α-亚麻酸对哮喘大鼠模型气道炎症和FGF23表达的影响.pdf

论著-亚麻酸对哮喘大鼠模型气道炎症和F G F 2 3表达的影响*任引刚 张莹 白莉敏 高砚丽 祝松涛(空军军医大学第二附属医院老年医学科,陕西 西安 7 1 0 0 3 8)【摘要】目的 探讨-亚麻酸对哮喘大鼠模型气道炎症和成纤维细胞生长因子2 3(F G F 2 3)表达的影响。方法 选取5 0只S P F级雄性S D大鼠建立卵白蛋白(OVA)诱导的哮喘S D大鼠模型,将大鼠随机分为对照组、OVA组(哮喘模型大鼠)、OVA+4 0 m g/k g A L A组(采用4 0 m g/k g的-亚麻酸治疗哮喘模型大鼠)、OVA+8 0 m g/k g A L A组(采用8 0 m g/k g的-亚麻酸治疗哮喘模型大鼠)和OVA+D e x组(采用0.2 5 m g/k g的地塞米松治疗哮喘模型大鼠),每组1 0只。各组大鼠均连续治疗处理7 d。通过HE染色评价肺组织形态。通过E L I S A法检测支气管肺泡灌洗液(B A L F)中干扰素-(I F N-)、白细胞介素(I L)-4、I L-1 7和I L-1 0的水平。采用自动生化分析仪检测各组大鼠血清总胆固醇(T C)、甘油三酯(T G)、低密度脂蛋白(L D L)和高密度脂蛋白(HD L)。通过免疫组化、W e s t e r n b l o t或q R T-P C R检测肺组织F G F 2 3、F G F R 4、K l o t h o、E-c a d h e r i n和-S MA的表达。结果 与OVA组相比,OVA+4 0 m g/k g A L A组、OVA+8 0 m g/k g A L A组和OVA+D e x组大鼠肺组织病变均明显减轻。与OVA组相比,OVA+4 0 m g/k g A L A组、OVA+8 0 m g/k g A L A组和OVA+D e x组大鼠B A L F中I F N-和I L-1 0的水平升高,而I L-4和I L-1 7降低(均P0.0 5)。与OVA组相比,OVA+4 0 m g/k g A L A组、OVA+8 0 m g/k g A L A组和OVA+D e x组大鼠血清中T C、T G和L D L水平降低,而HD L升高(均P0.0 5)。与OVA组相比,OVA+4 0 m g/k g A L A组、OVA+8 0 m g/k g A L A组和OVA+D e x组大鼠肺组织E-c a d h e r i n的蛋白表达水平升高,而-S MA降低(均P0.0 5)。与OVA组相比,OVA+4 0 m g/k g A L A组、OVA+8 0 m g/k g A L A组和OVA+D e x组大鼠肺组织F G F 2 3和F G F R 4的mR NA和蛋白表达水平降低,而K l o t h o水平升高(均P0.0 5)。结论 -亚麻酸可抑制哮喘大鼠的气道炎症和上皮-间充质转化、改善脂代谢,其机制可能是通过纠正T h 1/T h 2和T r e g/T h 1 7的失衡及调节F G F 2 3-K l o t h o-F G F R 4信号来实现的。【关键词】-亚麻酸;哮喘;气道炎症;上皮-间充质转化;脂代谢;F G F 2 3-K l o t h o-F G F R 4信号【中图分类号】R 5 6 2.2+5 【文献标志码】A D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 2-3 5 1 1.2 0 2 3.1 0.0 0 3 基金项目:陕西省重点研发计划项目(2 0 1 9 S F-2 0 2)通讯作者:祝松涛,E-m a i l:S o n g t a o 8 5 0 1 2 61 2 6.c o m引用本文:任引刚,张莹,白莉敏,等.-亚麻酸对哮喘大鼠模型气道炎症和F G F 2 3表达的影响J.西部医学,2 0 2 3,3 5(1 0):1 4 1 8-1 4 2 4,1 4 3 2.D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 2-3 5 1 1.2 0 2 3.1 0.0 0 3E f f e c t s o f A l p h a-l i n o l e n i c a c i d o n a i r w a y i n f l a mm a t i o n a n d f i b r o b l a s t g r o w t h f a c t o r 2 3 e x p r e s s i o n i n r a t m o d e l o f a s t h m aR E N Y i n g a n g,Z H A N G Y i n g,B A I L i m i n,G A O Y a n l i,Z H U S o n g t a o(D e p a r t m e n t o f G e r i a t r i c s,T h e S e c o n d A f f i l i a t e d H o s p i t a l o f A i r F o