NGALR干扰抑制NF-κB通路阻断肾小管细胞上皮间充质转分化.pdf

微循环学杂 志,():C C H I N E S EJ O U R N A LO FM I C R O C I R C U L A T I O Nd o i:/j i s s n 微循环学杂 志 年第 卷第期基础与实验N G A L R干扰抑制N F B通路阻断肾小管细胞上皮间充质转分化方珣曾星若陈隆敏申江曼董艳吕会娟高思陈文莉 中图分类号R 文献标识码A 文章编号 ()【摘要】目的:分析中性粒细胞明胶酶相关脂钙蛋白受体(NG A L R)干扰对高糖诱导HK 细胞的活性和上皮间质细胞转分化(EMT)的影响及其机制.方法:将HK 细胞分成对照组(正常培养的HK 细胞)、模型组(用 mM高浓度的葡萄糖诱导HK 细胞 h)、s i NG A L RN C组(先用 mM高浓度的葡萄糖诱导HK 细胞 h,然后再转染s i N GA L RN C质粒 h)、s i N GA L R组(先用 mM高浓度的葡萄糖诱导HK 细胞 h,然后再转染NG A L R干扰质粒 h)、P D T C组(先用 mM高浓度的葡萄糖诱导HK 细胞 h,然后加入 M N F B抑制剂P D T C)、P D T Cs i NG A L R组(先用 mM高浓度的葡萄糖诱导HK 细胞 h,然后加入 M N F B抑制剂P D T C作用 h,再转染N G A L R干扰质粒 h).各组细胞均在、C O的环境中培养.C C K 法检测细胞增殖,q R T P C R检测NG A L Rm R NA,流式细胞术检测细胞凋亡,W e s t e r nB l o t检测NG A L R、N G A L蛋白和N F B通路蛋白(N F Bp 和p N F Bp )及EMT相关蛋白(S n a i l和V i m e n t i n)表达.结果:与对照组相比,模型组细胞增殖能力显著下降(P ),凋亡率上升(P ),NG A L R、N G A L、S n a i l、V i m e n t i n及N F Bp 磷酸化的蛋白表达均上升(P ).与模型组相比,s i NG A L R组和P D T C组细胞增殖能力显著上升(P ),凋亡率下降(P ),N GA L R、NG A L、S n a i l、V i m e n t i n及N F Bp 磷酸化的蛋白表达均下降(P ).与P D T C组相比,P D T Cs i N GA L R组变化趋势更加显著.结论:N GA L R干扰通过调控N F B通路阻断高糖诱导肾小管EMT,抑制细胞的异常增殖和凋亡,减轻肾小管损伤.【关键词】HK 细胞;中性粒细胞明胶酶相关的脂钙蛋白受体;N F B通路;上皮间充质细胞转分化N G A L RI n t e r f e r e n c eB l o c k sE p i t h e l i a lM e s e n c h y m a lT r a n s d i f f e r e n t i a t i o no fR e n a lT u b u l a rC e l l sb yI n h i b i t i n g t h eN F BP a t h w a yF ANGX u n,Z E NGX i n g r u o,CHE NL o n g m i n,S HE NJ i a n g m a n,D ONGY a n,L U H u i j u a n,GAOS i,CHE N W e n l iD e p a r t m e n to fR h e u m a t o l o g ya n dI mm u n o l o g y,T h eC e n t r a lH o s p i t a l o fWu h a n,T o n g j iM e d i c a lC o l l e g e,H u a z h o n gU n i v e r s i t yo f S c i e n c e a n dT e c h n o l o g y,Wu h a n ,C h i n a;C o r r e s p o n d i n ga u t h o r【A b s t r a c t】O b j e c t i v e:T o i n v e s t i g a t e t h e e f f e c t o f n e u t r o p h i l g e l a t i n a s e a s s o c i a t e d l i p o c a l i nr e c e p t o r(NG A L R)i n t e r f e r e n c eo nt h ea c t i v i t ya n de p i t h e l i a lm e s e n c h y m a l t r a n s d i f f e r e n t i a t i o n(EMT)o fHK c e l l si n d u c e db yh i g hg l u c o s ea n