法四季采收，演变为秋冬采收是否有据可依未见详细研究报道；此外，何首乌的采收年限也未见明确规定。中医界历来视广东德庆为何首乌道地产区，其所产何首乌条壮、色正、粉性足、药效高。因此本研究选用广东德庆何首乌药材，对各生长年限和采收季节何首乌中质量指标的变化规律进行了探索研究。二苯乙烯苷类化合物为蓼科植物中何首乌特有的一类活性成分，在植物体内含量较高；黄酮、酚酸类化合物在植物体内广泛存在，其化学性质较为活泼，推测其随季节年限变化明显。故本研究采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱法（UPLC-QQQ-MS/MS）对何首乌中二苯乙烯苷类、黄酮类和酚类成分进行含量分析，监测上述3类成分随生长年限、采收季节发生的变化，为古今采收时间异同提供实验数据的支撑，并对何首乌质量评定指标的确立提供理论参考。1材料1.1仪器LCMS-8050 型 UPLC-QQQ-MS/MS 系统（日本岛津公司）；KQ-300DA型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；C800型凌生多功能粉碎机（永康市红太阳机电有限公司）；MSA6.6S-CE型百万分之一分析天平（德国赛多利斯科学仪器有限公司）。1.2试剂对照品反式-2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-D-葡萄糖苷（trans-THSG，批号：110844-201915）、虎杖苷（批号：111575-201603）、白藜芦醇（批号：111535-201703）、儿茶素（批号：110877-202005）、表儿茶素（批号：110878-201703）、金丝桃苷（批号：111521-201809）、芦丁（批号：100080-201811）、没食子酸（批号：110831-201906）均购自中 国 食品药品检定研究院；对照品 2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-(2-O-阿魏酰)-D-吡喃葡萄糖苷（批号：C25S11Y125979）、对 羟 基 苯 甲 酸（批 号：D13O8S45560）、对羟基苯甲醛（批号：Y02J7C15574）、对香豆酸（批号：Y16O8C45561）均购自上海源叶生物科技有限公司；顺式-THSG（cis-THSG，批号：18012507，成都普菲德生物技术有限公司）；决明酮-8-O-D-葡萄糖苷（批号：STC23540105，上海诗丹德生物技术有限公司）；所有对照品质量分数均98%；乙腈（德国 Merck 公司）；甲醇（美国Fisher公司）；甲酸（美国Sigma公司）；超纯水（美国Millipore公司）；其余试剂均为分析纯。1.3药材何首乌药材于2021年春、夏、秋3季收集自广东省肇庆市德庆县，经中国食品药品检定研究院张南平主任药师鉴定均为蓼科植物何首乌 Polygonum multiflorum Thunb.的 干 燥 块 根。样 品 来 源 信 息见表1。2方法与结果2.1色谱与质谱检测条件色谱条件：ACQUITY UPLC HSS C18色谱柱（100 mm2.1 mm，1.8 m）；流动相为 0.2%甲酸水溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脱（03.5 min，90%85%A；3.57.0 min，85%A；7.010.0 min，85%74%A；10.012.0 min，74%68%A；12.015.0 min，68%64%A；15.017.0 min，64%A；17.031.5 min，64%20%A；31.536.0 min，20%A；36.036.2 min，1770Aug.2023 Vol.25 No.82023 年 8 月 第 25 卷 第 8 期中国现代中药Mod Chin Med20%90%A；36.241.0 min，90%A）；流 速 为0.4 mL min1；柱温为27；进样量为1 L。质谱条件：电喷雾离子源（ESI），正、负离子多反应检测（MRM）模式。空气作为干燥辅助气，体积流量为 10 L min1，加热模块温度为 400；氮气（N2）作为锥孔气，体积流量为3 L min1，脱溶剂管温度为300；氩气（Ar）用于碰撞诱导解离（CID）气体。检测模式为正、负离子同时扫描，离子源温度300，接口电压为3000 V；每个离子对 驻 留 时 间 为 23.8 ms。14 个 成 分 的 质 谱 参 数见表2。2.2溶液的制备2.2.1供试品溶液的制备取1.3项下药材粉碎后过四号筛（65目），得不同采收时间样品细粉。精密称取何首乌样品 1 g，加入 50 倍量 70%乙醇，置 100 mL具塞锥形瓶中超声提取30 min，静置冷却后补足减失的质量，并用定量滤纸得续滤液25 mL。将续滤液置100 mL蒸发皿中，95 水浴加热挥干，用新配制备的70%乙醇溶解并定容至5 mL，澄清透明溶液经0.22 m滤膜滤过后，即得供试品溶液。2.2.2对照品溶液的制备精密称取二苯乙烯苷类、黄酮类等对照品粉末适量，置于10 mL量瓶中加甲醇溶解定容，得到各对照品母液；混合14个成分的对照品母液，并用70%乙醇梯度稀释，最终得对照品混合储备液。2.3何首乌中14个成分的UPLC-QQQ-MS/MS分析取 2.2项下溶液适量，进样分析，得到 UPLC-QQQ-MS/MS总离子流图（图1）。