补气益精生血中药对人红系细胞组蛋白修饰酶的影响.pdf

实验论著补气益精生血中药对人红系细胞组蛋白修饰酶的影响陈珏璇,徐方蔚,卢焯明基金项目:广东省中医药局科研项目();广州市妇女儿童医疗中心内部基金(NK E P R E )作者单位:广州,广州市妇女儿童医疗中心作者简介:陈珏璇(),女,医学硕士,主治医师.研究方向:中药、针灸结合治疗儿童疾病通讯作者:卢焯明,E m a i l:q q c o m【摘要】目的观察补气益精生血中药对人红系K 细胞株组蛋白修饰酶的影响.方法运用补气益精生血、补气生血、益精生血的中药分别以高、低浓度对K 细胞株进行诱导,并以丁酸钠作阳性对照.以实时荧光定量聚合酶链式反应(P C R)检测细胞珠蛋白基因基因mR NA水平,采用酶标仪以比色法检测细胞组蛋白脱乙酰基酶(HD A C、HD A C),组蛋白乙酰基转移酶(HA T)酶活性水平,P C R方法检测HDA C、HDA C、HA T基因m R NA水平,W e s t e r nB l o t方法检测HD A C、HD A C、HA T蛋白水平.结果补气益精高剂量组、补气高剂量组、益精低剂量组中药及丁酸钠均显著提升了珠蛋白基因表达水平.补气益精高、低剂量组及益精高、低剂量组的细胞HA T酶活性水平均显著高于空白对照组,而丁酸钠组的HD A C 酶活性水平则显著低于空白对照组.对于HA T基因的m R NA水平,补气益精高、低剂量组,益精高剂量组显著高于空白对照组.W e s t e r nB l o t结果则只有补气益精高剂量组和益精高剂量组的HA T蛋白水平显著高于空白对照组.结论补气益精生血中药可能通过上调HA T基因的表达进而促进红系细胞内珠蛋白基因启动子区组蛋白的乙酰化修饰,其诱导珠蛋白基因表达治疗儿童地中海贫血的分子机制可能与调节组蛋白修饰酶有关.【关键词】地中海贫血;中医药疗法;珠蛋白基因表达;组蛋白修饰d o i:/j i s s n 【中图分类号】R 【文献标识码】A【文章编号】()T h e i m p a c t o fB u q iY i j i n gS h e n g x u eC h i n e s eh e r b a lm e d i c i n e s o nh i s t o n e m o d i f y i n g e n z y m e s i nh u m a ne r y t h r o i dc e l l s CHENJ u e x u a n,XUF a n g w e i,L UZ h u o m i n gG u a n g z h o uW o m e na n dC h i l d r e n sM e d i c a lC e n t e r,G u a n g z h o u ,C h i n a【A b s t r a c t】O b j e c t i v eT h i ss t u d ya i m st oi n v e s t i g a t et h ei m p a c to fB u q iY i j i n gS h e n g x u eC h i n e s eh e r b a lm e d i c i n e s,w h i c ha r ek n o w n f o r t h e i rg e n e r a t i n gb l o o db yt o n i f y i n gQ i a n db e n e f i t i n ge s s e n c ep r o p e r t i e s,o nh i s t o n e m o d i f y i n ge n z y m e s i n t h eh u m a ne r y t h r o i dK c e l l l i n e M e t h o d s K c e l l sw e r e i n d u c e dw i t hh i g ha n d l o wc o n c e n t r a t i o n so f s e v e r a l g r o u p so fC h i n e s eh e r b a lm e d i c i n e s,i n c l u d i n gB u q iY i j i n gS h e n g x u ed r u g s,B u q i S h e n g x u ed r u g s a n dY i j i n gS h e n g x u ed r u g s f o rb l o o dg e n e r a t i n g,a n ds o d i u mb u t y r a t ew a su s e da sap o s i t i v ec o n t r o l T h em R NAl e v e l so ft h e g l o b i ng e n ew e r ea s s e s s e du s i n gr e a l t i m ef l u o r e s c e n c eq u