LncRNA SNHG16靶向调控miR-516a-5p对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响.pdf

实用医学杂志 2023年第39卷第20期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.20LncRNA SNHG16靶向调控miR-516a-5p对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响杨丰帅 邱东达 杨运泉 龚双喜 陈石林 汪欣宇长沙市第一医院胃肠外科（长沙 410005）【摘要】目的分析LncRNA SNHG16靶向调控miR-516a-5p对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法采用实时荧光RT-PCR检测lncRNA SNHG16、miR-516a-5p表达，构建抑制lncRNA SNHG16表达的SW480细胞，并对SW480细胞转染，分为NC组、si-NC组、si-SNHG16组、miR-NC组、miR-516a-5p组、si-SNHG16+anti-miR-NC 组、si-SNHG16+anti-miR-516a-5p 组，检测各组细胞增殖、凋亡侵袭、迁移情况。结果与癌旁组织相比，结直肠癌组织中lncRNA SNHG16表达水平升高，miR-516a-5p表达水平降低（P 0.05）。与FHC组相比，HCT116组、SW620组、SW480组细胞中lncRNA SNHG16表达水平升高，miR-516a-5p表达水平较低，且SW480组lncRNA SNHG16水平最高、miR-516a-5p水平最低（P 0.05）。与si-NC组相比，si-SNHG16组lncRNA SNHG16表达水平降低（P 0.05），表明干扰lncRNA SNHG16表达的SW480细胞株构建成功，与 si-NC 组相比，si-SNHG16 组 CyclinD1、MMP-2、MMP-9、OD 值、迁移细胞数、侵袭细胞数降低，凋亡细胞升高（P 0.05）。与miR-NC组相比，miR-516a-5p组miR-516a-5p表达水平升高（P 0.05），表明高表达 miR-516a-5p 的 SW480 细胞株构建成功，与 miR-NC 组相比，miR-516a-5p 组 CyclinD1、MMP-2、MMP-9、OD 值、迁移细胞数、侵袭细胞数降低，凋亡细胞升高（P 0.05）。双荧光素酶报告试验显示，与miR-NC组相比，miR-516a-5p可使SNHG16荧光素酶活性降低（P 0.05）。与si-NC组相比，抑制lncRNA SNHG16表达可使SW480细胞中miR-516a-5p表达、凋亡细胞升高，CyclinD1、MMP-2、MMP-9、OD 值、迁移细胞数、侵袭细胞数降低（P 0.05），与 si-SNHG16+anti-miR-NC组相比，si-SNHG16+anti-miR-516a-5p组miR-516a-5p表达、凋亡细胞降低，CyclinD1、MMP-2、MMP-9、OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数升高（P 0.05）。结论干扰lncRNA SNHG16表达，可对miR-516a-5p表达进行调控，抑制结直肠癌细胞增殖、侵袭、迁移，并促进其凋亡。【关键词】结直肠癌；LncRNA SNHG16；miR-516a-5p；增殖；侵袭；迁移【中图分类号】R735The effect of targeted regulation of miR516a5p by LncRNA SNHG16 on the proliferation，invasion，and migration ability of colorectal cancer cells YANG Fengshuai，QIU Dongda，YANG Yunquan，GONG Shuangxi，CHEN Shilin，WANG Xinyu.Department of Gastrointestinal，Changsha First Hospital，Changsha 410005，China 【Abstract】Objective Analyze the effect of LncRNA SNHG16 targeted regulation of miR516a5p on the proliferation，invasion，and migration ability of colorectal cancer cells.Methods Real time fluorescence RTPCR was used to detect the expression of lncRNA SNHG16 and miR516a5p，and SW480 cells were constructed to inhibit lncRNA SNHG16 expression.SW480 cells were transfected and divided into a NC group，a siNC