茶薪菇‘中菌白茶1号’选育.pdf

9 食用菌学报 2023.30（5）：2023.05.茶薪菇 中菌白茶1号 选育刘祈猛1，华 蓉1,2，孙达锋1，张俊波1，李建英1，刘春丽1，罗 熙1，刘绍雄1,2*（1中华全国供销合作总社昆明食用菌研究所，云南 昆明 650221；2云南省食用菌产业研究院，云南 昆明 650221）摘要：以茶薪菇（Cyclocybe chaxingu）菌株白茶 6 号为亲本进行单孢杂交育种，经初筛、复筛获得杂交菌株ZJCXG001，对其进行中试和示范栽培。结果表明，与菌株白茶6号相比，杂交菌株ZJCXG001子实体整齐度较高；菌盖直径适中，为（4.400.15）cm；菌柄较长，为（12.110.51）cm；产量较高，生物学效率为86.3%；第一潮菇采收时间较短，为（50.51.3）d。2022年10月20日，菌株ZJCXG001通过云南省非主要农作物品种鉴定，定名为中菌白茶1号。关键词：茶薪菇；单孢杂交；品种选育；工厂化栽培Breeding of a New Cyclocybe chaxingu Cultivar Zhongjunbaicha 1LIU Qimeng1,HUA Rong1,2,SUN Dafeng1,ZHANG Junbo1,LI Jianying1,LIU Chunli1,LUO Xi1,LIU Shaoxiong1,2*(1 Kunming Edible Fungi Institute of All China Federation of Supply and Marketing Cooperatives,Kunming 650221,Yunnan,China;2 Yunnan Academy of Edible Fungi Industry Development,Kunming 650021,Yunnan,China)Abstract:Using Cyclocybe chaxingu strain Baicha 6 as the parent,monospore inbreeding of new varieties was carried out.After preliminary and secondary screening,a hybrid strain named ZJCXG001 was selected for pilot and demonstrative production.The results showed that ZJCXG001 had higher uniformity of fruiting bodies compared with Baicha 6.ZJCXG001 showed moderate pileus diameter(4.400.15)cm,long stipes (12.110.51)cm,a high yield,and a biological efficiency of 86.3%.The harvesting time for the first tide of ZJCXG001 was short,which was(50.51.3)d after inoculation.On Oct 20,2022,ZJCXG001 passed the identification of non-major crop varieties in Yunnan Province and was named Zhongjunbaicha 1.Key words:Cyclocybe chaxingu;monospore inbreeding;variety breeding;factory cultivation 茶薪菇（Cyclocybe chaxingu）隶属于担子菌门（Basidomycota），蘑菇纲（Agaricomycetes），蘑菇目（Agaricales），假脐菇科（Tubariaceae），环伞属（Cyclocybe）1；别名油茶菇、茶菇等，商品名为茶树菇2。茶薪菇是我国大宗栽培的重要食用菌之一。据统计，2021年我国茶薪菇鲜菇产量为89.47万吨，在食用菌中位居第8，年产值约90亿元，具有重要的经济价值3-5。茶薪菇营养丰富、风味独特、口感极佳，具有清热、平肝、利尿和健脾等功效，素有“中华神菇”美誉6。