IL-37调控miR-106b-5p_PTEN抑制肾细胞癌细胞生物学行为.pdf

中国免疫学杂志2023 年第 39 卷IL-37调控miR-106b-5p/PTEN抑制肾细胞癌细胞生物学行为顾鹏 陶维雄 彭伟 魏世平（长江航运总医院泌尿外科，武汉 430000）中图分类号 R692 文献标志码 A 文章编号 1000-484X（2023）08-1694-06摘要 目的：探讨IL-37对肾细胞癌细胞生物学行为的影响和潜在机制。方法：RT-qPCR检测肾细胞癌组织中IL-37 mRNA和miR-106b-5p表达。Western blot检测肾细胞癌组织中10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物（PTEN）蛋白表达。将肾细胞癌细胞786-0分为对照组、IL-37（10、50、100 ng/ml）组、anti-miR-NC组、anti-miR-106b-5p组、IL-37+miR-NC组、IL-37+miR-106b-5p组。采用MTT法、平板克隆实验、划痕愈合实验、流式细胞术检测786-0细胞增殖、迁移和凋亡能力。荧光素酶实验检测miR-106b-5p与PTEN的靶向关系。结果：肾细胞癌组织中miR-106b-5p表达量显著升高（P0.05），IL-37 mRNA和PTEN蛋白表达量显著降低（P0.05）。与对照组比较，IL-37（10、50、100 ng/ml）组细胞活力、集落形成数、迁移距离、miR-106b-5p表达显著降低（P0.05），凋亡率、PTEN蛋白表达显著升高（P0.05）。与anti-miR-NC组比较，anti-miR-106b-5p组细胞活力、集落形成数、迁移距离显著降低（P0.05），凋亡率、PTEN蛋白表达显著升高（P0.05）。与IL-37+miR-NC组比较，IL-37+miR-106b-5p组细胞活力、集落形成数、迁移距离显著升高（P0.05），凋亡率、PTEN蛋白表达显著降低（P0.05）。PTEN是miR-106b-5p的靶基因。结论：外源性IL-37可抑制肾细胞癌细胞的增殖和迁移，诱导细胞凋亡，其抗肿瘤机制可能是通过抑制miR-106b-5p/PTEN途径发挥作用。关键词 IL-37；肾细胞癌；miR-106b-5p；细胞增殖；迁移；凋亡；10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物IL-37 regulates miR-106b-5p/PTEN to inhibit biological behavior of renal cell carcinoma cellsGU Peng，TAO Weixiong，PENG Wei，WEI Shiping.Department of Urology，Changjiang Shipping General Hospital，Wuhan 430000，ChinaAbstract Objective：To investigate the effect of IL-37 on the biological behavior of renal cell carcinoma cells and further to explore its potential mechanism.Methods：The expressions of IL-37 mRNA and miR-106b-5p in renal cell carcinoma tissues were measured using RT-qPCR.The expression of phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10（PTEN）protein in renal cell carcinoma tissues were detected by Western blot.Renal cell carcinoma 786-0 cells were divided into control group，IL-37（10，50，100 ng/ml）groups，anti-miR-NC group，anti-miR-106b-5p group，IL-37+miR-NC group and IL-37+miR-106b-5p group.MTT method，plate cloning assay，scratch healing assay and flow cytometry were applied to detect the viability，colony formation migration and apoptosis of 786-0 cell respectively.Luciferase