a n t i t a t i v eP C RA d d i t i o n a l l y,c e l l u l a rHD A C,HD A C,a n dHA Te n z y m ea c t i v i t y l e v e l sw e r ea n a l y z e du s i n ga ne n z y m em a r k e rb yc o l o r i m e t r i cd e t e c t i o nm e t h o d s T h em R NAl e v e l so fHD A C,HD A C,a n dHA Tg e n e sw e r ed e t e r m i n e du s i n g t h eP C Rm e t h o d,w h i l ep r o t e i n l e v e l so f t h e s eg e n e sw e r ed e t e r m i n e dv i aW e s t e r nB l o t R e s u l t s T r e a t m e n tw i t hC h i n e s eh e r b a lm e d i c i n ea n ds o d i u mb u t y r a t es i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e dt h ee x p r e s s i o nl e v e l so f t h e g l o b i ng e n e i nh i g h d o s eQ i t o n i f y i n ga n de s s e n c e b e n e f i t i n gg r o u p,h i g h d o s eQ i t o n i f y i n gg r o u p,a n dl o w d o s ee s s e n c e b e n e f i t i n gg r o u p C e l l u l a rHA T e n z y m ea c t i v i t yl e v e l sw e r en o t a b l yh i g h e r i nh i g ha n dl o w d o s eQ i t o n i f y i n ga n de s s e n c e b e n e f i t i n gg r o u p s,a sw e l la si nh i g ha n dl o w d o s ee s s e n c e b e n e f i t i n gg r o u p st h a ni nb l a n kc o n t r o lg r o u p,w h i l eHD A C e n z y m ea c t i v i t yl e v e l si nt h es o d i u mb u t y r a t eg r o u pw e r em a r k e d l yl o w e rt h a nt h o s er e c o r d e di nt h eb l a n kc o n t r o lg r o u p HA TmR NAl e v e l s中国中西医结合儿科学 年 月第 卷第期C h i nP e d i a t r I n t e g rT r a d i tW e s tM e d,O c t ,V o l ,N o w e r en o t a b l yh i g h e r i nh i g ha n d l o w d o s eQ i t o n i f y i n ga n de s s e n c e b e n e f i t i n gg r o u p s,a sw e l l a s i nh i g h d o s ee s s e n c e b e n e f i t i n gg r o u pt h a ni nb l a n kc o n t r o lg r o u p W e s t e r nB l o to u t c o m e sd e m o n s t r a t e dt h a to n l yt h eHA Tp r o t e i n l e v e l s i nt h eh i g h d o s eQ i t o n i f y i n ga n de s s e n c e b e n e f i t i n gg r o u pa n dh i g h d o s ee s s e n c e b e n e f i t i n gg r o u pw e r ec o n s i d e r a b l ye l e v a t e dc o m p a r e dt ot h o s e i nt h eb l a n kc o n t r o lg r o u p C o n c l u s i o nT