2.4方法学考察2.4.1专属性试验取2.2.2项下对照品溶液，以对照品质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），得到何首乌中14个化学成分的线性回归曲线，见表3。2.4.2精密度试验精密称取1年生夏季采收样品（编号1X）粉末1 g，按2.1、2.2项下条件与方法同天内连续进样6次，计算日内精密度的RSD。结果显示，样品中14个化学成分的平均日内精密度RSD表1何首乌样品来源信息编号1C2C3C4C5C1X2X3X4X5X1Q2Q3Q4Q5Q生长年限/年123451234512345收集时间/年-月-日2021-04-192021-04-192021-04-192021-04-192021-04-192021-08-182021-08-182021-08-182021-08-182021-08-182021-11-292021-11-292021-11-292021-11-292021-11-29表2何首乌中待测化合物质谱检测参数化合物trans-THSGcis-THSG2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-(2-O-阿魏酰)-D-吡喃葡萄糖苷虎杖苷白藜芦醇儿茶素表儿茶素金丝桃苷芦丁没食子酸对羟基苯甲酸对羟基苯甲醛对香豆酸决明酮-8-O-D-葡萄糖苷分子式C20H22O9C20H22O9C30H30O12C20H22O8C14H12O3C15H14O6C15H14O6C21H20O12C27H30O16C7H6O5C7H6O3C7H6O2C9H8O3C20H24O9tR/min7.364.9512.176.6711.342.743.897.136.811.202.924.135.2612.74MRM离子对（m/z）405.15243.15405.15243.15581.20405.20389.15227.20227.05143.10289.00109.00289.00109.00463.10300.15609.00300.15168.95125.05137.2593.05121.0092.05163.20119.05407.20245.15碰撞电压/V20191921242526272616152415201771Aug.2023 Vol.25 No.82023 年 8 月 第 25 卷 第 8 期中国现代中药Mod Chin Med分别为 0.39%、0.61%、1.39%、0.76%、0.77%、1.49%、1.97%、2.86%、1.99%、2.80%、1.98%、3.26%、1.48%、1.67%，均 小 于 4.0%，精 密 度良好。2.4.3重复性试验精密称取1年生夏季采收样品（编号 1X）粉末 1 g（平行称取 6份），按 2.1、2.2项下条件与方法制备分析，分别进样3针，随行标准曲线考察重复性。得 trans-THSG、cis-THSG、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-(2-O-阿魏酰)-D-吡喃葡萄糖苷、虎杖苷、白藜芦醇、儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷、芦丁、没食子酸、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛、对香豆酸和决明酮-8-O-D-葡萄糖苷的平均质量分数分别为19 662.08、243.02、71.12、43.10、211.39、654.59、75.14、0.18、0.62、76.79、5.74、29.91、27.13、197.66 g g1，重复性 RSD 分 别 为 0.65%、0.97%、1.66%、2.76%、1.97%、0.67%、2.06%、2.68%、2.66%、1.67%、1.77%、0.97%、1.39%、1.19%，符合试验要求。2.4.4稳定性试验取1年生夏季采收样品（编号1X）供试品溶液，在室温分别放置 0、2、4、8、12、24 h 后进样，考察 14 个成分在室温下的稳定性。trans-THSG、cis-THSG、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-(2-O-阿魏酰)-D-吡喃葡萄糖苷、虎杖苷、白藜芦醇、儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷、芦丁、没食子酸、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛、对香豆酸和决明酮-8-O-D-葡萄糖苷峰面积的RSD分别为1.97%、1.96%、0.97%、1.36%、1.09%、2.47%、1.39%、2.39%、1.11%、2.85%、0.99%、1.93%、1.74%、1.89%，表明24 h室温放置稳定良好。2.4.5加样回收率试验取已知含量的1年生夏季采收样品（编号1X）粉末0.5 g，加入与待测成分注：A.对照品；B.供试品；1.trans-THSG；2.cis-THSG；3.2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-(2-O-阿魏酰)-D-吡喃葡萄糖苷；4.