d i t sm e c h a n i s mM e t h o d:T h eHK c e l l sw e r ed i v i d e d i n t oc o n t r o l g r o u p,m o d e l g r o u p,s i NG A L RN Cg r o u p,s i NG A L Rg r o u p,P D T C(N F Bi n h i b i t o r)g r o u pa n dP D T Cs i N G A L Rg r o u p C C K a s s a yw a su s e dt od e t e c t c e l lp r o l i f e r a t i o n,q R T P C Rw a sp e r f o r m e dt od e t e c t t h em R NAe x p r e s s i o no fNG A L R,f l o wc y t o m e t r yw a s 基金项目武汉市卫健委医学科研项目(WX Y )作者单位华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院风湿免疫科,武汉 ;通讯作者,E m a i l:w h w e n l i c o m本文 收到,修回u s e dt od e t e c t a p o p t o s i s,W e s t e r nB l o tw a su s e dt od e t e c tp r o t e i ne x p r e s s i o no fNG A L R,N GA L,N F Bp a t h w a yp r o t e i n s(N F Bp a n dp N F Bp )a n dEMT r e l a t e dp r o t e i n s(S n a i la n dV i m e n t i n)R e s u l t s:C o m p a r e dw i t hc o n t r o l g r o u p,t h ep r o l i f e r a t i o nc a p a c i t yo fm o d e l c e l l sw a ss i g n i f i c a n t l yr e d u c e d(P ),t h ea p o p t o s i s r a t ew a si n c r e a s e d(P ),a n dt h ee x p r e s s i o n so fNG A L R,N G A L,S n a i l,V i m e n t i na n dp p /p p r o t e i n sw e r ei n c r e a s e d(P )C o m p a r e dw i t hm o d e l g r o u p,t h ep r o l i f e r a t i o na b i l i t yo fc e l l s i ns i N GA L Rg r o u p sa n dP D T Cg r o u p sw e r e i n c r e a s e ds i g n i f i c a n t l y(P ),t h ea p o p t o s i sr a t ew e r ed e c r e a s e d(P ),a n dt h ee x p r e s s i o n so fNG A L R,NG A L,S n a i l,V i m e n t i na n dp p /p p r o t e i n sw r ed e c r e a s e d(P )T h et r e n dw a sm o r es i g n i f i c a n t i nP D T Cs i N GA L Rg r o u pc o m p a r e d t o t h eP D T Cg r o u p C o n c l u s i o n:NG A L Ri n t e r f e r e n c e c a nb l o c kh i g hg l u c o s e i n d u c e de p i t h e l i a lm e s e n c h y m a l t r a n s d i f f e r e n t i a t i o ni nr e n a l t u b u l a rc e l l sb yr e g u l a t i n gt h eN F Bp a t h w a y,t h e r e b y i n h i b i t i n ga b n o r m a l c e l lp r o l i f e r a t i o na n da p o p t o s i s t or e l i e v er e n a l t u b u l e i n j u r y【K e yw o r d s】HK c e l l s;N e u t r o p h i l g e l a t i n a s e a s s o c i a t e d l i p o c a l i nr e c e p t o r;N F Bp a t h w a y;E p i t h e l i a lm e s e n c h y m a l t r a n s d i f f e r e n t i a t i o n微循环学杂 志 年第 卷第期基础与实验高糖饮食会诱发型糖尿病和肥胖,严重威胁人类健康.