茶薪菇具有高蛋白、低脂肪、低糖分等营养特性和抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、凝集红细胞等药理作用，广受消费者喜爱，具有广阔收稿日期：2023-04-04原稿；2023-05-31修改稿基金项目：国家重点研发计划课题（2022YFD1200602）；云南省创新引导与科技型企业培育计划（202204BP090012）；云南省科技人才与平台计划（202305AD160051)作者简介：刘祈猛（1993），男，硕士，助理研究员，主要从事食用菌育种与工厂化栽培研究。*本文通信作者 E-mail:917002 10 第 30 卷食 用 菌 学 报市场前景7-8。市场上的茶薪菇品种多为褐色，鲜有白色品种。至今，获国家审（认）定的茶薪菇品种有古茶1号（国品认菌2008033）、明杨3号（国品认菌2008034）、古茶988（国品认菌2008035）、赣茶AS-1（国品认菌2008036）、古茶2号（国品认菌2008037），皆为褐色品种9。与褐色茶薪菇品种相比，白色品种子实体致密、嫩脆爽口、味道鲜美、市场价值高，更受消费者青睐10；但白色品种易开伞、栽培周期长、抗病虫害能力差、产量低，生物学效率为65%75%11-12。因此，开展白色茶薪菇杂交品种选育，为规模化生产提供优良品种显得尤为重要。1 材料与方法1.1 供试菌株茶薪菇（C.chaxingu）菌株白茶6号保藏于中华全国供销合作总社昆明食用菌研究所食用菌种质资源库，为江西省广昌县栽培菌株，其子实体白色、易开伞，生物学效率约为70%。1.2 培养基PDA培养基：200 g马铃薯、20 g葡萄糖、1820 g琼脂粉、1 000 mL蒸馏水，pH7.0。一级种子液培养基：200 g马铃薯、20 g葡萄糖、3 g酵母粉、3 g磷酸二氢钾、1.5 g硫酸镁、10 mg维生素B1、1 000 mL蒸馏水，pH7.013。二级种子液培养基：2.4 kg葡萄糖，640 g大豆，80 g酵母粉，120 g磷酸二氢钾，60 g硫酸镁，1 g维生素B1，80 L蒸馏水13。栽培种培养料：40%木屑、30%玉米芯、18%麦麸、10%棉籽壳、2%石灰，含水量60%。1.3 单孢菌株分离和杂交参照刘祈猛14的方法分离白茶6号单孢菌株，随机将单孢菌株两两配对接种于PDA培养皿（直径9 cm）中，菌丝块（直径5 mm）相距1.5 cm，25 黑暗培养，待菌丝接触后，在菌丝结合处取菌丝块（直径3 mm）接种于PDA培养皿（直径6 cm）中，25 黑暗培养，显微镜镜检菌丝有锁状联合的表明杂交成功，将杂交菌株接种PDA试管并编号，25 黑暗培养后保藏。1.4 初筛 分别将杂交菌株菌丝块（直径5 mm）接种于PDA培养皿（直径9 cm）中，25 黑暗培养7 d，以菌丝长势为指标筛选优势杂交菌株，参照刘祈猛等13的方法进行栽培，每瓶接种30 mL一级种子液，挑选可出菇的菌株进行复筛。1.5 复筛 用塑料瓶（1 100 mL）装500 g栽培种培养料（湿重），每瓶接种30 mL一级种子液，每个菌株接种75瓶，参照刘祈猛等13的方法进行栽培，3540 d菌丝长满瓶后转移到智能出菇房催蕾，1216 d 后采收第一潮菇，测定每瓶产量，继续培养，1015 d后采收第二潮菇，采收3潮菇，记录子实体整齐度、单瓶子实体数量、第一潮菇采收时间，测定菌盖直径和厚度、菌柄直径和长度以及单瓶产量（3潮菇）。1.6 中试参照1.5栽培复筛获得菌株ZJCXG001和白茶6号，每瓶接种30 mL二级种子液，每个菌株设3组重复，每组500瓶，共计1 500瓶，产量测定采用五点取样法15，每个取样点100瓶，记录子实体整齐度、单瓶子实体数量、第一潮菇采收时间，测定菌盖直径和厚度、菌柄直径和长度以及单瓶产量（3潮菇）。1.7 示范栽培参照刘祈猛等13的方法栽培菌株ZJCXG001和白茶6号，用聚丙烯袋（18 cm33 cm0.05 mm）装1 kg栽培种培养料（湿重），每个菌株设3组重复，每组3 333或3 334袋，共计10 000袋，每袋接种 11 刘祈猛，等：茶薪菇 中菌白茶 1 号 选育第 5 期30 mL二级种子液，产量测定采用五点取样法15，每个取样点500袋，记录子实体整齐度、单瓶子实体数量、第一潮菇采收时间，测定菌盖直径和厚度、菌柄直径和长度以及产量（3潮菇）。1.8 子实体营养成分含量测定将3555 烘干的菌株ZJCXG001和白茶6号子实体样品送云南省三正技术检测有限公司检测营养成分含量。1.9 杂交菌株验证1.9.1 拮抗实验参照 食用菌菌种区别性鉴定 拮抗反应(NY/T 18452010)16，接种菌株白茶 6 号和ZJCXG001菌丝块（直径5 mm）于PDA培养皿（直径9 cm）中，菌丝块相距1.5 cm，25 培养5 d，观察拮抗情况。