h em o l e c u l a rm e c h a n i s mo fB u q iY i j i n gS h e n g x u eC h i n e s eh e r b a lm e d i c i n e s i nt h e i n d u c t i o no f g l o b i n i ng e n ee x p r e s s i o ni nt h e t r e a t m e n t o f p e d i a t r i c t h a l a s s e m i am a yb e r e l a t e d t o t h e r e g u l a t i o no f t h eh i s t o n e m o d i f y i n ge n z y m e,w h i c hm a yb em e d i a t e db yu p r e g u l a t i n g t h e e x p r e s s i o no f h i s t o n e a c e t y l t r a n s f e r a s eHA Tt oe n h a n c eh i s t o n em o d i f i c a t i o n i ne r y t h r o i dc e l l s【K e y w o r d s】t h a l a s s e m i a;T CMt h e r a p y;g l o b i ng e n ee x p r e s s i o n;H i s t o n em o d i f i c a t i o n地中海贫血在我国南方及多个热带亚热带国家高发,严重危害儿童健康 .目前的婚检产检手段对于家族史不详的轻型地中海贫血未必能做出准确的筛查,如父母均为轻型地中海贫血,即有可能生出中间型或重型地中海贫血患儿.这部分患儿常常需要规律输血及除铁,这些均为治标手段,且存在较多不良反应,对于我国及发展中国家的患者和政府公共卫生支出也是巨大的负担 .目前我国每年仍有相当数量的地中海贫血患儿不断降生,而现存的很多地中海贫血患儿也尚未能得到很有效的治疗,这既是当今医学的难题,也成为重要的社会问题.对于珠蛋白基因缺陷的地中海贫血而言,诱导珠蛋白表达以代偿珠蛋白功能是其重要的新型治疗手段,但目前各种诱导西药均有免疫抑制等明显副作用 .我们既往发现健脾补气生血的中药黄芪、党参及补肾益精生血的中药龟板等可激活人类红系细胞株珠蛋白基因的表达.随后的临床研究显示上述中药组成的补气益精生血方药对儿童地中海贫血有良好疗效且副作用小,能有效诱导患儿珠蛋白基因的表达、合成胎儿血红蛋白而发挥代偿正常血红蛋白的作用 ,其诱导机制与激活p 丝裂原活化的蛋白激酶(m i t o g e na c t i v a t e dp r o t e i nk i n a s e,MA P K)信号通路 等有关.我们的前期体外研究还提示中药可通过p MA P K通路增强珠蛋白基因启动子区组蛋白磷酸化乙酰化修饰,使相关区域染色质结构松散而基因易于转录.至于中药是否通过影响组蛋白酶从而提高修饰水平,目前尚未明了.本研究在既往基础上继续深入,观察本课题中药能否影响人红系细胞组蛋白修饰酶相关指标,包括组蛋白 脱乙酰基酶(h i s t o n ed e a c e t y l a s e,HD A C)中的H D A C、H D A C,组蛋白乙酰基转移酶(h i s t o n e a c e t y l t r a n s f e r a s e,HA T),以期进一步从表观遗传角度揭示中药治疗地中海贫血的分子机制.材料与方法 材料 细胞株目前永生化的人红系细胞K 为研究珠蛋白基因表达及胎儿血红蛋白诱导的常用工具,本研究选用K 细胞株作为研究对象,由广州致邦生 物 科 技 有 限 公 司 提 供 赛 库 生 物(C e l l C o o k),货号C C .药物黄芪、龟板、党参 水提物(补气益精生血中药),黄芪、党参 水提物(补气生血中药)以及龟板水提物(益精生血中药)分别按 g/L及 g/L的浓度委托广州中医药大学中西医结合基础研究中心以水提法进行制备.丁酸钠(S i g m a公司).试剂T r i z o l试剂(T h e r m oF i s h e r公司);胎牛血清、R PM I中性 培养基(G I B C O公司);P r i m e S c r i p tTMR Tr e a g e n tK i tw i t hg D NA E r a s e r逆转录试剂盒、T BG r e e nP r e m i xE xT a q荧光定量P C R试 剂 盒(T a K a R a公 司);E p i Q u i kTMm AR NA M e t h y l a t i o nQ u a n t i f i c a t i o nK i t试剂盒(E P I G E NT E K公司);R I P A裂解液、聚丙烯酰胺凝胶(碧云天公司);二喹啉甲酸蛋白定量试剂盒(美仑生物公司);I g G二抗、HD A C 一抗,HD A C 一抗、HAT一抗(A b c a m公司);超敏化学发光试剂盒(M i l l i p o r e公司).