r c e M e d i c a l U n i v e r s i t y,X i a n 7 1 0 0 3 8,C h i n a)【A b s t r a c t】O b j e c t i v e T h i s s t u d y a i m e d t o r e v e a l t h e e f f e c t o f -l i n o l e n i c a c i d o n a i r w a y i n f l a mm a t i o n a n d f i b r o-b l a s t g r o w t h f a c t o r 2 3(F G F 2 3)e x p r e s s i o n i n r a t s m o d e l o f a s t h m a.M e t h o d s I n t h i s s t u d y,a n o v a l b u m i n(OVA)-i n-d u c e d a s t h m a S D r a t m o d e l w a s e s t a b l i s h e d,a n d t h e r a t s w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o 5 g r o u p s(n=1 0):c o n t r o l g r o u p,OVA g r o u p(a s t h m a m o d e l r a t s),OVA+4 0 m g/k g A L A g r o u p(a s t h m a t i c m o d e l r a t s t r e a t e d w i t h 4 0 m g/k g -l i n o l e-n i c a c i d),OVA+8 0 m g/k g A L A g r o u p(a s t h m a t i c m o d e l r a t s t r e a t e d w i t h 8 0 m g/k g -l i n o l e n i c a c i d)a n d OVA+D e x g r o u p(a s t h m a t i c m o d e l r a t s t r e a t e d w i t h 0.2 5 m g/k g d e x a m e t h a s o n e).T h e r a t s w e r e t r e a t e d c o n t i n u o u s l y f o r 7 d a y s.L u n g t i s s u e m o r p h o l o g y w a s e v a l u a t e d b y HE s t a i n i n g.T h e l e v e l s o f i n t e r f e r o n-(I F N-),i n t e r l e u k i n(I L)-4,I L-1 7 a n d I L-1 0 i n b r o n c h o a l v e o l a r l a v a g e f l u i d(B A L F)w e r e d e t e c t e d b y E L I S A.S e r u m t o t a l c h o l e s t e r o l(T C),t r i g l y c e r i d e 8141西部医学 2 0 2 3年1 0月 第3 5卷第1 0期 M e d J W e s t C h i n a,O c t o b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.1 0(T G),l o w-d e n s i t y l i p o p r o t e i n(L D L)a n d h i g h-d e n s i t y l i p o p r o t e i n(HD L)w e r e d e t e c t e d b y a u t o m a t i c b i o c h e m i c a l a n a l y-z e r.T h e e x p r e s s i o n s o f F G F 2 3,F G F R 4,K l o t h o,E-c a d h e r i n a n d -S MA i n l u n g t i s s u e w e r e d e t e c t e d b y i mm u n o h i s t o-c h e m i s t r y,W e s t e r n b l o t o r q R T-P C R.R e s u l t s C o m p a r e d w i t h OVA g r o u p,OVA+4 0 m g/k g A L A g r o u p,OVA+8 0 m g/k g A L A g r o u p a n d OVA+D e x g r o u p r a t s h a d