研究表明,在喂食高糖饮食的果蝇幼虫体内,免疫反应途径和先天免疫系统均被异常激活,大量细胞凋亡.狼疮性肾炎是一种潜在具有致命危害的自身免疫性疾病,目前的治疗方法无效且通常具有较严重的毒副作用.自 年世界卫生组织引入狼疮性肾炎组织学分类以来,对狼疮性肾炎的关注都集中在肾小球损伤上,而临床实验在近三分之一的儿童狼疮性肾炎患者中发现了肾小管间质异常.狼疮性肾炎与小管间质病变的关系比与肾小球纤维化的关系更密切,肾小管和肾间质是其主要靶点.肾脏中成熟的肾小管上皮细胞上皮间充质转化(EMT)是肾脏中高糖毒性的特征表现,且与肾小管间质纤维化进展高度相关.肾小管上皮细胞可通过EMT转为肌成纤维细胞,进入间质合成细胞外基质,阻断EMT可以抑制疾病进程,.中性粒细胞明胶酶相关脂钙蛋白(NGA L)及其受体(NGA L R)均属于糖蛋白的一种,并且与先天免疫系统有关,已在多种疾病中检测到表达水平增加,被证明可预测肾小管损伤.本课题组前期研究结果显示,狼疮性肾炎患者血液、尿液及肾组织中NGA L和NGA L R表达水平显著高于非狼疮性肾炎患者,且尿液中NGA L R的表达水平与狼疮活动指标呈正相关.有研究证实NGA L可调控N F B/S n a i l信号通路上游启动子,而激活的N F B通路能诱导肾脏炎症反应直接参与狼疮性肾炎和EMT,.但NGA L R对N F B的调控作用及在狼疮性肾炎中的作用机制尚不明确.因此,本研究通过构建NGA L R干扰表达载体,结合N F B通路抑制 剂,基 于 高 糖 诱 导 的 肾 小 管 上 皮 细 胞 评 估NGA L R通过调控N F B通路对细胞EMT的影响.探讨NGA L R在肾小管上皮细胞表型变化中的作用,进一步阐明NGA L/NGA L R对狼疮性肾炎发生发展的影响.材料与方法 主要试剂和仪器HK 人肾近曲小管细胞购自上海赛百慷公司,D e f i n e dK S FM来源于i C e l l(i C e l l h b),胰蛋白酶、C C K、D 无水葡萄糖、D 甘露醇、T w e e n 、R I P A(强)组织细胞快速裂解液、B C A蛋白浓度测定试剂盒购自北京索莱宝公司(T 、C A 、G 、M 、T 、R 、P C ),T r i z o l购自美国Am b i o n公司(),O p t i MEM购自美 国G i b c o公 司(),L i p o f e c t a m i n eR NA i MA X购自美国I n v i t r o g e n公司(),A n n e x i n V P E/AA D凋亡检测试剂 盒购自美国B D公司(),P V D F转移膜、化学发光试剂购于美国M i l l i p o r e公司(I P VH 、W B K L S ),抗体NGA L R、NGA L、p 、p p 、S n a i l、V i m e n t i n、GA P DH、G o a t a n t i R a b b i t I g G购于武汉B i o s w a m p公司(a b 、P A B 、P A B 、a b 、P A B 、P A B 、P A B 、S A B ).倒置荧光显微镜来源于L e i c a公司(DM I LL E D),酶标仪来源于杭州奥盛公司(AMR ),流式细胞仪来源于艾森仪器公司(N o v o C y t e),荧光定量P C R仪来源于B i o R a d公司(C F X C o n n e c t),全自动化学发光分析仪来源于上海天能仪器公司(T a n o n ).筛选高糖诱导细胞模型构建的最佳时间HK 用D e f i n e d K S FM培 养 基 置 于、C O培养箱中培养,倒置显微镜下观察细胞汇合N G A L R干扰抑制N F B通路阻断肾小管细胞上皮间充质转分化度达到 以上时,胰蛋白酶消化细胞,传代培养.取 处 于 对 数 生 长 期 的HK 细 胞,加 入 mM葡萄糖分别诱导、h,同时设置正常对照组(mM葡萄糖)和渗透压组(mM葡萄糖 mM甘露醇),置于、C O培养箱中培养,通过细胞活性和NGA L RmR NA表达确定高糖诱导最佳作用时间.与正常对照组和渗透压组相比,高糖诱导后各组细胞增殖能力下降(P),NGA L R mR NA相对表达水平上升(P).同时,高糖诱导构建模型的时间为 h时,细胞增殖能力趋于稳定,NGA L R mR NA相对表达水平最高.因此,高糖诱导细胞模型构建最佳作用时间为 h.见表.