仪器匀浆机(I KA公司);冰箱(N B S公司);高速低温离心机(科大创新公司);微量移液器(G I L S ON公司);全自动实时荧光定量P C R仪(B I O R A D公司);酶标仪(P e r k i n E l m e r公司);蛋白电泳仪(B I O R A D公司);显影仪成像分析系统(UV P公司).研究方法 分组及加药K 细胞株取等份,根据我们前期浓度梯度及时间梯度预实验得出的高、低诱导浓度与最佳诱导时间,按以下组分别加药:()以 g/L黄芪、龟板、党参水提物诱导 h的为补气益精低剂量组;()以 g/L黄芪、龟板、党参水提物诱导 h的为补气益精高剂量组;()以 g/L黄芪、党参水提物诱导 h的为补气低剂量组;()以 g/L黄芪、党参水提物诱导 h的为补气高剂量组;中国中西医结合儿科学 年 月第 卷第期C h i nP e d i a t r I n t e g rT r a d i tW e s tM e d,O c t ,V o l ,N o ()以 g/L龟板水提物诱导 h的为益精低剂量组;()以 g/L龟板水提物诱导 h的为益精高剂量组;()以 m o l/L丁酸钠诱导 h的为阳性对照组(丁酸钠组);()未加药处理的为空白对照组.珠蛋白基因表达水平检测诱导结束后收集各组细胞.从G e n b a n k查得珠蛋白基因序列,设 计 引 物 如 下:F o r w a r d:G G C AA C C T GT C C T C T G C C T C ,R e v e r s e:GAA AT GGATT G CC AAAA CG G .以T r i z o l裂解K 细胞,加氯仿抽提总R NA,利用P r i m e S c r i p tR T逆转录酶逆转录合成c D NA,以c D NA为模板,实时P C R扩增基因核酸.采用T BG r e e n作为荧光素分子标志,实时读取荧光强度并自动描出各样本扩增曲线.根 据C t值、标 准 曲 线 以 及 以 内 参 基 因GA P DH核酸量矫正,算出每个样本基因的核酸拷贝数.实验重复次.HD A C、HD A C、HAT活性检测提取细胞总R NA.制备缓冲液、抗体溶液、增强剂溶液及阳性对照品,制备标准曲线.按照说明书添加稀释液体、培养及进行酶反应.反应终止后在 n m处读取吸光度.用专门公式计算m A在总R NA中的含量.HD A C、HD A C、HAT基因mR NA水平检测HD A C 引物如下:F o r w a r d:C G C T C CAT CC G T C C A GAT AA C AT G ,R e v e r s e:G C CA C A GAA C C A C C A G T A GA C AA C .HD A C 引 物 如 下:F o r w a r d:C GA G C A T C AGA C AAG C G G AT A G C ,R e v e r s e:AG CC A CAT T T C T T C G A C C T C C T T C .HAT引物如下:F o r w a r d:G T CT G GAATG C TG T GT G C T G G AG ,R e v e r s e:G C C G C C G T GAG TC T TC T TG T AC .其余方法同 .H D A C、H D A C、H A T蛋白水平检测裂解K 细胞,提取总蛋白,二喹啉甲酸蛋白浓度测定,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白,转聚偏二氟乙烯膜.封闭洗涤后,分别以HD A C、HD A C、HAT的一抗、二抗先后与蛋白孵育杂交,以GA P DH蛋白为内参照,使用超敏化学发光试剂盒曝光显影,通过显影仪分析系统分析每个样本目的蛋白条带与内参照条带的积分光密度值(i n t e g r a t e do p t i c a l d e n s i t y,I O D)比值.统计学方法原始数据录入采用S P S S 软件,符合正态分布的计量资料以xs表示,各指标进行组间比较,均采用ANOVA单因素方差分析.P 为差异有统计学意义.结果 珠蛋白基因mR NA水平经内参基因核酸量矫正的珠蛋白基因mR NA的相对拷贝数见表.单因素方差分析结果显示,各组间差异有统计学意义(P ).其中补气益精高剂量组、补气高剂量组、益精低剂量组及丁酸钠组的珠蛋白基因mR NA水平均显著高于空白对照组,差异有统计学意义(P ).表各组珠蛋白基因m R NA水平(xs)组别n珠蛋白m R NA水平空白对照组 丁酸钠组 a补气益精低剂量组 补气益精高剂量组 b补气低剂量组 补气高剂量组 a益精低剂量组 b益精高剂量组 F P 注:与空白对照组比较,aP ,bP .HD A C、HD A C、HAT酶活性水平各组K 细 胞 经 酶 标 仪 比 色 法 测 定 的HD A C、HD A C、HAT酶活性水平见表.