s i g n i f i c a n t l y r e d u c e d l u n g l e s i o n s.C o m p a r e d w i t h OVA g r o u p,t h e l e v e l s o f I F N-a n d I L-1 0 i n t h e B A L F o f OVA+4 0 m g/k g A L A g r o u p,OVA+8 0 m g/k g A L A g r o u p a n d OVA+D e x g r o u p w e r e i n c r e a s e d,w h i l e t h e l e v e l s o f I L-4 a n d I L-1 7 d e c r e a s e d(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h OVA g r o u p,t h e s e r u m l e v e l s o f T C,T G a n d L D L i n OVA+4 0 m g/k g A L A g r o u p,OVA+8 0 m g/k g A L A g r o u p a n d OVA+D e x g r o u p w e r e d e c r e a s e d,w h i l e HD L w a s i n c r e a s e d(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h OVA g r o u p,t h e p r o t e i n e x p r e s s i o n l e v e l o f E-c a d h e r i n i n t h e l u n g t i s s u e o f OVA+4 0 m g/k g A L A g r o u p,OVA+8 0 m g/k g A L A g r o u p a n d OVA+D e x g r o u p i n c r e a s e d,w h i l e -S MA d e c r e a s e d(P 0.0 5).C o m p a r e d w i t h OVA g r o u p,t h e mR NA a n d p r o t e i n e x p r e s s i o n l e v e l s o f F G F 2 3 a n d F G-F R 4 i n t h e l u n g t i s s u e o f OVA+4 0 m g/k g A L A g r o u p,OVA+8 0 m g/k g A L A g r o u p a n d OVA+D e x g r o u p w e r e d e-c r e a s e d,w h i l e K l o t h o l e v e l w a s i n c r e a s e d(P0.0 5).C o n c l u s i o n A l p h a-l i n o l e n i c a c i d c a n i n h i b i t a i r w a y i n f l a mm a t i o n a n d e p i t h e l i a l-m e s e n c h y m a l t r a n s i t i o n a n d i m p r o v e l i p i d m e t a b o l i s m i n a s t h m a t i c r a t s,a n d t h e m e c h a n i s m m a y b e a-c h i e v e d b y c o r r e c t i n g t h e i m b a l a n c e o f T h 1/T h 2 a n d T r e g/T h 1 7 a n d r e g u l a t i n g F G F 2 3-K l o t h o-F G F R 4 s i g n a l i n g.【K e y w o r d s】A l p h a-l i n o l e n i c a c i d;A s t h m a;A i r w a y i n f l a mm a t i o n;E p i t h e l i a l-m e s e n c h y m a l t r a n s i t i o n;L i p i d m e-t a b o l i s m;F G F 2 3-K l o t h o-F G F R 4 s i g n a l i n g 哮喘的特点是呼吸道症状和气流受限,其发病机制通常与气道炎症和气道重塑相关1-2。虽然短效2-受体激动剂、皮质类固醇等药物可以较好地控制哮喘,但是仍有许多的哮喘患者对常用药物无反应,气道功能无法改善。此外,长期使用这些药物会导致如口咽部疼痛、口疮、牙齿问题、体重异常或精神问题等各种副作用3。