虎杖苷；5.白藜芦醇；6.儿茶素；7.表儿茶素；8.金丝桃苷；9.芦丁；10.没食子酸；11.对羟基苯甲酸；12.对羟基苯甲醛；13.对香豆酸；14.决明酮-8-O-D-葡萄糖苷。图1何首乌样品和对照品总离子流图表3何首乌中14个化学成分的线性方程化合物trans-THSGcis-THSG2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-(2-O-阿魏酰)-D-吡喃葡萄糖苷虎杖苷白藜芦醇儿茶素表儿茶素金丝桃苷芦丁没食子酸对羟基苯甲酸对羟基苯甲醛对香豆酸决明酮-8-O-D-葡萄糖苷线性回归方程Y=2 291 254X830 840Y=28 996X+338 329Y=659 884X326 945Y=53 156X611Y=12 823X47 880Y=226 431X+416Y=2722X318Y=50 146 881X247Y=29 726X107Y=4172X+470Y=50 286X460Y=379 284X+8221Y=96 499X+6912Y=128 437X+1147线性范围/ng mL10.220 022.230 09.310 0286.200 00.390 0139.886 00.150 015.940 00.590 0104.980 00.003 70.060 00.090 019.030 00.006 40.380 00.008 00.400 00.277 910.550 00.040 00.750 00.128 725.740 00.250 025.009 60.350 05.980 0r0.999 70.994 70.999 70.999 90.991 80.999 60.999 80.998 50.999 90.999 90.998 61.000 00.998 40.999 9检测限/ng mL10.020.190.040.120.0100.2100.110.010.200.030.230.01定量限/ng mL10.104.190.180.070.2700.04000.130.020.060.110.161772Aug.2023 Vol.25 No.82023 年 8 月 第 25 卷 第 8 期中国现代中药Mod Chin Med等质量浓度的各对照品溶液，按2.1、2.2项下条件与方法制备分析（平行检测6份），记录峰面积得到相应平均加样回收率。样品中 trans-THSG、cis-THSG、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-(2-O-阿魏酰)-D-吡喃葡萄糖苷、虎杖苷、白藜芦醇、儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷、芦丁、没食子酸、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛、对香豆酸和决明酮-8-O-D-葡 萄 糖 苷 回 收 率 分 别 为 101.19%、99.78%、100.04%、101.89%、99.82%、99.77%、100.80%、93.77%、99.36%、103.19%、96.60%、99.01%、99.98%、99.97%，RSD 分 别 为 0.79%、0.83%、1.96%、0.80%、0.89%、0.66%、1.01%、0.69%、0.95%、1.63%、0.76%、0.91%、2.07%、1.89%，表明该方法准确度良好。2.5不同采收期14个化学成分的含量测定参照2.2项下制备方法，按2.1项下条件进样分析，得不同季节年限的何首乌样品中14个化学成分的质量分数，结果见表4。选取不同采收年份的样品，将14种成分的质量分数进行生长年限的比较（图2），可发现，与1年生何首乌相比，随生长年限的增长，trans-THSG、白藜芦醇、决明酮-8-O-D-葡萄糖苷分别在春夏秋3 季中呈现先降低后升高的趋势（3 年生为谷值）；cis-THSG、没食子酸分别在夏秋、春夏秋季呈现先升高后逐渐降低的趋势（3年生和 4年生为峰值）；2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-(2-O-阿魏酰)-D-吡喃葡萄糖苷、儿茶素、芦丁、对香豆酸分别在春季、春秋、春夏季、夏季随年限增加含量降低。将上述样品按采收季节进行均值处理，并与春季采收何首乌中相应成分的含量比较，见表4，结果可得trans-THSG夏秋两季含量逐渐降低；cis-THSG逐渐升高；2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-(2-O-阿魏酰)-D-吡喃葡萄糖苷、虎杖苷、儿茶素、芦丁、决明酮-8-O-D-葡萄糖苷含量春季高于夏秋两季；白藜芦醇、表儿茶素、没食子酸、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛、对香豆酸小分子物质夏季高于春秋含量；金丝桃苷仅夏季采收样品中含有微量。何首乌二苯乙烯苷、黄酮、酚类成分在不同采收 季 节 含 量 变 化 明 显，此 外 trans-THSG、cis-THSG、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-(2-O-阿魏酰)-D-吡喃葡萄糖苷、白藜芦醇、儿茶素、没食子酸、决明酮-8-O-D-葡萄糖苷总体含量较高，考虑其作为何首乌质量评价的潜在指标成分。