单因素方差分析结果显示,各组差异有统计学意义(P ).各中药组的HAT酶活性水平均高于空白对照组,其中,补气益精高、低剂量组及益精高、低剂量组与空白对照组比较差异有统计学意义(P ).丁酸钠组HD A C 酶活性水平显著低于空白对照组,差异有统计学意义(P ).HD A C、HD A C、HA T基因m R N A水平经内参基因核酸量矫正的珠蛋白基因mR NA的相对拷贝数见表.单因素方差分析结果显示,HA T基因组间比较差异有统计学意义(P ),其中补气益精高、低剂量组,益精高剂量组以及丁酸钠组均显著高 于 空 白 对 照 组,差 异 有 统 计 学 意 义(P ).HD A C、HD A C、HAT蛋 白 水 平各 组H D A C、H D A C 的W e s t e r nB l o t蛋白条带经内参照蛋白矫正的I O D比值比较差异无统计学意义(P ).HA T蛋白组间比较差异有统计学意义(P ),其中补气益精高剂量组和益精高剂量组显著高于空白对照组,差异有统计学意义(P ).HAT蛋白及内参蛋白条带见图.中国中西医结合儿科学 年 月第 卷第期C h i nP e d i a t r I n t e g rT r a d i tW e s tM e d,O c t ,V o l ,N o 表各组HD A C、HD A C、HA T酶活性水平(xs)组别nHD A C 酶HD A C 酶HA T酶空白对照组 丁酸钠组 a 补气益精低剂量组 b补气益精高剂量组 b补气低剂量组 补气高剂量组 益精低剂量组 a益精高剂量组 bF P 注:与空白对照组比较,aP ,bP .表HD A C、HD A C、HA T基因m R NA水平(xs,c o p i e s)组别nHD A C基因HD A C基因HA T基因空白对照组 丁酸钠组 a补气益精低剂量组 b补气益精高剂量组 b补气低剂量组 补气高剂量组 益精低剂量组 益精高剂量组 bF P 注:与空白对照组比较,aP ,bP .图各组W e s t e r nB l o t蛋白条带图像讨论珠蛋白基因诱导是地中海贫血治疗手段的研究热点之一 .即通过药物或手段诱导胎儿珠蛋白基因在儿童期重新高表达,珠蛋白链与过剩的链结合生成胎儿血红蛋白(),一方面可在功能上弥补由于珠蛋白合成障碍所导致的正常成人血红蛋白的减少,另一方面结合过剩的链可纠正珠蛋白链的不平衡,减少四聚体对红细胞的损伤,减轻溶血及无效造血,从而改善贫血,减少并发症.现存为数不多的诱导西药均存在各种副作用,比如抑制免疫或抑制骨髓,或者价格昂贵、药效短暂等,可用于临床的还不多.近年我们把研究的目光转到了副作用较小的传统中医中药.我们前期对儿童地中海贫血的中医证候规律研究显示,儿童地中海贫血的主要证候是脾虚气血不足及肝肾阴精亏虚 ,继而我们拟定了健脾补气生血和补肾益精生血结合,即补气益精生血的核 心 治 法,并 结 合 课 题 组 的 系 列 体 外 实 验 结果,制定了以黄芪、党参、龟板组成的补气益精生血复方进行了多项临床研究.结果表明补气益精生血治法方药能有效提升地中海贫血患儿的总血红蛋白及胎儿血红蛋白水平,改善红细胞、平均血红蛋白含量等血液学指标及中医证候,也未发现有中国中西医结合儿科学 年 月第 卷第期C h i nP e d i a t r I n t e g rT r a d i tW e s tM e d,O c t ,V o l ,N o 抑制骨髓抑制或影响肝肾功能等副作用 ,.其起效机制与诱导珠蛋白基因表达合成胎儿血红蛋白、激活p MA P K信号通路以及调节相关红系转录因子等有关 ,.至于其下游对珠蛋白基因的表观遗传调控,课题组研究显示单味龟板以及黄芪多糖均可通过p MA P K信号通路提高珠蛋白基因启动子区组蛋白修饰水平,而启动子区组蛋白修饰水平高则基因更容易表达,达到诱导珠蛋白基因表达的目的.但中药是否通过影响组蛋白修饰的相关催化酶从而增强组蛋白修饰,目前还未明确.本实验结果显示,无论是中药还是阳性对照药丁酸钠,各用药组的珠蛋白基因mR NA水平均高于空白对照组,再次验证了本课题中药可诱导珠蛋白基因的表达.其中补气益精高剂量组和益精低剂量组诱导效果明显优于丁酸钠,而有部分中药组与空白对照组差异无统计学意义,可能与样本量较小及组内变异较大有关.组蛋白的乙酰化磷酸化等活性修饰可令染色质结构松 散,产 生 开 放 功 能 域,有 利 于 基 因 转 录.HD A C、HD A C 可抑制组蛋白的乙酰化,而HAT则会 增 强 组 蛋 白 的 乙 酰 化.人 类 在 新 生 儿 期 后HD A C逐渐使珠蛋白基因启动子区域的组蛋白去乙酰化,染色质结构致密,故珠蛋白基因不再表达,而使用丁酸钠等HD A C抑制剂则可恢复组蛋白乙酰化,从而促进珠蛋白基因的表达 .我们原本猜想中药可能与丁酸钠有类似抑制HD A C的效果,但实际实验结果显示中药却是提升了HAT的酶活性.我们进一步观察了人红系细胞内各乙酰化修饰酶基因的mR NA水平及蛋白水平,发现多组中药对HAT的mR NA转录表达均有显著性上调作用.