experiment was performed to confirm the targeting relationship between miR-106b-5p and PTEN.Results：The expression of miR-106b-5p in renal cell carcinoma tissue was significantly increased（P0.05），while the expressions of IL-37 mRNA and PTEN protein were significantly decreased（P0.05）.Compared with the control group，the cell viability，colony formation number，migration distance，miR-106b-5p expression in IL-37（10，50，100 ng/ml）groups were significantly decreased（P0.05），apoptosis rate and PTEN protein expression were significantly increased（P0.05）.Compared with the anti-miR-NC group，the cell viability，colony formation number and migration distance in anti-miR-106b-5p group were significantly reduced （P0.05），and apoptosis rate and PTEN protein expression were significantly increased（P0.05）.Compared with IL-37+miR-NC group，the cell viability，colony formation number，and migration distance in IL-37+miR-106b-5p group were significantly increased（P0.05），and apoptosis rate and PTEN protein expression were significantly decreased（P5 cm）为2017年1月至2019年5月长江航运总医院泌尿外科收集的 35例组织标本，其中男性20例，女性15例，年龄3068岁，中位年龄52岁。所有标本均经组织病理学证实，癌旁组织标本证实为无癌组织浸润。本研究获得长江航运总医院医学伦理委员会批准（201612-130601），所有患者或其家属均签署知情同意书。1.1.2细胞与试剂人RCC细胞786-0细胞、RPMI1640培养基购于武汉普诺赛生命科技公司；miRNA第一链cDNA合成试剂盒、miRNA荧光定量PCR检测试剂盒购于美国Gene Copoeia公司；逆转录试剂盒、SYBR Green master mix购于大连TaKaRa生物公司；脂质体 Lipofectamine3000、Trizol 试剂购于美国Invitrogen公司；miR-106b-5p模拟物（mimics）、抑制物（anti-miR-106b-5p）以及相应对照（miR-NC、anti-miR-NC）、荧光素酶报告质粒购于广州锐博生物；噻唑蓝（MTT）试剂盒、膜联蛋白 V-异硫氰酸荧光素（Annexin-V-FITC）凋亡检测试剂盒购于北京百奥莱博生物公司；PTEN兔单克隆抗体、磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）兔单克隆抗体购于上海碧云天生物公司。1.2方法1.2.1实时定量PCR（RT-qPCR）检测IL-37 mRNA、miR-106b-5p 表达参照 Trizol 试剂使用说明分离RCC 组织、癌旁组织中总 RNA。采用逆转录试剂盒、SYBR Green master mix逆转录和RT-qPCR检测IL-37 mRNA表达。采用 miRNA第一链 cDNA合成试剂盒、miRNA荧光定量PCR检测试剂盒逆转录和RT-qPCR 检测 miR-106b-5p 表达。2Ct法计算 IL-37 mRNA、miR-106b-5p表达量。miR-106b-5p正向：5-TGCGGCAACACCAGTCGATGG-3，反 向：5-CCAGTGCAGGGTCCGAGGT-3；内参 U6 正向：5-CTCGCTTCGGGCAGCACA-3，反 向：5-AACGCT-TCACGAATTTGCGT-3；IL-37 正 向：5-TTAGA-AGACCCGGCTGGAAGCC-3，反向：5-AGATCTCTGGGCGTATGTAGT-3；内参 GAPDH 正向：5-GA-AGGTCGGAGTCAACGGATTT3-3，反向：5-CCTGGAAGATGGTGATGGGATT3-3。