过敏原试剂盒说明书(精简版)【印刷版】.doc

过敏原体外检测试剂盒说明书 深圳市博卡生物技术有限公司
过敏原体外检测试剂盒
说明书

（本试剂盒仅用于体外诊断）

G02 8 T或12 T 2～8 ℃

用 途
本试剂盒可检测人血清或血浆中的总IgE抗体和过敏原特异性IgE抗体。本试剂盒的检测结果仅供参考，需要与患者的临床病史结合，以便对过敏性疾病作出正确的诊断。
概 述
过敏是免疫机制发动的超敏性反应。过敏可由抗体或细胞介导。对于大多数具有呼吸道、胃肠道或皮肤症状的患者，其过敏反应是由IgE抗体介导的。IgE能够与肥大细胞上的IgE受体特异性结合，并介导肥大细胞介质和前炎症因子的释放。
引起过敏反应的抗原称为过敏原。过敏原通过吸入、食入和接触等途径进入体内,引发各种各样的过敏性疾病。过敏原一般是蛋白质(常是糖蛋白)或能结合到蛋白质上的化合物(半抗原)。常见的过敏原包括花粉、螨、真菌、食物、药物以及昆虫毒素等。对于IgE致敏的患者，暴露于过敏原会导致多种疾病，例如鼻炎、结膜炎、哮喘、特应性湿疹、荨麻疹等，甚至会导致过敏性休克。
循环的总IgE抗体的高水平常与过敏反应有关。测定总IgE水平可提供有关总过敏反应负荷水平的信息及患者特应性状态的大体情况。特异性IgE抗体的产生是特应性个体受过敏原反复刺激的结果。测定过敏原特异性的循环IgE抗体能帮助确定致敏过敏原，预测未来发生过敏反应的危险并指导临床。
原 理
本试剂盒根据酶联免疫分析原理，采用间接法测定病人血清中的特异性IgE。具体如下：
（1）以微孔板为固相载体。过敏原与固相载体联接，形成固相抗原。而测定人总IgE的反应孔的包被物为抗人IgE抗体。
（2）固化于载体表面的抗原与病人血清一起孵育后，血清中的特异性IgE会特异地结合到过敏原上，形成抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性IgE抗体，血清中的非特异性IgE抗体及其它成份在洗涤过程中被洗去。
（3）加入生物素标记抗人IgE抗体。固相免疫复合物中的IgE抗体与生物素标记抗人IgE抗体结合。
（4）洗涤后，加入辣根过氧化物酶-链亲和素结合物。该结合物可与生物素标记抗人IgE抗体结合。洗涤后，固相载体上的酶量与标本中的受检抗体的量呈正相关。
（5）再次洗涤后，加入底物进行显色。显色一段时间后，加入终止液终止反应。颜色的深浅与血清中的特异性IgE抗体成正比。用酶标仪检测反应产物吸光度。反应孔的OD值与标本中过敏原特异性IgE 抗体的滴度呈正相关。
试剂盒组成
名 称
12T
8T
预包被过敏原酶标板
生物素标记抗人IgE抗体
辣根过氧化物酶结合物
浓缩洗涤液
终止液
显色剂A
显色剂B
样本稀释液
不干胶纸
使用说明书
8×12
2×5 ml
2×5 ml
2×25 ml
1×5 ml
1×5 ml
1×5 ml
1×5 ml
1张
1份
12×8
2×5 ml
2×5 ml
2×25 ml
1×5 ml
1×5 ml
1×5 ml
1×5 ml
1张
1份
试剂盒组成说明：
○ 预包被过敏原酶标板
每个试剂盒的预包被过敏原酶标板都装在有干燥剂的密封铝箔袋中。12人份（12 T）试剂盒的酶标板规格为8孔/条×12条；8人份（8 T）试剂盒的酶标板规格为12孔/条×8条。
酶标板反应孔的过敏原组合，请参照试剂盒内标签。
○ 浓缩洗涤液（20×）
每瓶装有25 ml 浓缩洗涤液。使用前，25 ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释至500 ml，并
充分混匀。如果浓缩洗涤液出现沉淀，可将瓶子置于37℃水浴箱中，进行溶解。
操作步骤
1、所有试剂和酶标板平衡至室温。根据样本数量及要检测的过敏原种类，从铝箔袋中取出相应数量的酶标板板条，并作相应的标记。其余酶标板板条和干燥剂一同放回塑料密封袋中，并
密封好。稀释一定量的浓缩洗涤液备用。
2、使用样本稀释液两倍稀释血清样本。除空白孔
外，其它孔均加入100 ml稀释后的血清样本。
或者，先往各检测孔加入50 ml样本稀释液，再加入50 ml血清样本。空白孔加入100 ml样本稀释液。
3、轻轻摇动酶标板，注意不要使内容物流出反应孔。使用不干胶纸密封已加样的酶标板，并将其置于37℃水浴箱中孵育3 h。
4、甩掉酶标板微孔中的液体，用稀释好的洗涤缓冲液洗涤酶标板板条。每孔加200~300μL洗涤液，静止1分钟左右，甩掉酶标板微孔中的液体，拍干。手工洗板，至少洗涤三次。也可使用自动洗板机完成清洗步骤。清洗完毕后，将酶标板倒置，用吸水纸将剩余的水吸干。
5、往所有反应孔中加入100 ml（或者直接用试剂瓶垂直滴入两滴液体）生物素标记抗人IgE抗体，置37℃孵育1 h。至少洗涤三次，洗涤步骤同4。
6、往反应孔中加入100 ml(或者直接用试剂瓶垂直滴入两滴液体)辣根过氧化物酶-链亲和素结合物，置37℃孵育30分钟。至少洗涤三次，洗涤步骤同4。
7、往反应孔中加显色剂A、显色剂B各50 ml（或直接用试剂瓶先后垂直加入1滴显色剂A和显色剂B），置37℃孵育10分钟。每孔加入50 ml（或直接用试剂瓶滴入1滴液体）终止液终止反应。
8、用酶标仪选双波长450 nm和630 nm读取吸光度值。在加入终止液后，20分钟内必须用酶标仪读取完所有反应孔的吸光度值。
实验结果评价
样本反应孔的OD值减去空白对照孔的OD值，即OD值差值。根据OD值差值的大小判断特异性IgE的级别。
OD值差值 过敏原特异性IgE级别
<0.2 阴性（-）
0.2~0.5 弱阳性（+）
0.5~0.9 阳性（++）
0.9~1.5 强阳性（+++）
>1.5 特强阳性（++++）
因缺乏有关特异性IgE抗体和过敏原的国际标准，不同体外检测方法得到的结果不一定一致。所以应注意不同方法的差异性及相关性。
局限性
◇ 血清中过敏原特异性IgE水平仅能说明个体对已测过敏原的敏感性。但不能仅依靠检测血清中的过敏原特异性IgE水平，而必须结合临床病史和其它诊断手段才能确诊过敏症。
◇ 不同过敏原与特异性IgE的结合能力不同。因而尽管不同过敏原的检测结果相同，临床表现未必一致。
◇ 当总IgE值非常高，特异性IgE却非常低时，应谨慎解释结果。IgE 抗体水平升高不仅仅见于过敏性疾病患者，还可见于IgE 型骨髓瘤，肺部霉菌感染以及寄生虫感染的活动期。
◇ 患者服用抗过敏药及某些含抗过敏成份的感冒药将对检测结果造成影响。建议进行过敏反应体外检测前至少停药两天。
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