补肺填精方对大鼠薄型子宫内膜容受性的实验研究.pdf

基金项目:新疆维吾尔自治区自然科学基金青年基金项目(2 0 2 1 D 0 1 C 4 4 9)作者简介:张秋梅(1 9 8 7-),女,硕士,副主任医师,研究方向:中医妇科及生殖障碍类疾病。通信作者:宋国宏,硕士,主任医师,副教授、博士生导师,研究方向:中医妇科及生殖障碍类疾病,E-m a i l:2 5 2 8 7 2 5 6 4 2q q.c o m。本文引用:张秋梅,顾仁艳,张小英,等.补肺填精方对大鼠薄型子宫内膜容受性的实验研究J.新疆医科大学学报,2 0 2 3,4 6(1 1):1 5 2 6-1 5 3 2.d o i:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 9-5 5 5 1.2 0 2 3.1 1.0 2 0补肺填精方对大鼠薄型子宫内膜容受性的实验研究张秋梅,顾仁艳,张小英,宋国宏(新疆医科大学第五附属医院中医科,乌鲁木齐 8 3 0 0 1 1)摘要:目的 探讨补肺填精方对大鼠薄型子宫内膜容受性的影响。方法 选取未交配1 0周龄S D雌性大鼠,体重1 8 02 2 0 g。适应性喂养7 d后,连续阴道涂片HE染色1 0 d,筛选4 0只动情周期规则的S D大鼠。随机选取6只雌性大鼠作为正常对照组,其他3 4只雌性大鼠建立肺肾阴虚模型,造模成功后,随机选取6只作为肺肾阴虚组,其他造模成功的大鼠建立薄型子宫内膜大鼠模型,造模过程中死亡4只,造模成功的2 4只大鼠随机分为阴虚+薄型组(不予药物治疗)、中药低剂量组(1 3.6 5 gk g-1d-1,灌胃3 0 d)、中药高剂量组(2 7.3 gk g-1d-1,灌胃3 0 d)、西药组(戊酸雌二醇片0.1 1 m gk g-1d-1,灌胃3 0 d),每组6只。观察6组大鼠子宫内膜组织形态学变化、子 宫内膜纤维 化、环 腺 苷 酸(C y c l i c a d e n o s i n e m o n o p h o s p h a t e,c AM P)、环 磷 酸 鸟 苷(C y c l i c g u a n o s i n e m o n o p h o s p h a t e,c GM P)表达变化及m i R N A 1 3 5 a、人同源框蛋白A 1 0(H o m e o b o x A 1 0,HO X A 1 0)的m R N A表达变化。结果 与正常对照组比较,其余各组的子宫内膜厚度较薄,腺体较少,内膜连续性较差;除正常对照组外,中药高剂量组与其余各组比较,内膜更加完整,腺上皮及腔上皮细胞排列更整齐,腺体和毛细血管也明显增加。与正常对照组比较,肺肾阴虚组和阴虚+薄型组中的纤维化程度、不可溶性胶原纤维含量显著升高;中药高剂量组与其余各组比较,纤维化程度及不可溶性胶原纤维含量降低。与正常对照组比较,其余各组中的c AM P水平显著升高;与阴虚+薄型组比较,其余各组c AM P水平显著下降(P0.0 5)。与正常对照组比较,其余各组中的c GM P水平显著降低(P0.0 5);与阴虚+薄型组比较,其余各组c GM P水平显著升高(P0.0 5)。与正常对照组及肺肾阴虚组比较,其余各组中的m i R-1 3 5 a的m R N A表达水平显著升高(P0.0 5);与阴虚+薄型组比较,其余各组的m i R-1 3 5 a含量显著降低(P0.0 5)。与正常对照组及肺肾阴虚组比较,其余各组的HO X A 1 0 m R N A表达水平显著降低(P0.0 5);与阴虚+薄型 组比较,中药高 剂量组HO X A 1 0的m R N A表达水平显著升高(P0.0 5)。其中,与低剂量中药比较,高剂量中药效果更显著。结论 补肺填精方能有效改善大鼠薄型子宫内膜容受性,值得在临床推广。关键词:补肺填精方;薄型子宫内膜;容受性;实验中图分类号:R 2 8 5.5 文献标识码:A 文章编号:1 0 0 9-5 5 5 1(2 0 2 3)1 1-1 5 2 6-0 7d o i:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 9-5 5 5 1.2 0 2 3.1 1.0 2 0E x p e r i m e n t a l s t u d y o n r e c e p t i v i t y o f B u f e i T i a n j i n g R e c i p eo f t h i n e n d o m e t r i u m i n r a t sZ H A N G Q i u m e i,G U R e n y a n,Z A H N G X i a o y i n g,S O N G G u o h o n g(T h e F i f t h A f f i l i a t e d H o s p i t a l o f X i n j i a n g M e d i c a l U n i v e r s i t y,T r