脂质代谢在哮喘的各种细胞功能调节中起着至关重要的作用,脂质代谢紊乱可引起多种炎症细胞因子的产生并促进哮喘的发生4。因此,控制哮喘中脂质代谢的异常可能是治疗哮喘的重要方向之一4。-亚麻酸(A l p h a-l i n o l e n i c a c i d,A L A)是一种-3多不饱和脂肪酸,也是一种人体不能合成的必需脂肪酸。-亚麻酸具有降压、降血脂、抗炎、改善脂质代谢等功能5。有研究6报道,-亚麻酸具有抑制炎症和氧化应激的作用,是治疗支气管哮喘等气道炎症性疾病的潜在候选药物,但具体的作用机制尚不明确。成纤维细胞生长因子2 3(F i b r o b l a s t g r o w t h f a c-t o r s 2 3,F G F 2 3)是一种重要的骨源性调磷激素,其主要受 体 为 成 纤 维 细 胞 生 长 因 子 受 体(F i b r o b l a s t g r o w t h f a c t o r r e c e p t o r s,F G F R)/K l o t h o复 合 物7。F G F 2 3具有调控机体胆汁酸平衡、维持全身稳态等作用。另外,F G F 2 3在糖脂代谢中具有重要作用,代谢综合征患者血清F G F 2 3水平更高,且与甘油三酯呈正相关,与高密度脂蛋白、胆固醇和载脂蛋白A呈负相关8。本研究假设-亚麻酸可能通过改善脂代谢引起的炎症和氧化应激来抑制哮喘。F G F 2 3是一种与调节炎症和脂代谢的生长因子8-9,K l o t h o(F G F 2 3的共同受体)基因敲除的慢性阻塞性肺疾病(C h r o n i c o b s t r u c t i v e p u l m o n a r y d i s e a s e,C O P D)模型小鼠气道炎症加剧,F G F R 4表达增加9。本研究探讨-亚麻酸对哮喘动物模型的治疗作用和F G F 2 3表达的影响,现将结果报告如下。1 材料与方法1.1 实验材料 卵白蛋白(O v a l b u m i n,OVA)购自美国S i g m a A l d r i c h公司;地塞米松磷酸钠注射液购自郑州卓峰制药有限公司;干扰素-(I F N-)、白细胞介素(I L)-4、I L-1 7和I L-1 0 E L I S A试剂盒购自武汉菲恩生物科技有限公司;HE染色和M a s s o n三色染色试剂、R I P A购自北京索莱宝科技有限公司;免疫组化及W e s t e r n b l o t中所用的一抗及二抗均购自英国A b c a m公司;B C A蛋白质测定试剂盒、T R I z o l试剂购自碧云天生物技术研究所;MML V反转录酶购自美国P r o m e g a公司;S Y B R P r i m e S c r i p t R T-P C R试剂盒购自日本T a K a R a公司。1.2 实验动物 5 0只体质量为1 8 02 2 0 g的S P F级6周龄雄性S D大鼠由空军军医大学第二附属医院骨科实验室提供 许可证号:S Y X K(陕)2 0 2 0-0 0 7。大鼠饲养条件为2 5、5 5%相对湿度、1 2 h光暗循环照明,不限制食物和水。适应性饲养1周后进行后续实验。本研究通过医院伦理委员会审核通过。1.3 动物分组及处理 将大鼠随机分为5组(n=1 0):对 照 组、OVA组、OVA+4 0 m g/k g A L A组、OVA+8 0 m g/k g A L A组和OVA+D e x组。参考文献1 0方法建立哮喘大鼠模型。含有1 0 0 m g OVA和1 0 0 m g氢氧化铝的1 m L 0.9%生理盐水作为致敏液。OVA组、OVA+4 0 m g/k g A L A组、OVA+8 0 m g/k g A L A组和OVA+D e x组大鼠分别于第0、7、1 4 d腹腔注射1 m L致敏液。使用0.9%生理盐水配9141西部医学 2 0 2 3年1 0月 第3 5卷第1 0期 M e d J W e s t C h i n a,O c t o b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.1 0置1%OVA溶液。从第2 1 d开始,用5 0 L的1%OVA溶液滴鼻激发,连续7 d。使用0.0 1%酒精溶解-亚麻酸和地塞米松。从第2 1 d开始,在激发前2 h对OVA+4 0 m g/k g A L A组和OVA+8 0 m g/k g A L A组大鼠分别灌胃4 0和8 0 m g/k g的-亚麻酸,对OVA+D e x组大鼠灌胃0.2 5 m g/k g的地塞米松。对照 组 大 鼠 使 用0.9%生 理 盐 水 致 敏 和 激 发,用0.0 1%酒精灌胃,OVA组大鼠采用0.0 1%酒精灌胃。1.4 组织学染色 最后一次激发2 4 h后,处死大鼠分离获取大鼠左肺,并用1 0%多聚甲醛固定大鼠左肺,制作肺组织石蜡切片,然后进行HE染色。1.5 B A L F收集和计数细胞 最后一次激发2 4 h后,大鼠左侧主支气管插管,采用3 m L P B S溶液冲洗肺并收集B A L F,重复3次。