1.2.2细胞培养和实验分组786-0细胞接种RPMI1640培养基（添加1%青霉素链霉素和10%胎牛血清）置于95%湿度、5%CO2、37 培养箱中培养。胰酶消化生长汇合度为80%细胞，按照1 3比例传代。将对数生长期786-0细胞按照2105个/孔接种于 6孔板，参照 Lipofectamine3000说明书分别转染 anti-miR-NC、anti-miR-106b-5p、miR-NC、miR-106b-5p mimics至生长汇合度为50%的细胞，收集转染48 h细胞。实验分组：正常培养的786-0细胞记为对照（control）组；用含10、50、200 ng/ml IL-37的培养液孵育 786-0 细胞，依次记为 IL-37（10 ng/ml）组、IL-37（50 ng/ml）组、IL-37（100 ng/ml）组；转染 anti-miR-NC、转染 anti-miR-106b-5p 的 786-0 细胞依次记为anti-miR-NC 组、anti-miR-106b-5p 组；用 200 ng/ml IL-37 的培养液分别孵育转染 miR-NC、转染 miR-106b-5p mimics的细胞依次记为 IL-37+miR-NC组、IL-37+miR-106b-5p组。1.2.3MTT 法检测细胞活力将未转染细胞、转染48 h细胞按照1104个/孔的密度接种于96孔板，按照 1.2.2实验分组进行处理，在培养 24 h、48 h、1695中国免疫学杂志2023 年第 39 卷72 h时每孔加入10 l的MTT溶液。将培养板放入培养箱孵育4 h后，每孔加入150 l的二甲基亚砜，置于低速摇床振荡10 min溶解结晶。用酶标仪测定各孔在490 nm的光密度（OD）值。1.2.4平板克隆实验检测细胞克隆能力收集1.2.2各组细胞，按照5102个/孔密度接种于6孔板，轻柔晃动平板时分散均匀。置于培养箱孵育1014 d。当出现细胞集落时终止培养。甲醇固定菌落，0.5%结晶紫进行细胞染色。显微镜下计数50个细胞的集落数以表示细胞克隆能力。1.2.5划痕愈合实验检测细胞迁移能力将1.2.2各组细胞按照1105个/孔接种6孔板，当细胞生长汇合度约为90%时采用无菌枪头垂直于单层细胞表面划一条直线，PBS去除碎片，显微镜下测定划痕距离，记为0 h划痕距离。置于培养箱孵育24 h后，显微镜下测定24 h划痕距离。迁移距离（m）=0 h划痕距离24 h划痕距离1.2.6流式细胞术检测细胞凋亡PBS洗涤786-0细胞 2 次，加入 1结合缓冲液调整细胞密度为 1105个/ml。取 100 l细胞悬液加入反应管内，随后加入 5 l Annexin-V-FITC、5 l 碘化丙啶（PI）。将反应管置于暗箱反应15 min。然后向反应管内补加 1结合缓冲液使总体积达到 500 l。流式细胞仪分析细胞凋亡率。1.2.7Western blot检测PTEN蛋白表达RIPA法提取RCC组织、癌旁组织、各组细胞中总RNA，测定蛋白浓度合格后，将蛋白样品与5样品缓冲液按照4 1混合，在95 加热10 min，然后进行SDS-PAGE。电泳90 min后，将蛋白转移到聚偏氟乙烯膜上。用5%脱脂牛奶在室温下封闭膜1 h，然后用1 1 000稀释的PTEN抗体4 孵育过夜，随后将膜与IgG二抗在室温下孵育1 h。将膜置于塑料盒内，滴加化学发光试剂进行显影定影。利用凝胶图像处理系统进行灰度分析。1.2.8双荧光素酶报告实验依据 Targetscan 数据库预测的miR-106b-5p与PTEN-3-UTR区域结合位，构建含有miR-106b-5p结合位点序列的（WT）或突变型（MUT）PTEN荧光素酶报告质粒WT-PTEN、MUT-PTEN。按照脂质体转染法将WT-PTEN、MUT-PTEN分别与miR-106b-5p mimics或miR-NC共转染786-0细胞，使用双荧光素酶报告基因检测试剂盒分析转染 48 h 后各组 786-0 细胞的相对荧光素酶活性。1.3统计学分析所有数据均使用SPSS16.0软件分析，以x s表示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析和LSD-t检验。P0.05为差异有统计学意义。2 结果 2.1 RCC 组 织 中 IL-37 mRNA、PTEN 蛋 白 以 及miR-106b-5p 表达与癌旁组织相比，RCC 组织中miR-106b-5p 表 达 量 显 著 升 高（P0.05），IL-37 mRNA、PTEN 蛋白表达量显著降低（P0.05）。见 图1。