a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i c i n e D e p a r t m e n t,U r u m q i 8 3 0 0 1 1,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e T o e x p l o r e t h e e f f e c t o f B u f e i T i a n j i n g R e c i p e o n t h e r e c e p t i v i t y o f t h i n e n d o m e t r i u m i n r a t s.M e t h o d s U n m a t e d 1 0 w e e k o l d S D f e m a l e w i t h b o d y w e i g h t o f 1 8 0-2 2 0 g w e r e s e l e c t e d.A f t e r 7 d a y s o f a d a p t i v e f e e d i n g a n d 1 0 d a y s o f c o n t i n u o u s HE s t a i n i n g,4 0 S D r a t s w i t h r e g u l a r e s t r o u s c y c l e s 第4 6卷 第1 1期新 疆 医 科 大 学 学 报V o l.4 6 N o.1 1 2 0 2 3年1 1月J o u r n a l o f X i n j i a n g M e d i c a l U n i v e r s i t yN o v.2 0 2 3 w e r e s c r e e n e d.6 f e m a l e r a t s w e r e r a n d o m l y s e l e c t e d a s t h e n o r m a l c o n t r o l g r o u p,a n d t h e o t h e r 3 4 f e m a l e r a t s w e r e e s t a b l i s h e d a s l u n g-k i d n e y Y i n d e f i c i e n c y m o d e l.A f t e r s u c c e s s f u l m o d e l i n g,6 f e m a l e r a t s w e r e r a n d o m l y s e l e c t e d a s l u n g-k i d n e y Y i n d e f i c i e n c y g r o u p,a n d t h e o t h e r r a t s w i t h s u c c e s s f u l l y m o d e l i n g w e r e e s t a b l i s h e d a s t h i n e n d o m e t r i u m r a t m o d e l,4 o f w h i c h d i e d d u r i n g t h e m o d e l i n g p r o c e s s.T h e 2 4 r a t s w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o Y i n d e f i c i e n c y+t h i n t y p e g r o u p(w i t h o u t m e d i c a t i o n),l o w-d o s e g r o u p o f t r a d i t i o n a l C h i n e s e m e d i c i n e(1 3.6 5 gk g-1d-1,g a v a g e f o r 3 0 d a y s),h i g h-d o s e g r o u p o f t r a d i t i o n a l C h i n e s e m e d i-c i n e(2 7.3 gk g-1d-1,g a v a g e f o r 3 0 d a y s),a n d W e s t e r n m e d i c i n e g r o u p(0.1 1 m gk g-1d-1,g a-v a g e f o r 3 0 d a y s),6 r a t s p e r g r o u p.T h e e n d o m e t r i a l h i s t o m o r p h o l o g i c c h a n g e s,e n d o m e t r i a l f i b r o s i s,c y-c l i c a d e n o s i n e m o n o p h o s p h a t e(c AMP),c y c l i