将B A L F在4 下1 0 0 0 r/m i n离心1 0 m i n,然后重悬于1 m L生理盐水中。对B A L F中 的 白 细 胞 进 行W r i g h t-G i e m s a染 色 并计数。1.6 B A L F中炎症因子的检测 按照E L I S A试剂盒说明书方法检测B A L F中I F N-、I L-4、I L-1 7和I L-1 0的水平。1.7 免疫组化检测肺组织E-c a d h e r i n和-S MA 将大鼠肺组织用4%的多聚甲醛固定4 8 h,脱水包埋,制成厚度为4 m的组织切片。肺组织常规抗原修复后,用山羊血清室温封闭3 0 m i n。将切片与E-c a d h e r-i n和-S MA一抗4 过夜孵育,然后与生物素标记的二抗3 7 孵 育3 0 m i n。一 抗 和 二 抗 稀 释 度 均 为1 5 0 0。最后使 用D A B显 色,苏 木 素 复 染。参 考 文献1 1方法对E-c a d h e r i n和-S MA进行阳性染色评分。1.8 脂代谢指标的检测 采用贝克曼库尔特AU 6 8 0自动生化分析仪检测各组大鼠血清T C、T G、L D L和HD L。1.9 W e s t e r n b l o t检测大鼠肺组织中F G F 2 3、F G-F R 4、K l o t h o、E-c a d h e r i n和-S MA的蛋白表达水平 将各组大鼠肺组织分离,剪碎,加入含有PM S F(1 mM)的R I P A裂解缓冲液中裂解并匀浆。使用B C A法测定蛋白含量,使用S D S-P AG E电泳分离蛋白并转移到聚偏氟乙烯膜。5%脱脂牛奶封闭2 h后,将膜与F G F 2 3(1 1 0 0 0稀释)、F G F R 4(1 1 0 0 0稀释)、K l o t h o(1 1 0 0 0稀释)、E-c a d h e r i n(1 3 0 0 0稀释)、-S MA(1 3 0 0 0稀释)和-a c t i n(1 5 0 0 0稀释,内参蛋白)的一抗4 过夜孵育。然后与HR P偶联的I g G二抗(1 2 0 0 0稀释)室温孵育2 h。使用E C L显影。1.1 0 q R T-P C R检测大鼠肺组织中F G F 2 3、F G F R 4和K l o t h o的mR NA表达水平 使用T R I z o l试剂从大鼠肺组织中提取总R NA。使用分光光度计检测2 6 0 n m和2 8 0 n m处的光密度比,并使用随机引物和MML V反 转 录 酶 将R NA反 转 录 为c D NA。使 用A B I P R I S M 7 5 0 0实 时P C R系 统 和S Y B R P r i m e-S c r i p t R T-P C R试剂盒对F G F 2 3、F G F R 4和K l o t h o引物进行P C R扩增。-a c t i n作为内参,通过2-C T确定目标mR NA水平。引物序列如下:F G F 2 3正向:5-G G C C T GAT C C A C C T G T A C A C A-3 和反向:5-A C C A C AAAG C C AG C AT C C T C T-3;F G F R 4正向:5-G T G C T G C C AGAG GAAGA C C T-3 和 反向:5-C AG GAG C A C AAG C AGAA C C A-3;K l o t h o正 向:5-T G T GA C AG C C AAT G GAAT C G-3 和反向:5-G G T T GAT G T C G T C C AA C A C G-3;-a c t i n正 向:5-T G T T A C C AA C T G G GA C GA C A-3 和 反 向:5-C T G G G T C AT C T T T T C A C G G T-3。1.1 1 统计学分析 使用S P S S 2 1.0软件分析数据,采用单因素方差分析及L S D事后检验进行组间差异比较,计量资料采用均数标准差(xs)表示。以P0.0 5为差异有统计学意义。2 结果2.1 -亚麻酸对哮喘大鼠肺组织形态的影响 各组大鼠肺组织切片HE染色结果显示,对照组大鼠肺组织形态正常,支气管上皮完好,未见明显炎症反应。与对照组比较,OVA组大鼠气道壁和气道平滑肌明显增厚,上皮丢失,支气管周围有大量炎性细胞浸润(以白细胞和嗜酸性粒细胞为主)。OVA+4 0 m g/k g A L A组、OVA+8 0 m g/k g A L A组和OVA+D e x组上述病理改变均明显减轻。见图1。图1 各组大鼠肺组织切片H E染色(2 0 0)F i g u r e 1 H E s t a i n i n g o f l u n g t i s s u e s e c t i o n s o f r a t s i n e a c h g r o u p0241西部医学 2 0 2 3年1 0月 第3 5卷第1 0期 M e d J W e s t C h i n a,O c t o b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.1 02.2 -亚麻酸对哮喘大鼠B A L F中炎症因子的影响 与对照组比较,OVA组大鼠B A L F中I F N-的水平显著降低,I L-4、I L-1 7和I L-1 0的水平均显著升高(P0.0 5)。