表4不同采收季节和生长年限的何首乌中14个成分的质量分数（n=3）g g1样品编号1C2C3C4C5C1X2X3X4X5X1Q2Q3Q4Q5QCXQ二苯乙烯苷类成分trans-THSG34 221.5833 806.7331 269.0932 146.9128 532.6919 662.0819 914.4316 798.1019 991.4019 545.2310 038.089 951.739 697.109 791.618 804.6731 995.4019 182.259 656.64cis-THSG377.36218.24255.75218.98327.92243.02281.02618.38414.21302.79333.19396.29759.52758.87306.78279.65371.88510.932,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-(2-O-阿魏酰)-D-吡喃葡萄糖苷123.28121.31113.46103.0583.8471.1272.8963.6268.8966.5666.3363.1662.8864.5161.68108.9968.6263.71虎杖苷150.57167.89160.26159.91131.5343.1042.5236.5543.3127.9552.3152.6753.9256.6763.25154.0338.6955.76白藜芦醇161.83132.6597.2466.34126.36211.39212.55149.19156.24171.05123.46104.6145.6156.4384.93116.88180.0883.01黄酮类成分儿茶素1 349.021 280.681 126.791 086.25957.42654.59617.02574.39687.76563.17831.13814.30818.23758.37696.581 160.03619.39783.72表儿茶素69.3662.8757.5852.1457.2875.14111.7999.8196.63139.5739.8038.7144.9045.2343.1359.85104.5942.35金丝桃苷0.180.320.570.240.520.37芦丁0.820.720.690.550.540.620.500.450.440.200.380.390.450.440.410.660.440.41酚类成分没食子酸41.7634.9251.2836.9433.2276.7960.3567.6666.1858.9151.4544.2956.4661.4741.4039.6265.9851.01对羟基苯甲酸2.011.932.151.932.365.746.016.095.395.651.691.831.601.761.702.085.781.72对羟基苯甲醛15.6210.0711.169.4210.5229.9135.2733.1839.4633.234.114.296.507.074.6411.3634.215.32对香豆酸2.614.144.874.534.4727.1311.578.478.165.220.400.470.420.800.724.1212.110.56决明酮-8-O-D-葡萄糖苷244.16250.37214.69234.54226.47197.66218.53143.65194.92172.63171.75161.48158.70179.54175.16234.05185.48169.33注：C、X、Q分别为春、夏、秋季何首乌成分15年平均质量分数；表示未检测到。1773Aug.2023 Vol.25 No.82023 年 8 月 第 25 卷 第 8 期中国现代中药Mod Chin Med3讨论千金翼方中指出“夫药采取，不知时节，不以阴干暴干，虽有药名，终无药实，故不依时采收，与朽木不殊，虚费人工，卒无捭益”6，强调依时采收的重要性。故本研究采用 UPLC-QQQ-MS/MS 研究不同采收季节和生长年限对何首乌中二苯乙烯苷、黄酮、酚类14个化学成分含量的影响，为其药材的质量控制和安全性研究提供理论支持。何首乌为多年生草本植物，生长年限的增加能介导物质转化积累，进而影响药材毒效作用。研究发现，何首乌中主要二苯乙烯苷类 trans-THSG 和cis-THSG随生长年限呈现相反的含量变化趋势，提示随生长年限的增加植物体内可能存在trans-THSG与cis-THSG的相互转换；黄酮和酚类多随生长年限的增加含量降低，推测可能与何首乌多年生长后木质化程度增加有关7。一般认为秋冬为根茎类中药的适宜采收期，可能与秋冬之际气温降低、植物生长停滞、体内有效物质逐步积累有关。研究发现，二苯乙烯苷类化合注：A.二苯乙烯苷类；B.黄酮类；C.酚类。图2不同采收季节、生长年限何首乌样品14个成分质量分数变化趋势（x s,n=3）1774Aug.2023 Vol.25 No.82023 年 8 月 第 25 卷 第 8 期中国现代中药Mod Chin Med物含量峰值多出现在春季，其中trans-THSG含量远高于其他化合物，且秋季含量最低，仅为春季含量的1/3。