group，a siSNHG16 group，a miRNC group，a miR516a5p group，a siSNHG16+anti miRNC group，and a siSNHG16+anti miR516a5p group to detect cell proliferation，apoptosis，invasion，and migration in each group.Results Compared with adjacent tissues，the expression level of lncRNA SNHG16 in colorectal cancer tissue increased，while the expression level of miR516a5p decreased（P 0.05）.Compared with the FHC group，the expression levels of lncRNA SNHG16 and miR516a5p were increased in the HCT116，SW620，and SW480 groups，while the expression levels of miR516a5p were lower.The SW480 group had the highest lncRNA SNHG16 and the lowest miR516a5p levels（P 0.05）.Compared with the siNC group，the expression level of lncRNA SNHG16 in the siSNHG16 group decreased（P 0.05），indicating the successful construction of SW480 cell lines that interfered with lncRNA SNHG16 expression.Compared with the siNC group，the siSNHG16 group showed a decrease in CyclinD1，MMP2，基 础 研 究doi：10.3969/j.issn.1006-5725.2023.20.006基金项目：湖南省卫生健康委科研计划项目（编号：202204013155）；长沙市2020年度指导性科技计划项目（编号：kzd2001091）2591实用医学杂志 2023年第39卷第20期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.20MMP9，OD value，number of migrating and invading cells，and an increase in apoptotic cells（P 0.05）.Compared with the miRNC group，the miR516a5p group showed an increase in miR516a5p expression levels（P 0.05），indicating the successful construction of SW480 cell lines with high expression of miR516a5p.Compared with the miRNC group，the miR516a5p group showed a decrease in CyclinD1，MMP2，MMP9，OD value，number of migrating cells，and number of invasive cells，while an increase in apoptotic cells（P 0.05）.The dual luciferase report test showed that compared with the miRNC group，miR516a5p could reduce the luciferase activity of SNHG16（P 0.05）.Compared with the siNC group，inhibiting the expression of lncRNA SNHG16 resulted in an increase in miR516a5p expression and apoptotic cells in SW480 cells，as well as a decrease in CyclinD1，MMP2，MMP9，OD value，number of migratory cells，and number of invasive cells（P 0.05）.Compared with the siSNHG16+anti miRNC group，the siSNHG16+anti miR516a5p group showed a decrease in miR516a5p expression and apoptotic cells，while the cyclinD1，MMP2，MMP9，OD value，number of migratory cells，and number of invasive cells increased（P 0.05）.Conclusion Interfering with lncRNA SNHG16 expression can regulate the expression of miR516a5p，inhibit the proliferation，invasion，migration，and promote apoptosis of colorectal cancer cells.