而最终翻译后的蛋白水平,只有补气益精高剂量组及益精高剂量组可显著提升HAT蛋白表达.尤其是补气益精高剂量组,在HAT的酶活性、mR NA水平及蛋白水平三项指标上均有一致显著性的提升.这提示我们补气益精生血的中药可能通过上调HA T的表达进而促进红系细胞内珠蛋白基因启动子区组蛋白的乙酰化修饰,从而诱导珠蛋白基因的进一步表达.p MA P K通路是外源信号从细胞表面传导到核内染色质的重要传递者,它介导胞内蛋白激酶的级联反应,影响核内基因转录,活化的p MA P K可发生转位进入核内,将修饰信号逐级传递至珠蛋白基因启动子区域的组蛋白或相关转录因子,促进红系分化及诱导基因表达 .目前除我们课题组外,中药对人红系细胞p MA P K 组蛋白修饰路径影 响 的 研 究 鲜 见 报 道,下 一 步 实 验 可 设 立 以p MA P K特异抑制预处理的对照组,再观察中药对组蛋白修饰酶的影响,验证HAT水平的提升及乙酰化的增强确实依赖于上游的p MA P K的活化.我们的系列研究从表观遗传角度揭示中医药治疗地中海贫血的分子机制,为开发地中海贫血的国家中药新药提供实验依据,课题对于我国地中海贫血高发区具有较大的实用价值、广泛的应用前景及重要的社会意义,对研究人类发育阶段特异性的珠蛋白表达转换及人类表观遗传调控也将提供一定科学参考价值.参考文献X uA,C h e nW,X i eW,e t a l H e m o g l o b i nv a r i a n t s i ns o u t h e r nC h i n a:r e s u l t so b t a i n e dd u r i n gt h em e a s u r e m e n to fg l y c a t e dh e m o g l o b i n i nal a r g ep o p u l a t i o nJ C l i nC h e m L a b M e d,():中华医学会医学遗传学分会遗传病临床实践指南撰写组地中海贫血的临床实践指南J中华医学遗传学杂志,():M o t t a I,B o u F a k h r e d i nR,T a h e rA T,e t a l B e t a t h a l a s s e m i a:n e wt h e r a p e u t i co p t i o n sb e y o n d t r a n s f u s i o na n d i r o nc h e l a t i o nJ D r u g s,():A n d r i e u S o l e rC,S o l e rE Wh e nb a s i cs c i e n c er e a c h e s i n t or a t i o n a l t h e r a p e u t i c d e s i g n:f r o mh i s t o r i c a l t on o v e l l e a d s f o r t h et r e a t m e n to f g l o b i n o p a t h i e sJ C u r rO p i nH e m a t o l,():卢焯明地中海贫血的珠蛋白基因诱导疗法J中国实验血液学杂志,():郭志梅,李海军,钱新华龟板、黄芪、丹参和党参诱导K 细胞合成珠蛋白的实验研究J中国实验血液学杂志,():卢焯明,钱新华,张春红,等补气益精生血方药治疗儿童地中海贫血随机对照研究J中国中医药信息杂志,():L uZ,Q i a nX,Z h a n gC,e ta l R a d i x A s t r a g a l is t i m u l a t e sp MA R Kp h o s p h o r y l a t i o ni np e d i a t r i cp a t i e n t sw i t h t h a l a s s e m i aJ E v i dB a s e dC o m p l e m e n tA l t e r n a tM e d,:卢焯明,钱新华,张春红,等补气益精生血中药对地贫患儿p MA P K信号通路的影响J中药新药与临床药理,():Q i a nX,C h e nJ,Z h a oD,e ta l P l a s t r u mt e s t u d i n i s i n d u c e s g l o b i ng e n ee x p r e s s i o nt h r o u g he p i g e n e t i ch i s t o n em o d i f i c a t i o n sw i t h i nt h e g l o b i ng e n ep r o m o t e rv i aa c t i v a t i o no f t h ep MA P Ks i g n a l i n gp a t h w a yJ I n tJM o lM e