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遗传学设计性实验方案

实验课题：果蝇有关性状的遗传学分析
一、目的和要求：
1、掌握处女果蝇和雌雄果蝇的选取方法；
2、掌握果蝇的性状遗传分析方法
3、了解由性染色体上基因所控制的性状分离规律；
4、要求能独立查阅相关资料，要求每组做正反交，并进行预假设和适合度检验。
5、掌握实验结果的统计分析方法
二、实验材料、试剂及仪器
（1）实验材料：长翅白眼、残翅红眼果蝇、玉米粉、糖、琼脂、酵母粉
（2）实验试剂：乙醚、苯甲酸、水
（3）实验仪器：40试管、白瓷板、毛刷、小烧杯、显微镜、解剖针、玻璃棒、量筒、电炉、旧报纸、高压蒸汽灭锅、试管架、标签纸橡皮筋、万分之一天平、麻醉瓶、培养瓶、培养皿、胶带、棉球
三、实验方法
1、培养基的制备
A、称量，配方及用量如下:
果蝇培养基成份（800ml）
蒸馏水
480ml
玉米粉
68g
糖
52g
琼脂
8.0g
丙酸（苯甲酸）
4.0ml (2.0g)
酵母粉
少许

B、溶解（一部分煮玉米粉，一部分溶琼脂）
C、分装 按要求将配置的培养基分装到试管，并标号为1—10号
D、加棉塞、包扎
E、高压蒸汽灭菌
加水——装物——加盖——排气——加热（121摄氏度20分钟）——取物
2、取材        
取亲本果蝇即野生型和白眼残翅型，并将原种瓶中的成虫全部清除。
3、果蝇的饲养
将装有果蝇的试管放在阴暗室温下饲养
4、处女蝇的鉴别与收集
此后隔6个小时收集刚羽化的成虫，并麻醉，将准确鉴别的雌性和雄性果蝇分别放入1号（♀）和2号（♂）试管中备用。（注♀：腹部背面有五条黑条纹； ♂：腹部背面有三条黑条纹，最后一条极宽，并延伸到腹面）
5、杂交
（1）、将1号管中的雌蝇麻醉后用鉴别雌性蛹的方法分离出处女蝇，并将长翅白眼处女蝇放在3号试管中，将残翅红眼处女蝇放在4号试管中。
（2）、处女蝇与雄果蝇正反交。按下述将2号管中相应雄蝇分离出来分别放入3、4号管中。
  正交：长翅白眼（♀）X残翅红眼（♂）  4对  （置于3号试管）
  反交：残翅红眼（♀）X长翅白眼（♂）  4对  （置于4号试管）
分别培养得到F1，贴上标签（注明亲本表现型、 杂交日期、实验者姓名）
（3）、将F1培养7天后，待幼虫出现后移去P亲本果蝇（记录日期），再过4天取出F1 观察其表型（眼色、翅形）统计各种性状，并挑出3号试管中F1的处女蝇（置于5号试管）和雄果蝇（置于6号试管）；挑出4号试管中F1的处女蝇（置于7号试管）和雄果蝇（置于8号试管）。
（4）、7天后移去F1成虫果蝇
（5）、将5号和6号的6对F1雌雄蝇（置于9号试管）做兄妹交；将7号和8号的6对F1雌雄蝇（置于10号试管）做兄妹交。（注明亲本表现型，日期，实验者姓名）
（6）、6～7d后清除F1代（记录日期）。
（7）、3～4d后，F2代成蝇出现，连续观察统计各种性状及性别比例，F3代出来后停止统计。
（8）、进行遗传分析
6、结果预估及分析
P: 1、长翅白眼（♀）X残翅红眼（♂）   2、残翅红眼（♀）X长翅白眼（♂）
↓                      ↓
F1: 红眼长翅（雌性）：白眼长翅（雄性）       雌雄全部为 红眼长翅
            1    ： 1
                         ↓ ↓
F2: 长翅红眼（♀）3|16  长翅红眼（♂）3|16  长翅红眼（♀）6|16长翅红眼（♂）3|16
长翅白眼（♀）3|16 长翅白眼（♂）3|16   长翅白眼（♂）3|16残翅红眼（♀）2|16
残翅红眼（♀）1|16  残翅红眼（♂）1|16   残翅红眼（♀）1|16  残翅白眼（♂）1|16     
残翅白眼（♀）1|16  残翅白眼（♂）1|16
长翅红眼:长翅白眼:残翅红眼:残翅白眼      长翅红眼:长翅白眼:残翅红眼:残翅白眼
3 : 3 : 1 : 1      9 : 3 : 3 : 1
如实将各代正反交的结果填入表格。将记录结果整理，分别做X2测验，看其是否符合遗传规律。记录好放飞时间（亲代和F1代），对结果进行分析。 
世代
统计日期
正交：长翅白眼（♀）X残翅红眼（♂）
反交：残翅红眼（♀）X长翅白眼（♂）
长翅红眼
长翅白眼
残翅红眼
残翅白眼
长翅红眼
长翅白眼
残翅红眼
残翅白眼
F1雌

F1雄

合计

F2雌

F2雄

合计

比例

χ2检测表
F2表型
长翅红眼
长翅白眼
残翅红眼
残翅白眼
合计
实验观察数（O）

理论数（E）

偏差（O-E）

（O-E）2/E

χ2=∑（O-E）2/E
χ2的定义为：   O是实测值；E是理论值；S是各项比值的总和
确定实得结果跟假设有显著性差异的概率水平：
   当P＜0.05时，存在显著性差异；
   当P＜0.01时，存在极显著差异；
   当P≤0.05时，没有显著性差异。
四、注意事项
1、 麻醉剂的使用：乙醚有毒, 挥发性强，使用时，要注意随时盖好瓶盖,防止乙醚挥发。
2、麻醉深度：麻醉果蝇时，要防止麻醉过度，影响继代培养。
3、雌雄果蝇的准确识别。
4、做好标记：新转移的培养瓶上需贴好标签，注明继代培养日期及实验者姓名。 
5、处女蝇的选择要准确。
6、若F1性状混杂，暂停；
7、培养基不够用，自行配制，注意配方和数量；