2.2IL-37抑制786-0细胞的增殖、迁移，诱导细胞凋亡采用不同剂量的 IL-37（10、50 和 100 ng/ml）处理786-0细胞，与对照组比较，IL-37剂量依赖性地降低786-0细胞活力（48 h、72 h）、集落形成数和迁移距离（P0.05），提高细胞凋亡率（P0.05）。见图2。2.3IL-37抑制786-0细胞中miR-106b-5p表达、促进 PTEN 蛋白表达用不同剂量的 IL-37（10、50和100 ng/ml）处理786-0细胞，与对照组相比较，IL-37剂量依赖性地降低 786-0细胞 miR-106b-5p表达量（P0.05）或升高 PTEN 蛋白表达量（P0.05）。见图3。2.4抑制miR-106b-5p对786-0细胞增殖、迁移、诱导凋亡及PTEN蛋白表达的影响将anti-miR-NC、anti-miR-106b-5p 分别转染 786-0 细胞，与 anti-miR-NC 组 相 比，anti-miR-106b-5p 组 786-0 细 胞 miR-106b-5p 表达量降低（P0.05），细胞活力（48 h、72 h）、集落形成数、迁移距离降低（P0.05），细胞凋亡率、PTEN蛋白表达显著升高（P0.05）。见图4。2.5miR-106b-5p和PTEN的靶向关系Targetscan预测到PTEN的3-UTR区域与miR-106b-5p之间存在特异性结合位点，见图5A。检测相对荧光素酶活性显示，与转染 miR-NC 比较，转染 miR-106b-5p Note：A.IL-37 is low expressed in renal cell carcinoma tissues；B.miR-106b-5p is highly expressed in renal cell carcinoma tissues；C.PTEN protein is low expression in renal cell carcinoma tissues.Compared with paracancer tissues group，*.P0.05.图1IL-37、miR-106b-5p和PTEN蛋白在肾细胞癌组织中的表达Fig.1Expressions of IL-37，miR-106b-5p and PTEN protein in renal cell carcinoma tissues1696顾鹏等 IL-37调控miR-106b-5p/PTEN抑制肾细胞癌细胞生物学行为 第 8 期mimics 显著降低 786-0 细胞中 WT-PTEN 的相对荧光素酶活性（P0.05），而对MUT-PTEN的相对荧光素酶活性的影响差异无统计学意义，见图5B。2.6过表达 miR-106b-5p 可减弱 IL-37 对 786-0 细胞增殖、迁移的抑制作用及凋亡的诱导作用采用IL-37分别处理未转染、转染miR-NC或者转染miR-106b-5p mimics的786-0细胞，结果显示与IL-37组、IL-37+miR-NC组相比较，IL-37+miR-106b-5p组786-0细胞 miR-106b-5p表达量升高（P0.05），细胞活力（48 h、72 h）、集落形成数、迁移距离升高（P0.05），细胞凋亡率、PTEN蛋白表达降低（P0.05）。见图6。Note：A.IL-37 inhibits expression of miR-106b-5p in 786-0 cells；B.IL-37 promotes expression of PTEN protein in 786-0 cells.Compared with control group，*.P0.05；compared with IL-37（10 ng/ml）group，#.P0.05；compared with IL-37（50 ng/ml）group，&.P0.05.图3miR-106b-5p和PTEN蛋白表达检测Fig.3Detection of miR-106b-5p and PTEN protein expressionsNote：A.Different concentrations of IL-37 inhibit viability of 786-0 cells；B.Different concentrations of IL-37 induce 786-0 apoptosis；C.Different concentrations of IL-37 inhibit 786-0 colony formation；D.Different concentrations of IL-37 inhibit 786-0 scratch healing.Compared with control group，*.P0.05；compared with IL-37（10 ng/ml）group，#.P0.05；compared with IL-37（50 ng/ml）group，&.P0.05.