d,():卢焯明,钱新华以聚类分析法研究儿童中间型地中海贫血的中医证候分布规律J中华中医药杂志,():卢焯明,张春红,陈致雯,等小儿重型地中海贫血的中医证候分布规律J中医儿科杂志,():杨敏,赵丹华,钱新华黄芪不同提取物对K 细胞向红系分化的诱导作用研究J解放军医学杂志,():中国中西医结合儿科学 年 月第 卷第期C h i nP e d i a t r I n t e g rT r a d i tW e s tM e d,O c t ,V o l ,N o Y a n gM,Q i a nXH,Z h a oDH,e t a l E f f e c t s o fA s t r a g a l u sp o l y s a c c h a r i d eo nt h ee r y t h r o i d l i n e a g ea n dm i c r o a r r a ya n a l y s i s i nK c e l l sJ JE t h n o p h a r m a c o l,():卢焯明,钱新华,陈致雯,等黄芪及其复方中药治疗小儿地中海贫血的前瞻性临床研究J中国当代儿科杂志,():卢焯明,张春红,杜广亮,等补气益精生血法治疗地中海贫血 例及对B C L A影响J福建中医药,():L e eWS,M c C o l l B,M a k s i m o v i c J,e t a l E p i g e n e t i c i n t e r p l a ya tt h e g l o b i nl o c u sJ B i o c h i m B i o p h y s A c t a G e n e R e g u lM e c h,():M a j c h r z a k C e l i s k aA,W a r y c hA,S z o s z k i e w i c zM N o v e la p p r o a c h e st oe p i g e n e t i ct h e r a p i e s:f r o md r u gc o m b i n a t i o n st oe p i g e n e t i ce d i t i n gJ G e n e s(B a s e l),():M a i k R a c h l i n eG,L i f s h i t sL,S e g e rR N u c l e a rP :r o l e si np h y s i o l o g i c a l a n dp a t h o l o g i c a l p r o c e s s e sa n dr e g u l a t i o no fn u c l e a r t r a n s l o c a t i o nJ I n t JM o lS c i,():P a c eB S,L i uL,L iB,e t a l C e l l s i g n a l i n gp a t h w a y s i n v o l v e d i nd r u g m e d i a t e df e t a lh e m o g l o b i ni n d u c t i o n:S t r a t e g i e st ot r e a ts i c k l ec e l ld i s e a s eJ E x pB i o lM e d(M a y w o o d),():(收稿日期:)(本文编辑:刘颖;外审专家:刘芳)综述基于阴阳学说探讨注意缺陷多动障碍发病机制李亚群,宋宇尘,韩新民,袁海霞基金资助:国家自然科学基金项目(,);江苏省高等学校自然科学基金面上项目(K J B );南京中医药大学自然科学基金青年项目(N Z Y );江苏省中医院优秀青年博士培养计划(Q B );王靖全国名老中医药传承工作室作者单位:江苏 泰州,泰州市中医院儿科(李亚群);南京,南京中医药大学儿科教研室(李亚群,宋宇尘,韩新民);南京,南京中医药大学附属医院儿科(韩新民,袁海霞)作者简介:李亚群(),男,医学博士,副主任中医师.研究方向:儿童精神神经系统疾病的研究通讯作者:袁海霞,E m a i l:y u a n h x c n h o t m a i l c o m【摘要】注意缺陷多动障碍是起病于儿童期的心身疾病,现代中医学者认为阴阳失衡是其基本病机,随着时代的变化,儿童饮食、情志等致病因素均发生了极大改变,阴阳在不断变化过程中,其病机从低基线水平阴阳失衡(阴不足致阳偏亢)发展为现今高基线水平阴阳失衡(阳偏亢耗伤阴液),临床证型从肝肾阴虚证为主要证型发展为以心肝火旺、痰火内扰为主要证型,治病必求于本,当首先清泻心肝之实热以达阴阳平衡,国内外实验研究采用系统生物学方法证实单胺类神经递质多巴胺和去甲肾上腺素合成、释放、清除之间、多巴胺D 样受体与D 样受体、促炎因子与抗炎因子之间相互拮抗、相互影响、相互调节的关系与中医阴阳平衡理论密切相关,目前正在研究多巴胺突触囊泡循环中促囊泡循环因子与抑制囊泡循环因子的关系,以期为注意缺陷多动障碍中医药治疗提供