【Key words】colorectal cancer；LncRNA SNHG16；miR516a5p；proliferation；invasion；transfer结直肠癌为消化道常见恶性肿瘤，临床发病率逐年升高，发病早期，患者无明显症状，多数患者确诊时已为晚期，可造成患者不良预后。结直肠癌临床发病机制复杂，故对其分子机制进行分析，寻找治疗结直肠癌新途径具有重要意义。临床研究显示，在结直肠癌发展过程中，LncRNA、miRNAs 可作为促癌、抑癌基因，对细胞的增殖、侵袭、凋亡进行调控1。lncRNA可对基因的转录进行调节，在肿瘤的发生、发展中作用较为重要，lncRNA SNHG16 可促进多种肿瘤发展，且与肿瘤的分期、耐药具有一定相关性，可对机体内相关信号通路进行调节2。miR-516a-5p 在肝癌、肺癌、结直肠癌等多种肿瘤中表达下降，可对多种蛋白进行调节，进而控制细胞的增殖、迁移3。临床研究中，暂未有研究显示lncRNA SNHG16可靶向调控 miR-516a-5p 对结直肠癌细胞的增殖、迁移进行调节，基于此，本研究分析干扰 lncRNA SNHG16 调控 miR-516a-5p 对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响。1材料与方法1.1主要试剂人结直肠癌细胞系（HCT116、SW620、SW480）购自于上海抚生实业有限公司，结直肠上皮细胞FHC购自上海澳音生物科技有限公司。DMEM 完全培养液（北京信生元生物医学科技有限公司）；培养箱（杭州诺丁科学器材有限公司）；电化学发光试剂盒（上海联硕生物科技有限公司）；全蛋白提取试剂盒（昆山远慕生物科技有限公司）；四甲基偶氮唑盐（MTT）试剂盒（武汉益普生物科技有限公司）；四甲基联苯胺（TMB）溶液（上海化邦生物科技有限公司）；pcDNA、lncRNA SNHG16、anti-miR-NC、anti-miRNA-516a-5p、si-NC、si-SNHG16、miRNC、miRNA-516a-5p购自翌圣生物科技（上海）股份有限公司；CyclinD1、MMP-2、MMP-9、GADTH抗体购自上海延慕实业有限公司。1.2标本来源选取2022年3月至2023年3月在医院进行手术治疗的20例结直肠癌患者，取患者结直肠癌组织、癌旁组织，该研究经患者、家属知情同意，经我院伦理委员会审核批准。1.3细胞培养将 FHC、HCT116、SW620、SW480细胞，均置于含 1%双抗、10%胎牛血清的 RPMI-1640培养基中予以培养，此培养基内含10%的灭活的 FBS，在 CO2 5%37 的培养箱内予以培育，当细胞的融合度至80%时，选取胰蛋白酶（0.25%）对细胞进行消化，后对其实施传代培育，选用3次以上传代的对数生长期的细胞予以后续的试验。1.4细胞转染取 SW480 细胞，作为 NC 组，对SW480 细胞转染 si-NC，作为 si-NC 组，对 SW480细胞做 SNHG16 抑制剂转染，作为 si-SNHG16 组，miR-NC 组为 SW480 细胞转染 miR-NC，miR-516a-5p 组为 SW480 细胞转染 miR-516a-5p 模拟物，si-SNHG16+anti-miR-NC组为SW480细胞做SNHG16抑制剂转染+anti-miR-NC，si-SNHG16+anti-miR-516a-5p 组 SW480 细胞做 SNHG16 抑制剂转染+miR-516a-5p抑制剂，分组后，继续对细胞培养，细胞融合度为80%后，进行转染，连续转染24 h。1.5检测方法1.5.1lncRNA SNHG16、miR516a5p 表达水平检测提取癌组织、癌旁组织，放入液氮中研磨，根据试剂盒说明书提取总RNA，后转录为cDNA，采用 RT-PCR 对 lncRNA SNHG16、miR-516a-5p 表达量进行鉴定，反应条件：95 预变性3 min、95 2592实用医学杂志 2023年第39卷第20期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.20变性 5 s、56 退火 10 s，72 25，进行 40 个循环，72 10 min，采用 2-Ct方法计算出 lncRNA SNHG16、miR-516a-5p 的 表 达 量。引 物 序 列见表1。1.5.2细胞增殖检测采用MTT比色法对细胞的增殖情况进行检测，对细胞的浓度进行调整，后将其接种于96孔板，加入0.2 mL细胞悬液，在37、5%CO2环境中培养，分别于24、48、72 h在其中添加0.01 mL MTT试剂，孵育4 h，后采用酶标仪测定490 nm处细胞OD值，对细胞增殖率进行计算，试验重复进行5次，结果取平均值。