1.9.2 EST-SSR分析基于课题组前期获得的茶薪菇转录组数据，筛选 6 对 EST-SSR 引物（表 1）。PCR 扩增体系表 1 引物名称和序列Table 1 EST-SSR primers引物名称Primer name序列Sequence(53)AbA001F/RACCAACGACAGACAACACCACGAACCAGTCGTACCCTCATAbA026F/RGACGACGAGGAGGAGTTCACCGTAGTTCCCGTACGTCCATAbA070F/RTACTGCCAACTCGAGCCTCTAGGGAGAGGGAGATGACGATAbA079F/RCTGGTACTGCGCAGCAAATATCGTTGGTGGATCTTCTTCCAbA087F/RCGAGGACGATCGGATAGGTATCCTCATCCCATTCCTCAAGAbA089F/RACCTCCACCTCTGAATCGTGGTCCACCTCTGTGCCTTGAT（10 L）：2Taq PCR Master Mix 5 L，正向、反向引物（10 mol L-1，5端有荧光标记）各0.5 L，模板DNA 1 L，ddH2O 3 L。PCR反应条件：95 预变性5 min；95 变性30 s，6252 （每个循环下降1）退火30 s，72 延伸30 s，10个循环；95 变性30 s，52 退火30 s，72 延伸30 s，25个循环；72 延伸20 min。设3次重复。将1 L PCR扩增产物、0.5 L GeneScan500 LIZ、8.5 L Hi-Di Formamide 加入测序仪（3730XL，美国 Applied Biosystem公司）上机板中，95 变性3 min，冷却至室温，进行分析检测。1.10 数据处理数据采用DPS软件处理，两组和多组比较均采用LSD法进行多重比较分析。2 结果与分析2.1 单孢菌株制备、杂交和初筛结果获得96个单孢菌株和21个杂交菌株，将菌丝长势较好的13个杂交菌株进行栽培，其中6个菌株可以出菇，进行复筛。2.2 复筛结果如图 1 所示，6 个杂交菌株菌盖颜色均为白色。与菌株白茶 6 号相比，杂交菌株 ZJCXG001、ZJCXG003 和 ZJCXG006 子实体整齐度较高（图 1），且菌盖直径适中，分别为（4.260.09）、（4.300.11）、（4.220.09）cm；菌株ZJCXG004、ZJCXG005菌盖直径较大，ZJCXG002菌盖直径较小（表2）。如表3所示，菌株ZJCXG001第一、二、三潮产量均较高，生物学效率为85.0%；且第一潮菇采收时间最短，为（50.21.8）d，因此选择菌株ZJCXG001进行中试实验。12 第 30 卷食 用 菌 学 报注：AG 分别表示菌株ZJCXG001、ZJCXG002、ZJCXG003、ZJCXG004、ZJCXG005、ZJCXG006、白茶6号。Notes:AG indicate ZJCXG001,ZJCXG002,ZJCXG003,ZJCXG004,ZJCXG005,ZJCXG006,and Baicha 6,respectively.图 1 复筛出菇情况Fig.1 Fruiting of six dominant hybrids and Baicha 6表 2 复筛子实体农艺性状Table 2 Secondary screening of fruiting body agronomic traits 菌株Strain菌盖 Pileus菌柄 Stipe子实体整齐度Fruiting body uniformity单瓶子实体数量Number of fruiting bodies per bottle直径Diameter/cm厚度Thickness/mm直径Diameter/cm长度 Length/cmZJCXG0014.260.09 b15.480.93 a1.190.05 a9.790.50 b+10.30.9 aZJCXG0023.940.70 c15.050.48 a1.090.17 a9.670.73 bc+7.62.6 bZJCXG0034.300.11 b15.630.59 a1.140.18 a9.310.51 bc+10.41.9 aZJCXG0044.830.24 a15.050.47 a1.140.09 a10.700.75 a+9.81.8 aZJCXG0054.730.47 a15.180.28 a1.160.14 a9.730.94 b+6.94.2 bZJCXG0064.220.09 bc15.470.54 a1.140.14 a9.150.38 c+8.92.3 ab白茶 6 号Baicha 64.290.13 b15.171.25 a1.130.18 a10.480.68 a+8.51.0 ab注：数据为平均值标准差（n=30）；+、+、+分别表示子实体整齐度高、一般、低；同列不同小写字母表示差异显著（P0.05）。