黄酮类化合物大量成分含量峰值亦出现在春季，谷值可能为夏季（如儿茶素）或秋季（如芦丁）；值得注意的是，金丝桃苷仅在夏季何首乌样品中检测到微量。本研究结果与已有的相关文献报道8-10中测得二苯乙烯苷、黄酮、酚类成分含量变化规律基本一致。蒽醌为何首乌内广泛分布的成分，前期研究发现，秋季采收何首乌样品中游离大黄素和大黄素甲醚含量低于夏季采收样品，结合蒽醌大黄素-8-O-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-D-葡萄糖苷含量远低于春夏采收样品11，其中结合蒽醌可能为毒性物质基础，具有肝细胞毒性12-13。二苯乙烯苷类为何首乌中特有化学成分，trans-THSG具有潜在药物性肝损伤风险14-16。决明酮-8-O-D-葡萄糖苷为何首乌中的萘类成分，Yang等17通过斑马鱼胚胎发育模型发现其具有较强毒性作用。另有研究表明cis-THSG具有良好的调血脂活性18-20，可能为药物的有效作用成分。结合本研究结果，3年生秋季采收何首乌中所含潜在毒性物质大黄素-8-O-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-D-葡萄糖苷、trans-THSG、决明酮-8-O-D-葡萄糖苷含量均低于其余采收样品，有效成分cis-THSG含量最高，故推测3年为适宜采收年限、秋季为适宜采收季节，与中国药典2020年版规定相符。本研究发现，何首乌中14个化学成分的含量随采收季节和生长年限的变化明显，且 trans-THSG、cis-THSG、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-(2-O-阿魏酰)-D-吡喃葡萄糖苷、白藜芦醇、儿茶素、没食子酸、决明酮-8-O-D-葡萄糖苷含量较高、趋势清晰，可作为潜在的指标性成分。冬季气候严寒，考虑生产实际故选用秋冬交界11月末采收样品，秋冬两季何首乌含量异同还需进一步探究和考证。参考文献1 唐慎微.重修政和经史证类备用本草 M.北京：人民卫生出版社，1957：262.2 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部 M.北京：中国医药科技出版社，2020：73-74.3 李妍怡，张玉杰，汪祺，等.基于产地和炮制工艺探讨何首乌化学成分变化 J .中国药物警戒，2022，19（7）：799-802.4 刘文泰.本草品汇精要 M.北京：华夏出版社，2004：243.5 陈仁山.药物出产辨 M.台北：新医药出版社，1930：78.6 孙思邈.千金翼方 M.北京：人民卫生出版社，1998：1-2.7 张丽艳，杨玉琴，高言明.贵州不同产地野生及栽培何首乌中二苯乙烯苷含量比较 J.中国中药杂志，2003，28（8）：786-787.8 孟磊.“精准药材”定向培育研究：以何首乌为例 D.北京：北京中医药大学，2018.9 王芳，张久磊，武玉祥，等.何首乌不同采收期及不同部位的药用成分 J.贵州农业科学，2015，43（12）：170-172.10 李帅锋，郑传柱，张丽，等.不同采收期对何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分含量的影响 J.中国现代中药，2015，17（11）：1177-1179，1183.11 李妍怡，王莹，张南平，等.基于UPLC-MS/MS分析不同采收期对何首乌蒽醌含量的影响 J.中国药物警戒，2022，19（12）：1277-1284.12 汪祺，王亚丹，杨建波，等.大黄素-8-O-D-葡萄糖苷及其代谢产物肝毒性研究 J.中国新药杂志，2020，29（16）：1856-1862.13 汪祺，张茜蕙，文海若，等.基于肝微组织考察何首乌主要单体潜在肝毒性 J.中国中药杂志，2020，45（12）：2954-2959.14 孙萌，俞沁玮，向婷，等.二苯乙烯苷扰乱胆汁酸平衡并抑制磷脂分泌诱导肝损伤 J.中国中药杂志，2021，46（1）：139-145.15 李娜，宋捷，李晓菲，等.药物代谢酶抑制剂对反式二苯乙烯苷所致肝损伤易感性的影响 J.药学学报，2017，52（7）：1063-1068.16 潘韵铮，李庆菊，张琦，等.基于复合细胞模型的顺式和反式二苯乙烯苷特异质肝损伤评价 J.药学学报，2021，56（3）：808-815.17 YANG J B，LI W F，LIU Y，et al.Acute toxicity screening of different extractions，components and constituents of Polygonum multiflorum Thunb.on zebrafish（Danio rerio）embryos in vivoJ.Biomed Pharmacother，2018，99：205-213.18 汪祺，文海若，马双成.以法尼醇X受体为作用靶点的何首乌中肝毒性成分的筛选 J.中国药物警戒，2022，19（6）：630-634.19 汪祺，闫明，马双成，等.基于定量构效关系的何首乌毒性单体成分预测 J .中国药物警戒，2021，18（4）：352-355，360.20 董立华，郭盼盼，闫文英，等.顺式二苯乙烯苷与反式二苯乙烯苷降血脂作用的对比 J.沈阳药科大学学报，2014，31（12）：989-992.（收稿日期：2023-03-15 编辑：田苗）1775