c g u a n o s i n e m o n o p h o s p h a t e(c GMP),a n d m i R NA 1 3 5 a i n 6 g r o u p s o f r a t s MR N A e x p r e s s i o n o f h u m a n h o m e o b o x p r o t e i n A 1 0(HO X A 1 0)w e r e o b s e r v e d.R e s u l t s C o m-p a r e d w i t h t h e n o r m a l c o n t r o l g r o u p,t h e o t h e r g r o u p s h a d t h i n n e r e n d o m e t r i a l t h i c k n e s s,f e w e r g l a n d s a n d p o o r e n d o m e t r i a l c o n t i n u i t y.I n a d d i t i o n t o t h e n o r m a l c o n t r o l g r o u p,c o m p a r e d w i t h t h e o t h e r g r o u p s,t h e e n d o m e t r i u m w a s m o r e c o m p l e t e,t h e g l a n d u l a r e p i t h e l i u m a n d c o e l o m i a l e p i t h e l i u m c e l l s w e r e a r r a n g e d m o r e n e a t l y,a n d t h e g l a n d s a n d c a p i l l a r i e s w e r e a l s o i n c r e a s e d s i g n i f i c a n t l y i n t h e h i g h-d o s e g r o u p.C o m-p a r e d w i t h t h e n o r m a l c o n t r o l g r o u p,t h e d e g r e e o f f i b r o s i s a n d i n s o l u b l e c o l l a g e n f i b e r c o n t e n t i n t h e l u n g a n d k i d n e y Y i n d e f i c i e n c y g r o u p a n d t h e l u n g a n d k i d n e y Y i n d e f i c i e n c y+t h i n e n d o m e t r i u m r a t m o d e l g r o u p w e r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d.C o m p a r e d w i t h o t h e r g r o u p s,t h e d e g r e e o f f i b r o s i s a n d i n s o l u b l e c o l l a-g e n f i b e r c o n t e n t i n t h e h i g h d o s e g r o u p w e r e d e c r e a s e d.C o m p a r e d w i t h n o r m a l c o n t r o l g r o u p,c AMP c o n-t e n t i n o t h e r g r o u p s w a s s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d.C o m p a r e d w i t h l u n g-k i d n e y Y i n d e f i c i e n c y+t h i n e n d o m e-t r i u m r a t m o d e l g r o u p,c AMP c o n t e n t i n o t h e r g r o u p s w a s s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h n o r m a l c o n t r o l g r o u p,c GMP c o n t e n t i n o t h e r g r o u p s w a s s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d(P0.0 5).C o m-p a r e d w i t h l u n