Notes:values are means SD(n=30);+,+and+indicate high,fair and low,respectively;different lowercase letters in the same column indicate a significant difference at P0.05.13 刘祈猛，等：茶薪菇 中菌白茶 1 号 选育第 5 期表 3 复筛第一潮菇采收时间和产量及生物学效率Table 3 Harvesting time of the first tide,yield,and biological efficiency of dominant hybrids and Baicha 6菌株Strain第一潮菇采收时间Harvesting time of the first tide/d单瓶产量 Yield/(g bottle-1)生物学效率Biological efficiency/%第一潮The first tide 第二潮The second tide 第三潮The third tide 合计TotalZJCXG00150.21.8 e98.22.2 A50.33.2 a21.52.8 AB170.01.6 A85.0ZJCXG00253.61.4 c81.34.1 CD43.65.8 b15.61.9 C140.41.0 F70.2ZJCXG00356.01.6 b81.53.3 CD41.23.3 b21.74.0 AB144.41.0 E72.2ZJCXG00454.51.3 c90.84.6 B40.84.1 b24.04.8 A155.61.3 B77.8ZJCXG00556.71.7 ab83.64.3 C41.75.1 b23.43.4 A148.71.4 C74.4ZJCXG00652.11.6 d77.54.0 D40.23.8 b18.93.3 BC136.61.8 G68.3白茶 6 号Baicha 657.51.2 a83.56.1 C41.75.7 b21.82.8 AB147.01.2 D73.5注：数据为平均值标准差（n=30）；同列不同小写字母表示差异显著（P0.05）；同列不同大写字母表示差异极显著（P0.01）。Notes:values are means SD(n=30);different lowercase letters in the same column indicate a significant difference at P0.05;different uppercase letters in the same column indicate a significant difference at P0.05）；同列不同大写字母表示差异极显著（P0.05);different uppercase letters in the same column indicate a significant difference at P0.01.表 5 中试实验第一潮菇采收时间和产量及生物学效率Table 5 Harvesting time of the first tide,yield,and biological efficiency of ZJCXG001 and Baicha 6 in pilot production菌株Strain第一潮菇采收时间Harvesting time of the first tide/d单瓶产量 Yield/(g bottle-1)生物学效率Biological efficiency/%第一潮The first tide 第二潮The second tide 第三潮The third tide 合计TotalZJCXG00150.61.3 B100.33.0 A51.12.6 A19.23.2 b170.62.8 A85.3白茶 6 号Baicha 656.21.5 A84.54.5 B41.23.7 B22.83.0 a148.41.2 B74.2注：数据为平均值标准差（n=100）；同列不同小写字母表示差异显著（P0.05）；同列不同大写字母表示差异极显著（P0.01）。