表高糖诱导对H K 细胞增殖活力和N G A L Rm R N A表达的影响(xs,n)组别细胞增殖活力(A n m)N GA L Rm R NA正常对照组 渗透压组 高糖诱导 h组 )高糖诱导 h组 )高糖诱导 h组 )高糖诱导 h组 )F值 注:与正常对照组比较,)P 微循环学杂 志 年第 卷第期基础与实验 NGA L R干扰慢病毒载体构建及细胞转染基于人NGA L R(G e n e I D:)的序列,构建干扰载体(s i NGA L R、s i NGA L R、s i NGA L R)及s i NGA L R N C(阴性对照).过程为:基因合成目的基因序列,进行引物退火获取基因片段.通过酶切反应体系进行载体线性化,将双酶切后的目的基因片段与载体进行连接,转化后进行阳性克隆鉴定.将酶切和P C R检测均为阳性的克隆子进行测序,将测序结果与N C B I中基因比对,检测是否成功构建.待接种于孔板的HK 细胞融合度为 时,取质粒和L i p o f e c t a m i n eR NA i MA X分别稀释于O p t i MEM中,两者混匀后室温孵育 m i n.将复合物加到含有细胞和新鲜培养基的培养板孔中,置于、C O培养箱中,转染 h后换新鲜培养基,继续培养 h.以未转染的HK 细胞为对照,q R T P C R检测NGA L R mR NA表达.转染NGA L R干扰慢病毒载体后,对照组、s i NGA L R、s i NGA L R、s i NGA L R和阴性 对照组细胞 中NGA L RmR NA的表达分别为()、()、()、()和().与对照组相比,转染s i NGA L R质粒的细胞NGA L R的mR NA相对表达均显著下降(F ,P ),阴性对照组无显著变化(P),即细胞成功转染s i NGA L R质粒.细胞分组实验细胞分为组:对照组,正常培养的HK 细胞;模型组,用 mM高浓度的葡萄糖诱导HK 细胞 h;s i NGA L RN C组,先用 mM高浓度的葡萄糖诱导HK 细胞 h,然后再转染s i NGA L RN C质粒 h;s i NGA L R组,先用 mM高浓度的葡萄糖诱导HK 细胞 h,然后再转染NGA L R干扰质粒 h;P D T C组,先用 mM高浓度的葡萄糖诱导HK 细胞 h,然后加入 M N F B抑制剂P D T C;P D T C s i NGA L R组,先用 mM高浓度的葡萄糖诱导HK 细胞 h,然后加入 M N F B抑制剂P D T C作用 h,再转染NGA L R干扰质粒 h.各组细胞均在、C O的环境中培养.C C K 法检测细胞增殖活力取各组HK 细胞悬液,调整浓度为 个细胞/孔接种于 孔板,每孔 l,在、C O培养箱中培养过夜,使细胞贴壁.用 mM葡萄糖和 mM甘露醇处理细胞,继续培养 h,向每孔加入 lC C K 溶液,培养 h.于 n m波长处检测各组细胞吸光度值代表细胞增殖活力.q R T P C R检测NGA L RmR NA表达收集各组待测HK 细胞,胰蛋白酶消化,离心后加入T r i z o l提取细胞总R NA,反转录获取c D NA,将制备好的c D NA进行P C R扩增.扩增体系为 m i n,s,s,s共 个循 环.以GA P DH为 内 参,采 用 C t计 算NGA L RmR NA相对表达水平.P C R引物由武汉天一华煜基因科技有限公司合成,序列为:NGA L R F:G T G AAGC G GC AG AT T GAG;NGA L R R:C AG G C T G G T AG C AG T G G C;GA P DH F:G G G AAA C T G T G G C G T GAT;GA P DH R:GAGT G GG T GT C GC T GT T GA.流式细胞仪检测细胞凋亡收集各组待测HK 细胞,取 个培养基重悬的细胞,离心重悬于 lP B S,加入lA n n e x i n V P E和l AA D,轻轻混匀,避光孵育 m i n,加入 lP B S,进行流式检测.方珣,曾星若,陈隆敏,等 W e s t e r nB l o t检测p N F Bp 、N F Bp 、S n a i l、NGA L R、NGA L和V i m e n t i n蛋白表达收集各组待测HK 细胞,每 个细胞加入含有 l蛋白酶和磷酸酶抑制剂的裂解液,充分裂解细胞,离心取上清液,用B C A试剂盒定量总蛋白.配置 的S D S P AG E凝胶,每孔上样 g蛋白进行电泳分离,转膜.在孵育过夜前,用脱脂奶粉室温下封闭 h.与稀释后的一抗()孵育 h,用含有T w e e n 的P B S洗涤膜三次,并与二抗()室温孵育 h.用E C L发 光 液 与 膜 接 触 检 测 印 迹.使 用T ANONG I S软件分析条带灰度值.统计学处理采用S P S S 软件进行统计分析.所有数据均进三次重复实验,以平均值标准差(xs)表示.多组间均数比较采用单因素方差分析,有差异者再行S t u d e n tst检验.P 为差异有统计学意义.结果 各组细胞增殖水平比较各组细胞增殖水平差异有统计学意义(P ).