g-k i d n e y-Y i n d e f i c i e n c y p l u s t h i n e n d o m e t r i a l r a t m o d e l g r o u p,c GMP c o n t e n t i n o t h e r g r o u p s w a s s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h n o r m a l c o n t r o l g r o u p a n d l u n g-k i d n e y Y i n d e f i c i e n c y g r o u p,t h e mR NA e x p r e s s i o n l e v e l o f m i R-1 3 5 a i n o t h e r g r o u p s w e r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h l u n g-k i d n e y-Y i n d e f i c i e n c y p l u s t h i n e n d o m e t r i a l r a t m o d e l g r o u p,t h e c o n t e n t o f m i R-1 3 5 a i n o t h e r g r o u p s w a s s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h n o r m a l c o n t r o l g r o u p a n d l u n g-k i d n e y Y i n d e f i c i e n c y g r o u p,HO X A 1 0 mR NA e x p r e s s i o n l e v e l i n o t h e r g r o u p s w a s s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h l u n g-k i d n e y-y i n d e f i c i e n c y+t h i n e n d o m e t r i u m r a t m o d e l g r o u p,t h e mR NA e x p r e s s i o n l e v e l o f HO X A 1 0 i n h i g h-d o s e C h i n e s e m e d i c i n e g r o u p w a s s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h l o w-d o s e C h i n e s e m e d i c i n e,t h e e f f e c t o f h i g h-d o s e C h i n e s e m e d i c i n e w a s m o r e s i g-n i f i c a n t.C o n c l u s i o n B u f e i T i a n j i n g R e c i p e c a n e f f e c t i v e l y i m p r o v e t h e r e c e p t i v i t y o f t h i n e n d o m e t r i u m i n r a t s,w h i c h i s w o r t h y o f c l i n i c a l p r o m o t i o n.K e y w o r d s:B u f e i T i a n j i n g R e c i p e;t h i n e n d o m e t r i u m;r e c e p t i v i t y;e x p e r i m e n t 胚胎着床成功的重要因素包括子宫内膜容受性和优质的胚胎1。人类辅助生殖技术(A s s i s t e d R e-p r o d u c t i v e T e c h n o l o g y,A R T)可得到优质胚胎,但只有2 0%3 0%的种植率,说明对妊娠结局产生重要影响的因素为子宫内膜的容受性2。子宫内膜容受性(E n d o m e t r i a l r e c e p t i v i t y,E R)是指子宫内膜对胚胎的接纳能力3。决定体外受精胚胎移植术成功与否的两项重要因素为E R和胚胎质量4。研究表明,中药复方能够通过调控子宫内膜的形态结构,介导E R相关基因及因子的表达,从而对E R进行改善5。