1.5.3细胞凋亡检测细胞凋亡情况通过TUNEL法进行测定，将所培养细胞做洗涤、DAPI 染色封片后的细胞核分别呈现为蓝色荧光（阴性细胞数）、绿色荧光（阳性细胞数），之后细胞凋亡情况采用荧光显微镜进行观察，细胞凋亡指数=凋亡细胞数/总细胞数100%。试验重复测量3次。1.5.4细胞迁移情况检测细胞迁移能力通过进行划痕试验进行检测，选取SW480用胰蛋白酶分解，获取细胞悬液接种到6孔板上，所有单层细胞采用1.60 mL移液器枪头自上而下做一条划痕，刮下细胞用 PBS 缓冲液洗涤，向干净培养基中加入4 mL溶液，37 下培育29 h，弃去培养液，在显微镜下观察并记录视野平均值，重复3次，取细胞迁移数平均值。1.5.5细胞侵袭能力检测细胞侵袭能力通过Transwell 实验进行检测，在 Transwell 小室铺基质胶，24 孔板中加入 600 L 10%胎牛血清培养基，上室分别接种 100 L 各组细胞悬液，37、5%CO2培养箱培养 18 h。滤膜用 4%多聚甲醛固定20 min。棉签擦去滤膜表面细胞，结晶紫染色，光镜下随机选 5 个视野，计算细胞总数，以穿过Matrigel 基质胶的细胞数来表示 SW480 的侵袭能力。循环3次，计算出SW480侵袭数总均值。1.5.6CyclinD1、MMP2、MMP9 检测采用Western Blot 法检测，将培养的 SW480 细胞放入离心管，将 RIPA 裂解液、蛋白酶抑制剂加入，以12 000 r/min离心处理10 min，制作组织匀浆，取上层清液，使用BCA法对蛋白浓度测定，后取相同质量蛋白，放入 10%SDS-PAGE 凝胶中，进行电泳、转膜处理，后采用 5%脱脂奶粉进行封管处理，放入 4 冰箱中，过夜处理，后进行清洗。加入CyclinD1、MMP-2、MMP-9 抗体，孵育 2 h，进行清洗，加入HRP标记二抗，室温下孵育3 h，凝胶成像系统下观察成像情况，计算恢复值，以GAPDH 为内参，对蛋白表达情况分析。1.5.7双荧光素酶报告试验采用 starBase 网站对预测 lncRNA SNHG16 表靶基因，结果显示，lncRNA SNHG16 中含有与 miR-516a-5p 互补核苷酸序列，包括 WT-lncRNA SNHG16、MUT-lncRNA SNHG16，将 WT-lncRNA SNHG16、MUT-lncRNA SNHG16、miR-NC、miR-516a-5p 转入 SW480 细胞，进行双荧光素酶检测。试验重复进行 5 次，结果取平均值。1.6统计学方法采用SPSS 26.0软件分析，计量资料采用均值标准误表示，符合正态分布的两组间比较采用t检验，多组间进行比较采用F检验，计数资料以率（%）表示，P 0.05表示其差异有统计学意义。2结果2.1LncRNA SNHG16、miR516a5p在结直肠癌组织中的表达与癌旁组织相比，结直肠癌组织中 lncRNA SNHG16 表达水平升高，miR-516a-5p表达水平降低，差异有统计学意义（P 0.05）。见表2。2.2结直肠癌细胞系中 LncRNA SNHG16、miR516a5p 表达水平与 FHC 组相比，HCT116 组、SW620 组、SW480 组细胞中 lncRNA SNHG16 表达水平升高，miR-516a-5p 表达水平较低，且 SW480组lncRNA SNHG16水平最高、miR-516a-5p水平最低，差异有统计学意义（P 0.05）。与si-NC组相比，si-SNHG16组 lncRNA SNHG16 表达水平降低（P 0.05），表明干扰 lncRNA SNHG16 表达的 SW480细胞株构建成功，与 si-NC 组相比，si-SNHG16 组 CyclinD1、MMP-2、MMP-9、OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数降低，凋亡细胞升高，差异有统计学意义（P 0.05）。与 miR-NC 组相比，miR-516a-5p组miR-516a-5p表达水平升高（P 0.05），表明高表达miR-516a-5p的SW480细胞株构建成功，与miR-NC 组相比，miR-516a-5p 组 CyclinD1、MMP-2、MMP-9、OD 值、迁移细胞数、侵袭细胞数降低，凋亡细胞升高，差异有统计学意义（P 0.05），见表5、图2。2.5lncRNA SNHG16 靶向调控 miR516a5p 表达双荧光素酶报告试验显示，与 miR-NC 组相比，miR-516a-5p 可使 SNHG16 荧光素酶活性降低（P 0.05），见表6。2.6沉默 miR516a5p 表达逆转干扰 lncRNA SNHG16对SW480细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响与si-NC组相比，抑制lncRNA SNHG16表达可使SW480细胞中miR-516a-5p表达、凋亡细胞升高，CyclinD1、MMP-2、MMP-9、OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数降低（P 0.05），与 si-SNHG16+anti-miR-NC组相比，si-SNHG16+anti-miR-516a-5p组miR-516a-5p 表达、凋亡细胞降低，CyclinD1、MMP-2、MMP-9、OD 值、迁移细胞数、侵袭细胞数升高，差异有统计学意义（P 0.05），见表7、图3。