Notes:values are means SD(n=100);different lowercase letters in the same column indicate a significant difference at P0.05;different uppercase letters in the same column indicate an extremely significant difference at P0.05）；同列不同大写字母表示差异极显著（P0.05);different uppercase letters in the same column indicate an extremely significant difference at P0.01.15 刘祈猛，等：茶薪菇 中菌白茶 1 号 选育第 5 期表 7 示范栽培第一潮菇采收时间和产量及生物学效率Table 7 Harvesting time of the first tide,yield,and biological efficiency of ZJCXG001 and Baicha 6 in demonstrative production菌株Strain第一潮菇采收时间Harvesting time ofthe first tide/d单瓶产量 Yield/(g bottle-1)生物学效率Biological efficiency/%第一潮The first tide 第二潮The second tide 第三潮The third tide 合计TotalZJCXG00150.51.3 B181.14.3 A97.12.9 A66.95.1 A345.17.5 A86.3白茶 6 号Baicha 656.11.5 A158.25.0 B67.54.8 B59.25.3 B284.917.6 B71.2注：数据为平均值标准差（n=500）；同列不同大写字母表示差异极显著（P0.01）。Notes:values are means SD(n=500);different uppercase letters in the same column indicate an extremely significant difference at P0.01.图 3 菌株 ZJCXG001（A）和白茶 6 号（B）子实体Fig.3 Fruiting bodies of ZJCXG001(A)and Baicha 6(B)图 4 菌株 ZJCXG001 工厂化栽培出菇情况Fig.4 Factory cultivation of ZJCXG001 2.5 子实体营养成分含量如表8所示，与亲本菌株白茶6号比较，杂交菌株ZJCXG001铁元素、硒元素、维生素B2、鲜甜氨基酸17含量较高，氨基酸总量较高，口感较甜。16 第 30 卷食 用 菌 学 报表 8 菌株 ZJCXG001 和白茶 6 号子实体营养成分含量Table 8 Nutrient composition of ZJCXG001 and Baicha 6项目 ItemZJCXG001白茶 6 号Baicha 6项目 ItemZJCXG001白茶 6 号Baicha 6磷 P/(mg100 g-1)758840天冬氨酸 Asp/(g100 g-1)2.711.80锌 Zn/(mgkg-1)74.272.8谷氨酸 Glu/(g100 g-1)4.243.10铁 Fe/(mgkg-1)56.548酪氨酸 Tyr/(g100 g-1)0.830.61镁 Mg/(mgkg-1)9111 459赖氨酸 Lys/(g100 g-1)1.611.11钙 Ca/(mgkg-1)68.3112胱氨酸 Cys/(g100 g-1)0.290.25钠 Na/(mg100 g-1)33.732.2苏氨酸 Thr/(g100 g-1)1.411.06钾 K/(mg100 g-1)1 7281 903丝氨酸 Ser/(g100 g-1)1.310.92硒 Se/(mgkg-1)0.0530.031甘氨酸 Gly/(g100 g-1)1.240.96蛋白质 Protein/(g100 g-1)25.827丙氨酸 Ala/(g100 g-1)1.491.30总糖 Total sugar/%46.944.3脯氨酸 Pro/(g100 g-1)0.900.71粗纤维 Crude