与对照组比较,模型组细胞增殖活力显著下降(t ,P ).与模型组比较,s i N G A L R组和P D T C组细胞增殖活力显著增加(t 、,P ).与P D T C组相比,P D T Cs i N G A L R组细胞增殖活力显著增加(t ,P ).见表.表各组细胞增殖能力和凋亡率(xs,n)组别细胞增殖活力(A n m)细胞凋亡率()对照组 模型组 )s i N GA L RN C组 s i N GA L R组 )P D T C组 )P D T Cs i N GA L R组 )F值 注:与对照组比较,)P ;与模型组比较,)P ;与P D T C组比较,)P 各组细胞凋亡率比较各组细胞凋亡率差异有统计学意义(P ).与对照组相比,模型组细胞凋亡率显著上升(t ,P ).与模型组相比,s i N G A L R组和P D T C组细胞凋亡率显著下降(t 、,P ).与P D T C组相比,P D T Cs i N G A L R组细胞凋亡率显著下降(t ,P ).见图和表.微循环学杂 志 年第 卷第期基础与实验图各组细胞凋亡情况(流式细胞术)N G A L R干扰抑制N F B通路阻断肾小管细胞上皮间充质转分化 各组 细胞p N F Bp 、N F Bp 、S n a i l、NGA L R、NGA L和V i m e n t i n蛋白表达水平比较各 组 细 胞p N F B p 、N F B p 、S n a i l、NGA L R、NGA L和V i m e n t i n蛋白表达水平差异均有统计学意义(P ).与对照组比较,模型组细胞中p N F Bp 、S n a i l、NGA L R、NGA L及V i m e n t i n蛋白表达均显著增加(t 、,P ).与模 型组比较,s i NGA L R组和P D T C组细胞中p N F Bp 、S n a i l、NGA L R、NGA L及V i m e n t i n蛋白表达均显著下降(t模型组v ss i N G A L R组 、,t模型组v sP D T C组 、,P ).与P D T C组比较,P D T Cs i NGA L R组细胞中p N F Bp 、S n a i l、NGA L R、NGA L及V i m e n t i n蛋白表达均显著下降(t 、,P ).见图和表.图各组细胞中p N F Bp 、N F Bp 、S n a i l、N G A L R、N G A L及V i m e n t i n蛋白水平(W e s t e r nB l o t)表各组细胞中p N F Bp 、N F Bp 、S n a i l、N G A L R、N G A L及V i m e n t i n蛋白相对表达表达变化(xs,n)组别p N F Bp /N F Bp S n a i lNGA L RN GA LV i m e n t i n对照组 模型组 )s i N GA L RN C组 s i N GA L R组 )P D T C组 )P D T Cs i N GA L R组 )F值 注:与对照组比较,)P ;与模型组比较,)P ;与P D T C组比较,)P 微循环学杂 志 年第 卷第期基础与实验讨论由于人口老龄化,肾脏疾病的患病率在世界范围内不断增加,并导致社会经济负担增加以及发病率和死亡率增加.狼疮性肾炎是一种累及多系统的自身免疫性疾病,主要由免疫复合物在肾小球内的形成和沉积引起.目前狼疮性肾炎的治疗主要以糖皮质激素和免疫抑制剂为主,但对部分患者的临床缓解和复发抑制效果差.因此,需要新型的靶向生物制剂准确及时地监测狼疮性肾炎的发生发展.NGA L是早期诊断急性肾损伤和预测肾脏预后的极佳生物标志物.与健康对照相比,系统性红斑狼疮患者的血清NGA L水平显著升高,其中与非狼疮性肾炎患者相比,狼疮性肾炎患者的血清NGA L水平显著更高.NGA L R是NGA L特异性受体之一,在NGA L内吞过程中起着重要作用.与正常肾组织及其它类型肾小球肾炎相比,狼疮性肾炎的肾小球中NGA L R蛋白表达明显增高,阳性染色结果表明其主要分布在系膜.本研究中,与正常培养的人肾近曲小管细胞相比,高糖诱导损伤的细胞中NGA L R蛋白表达显著升高,与前期临床结果一致.而干扰NGA L R的表达后,与高糖诱导的细胞模型相比,细胞增殖活力上升,凋亡率下降,说明抑制NGA L R的表达能保护细胞正常生长,抑制非正常凋亡.研究表明,EMT是组织损伤后纤维形成的一个组成部分,在器官纤维化过程中EMT被异常激活,诱导上皮细胞附近间充质肌成纤维细胞的形成,然后聚集和分泌纤维促进因子,促进组织变性.EMT过程复杂,在此过程中上皮细胞失去极性并获得间充质特性.V i m e n t i n、S n a i l等作为关键诱导因子,以各种组合方式诱导促进间充质形态的基因表达,并抑制维持上皮状态的基因表达,促进细胞EMT发生.S n a i l活化可以上调V i m e n t i n进而诱导细胞骨架的改变介导EMT和成年转基因小方珣,曾星若,陈隆敏,等鼠的肾纤维化,而抑制S n a i l和V i m e n t i n表达能阻断EMT过程,降低细胞纤维化程度.