本研究以肺肾阴虚薄型子宫内膜大鼠模型为研究对象,应用补肺填精方,对比常规西药治疗,分析补肺填精方对肺肾阴虚薄型子宫内膜大鼠模型的子宫形态、子宫内膜纤维化、环腺苷酸(C y c l i c a d e n-o s i n e m o n o p h o s p h a t e,c AMP)、环磷酸鸟苷(C y c l i c g u a n o s i n e m o n o p h o s p h a t e,c GMP)及人同源框蛋白A 1 0(H o m e o b o x A 1 0,HO X A 1 0)、m i R-1 3 5 a的影响,为自然周期或辅助生殖技术周期中的薄型子宫内膜患者的中医治疗提供参考依据。1 资料与方法1.1 实验材料1.1.1 动物来源 选取未交配1 0周龄S D雌性大鼠,由湖北省实验动物研究中心提供 动物许可证号:S C X K(鄂)2 0 2 0-0 0 1 8,饲养于新疆医科大学动物实验室,体重1 8 02 2 0 g。饲养条件 动物适应环境 7 d,自由饮水饮食,室温(2 21),湿度(4 07251 第1 1期 张秋梅,等:补肺填精方对大鼠薄型子宫内膜容受性的实验研究1 0)%,光照周期 1 2 h/1 2 h。适应性喂养7 d后,连续阴道涂片H E染色1 0 d,筛选4 0只动情周期规则的大鼠,造模过程中死亡4只。本动物实验通过新疆医科大学动物中心动物伦理委员会批准(审批号:I A C U C-2 0 2 1 0 2 0 2-1 1)。1.1.2 药物与仪器 补肺填精方(当归1 0 g、白芍1 0 g、熟地黄1 0 g、南沙参1 0 g、北沙参1 0 g、天冬、麦冬各1 0 g 等),由新疆医科大学第五附属医院中药房提供(批号分别为2 2 1 2 0 1、2 2 3 2 2 1 2 0 1、C 1 7 7 2 3 0 8 0 1、2 2 1 2 3 6 1 1 1 1/2 2 0 7 0 1、C 0 6 0 2 3 0 4 0 1、2 3 0 6 2 2 0 1等),戊酸雌二醇片(J 2 0 0 8 0 0 3 6)。病理切片机(厂家:德国L e i c a公司;型号:RM 2 0 1 6轮转式切片机)、环磷酸鸟苷(c GMP)酶联免疫吸附测定试剂盒(厂家:伊莱瑞特;货号:E-E L-0 0 8 3 c)、环磷酸腺苷(c AMP)酶联免疫吸附测定试剂盒(厂家:伊莱瑞特;货号:E-E L-0 0 5 6 c)、酶标仪(厂家:赛默飞世尔科技公司;型号:ml I S KANMK 3)、微量移液器(厂家:赛默飞世尔科技公司)、低速离心机(厂家:E p p e n d o r f;型号:5 7 0 2 R)1.2 建立模型 随机选取6只雌性大鼠作为正常对照组,其他3 4只雌性S D大鼠建立肺肾阴虚模型,采用烟熏+灌胃甲状腺素造模,3 0 m g/k g甲状腺素混悬液灌胃,灌胃1 0 d后,每天烟熏3 0 m i n,连续造模3 3 d。观察模型大鼠体质量降低、有呛咳、少食、易怒等症状体征的出现,同时c AMP水平升高,c GMP水平降低,表明大鼠肺肾阴虚造模成功6。随机选取6只作为肺肾阴虚组,其他2 8只造模成功的大鼠采用宫腔注射9 5%无水乙醇法再次建立薄型子宫内膜大鼠模型,观察形态学特点以评估造模情况7。1.3 分组 二次造模过程中死亡4只,其他2 4只雌性S D大鼠随机分为阴虚+薄型组、中药低剂量组、中药高剂量组、西药组,每组6只。阴虚+薄型组(不予药物治疗)。中药低剂量组(1 3.6 5 gk g-1d-1,灌胃3 0 d)、中药高剂量组(2 7.3 gk g-1d-1,灌胃3 0 d)、西药组(戊酸雌二醇片0.1 1 m gk g-1d-1,灌胃3 0 d)。1.4 苏木精-伊红(H E)染色观察子宫组织病理情况 应用4%多聚甲醛磷酸缓冲液对子宫组织标本进行固定,然后进行石蜡包埋、切片操作,经HE染色后在显微镜下对子宫组织病理变化进行观察。1.5 M a s s o n染色检测子宫内膜纤维化 子宫组织标本固定、石蜡包埋、切片操作同上。经 W e i g e r t铁苏木精染液染核、1%盐酸酒精分化、丽春红酸性品红染液染色、1%磷钼酸溶液分化、苯胺蓝染液复染、1%冰醋酸冲洗、9 5%酒精脱水、无水乙醇脱水、二甲苯透明、风干后中性树胶封片,镜检。1.6 酶联免疫吸附法(E n z y m e l i n k e d i mm u n o s o r-b e n t a s s a y,E L I S A)检测c AMP、c GMP水平 需平衡至室温后充分混匀,设空白孔、标准孔和待测样品孔。酶标板加样品、标准品和生物素化抗体工作液,加膜3 7孵育,洗板后加酶结合物工作液,再洗板、加显色剂避光孵育,最后加终止液并用酶标仪测各孔吸 光 度,并 根 据 标 准 曲 线 计 算 各 组c AMP和c GMP的含量。1.7 实时荧光定量P C R检测m i R N A 1 3 5 a、H O X A 1 0的m R N A相对表达水平 通过D NAMAN 软件设计m i R NA 1 3 5 a、HO X A 1 0、U 6和GA P DH荧光实时定量P C R引物。逆转录c D NA,经过q P C R反应,配制成2 0 u l体系混合均匀,9 5,1 0 m i n,9 5,1 5 s,6 0 6 0 s,9 5 1 5 s,4 0个循环。