表2LncRNA SNHG16、miR-516a-5p在结直肠癌组织中的表达Tab.2Expression of LncRNA SNHG16，miR-516a-5p in colorectal cancer tissuesx s组别癌旁组织结直肠癌组织t值P值SNHG161.00 0.213.58 0.4217.375 0.001miR-516a-5p1.00 0.360.45 0.054.7850.001表3结直肠癌细胞系中LncRNA SNHG16、miR-516a-5p表达水平Tab.3Expression levels of LncRNA SNHG16 andmiR-516a-5p in colorectal cancer cell linesx s组别FHC组HCT116组SW620组SW480组F值P值SNHG161.00 0.184.92 0.584.94 0.595.14 0.6120.585 0.001miR-516a-5p1.00 0.270.49 0.060.44 0.050.41 0.046.8360.001表4干扰lncRNA SNHG16表达对SW480细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响Tab.4Effects of interfering lncRNA SNHG16 expression on proliferation，apoptosis，invasion，and migration of SW 480 cellsx s组别NC组si-NC组si-SNHG16组F值P值SNHG161.00 0.151.04 0.180.35 0.424.6090.001CyclinD10.95 0.080.92 0.070.52 0.0415.2030.001MMP-20.75 0.080.77 0.090.35 0.0414.1420.001MMP-90.81 0.090.79 0.080.29 0.0317.3330.001OD值（490 nm）24 h0.46 0.050.43 0.040.22 0.0313.0160.00148 h0.78 0.080.77 0.070.48 0.069.4870.00172 h1.19 0.221.17 0.200.64 0.067.6270.001凋亡细胞（%）7.25 0.817.29 0.8223.25 3.4814.1610.001迁移细胞数175.25 23.14177.32 23.1884.25 9.2511.5480.001侵袭细胞数132.36 21.03133.05 21.0648.25 5.3113.2630.001si-NC组si-SNHG16组NC组CyclinD1MMP-2MMP-9GAPDH图1Western blot蛋白图Fig.1Western blot protein plot2594实用医学杂志 2023年第39卷第20期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.203讨论临床多采用手术联合化疗对结直肠癌患者治疗，但该治疗方式预后较差，故寻找结直肠癌的新型治疗靶点，对结直肠癌早期筛查具有重要意义。临床研究表明4，多种细胞的分化、转移、增殖等生物学进程可受到 lncRNA 的影响，lncRNA为潜在的致癌基因，lncRNA 表达升高，可使肿瘤细胞的发生、发展受到影响，为临床治疗恶性肿瘤的潜在靶点。SNHG16为致癌基因，表达升高后，可促进结直肠癌的进展、生长，在结直肠癌的临床病理学特征中，可对细胞的凋亡、转移、侵袭进行调控5。lncRNA SNHG16为小核仁RNA宿主基因中的成员，为致癌RNA，在多种恶性肿瘤中具有较高的表达水平，并可影响肿瘤患者预后6。有关研究显示7，lncRNA SNHG16在肝癌组织、细胞中表达升高，抑制其表达，可使肝癌细胞的迁移、增殖、侵袭减缓，且检测lncRNA SNHG16表达，可用于预测肝癌患者的总生存期。lncRNA SNHG16表达升高，可影响脂质代谢的相关基因，使胃癌细胞的增殖速度加快，促进其迁移、侵袭8。