本研究中,干扰NGA L R的表达后,细胞模型中S n a i l和V i m e n t i n表达均下调,说明NGA L R沉默抑制高糖诱导的细胞EMT过程,从而抑制细胞异常的表型转变.在间质纤维化、肾纤维化等过程中,N F B信号通路发挥着重要作用.同时,N F B信号通路的过度激活已被确定是EMT的关键诱导物.N F B是参与调节细胞活化、炎症和存活的关键转录因子,在炎症和癌 症的发展中 起着核心 作用.K i m等 研究发现,抑制N F B活化和p 磷酸化及易位到细胞核中,能下调间充质标志物、S n a i l的蛋白水平,抑制癌细胞迁移、侵袭和增殖.本研究中,N F B抑制剂作用于高糖诱导损伤细胞模型时,HK 细胞增殖能力增强,凋亡率、S n a i l和V i m e n t i n表 达 及N F Bp 磷 酸 化 水 平 均 下 降,且NGA L R、NGA L表达下调.同时,干扰NGA L R的表达后,HK 细胞N F Bp 磷酸化下调.这说明NGA L R沉默对N F B信号通路的激活有负反馈调节作用,从而抑制高糖诱导的HK 细胞EMT过程.综上所述,结合课题组的前期临床研究,提示NGA L R对狼疮性肾炎靶向治疗具有重要的理论意义和临床应用价值.其机制可能是NGA L R通过与NGA L结合,激活HK 细胞内部N F B信号通路,抑制EMT进程,减少HK 细胞异常凋亡.本文第一作者简介:方珣(),男,汉族,硕士,副主任医师,研究方向:系统性红斑狼疮,干燥综合征等微循环学杂 志 年第 卷第期基础与实验参考文献Y uS,Z h a n gG,J i nL HAh i g h s u g a rd i e ta f f e c t sc e l l u l a ra n dh u m o r a l i mm u n er e s p o n s e si n D r o s o p h i l aJE x p C e l lR e s,():WuC Y,C h i e nH P,Y a n gHY,e ta l R o l eo f t u b u l o i n t e r s t i t i a ll e s i o n s i np r e d i c t i n gr e n a lo u t c o m ea m o n gp e d i a t r i co n s e tl u p u sn e p h r i t i s Ar e t r o s p e c t i v e c o h o r t s t u d yJ JM i c r o b i o l I mm u n o lI n f e c t,():F uD,S e n o u t h a iS,W a n gJ,e ta l F KNF a c i l i t a t e sHK c e l lEMTa n dt u b u l o i n t e r s t i t i a l l e s i o n sv i at h e W n t/C a t e n i np a t h w a y i nam u r i n em o d e lo f l u p u sn e p h r i t i sJF r o n tI mm u n o l,:L i uZ,N a nP,G o n gY,e t a l E n d o p l a s m i c r e t i c u l u ms t r e s s t r i g g e r e df e r r o p t o s i sv i a t h eX B P H r d N r f p a t h w a y i n d u c e sEMTp r o g r e s s i o n i nd i a b e t i cn e p h r o p a t h yJB i o m e dP h a r m a c o t h e r,:M a r t i n e z S a l g a d oC,Sn c h e z J u a n e sF,Lp e z H e r nn d e zF J,e ta l E n d o t h e l i a l a c t i v i nr e c e p t o r l i k ek i n a s e(A L K)r e g u l a t e sm y o f i b r o b l a s te m e r g e n c ea n dp e r i t u b u l a r c a p i l l a r ys t a b i l i t y i nt h ee a r l ys t a g e so fk i d n e yf i b r o s i sJ F r o n tP h a r m a c o l,:M i y a n oT,S u z u k iA,S a k a m o t oN C a l c i u mi