从而获得q P C R反应结果,采用2-C t方法用于结果量化计算。1.8 统计学处理 利用S P S S 2 5.0软件进行数据处理,计量资料采用均数标准差(x-s)表示,满足正态分布与方差齐性采用独立样本t检验,不满足正态分布则应用非参数检验,多重比较采用L S D法进 行 两 两 比 较,P 0.0 5为 差 异 具 有 统 计 学意义。2 结果2.1 各组大鼠子宫内膜组织形态学变化 正常对照组:子宫内膜呈波浪形,腺上皮细胞及腔上皮细胞形态正常,呈单层立方状,间质无水肿,血管及腺体数量较多;肺肾阴虚组:较正常对照组子宫内膜略有变薄,腺体数量减少;阴虚+薄型子宫内膜组:子宫壁全层均变薄,子宫内膜层较肌层更明显,内膜组织中血管和腺体稀疏;中药低剂量组:子宫内膜结构欠完整,腺上皮及腔上皮细胞呈矮柱状,腺体减少,毛细血管增多,内膜稍厚;中药高剂量组:子宫腔结构完整内膜比例增加,内膜连续呈波浪形,大部分腺上皮和腔上皮细胞完整,排列整齐,腺体和毛细血管增多;西药组:子宫腔结构不完整,内膜不连续,腺上皮和腔上皮细胞完整度较差,腺体和毛细血管增多,见图1。2.2 各组大鼠子宫内膜纤维化比较 与正常对照组大鼠比较,肺肾阴虚组纤维化程度及子宫组织中8251 新 疆 医 科 大 学 学 报第4 6卷 的不可溶性胶原纤维含量有所升高;与肺肾阴虚组大鼠比较,阴虚+薄型组中的纤维化程度及子宫组织中的不可溶性胶原纤维含量升高;在药物治疗后,纤维化程度及子宫组织中的不可溶性胶原纤维含量降低。中药高剂量组的治疗效果显著优于其余各组,见图2。正常对照组肺肾阴虚组阴虚+薄型组 中药低剂量组中药高剂量组西药组图1 不同分组大鼠子宫组织病理变化(1 0 0)正常对照组肺肾阴虚组阴虚+薄型组 中药低剂量组中药高剂量组西药组图2 不同分组大鼠子宫内膜纤维化(1 0 0)2.3 各组大鼠c AMP、c GMP 水平比较 与正常对照组比较,中药低剂量组、中药高剂量组、西药组中的c AMP水平显著升高;与肺肾阴虚组比较,中药低剂量组、中药高剂量组、西药组c AMP水平显著升高;与阴虚+薄型组比较,中药低剂量组、中药高剂量 组、西 药 组c AMP水 平 显 著 降 低(P均0.0 5),见图3 A、表1。与正常对照组比较,中药低剂量组、中药高剂量组、西药组中的c GMP水平显著降低;与肺肾阴虚组比较,中药低剂量组、中药高剂量组、西药组c GMP水平显著降低;与阴虚+薄型组比较,中药低剂量组、中药高剂量组、西药组c GMP水平显著升高(P均0.0 5),见图3 B、表1。9251 第1 1期 张秋梅,等:补肺填精方对大鼠薄型子宫内膜容受性的实验研究此外,各组大鼠质量变化,见表2。表1 各组大鼠c AM P、c GMP/(x-s)组别nC a m p/(n g/mL)C g m p/(p m o l/mL)正常对照组66.9 40.4 95 6.3 13.1 1肺肾阴虚组61 4.7 21.0 4*5 0.6 02.0 4*阴虚+薄型组65 4.6 64.5 3*#7.1 70.7 0*#中药低剂量组64 5.3 23.3 7*#1 3.7 01.5 7*#中药高剂量组64 0.5 52.2 4*#2 3.9 33.1 5*#西药组63 4.7 22.7 1*#O2 8.7 93.9 0*#F 1 3 3.9 1 6 6.7P 0.0 0 0 1 0.0 0 0 1 注:与正常对照组比较,*P0.0 5;与肺肾阴虚组比较,#P0.0 5;与阴虚+薄型组比较,P0.0 5;与中药低剂量组比较,P0.0 5;与中药高剂量组比较,OP0.0 5。2.4 各组大鼠m i R N A 1 3 5 a、H O X A 1 0的m R N A表达水平比较 与正常对照组比较,中药低剂量组、中药高剂量组、西药组中HO X A 1 0水平显著降低(P0.0 5)。与肺肾阴虚组比较,中药低剂量组、中药高剂量组、西药组的HO X A 1 0水平显著降低(P0.0 5)。与阴虚+薄型组比较,中药高剂量组和西药组中的HO X A 1 0的含量显著升高(P0.0 5),见图4 A、表3;与正常对照组、肺肾阴虚组比较,中药低剂量组、中药高剂量组、西药组中m i R-1 3 5 a水平均显著升高。与肺肾阴虚+薄型子宫内膜大鼠组比较,中药低剂量组、中药高剂量组、西药组中m i R-1 3 5 a水平显著下降(均P0.0 5),见图4 B、表3。表2 各组大鼠体质量变化/(g,x-s)组别n造模后体质量处死前体质量正常对照组61 7 6.3 38.5 02 8 5.6 72 0.9 8肺肾阴虚组61 4 8.0 07.9 4*2 4 9.6 75.5 1*阴虚+薄型组61 4 5.0 06.0 8*2 4 5.3 31 5.5 4*中药低剂量组61 5 3.6 75.1 3*2 8 2.6 78.0 2#中药高剂量组61 5 8.0 01 5.8 7*2 7 0.3 31 8.7 2西药组61 5 5.0 04.3 6*2 7 0.6 72 4.1 9F 4.6 6 7 2.9 1 7P 0.0 1 3 4 0.0 6 0 注:与正常对照组比较,*P0.0 5;与肺肾阴虚组比较,#P0.0 5;与阴虚+薄型组比较,P0.0 5。