急性大鼠心肌梗死实验模型的制备.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,大鼠心肌梗死实验模型的制备,背景,有关心肌梗死模型的制作，国内外采用结扎、药物、冷冻、栓塞、电凝等方法制作兔、大鼠、狗等不同动物的心肌梗死模型，但大多数学者认为结扎法复制的心肌梗死模型与心肌梗死实际发病过程更符合。,由于临床大多心肌缺血或心肌梗死都是一渐进性过程，会不断发生缺血或梗死后再灌现象。而冠状动脉结扎法能人为地仿造临床心肌梗死过程的冠状动脉梗死，其梗死部位、分布范围相对一致，病理生理、生化改变与临床心肌梗死更相似。,综上所述,结合实际操作条件,选用结扎大鼠冠状动脉结扎的方法,以建立稳定的、适于细胞移植治疗心肌梗死的大鼠动物模型。,建模原理,生物体各组织器官要维持其正常的生命活动，需要心脏不停地搏动以保证血运。而心脏作为一个泵血的肌性动力器官，本身也需要足够的营养和能源，供给心脏营养的血管系统，就是冠状动脉和静脉，也称冠脉循环。冠状动脉是供给心脏血液的动脉，起于主动脉根部,行于心脏表面。冠状静脉伴随 冠状动脉收集代谢后的静脉血，归流于冠状静脉窦，回到右心房。正常情况下，冠状动脉 之间，尚有丰富的吻合支或侧支。冠状动脉虽小，但血流量很大。占心排血量的,5%,，这就保证了心脏有足够的营养，维持它有力地昼夜不停地跳动。如果冠状动脉突然阻塞，不能很快建立侧支循环，常常导致心肌梗塞。但若冠状动脉阻塞是缓慢形 成的，则侧支可逐渐扩张，并可建立新的侧支循环，起代偿的作用。左冠状动脉为最大冠状动脉分支,.,主要供应左心室前壁和侧壁，其主要分支是左前降支和左回旋支,.,选用结扎鼠左冠状动脉前降支中上,1,3,处结扎的方法,冠状动脉突然阻塞，侧支循环不及起代偿的作用,.,以建立稳定的、适于细胞移植治疗心肌梗死,.,1,实验步骤和观察项目,1.1,实验动物健康雄性,Wistar,大鼠,30,只,体质量,250 25 g,制作心肌梗死动物模型的大鼠体重以,200,250 g,为宜（动物太小，不利于操作，耐受创伤能力低；而体重及鼠龄太大，则不利术后观察生存期，而且麻醉剂量不好掌握，凝血功能较差，不易止血。实验动物由广西医科大学实验中心提供。）,1.2,试验材料和药品,:,10%,水合氯醛溶液、青霉素注射液、碘伏、小动物呼吸机、心电图机、大白鼠手术板、,5ml,注射器,2,个、,7,号或,4,号针头、眼科剪、手术灯、眼科开睑器、小镊子、小弯钳、缝针、缝合线,(6-0,线,),、小无菌棉签,1.3,麻醉,SD,大鼠称重,(,两只,Wistar,大鼠体重各为,290g,及,360g),号鼠腹腔注射乌拉坦,1.45ml,号鼠腹腔注射,10%,水合氯醛,1ml,。,1.4,气管插管,大鼠仰卧固定于手术台上。,沿颈部中线切开皮肤，分离组织暴露气管，,用,7,号注射针头做为插管以,45,度斜进针从甲状软骨下缘轻轻水平插入约,0.71.5cm,斜面朝上。固定好,气管插管，呼吸比为,1,：,2,，呼吸频率,90,次,rain,，潮气量,14 ml,kg,。关闭呼吸机，四肢接心电图机记录术前心电图。完毕打开呼吸机，,(,此时作心电图与开胸后结扎前心电图对照,验证是否为先天变异或实验前异常心电图机未借到，所以心电图未能做,),甲状软骨下缘,1.5,开胸及冠状动脉结扎,心前区域剃毛,在心脏搏动最明显处,第三肋间隙水平开胸,皮肤切口约,1.5,2.0 cm,逐层钝性分离肌肉至胸膜。剪开胸膜,用眼科开睑器撑开肋间肌切口,以无菌棉球向下压迫左肺以保护肺脏剪开心包,用无菌棉签推开左心耳。在左心耳下距主动脉根部,2,3 mm,处,用,6-0,线穿过一小束心肌,并结扎。,(1),结扎后左室壁变苍白,并出现室壁运动减弱。,(2),术中结扎成功标识,:,心电监护见,II,导联,大鼠于结扎冠状动脉后,QRS,波峰降低，,J,点上移，,ST,段明显抬高,.,证明心肌缺血存在心肌梗死（证明结扎成功，心电图于结扎前与结扎后的心电图改变,排除手术操作造成人为性大鼠心肌缺血）。然后加大通气量,充分使肺复涨,并清理胸腔。,左心耳,在左心耳下距主动脉根部,2,3 mm,处可见一粉红色细小血管,1.6,关胸及术后处理,逐层关胸,断开呼吸机,清理呼吸道（拔出气管插管后应注意将大鼠舌头外提，防止舌根后坠出现缺氧窒息）并观察大鼠呼吸，以浅快呼吸，频率,3040,次,/min,为宜。术后单笼饲养。,注,:,手术过程中大鼠冠状动脉结扎后可能马上出现心律失常，室性停搏或心室纤维颤动，立即解除对心脏的挤压或同时进行心内按压可以使心脏恢复搏动。,1.7,术后抗感染及护理,大鼠本身具有比较强的抗感染能力，但是预防感染有利于促进术后恢复，并且良好的术后护理可以提高动物模型的生存率。因此，术前所用手术器械均要用,75,酒精浸泡消毒。术后腹腔注射青霉素,80,万,U,。待大鼠麻醉清醒后即可与其糖水和饲料，无须禁食。术后可适量补充能量。冬天应注意保嗳。,2,检测指标,2.1,术前和术中做的心电图,2.2,组织病理学检查,开胸结扎冠状动脉后,1d,、,2d,及,3 d,分批处死实验鼠。取其心脏，沿心脏纵轴剖开左右心室，用,10,福尔马林溶液固定,24 h,，然后垂直于心脏纵轴从心尖部至心底部分别横切,4,个切面，石蜡包埋，连续,5 um,厚度切片，,HE,染色，观察左室壁心肌组织的病理变化，确定心肌梗死的存在。,3,结果讨论,两只实验鼠死亡原因讨论：,号实验鼠在结扎冠状动脉时心脏停止跳动死亡号实验鼠在关闭胸腔时呼吸停止死亡,考虑以下可能原因：,.,鼠龄过大，适应手术能力较适龄鼠差，多篇文献提出实验鼠体重以,250 25 g,为宜，本次实验鼠体重分别为,290g,及,360g;,.,实验鼠体重较实验前预期的要重，麻醉剂有使用过量的可能，实验鼠术中出现呼吸抑制；,.,开睑器撑开术口压迫肺脏时间过长，可能存在气胸肺不张造成实验鼠缺氧；,.,压迫心脏时造成大血管移位扭转，重要脏器供血不足；,.,术中失血过多，造成血压下降，失血性休克；,.,结扎冠状动脉时部位未掌握好，结扎部位过高（结扎到左主干），大鼠出现严重心律失常乃至心跳骤停，尽管已施以胸外按压等抢救措施，但是最终没有成功使实验鼠复苏；,.,呼吸机频率和潮气量没有掌握好；,.,时值冬季，气温较低，手术操作时间较长，开胸后实验鼠体温丧失较大，存在低体温、手术和麻醉多重打击。,