与OVA组 相 比,OVA+4 0 m g/k g A L A组、OVA+8 0 m g/k g A L A组和OVA+D e x组大鼠B A L F中I F N-和I L-1 0的水平均显著升高,I L-4和I L-1 7的水平均显著降低(P0.0 5)。见表1。表1 各组大鼠B A L F中I F N-、I L-4、I L-1 7和I L-1 0的水平(xs,p g/m L)T a b l e 1 L e v e l s o f I F N-,I L-4,I L-1 7 a n d I L-1 0 i n B A L F o f r a t s i n e a c h g r o u p分组 I F N-I L-4I L-1 7I L-1 0对照组7 9.3 44.0 71 4.8 40.3 21 3.3 21.2 99.6 61.0 1OVA组3 3.6 02.3 21 1 7.1 45.9 34 2.4 32.7 72 1.4 31.5 1OVA+4 0 m g/k g A L A组4 9.3 42.5 47 8.3 37.1 52 6.9 61.7 52 7.1 12.2 0OVA+8 0 m g/k g A L A组6 1.0 03.1 56 3.2 54.0 42 0.3 61.8 44 1.4 22.1 8OVA+D e x组6 3.4 64.0 55 2.8 14.4 22 4.5 62.5 03 5.8 81.5 0F2 6 5.7 8 45 6 8.9 2 72 6 3.2 6 35 0 8.7 8 4P0.0 0 10.0 0 10.0 0 10.0 0 1注:与对照组比较,P0.0 5;与OVA组比较,P0.0 5。2.3 -亚麻酸对哮喘大鼠肺组织E-c a d h e r i n和-S MA表达的影响 免疫组化染色结果显示各组大鼠肺组织E-c a d h e r i n和-S MA的染色评分差异有统计学意义(E-c a d h e r i n:F=2 3.9 7 1,P0.0 0 1;-S MA:F=3 2.3 6 0,P0.0 0 1)。与对照组比较,OVA组大鼠肺组织E-c a d h e r i n染色评分显著降低,-S MA染色评分显著升高(P0.0 5)。与OVA组相比,OVA+4 0 m g/k g A L A组、OVA+8 0 m g/k g A L A组 和OVA+D e x组大鼠肺组织E-c a d h e r i n染色评分显著升高,-S MA染色评分显著降低(P0.0 5)。W e s t-e r n b l o t结果显示各组大鼠肺组织中E-c a d h e r i n和-S MA的 蛋 白 表 达 水 平 差 异 有 统 计 学 意 义(F=2 6 1.0 4 2,P0.0 0 1;F=2 3 5.2 2 9,P0.0 0 1)。与对照组比较,OVA组大鼠肺组织E-c a d h e r i n的蛋白表达水平显著降低,而-S MA显著升高(P0.0 5)。与OVA组 相 比,OVA+4 0 m g/k g A L A组、OVA+8 0 m g/k g A L A组和OVA+D e x组大鼠肺组织E-c a d h e r i n的蛋白表达水平显著升高,而-S MA显著降低(P0.0 5)。见图2、图3。图2 各组大鼠肺组织中E-c a d h e r i n和-S MA的免疫组化染色F i g u r e 2 I mm u n o h i s t o c h e m i c a l s t a i n i n g o f E-c a d h e r i n a n d -S MA i n l u n g t i s s u e o f r a t s i n e a c h g r o u p注:A.免疫组化染色图像(2 0 0);B、C.E-c a d h e r i n和-S MA的染色评分。与对照组比较,P0.0 5;与OVA组比较,P0.0 5。1241西部医学 2 0 2 3年1 0月 第3 5卷第1 0期 M e d J W e s t C h i n a,O c t o b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.1 0图3 各组大鼠肺组织中E-c a d h e r i n和-S MA的蛋白表达F i g u r e 3 P r o t e i n e x p r e s s i o n o f E-c a d h e r i n a n d -S MA i n l u n g t i s s u e o f r a t s i n e a c h g r o u p注:A.W e s t e r n b l o t检测;B、C.E-c a d h e r i n和-S MA的蛋白相对表达水平。