表3 各组大鼠m i R N A 1 3 5 a、H O X A 1 0的m R N A表达水平比较/(x-s)组别nHOXA 1 0 m i R NA 1 3 5 a 正常对照组61.1 60.1 71.0 60.1 2肺肾阴虚组60.8 30.0 9*1.4 60.0 8阴虚+薄型组60.2 90.0 5*#5.0 20.5 1*#中药低剂量组60.4 20.0 4*#3.9 90.3 6*#中药高剂量组60.4 60.1 5*#3.8 10.5 4*#西药组60.5 60.1 0*#2.6 00.4 2*#OF 2 4.5 4 4 8.7 9P 0.0 0 0 1 0.0 0 0 1 注:与正常对照组比较,*P0.0 5;与肺肾阴虚组比较,#P0.0 5;与阴虚+薄型组比较,P0.0 5;与中药低剂量组比较,P0.0 5;与中药高剂量组比较,OP0.0 5。注:与正常对照组比较,*P0.0 5;与肺肾阴虚组比较,#P0.0 5;与阴虚+薄型组比较,P0.0 5;表示与中药低剂量组比较,P0.0 5;表示与中药高剂量组比较,OP0.0 5。图3 各组大鼠子宫c AMP、c GMP水平比较0351 新 疆 医 科 大 学 学 报第4 6卷 注:A,HO X A 1 0的mR NA数据分析图;B,m i R-1 3 5 a的mR NA数据分析图。与正常对照组比较,*P0.0 5;与肺肾阴虚组比较,#P0.0 5;与阴虚+薄型组比较,P0.0 5;与中药低剂量组比较,P0.0 5;与中药高剂量组比较,OP0.0 5。图4 药物调节各组大鼠H O X A 1 0和m i R-1 3 5 a的m R N A相对表达水平比较3 讨论肾藏精,主生殖,子宫内膜容受性低下病位在肾,且多与肺、肝、脾相关,病性常为虚实夹杂。多数医家认为其主要病机为肾气不足,胞脉不畅,证多属于肾虚血瘀8。肾虚为本、肾脾亏虚是导致子宫内膜容受性差的因素9。肺乃娇脏,且为水之上源,因此治疗肾阴虚损时,应养肺润燥,促金生水。补肺填精方同时滋补肺肾二阴,从而达到金水相生,发挥养阴清肺、补肾养血、益气健脾之功效,药物组成:当归:补血活血、调和经血;白芍:养血调经、平肝止痛;熟地黄:补血填精;南沙参:养阴清肺、益胃生津、益气;北沙参:益胃生津,既能养肺胃之阴,也能清肺胃之热;天冬:滋阴润燥,清肺降火;麦冬:养阴生津、润肺清心,共同达到补肾润肺填阴之功效。本研究结果表明,补肺填精方能够通过改善子宫内膜形态,影响c AMP、c GMP以 及m i R NA 1 3 5 a、HO X A 1 0的mR NA表达,从而提升大鼠薄型子宫内膜容受性。子宫内膜厚度是子宫自身功能状况的一种体现,内膜达到一定厚度是受精卵顺利着床的前提。子宫内膜厚度可作为内膜容受性的临床检测指标之一1 0。有研究表明,应用补肾中药对薄型子宫内膜大鼠进行治疗后,大鼠的子宫内膜厚度明显增加,妊娠率显著提升1 1。本研究结果显示,与正常对照组比较,其余各组大鼠的子宫内膜厚度较薄,腺体较少,内膜连续性较差。中药高剂量组中大鼠内膜更加完整,多数腺上皮、腔上皮细胞排列较整齐,腺体和毛细血管数量也有所增加。提示补肺填精方通过促进阴虚+薄型子宫内膜大鼠的子宫内膜修复,提高其子宫内膜厚度及完整性,从而使E R得以提高。子宫内膜的发育是一个周期性事件,受到激素和生长因子 的严格调控1 2。“阴虚 则热,阳虚则寒”。现代研究表明,机体寒热状态的产生与环核苷酸动态水平变化密切相关1 3。环核苷酸中,c AMP和c GMP为细胞内第二信使,对于细胞活动具有重要调节作用1 4。c AMP和c GMP在动态平衡中维持着机体稳态1 5。有研究证实,中医辨证阳虚者,c AMP/c GMP比值明显降低,阴虚者体内c AMP水平升高1 6。本研究结果提示,在补肺填精方干预后,大鼠肺肾阴虚症状得以缓解,补肺填精方可以通过促进c GMP的表达,抑制c AMP的表达,最终达到滋阴清热之功效。HO X A-1 0基因是一种同源框转录调节因子,在 子 宫 内 膜 上 的 腺 细 胞 和 基 质 细 胞 中 高 度 表达2 0-2 1。本研究结果显示,与正常对照组比较,中药低剂量组、中药高剂量组、西药组中HO X A 1 0水平显著降低。与肺肾阴虚组比较,中药低剂量组、中药高剂量组、西药组的HO X A 1 0水平显著降低。与阴虚+薄型组比较,中药高剂量组和西药组中的HO X A 1 0的含量显著升高;与正常对照组、肺肾阴虚组比较,中药低剂量组、中药高剂量组、西药组中m i R-1 3 5 a水平均显著升高。提示,补肺填精方治疗可以通过上调HO X A 1 0,抑制m i R-1 3 5 a的表达,从而 改 善 子 宫 内 膜 容 受 性。分 析 原 因 可 能 为HO X A 1 0通过诱导其下游基因的激活或抑制发挥作用,调节整合素3、前列腺素系统、刺激基质细胞增生、调节免疫、调节P 5