有研究显表5高表达miR-516a-5p对SW480细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响Tab.5Effects of high expression of miR-516a-5p on the proliferation，apoptosis，invasion，and migration of SW 480 cellsx s组别NC组miR-NC组miR-516a-5p组F值P值miR-516a-5p0.41 0.050.43 0.061.21 0.1912.8770.001CyclinD10.87 0.090.84 0.080.46 0.0512.5930.001MMP-20.81 0.070.83 0.080.42 0.0514.3370.001MMP-90.85 0.090.82 0.080.31 0.0417.3380.001OD值（490 nm）24 h0.52 0.060.55 0.070.28 0.0311.3140.00148 h0.81 0.090.79 0.080.41 0.0512.2860.00172 h1.23 0.211.25 0.240.71 0.087.3170.001凋亡细胞（%）6.25 0.346.21 0.3221.94 3.2515.1840.001迁移细胞数185.36 24.05188.21 26.1490.29 10.0311.5370.001侵袭细胞数121.36 20.05122.41 21.1853.05 6.2810.2810.001miR-516a-5p组miR-NC组NC组CyclinD1MMP-2MMP-9GAPDH图2Western blot蛋白图Fig.2Western blot protein plot表6双荧光素酶报告试验Tab.6Dual-luciferase reporter assayx s组别miR-NC组miR-516a-5p组t值P值WT-SNHG161.03 0.140.49 0.0511.4870.001MUT-SNHG161.02 0.121.00 0.100.4050.690表7沉默miR-516a-5p表达逆转干扰lncRNA SNHG16对SW480细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响Tab.7Silencing of miR-516a-5p expression reversed the effects of interfering lncRNA SNHG16 on the proliferation，apoptosis，invasion，and migration of SW 480 cellsx s组别si-NC组si-SNHG16组si-SNHG16+anti-miR-NC组si-SNHG16+anti-miR-516a-5p组F 值P 值miR-516a-5p0.38 0.041.06 0.211.04 0.200.45 0.068.9350.001CyclinD10.92 0.070.52 0.040.50 0.030.94 0.0816.2850.001MMP-20.79 0.080.31 0.040.30 0.030.81 0.0917.0000.001MMP-90.80 0.090.27 0.030.31 0.040.75 0.0815.5560.001OD值（490 nm）24 h0.44 0.050.20 0.030.23 0.040.46 0.0610.0860.00148 h0.81 0.090.51 0.060.50 0.050.77 0.089.0500.00172 h1.19 0.200.72 0.080.75 0.091.23 0.216.6450.001凋亡细胞（%）7.34 0.8521.58 3.4720.66 3.347.49 0.8712.0670.001迁移细胞数170.36 22.0380.36 9.0179.18 8.93166.52 21.1812.0160.001侵袭细胞数142.36 22.1450.36 6.0348.36 5.85138.36 21.1112.9920.001si-SNHG16+anti-miR-516a-5p组si-SNHG16+anti-miR-NC组si-SNHG16组si-NC组CyclinD1MMP-2MMP-9GAPDH图3Western blot蛋白图Fig.3Western blot protein plot2595实用医学杂志 2023年第39卷第20期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.20示，lncRNA SNHG16高表达于结直肠癌患者，抑制lncRNA SNHG16表达，可使细胞的凋亡速度加快，并抑制其转移，使肿瘤细胞的存活率下降9。本文研究显示，干扰lncRNA SNHG16表达，可使 CyclinD1、MMP-2、MMP-9、OD值表达降低，并促进细胞的凋亡，抑制肿瘤细胞的转移、侵袭，该研究与上述研究一致，表明lncRNA SNHG16具有致癌作用，干扰 lncRNA SNHG16 表达，可降低细胞的增殖、转移能力，促使其恢复。miRNA 为调控性小 RNA，在多种疾病中表达水平处于异常状态，可参与多种疾病发生、发展，miRNA具有调节基因降解的作用，可对基因的翻译进行抑制，并调节基因的衰减，影响其他miRNA表达，且miRNA可对炎症介质的释放、免疫细胞的分化进行调节10。在非小细胞肺癌中，miR-516a-5p具有抑癌作用，具有利于非小细胞肺癌存活的作用，miR-516a-5p 低表达于结直肠癌组织，可影响结直肠癌细胞的增殖、转移，为结直肠癌的抑制因子11。