fibre/(g100 g-1)11.510.2缬氨酸 Val/(g100 g-1)1.321.06粗脂肪 Crude fat/(g100 g-1)2.21.8蛋氨酸 Met/(g100 g-1)0.310.23灰分 Ash content/(g100 g-1)7.27.5异亮氨酸 Ile/(g100 g-1)1.110.85多糖 Polysaccharide/(g100 g-1)4.684.5亮氨酸 Leu/(g100 g-1)1.681.28维生素 C VC/(mg100 g-1)2.616.6苯丙氨酸 Phe/(g100 g-1)1.070.78维生素 B2 VB2/(mg100 g-1)0.5970.29组氨酸 His/(g100 g-1)0.720.49维生素 B6 VB6/(mg100 g-1)2546.2精氨酸 Arg/(g100 g-1)1.481.012.6 杂交菌株ZJCXG001验证结果2.6.1 拮抗实验结果如图5所示，菌株ZJCXG001和白茶6号之间有明显拮抗线。注：A.正面；B.反面。Notes:A.front;B.back.图 5 菌株 ZJCXG001 和白茶 6 号拮抗情况Fig.5 Antagonism between ZJCXG001 and Baicha 62.6.2 EST-SSR分析结果如表 9 所示，6 对引物对菌株 ZJCXG001 和白茶 6 号扩增结果中，只有引物 AbA070F/R 和AbA079F/R对两个菌株的扩增片段大小不同。17 刘祈猛，等：茶薪菇 中菌白茶 1 号 选育第 5 期3 讨论目前，获国家审（认）定的 5 个茶薪菇品种皆为褐色品种，均由野生驯化而来，尚无茶薪菇白色品种通过审（认）定或鉴定，有关茶薪菇尤其是白色品种单孢杂交育种的报道也较少。蔡衍山等18建立茶薪菇孢子单核体对称交配育种技术，认为茶薪菇为四极性异宗结合食用菌。刘新锐等19通过原生质体单核化和杂交实验进一步验证表 9 PCR 扩增片段大小Table 9 PCR results of EST-SSR markers引物名称Primer nameZJCXG001Amplified product ofZJCXG001/bp白茶 6 号Amplified product ofBaicha 6/bpAbA001F/R177177,181AbA026F/R466466,468AbA070F/R357,364358,365AbA079F/R245249AbA087F/R213,270213AbA089F/R222,398398茶薪菇为四极性异宗结合食用菌，相对褐色白色为隐性性状，这为后续单孢杂交育种提供理论基础。笔者采用单孢杂交选育的杂交菌株ZJCXG001于2022年10月20日通过云南省非主要农作物品种鉴定，鉴定编号为滇鉴（食用菌）2022130号，定名为中菌白茶1号，其为国内首个通过品种鉴定的白色茶薪菇品种。与菌株白茶6号相比，中菌白茶1号子实体整齐度较高，菌盖直径适中，产量较高，栽培周期较短；铁元素、硒元素、维生素B2、鲜甜氨基酸含量较高，氨基酸总量较高，口感好。中菌白茶1号已在云南省进行多年多点工厂化栽培，相关专利13已获授权。参考文献1 刘祈猛,宋海燕,陈润秀,等.我国主栽食用菌茶薪菇的物种概念J.菌物学报,2021,40(5):981-991.2 刘绍雄,罗孝坤,孙达锋.食用菌规范化栽培技术M.昆明:云南科技出版社,2021.3 刘祈猛,华蓉,张俊波,等.茶薪菇的生物学特性、遗传育种与栽培现状研究进展J.食药用菌,2021,29(6):501-505.4中国食用菌协会.2021年度全国食用菌统计调查结果分析EB/OL.(2022-12-22)2023-04-03.https:/ 戴天放,裘源春,樊秀兰,等.江西省食用菌产业结构分析与优化对策J.中国食用菌,2021,40(12):77-82.6 罗信昌,陈士瑜.中国菇业大典M.2版.北京:清华大学出版社,2016.7 周会明,柴红梅,赵永昌.田头菇属真菌研究进展J.中国食用菌,2009,28(6):3-8.8 WU F,ZHOU L W,YANG Z L,et al.Resource diversity of Chinese macrofungi:edible,medicinal and poisonous speciesJ.Fungal Diversity,2019,98(1):1-76.9 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