n f l u xt h r o u g hT R P V c h a n n e l si n v o l v ei nh y p e r o s m o t i cs t r e s s i n d u c e de p i t h e l i a l m e s e n c h y m a l t r a n s i t i o ni nt u b u l a re p i t h e l i a lc e l l sJB i o c h e mB i o p h y sR e sC o mm u n,(P t):S o n gY J,Z h a n g QY,W a n gL J,e ta l P r e l i m i n a r ys t u d yo n p/n e u t r o p h i lg e l a t i n a s e a s s o c i a t e dl i p o c a l i n(N GA L)f e r r o p t o s i si n h i b i t i o ni nr e n a lt u b u l a re p i t h e l i a lc e l l sJB i o e n g i n e e r e d,():曾星若,方珣,刘昌璇,等狼疮肾炎中N GA L/NGA L R的表达及临床意义J临床肾脏病杂志,():H s uS H,C h o uL F,H o n gC H,e t a l C r o s s t a l kb e t w e e nE C a d h e r i n/C a t e n i na n dN F Bs i g n a l i n gp a t h w a y s:T h er e g u l a t i o no fh o s t p a t h o g e ni n t e r a c t i o nd u r i n gl e p t o s p i r o s i sJ I n tJM o lS c i,():胡义阳,杨忠明积雪草酸通过调控N r f/N F B治疗MR L/l p r小鼠狼疮性肾炎的实验研究J中国免疫学杂志,():,张彦,金进,王黎,等 L I N C 调控N F B信号通路对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞EMT的影响J中国中西医结合肾病杂志,():,W a n gXH,G a oJ W,B a oJ P,e ta l GA TA p r o m o t e st h es e n e s c e n c eo fn u c l e u sp u l p o s u s c e l l sv i aN F Bp a t h w a yJ A r c hG e r o n t o lG e r i a t r,:W a n gY J,L iY X,L iS,e ta l P r o g r e s s i nt r a d i t i o n a lC h i n e s em e d i c i n ea n dn a t u r a l e x t r a c t s f o r t h e t r e a t m e n t o f l u p u sn e p h r i t i sJ B i o m e dP h a r m a c o t h e r,:张高福,王墨儿童狼疮性肾炎的生物制剂治疗现状J中华实用儿科临床杂志,():L iY J,W uHH,L i uS H,e ta l P o l y o m a v i r u sB K,B KV m i c r o R NA,a n du r i n a r yn e u t r o p h i lg e l a t i n a s e a s s o c i a t e dl i p o c a l i nc a nb eu s e da sp o t e n t i a l b i o m a r k e r s o f l u p u sn e p h r i t i sJ P L o SO n e,():e N a k h j a v a n iMR J,A b e d i a z a rS,G h o r b a n i h a g h j oA,e ta l T h ei m p o r t a n c eo fs e r u m n e u t r o p h i lg e l a t i n a s e a s s o c i a t e dl i p o c a l i nl e v e l i np a t i e n t sw i t hl u p u sn e p h r i t i sJJR e n a lI n jP r e v,():M a oS,J i a n gT,S h a n gG,e ta l I n c r e a s e 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