研究显示12，lncRNA SNHG16通过与不同miRNA分子结合对肿瘤的进展进行调控，lncRNA SNHG16可介导miR-877-5p/FOXP4轴，使喉鳞状细胞癌细胞的增殖速度加快，促进喉鳞状细胞癌的发展，敲减lncRNA SNHG16表达，升高miR-342-3p表达，使多发性骨髓瘤细胞的凋亡速度加快，抑制肿瘤的发展，且 lncRNA SNHG16 可下调 DKK3 表达，使胃癌上皮-间质转化速度加快。细胞转移能力的增加与肿瘤的进展具有一定相关性，CyclinD1为肿瘤启动子，MMP-2、MMP-9 为基质金属蛋白酶，可使细胞外基质的沉积发生降解，促进细胞的迁移、侵袭。本研究显示，miR-516a-5p 在结直肠癌中表达下降，lncRNA SNHG16表达升高，两者呈负相关，敲减 lncRNA SNHG16 表达，可使 miR-516a-5p 激活，抑制结直肠癌细胞的转移、侵袭，并降低 CyclinD1、MMP-2、MMP-9 表达，表明干扰lncRNA SNHG16 表达，可抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移，促进其凋亡，是荧光素酶报告显示，lncRNA SNHG16对miR-516a-5p具有负调控作用。本研究显示，miR-516a-5p表达降低，可逆转干扰lncRNA SNHG16 对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用，使 CyclinD1、MMP-2、MMP-9 表达升高，表明在结直肠癌中，lncRNA SNHG16 起miR-516a-5p海绵作用，可对结直肠癌的生物学进程进行调节。综上所述，lncRNA SNHG16 在结直肠癌中表达升高，miR-516a-5p 表达降低，抑制 lncRNA SNHG16表达，可使miR-516a-5p表达升高，增加细胞凋亡率升高，并抑制其增殖、迁移、侵袭，表明lncRNA SNHG16 可靶向调控 miR-516a-5p，使结直肠癌细胞的增殖减缓，抑制结直肠癌的发展，具有较好治疗效果，可成为结直肠癌的治疗靶点。本研究在研究过程中也具有相对局限性，未进行动物体试验，且未进一步验证miR-516a-5p对结直肠癌细胞的增殖、凋亡的影响，后续应建立动物试验模型，进一步研究。【Author contributions】YANG Fengshuai：thesis revision and revision，participation in research，data collection and thesis writing；QIU Dongda：data collection，thesis writing and document retrieval；YANG Yunquan and GONG Shuangxi：data collation and statistical analysis，research（content）design；CHEN Shilin and WANG Xinyu：research guidance，paper revision，financial support，data collation.All authors read and approved the final manuscript as submitted.参考文献1 CHEN L，QIU C H，CHEN Y，et al.LncRNA SNHG16 drives proliferation，migration，and invasion of lung cancer cell through modulation of miR-520/VEGF axis J.Eur Rev Med Pharmacol Sci，2020，24（18）：9522-9531.2 NI C，FANG Q Q，CHEN W Z，et al.Breast cancer-derived exosomes transmit lncRNA SNHG16 to induce CD73+1 Treg cellsJ.Signal Transduct Target Ther，2020，5（1）：41.3 FONSEAC Y G，GONZLEZ-GIRALDO Y，SANTOS J G，et al.The hsa-miR-516a-5p and hsa-miR-516b-5p microRNAs reduce the migration and invasion on T98G glioblastoma cell lineJ.Cancer Genet，2023，270-271（8）：12-21.4 巩娟，张栋.血清长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因16和miR-147 a在重症肺炎患者血清中的表达及临床意义 J.陕西医学杂志，2023，52（1）：75-78，82.5 倪志福，汪晓玲，屈振繁，等.lncRNA SNHG16通过靶向miR-22-3p调控肾母细胞瘤WIT49细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的分子机制 J.临床外科杂志，2021，29（9）：883-888.6 刘景云，杨斌，熊丽，等.上皮性卵巢癌患者血清miR-302b-3p、lncRNA