与对照组比较,P0.0 5;与OVA组比较,P0.0 5。2.4 -亚麻酸对哮喘大鼠血清脂代谢指标的影响 与对照组比较,OVA组大鼠血清T C、T G和L D L水平显著升高,HD L显著降低(均P0.0 5)。与OVA组相比,OVA+4 0 m g/k g A L A组、OVA+8 0 m g/k g A L A组和O V A+D e x组大鼠血清T C、T G和L D L水平显著降低,H D L显著升高(均P 0.0 5)。见表2。表2 各组大鼠血清T C、T G、L D L和H D L水平(xs,mm o l/L)T a b l e 2 S e r u m T C,T G,L D L a n d H D L l e v e l s o f r a t s i n e a c h g r o u p分组T CT GL D LHD L 对照组2.1 10.1 90.5 40.0 52.0 10.1 10.8 60.0 9OVA组5.9 80.3 20.7 80.0 44.7 90.2 80.4 30.0 2OVA+4 0 m g/k g A L A组3.8 70.3 30.5 50.0 43.3 00.2 80.6 20.0 7OVA+8 0 m g/k g A L A组2.9 40.4 20.5 20.0 32.7 00.2 70.6 90.0 3OVA+D e x组3.2 20.2 70.4 90.0 42.4 80.1 80.6 60.0 5F2 1 1.3 7 07 4.2 0 52 0 9.1 3 56 7.0 1 0P0.0 0 10.0 0 10.0 0 10.0 0 1注:与对照组比较,P0.0 5;与OVA组比较,P0.0 5。2.5 -亚麻酸对哮喘大鼠肺组织中F G F 2 3-K l o t h o-F G F R 4信号的影响 q R T-P C R结果显示各组大鼠肺组织中F G F 2 3、K l o t h o、F G F R 4的mR NA表达水平差异 均 有 统 计 学 意 义(F=1 3 9 6.7 4 0,P0.0 0 1;F=7 5 9.1 2 6,P0.0 0 1;F=1 6 4 9.8 1 1,P0.0 0 1)。与对照组比较,OVA组大鼠肺组织中F G F 2 3和F G-F R 4的mR NA表达水平显著升高,K l o t h o的mR NA表达水平显著降低(均P0.0 5)。与OVA组相比,OVA+4 0 m g/k g A L A组、OVA+8 0 m g/k g A L A组和OVA+D e x组大鼠肺组织中F G F 2 3和F G F R 4的mR NA表达水平均显著降低,K l o t h o的mR NA表达水平显著升高(均P0.0 5)。W e s t e r n b l o t结果显示各组大鼠肺组织中F G F 2 3、K l o t h o、F G F R 4的蛋白表达水平差异均有统计学意义(F=8 0 3.4 8 8,P0.0 0 1;F=8 2 5.5 1 2,P0.0 0 1;F=4 9 6.1 9 9,P0.0 0 1)。与 对 照 组 比 较,OVA组 大 鼠 肺 组 织 中F G F 2 3和F G F R 4的蛋白表达水平显著升高,K l o t h o蛋白表达水平显著降低(均P0.0 5)。与OVA组相比,OVA+4 0 m g/k g A L A组、OVA+8 0 m g/k g A L A组和OVA+D e x组大 鼠肺组织中F G F 2 3和F G F R 4的蛋白表达水平均显著降低,K l o t h o蛋白表达水平显著升高(均P0.0 5)。见图4、图5。3 讨论-亚麻酸具有降压、降血脂、抗炎、抗癌、抗动脉粥样硬化、改善血管内皮功能异常等功能。炎症是哮喘的一种主要病理表现。据报道1 2,-3脂肪酸能够降低炎症反应。F e r r u c c i等1 3报道,血液中-亚麻酸水平较高与促炎标志物水平较低相关。Z h a o等1 4表明,摄入-亚麻酸通过抑制高胆固醇血症患者外周血单个核细胞产生I L-6、I L-1和T N F-而起到抗炎作用。B o s k a b a d y等6研究发现-亚麻酸改善了OVA诱导的哮喘大鼠炎症、氧化/抗氧化失衡,并且减轻了2241西部医学 2 0 2 3年1 0月 第3 5卷第1 0期 M e d J W e s t C h i n a,O c t o b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.1 0 图4 q R T-P C R检测各组大鼠肺组织中F G F 2 3、K l o t h o和F G F R 4的m R N A水平F i g u r e 4 q R T-P C R d e t e c t i o n o f F G F 2 3,K l o t h o a n d F G F R 4 m R N A l e v e l s i n l u n g t i s s u e o f r a t s i n e a c h g r o u p注:AC.F G F 2 3、K l o