图2不同浓度IL-37对786-0细胞增殖、凋亡、迁移的影响Fig.2Effect of different concentrations of IL-37 on pro-liferation，apoptosis and migration of 786-0 cellsNote：A.Complementary sequence of miR-106b-5p and PTEN；B.Complementary sequence of miR-106b-5p and PTEN.Compared with miR-NC group，*.P0.05.图5miR-106b-5p靶向调控PTEN表达Fig.5miR-106b-5p targets and regulates PTEN expressionNote：A.Detection of miR-106b-5p expression after inhibition miR-106b-5p treatment；B.miR-106b-5p inhibition inhibits 786-0 cell activity；C.Inhibition of miR-106b-5p promotes expression of PTEN protein；D.Inhibition of miR-106b-5p induces 786-0 cells apoptosis；E.Inhibition of miR-106b-5p inhibits 786-0 colony formation；F.Inhibition of miR-106b-5p inhibits 786-0 scratch healing.Compared with anti-miR-NC group，*.P0.05.图4抑 制 miR-106b-5p 对 786-0 细 胞 增 殖、凋 亡、迁 移 及PTEN蛋白表达的影响Fig.4Effect of inhibiting miR-106b-5p on proliferation，apoptosis，migration and PTEN protein expression of 786-0 cells1697中国免疫学杂志2023 年第 39 卷3 讨论 除免疫抑制外，越来越多研究者关注 IL-37的抗肿瘤作用。YAN等10报道结肠癌组织中IL-37表达较低，其下调与结肠癌肿瘤分期、浸润深度、远处转移、分化结果显著相关，是结肠癌患者无病生存期和总生存期的独立预后指标，上调 IL-37的表达可抑制结肠癌细胞增殖和转移。GE等11和JIANG等12报道 IL-37可能通过抑制肿瘤血管生成、细胞侵袭转移、肿瘤形成在肺癌进展中具有保护作用。此外，IL-37 还可介导 Bim 上调诱导宫颈癌细胞凋亡13。本研究结果表明，RCC 组织中 IL-37 mRNA表达明显降低，外源性IL-37干预明显降低RCC细胞786-0的活力、克隆形成和迁移能力，并增加细胞凋亡率，并呈剂量依赖性，这与 JIANG 等14报道 IL-37 在 RCC 中抗肿瘤作用相吻合。以上数据表明，IL-37 在 RCC 中具有抗肿瘤活性，外源性 IL-37可能是抑制RCC恶性生物学行为的潜在有效方法。miRNA是一类功能性非编码RNA分子，其通过抑制靶 mRNA 表达或活性参与调控细胞存活、凋亡、炎症、转移、耐药等细胞过程，与肿瘤进展关系密切15-16。有研究报道多种IL在肿瘤进展中的作用与调控miRNA表达有关，如胰腺癌中IL-9通过下调抑癌基因miR-200a表达促进胰腺癌细胞增殖和转移17；外源性 IL-17 干预可抑制 miR-195-5p 表达并增强子宫内膜癌细胞活力、迁移和侵袭能力18。本研究显示，外源性 IL-37干预以剂量依赖方式降低786-0细胞中 miR-106b-5p表达水平，增加 PTEN 蛋白表达水平，提示IL-37在RCC中的抗肿瘤作用很可能与调控 miR-106b-5p和 PTEN表达有关。据报道 miR-106b-5p在多种实体瘤中表达改变，乳腺癌miR-106b-5p靶向CNN1增强癌细胞的增殖、迁移能力19。miR-106b-5p的高表达与肝癌晚期分期和高肿瘤分级显著相关，下调 miR-106b-5p可抑制肝癌细胞增殖和侵袭，是肝癌的潜在治疗靶点20。此外，lncRNA XIST通过下调miR-106b-5p可抑制肾细胞癌进展21。本研究结果表明，RCC 组织中 miR-106b-5p表达显著增加，PTEN 蛋白表达显著降低。转染 anti-miR-106b-5p 抑制 miR-106b-5p 表达显著降低 786-0 细胞的恶性增殖、迁移，并诱导细胞凋亡，这与IL-37在RCC中抗肿瘤效果类似。PTEN是多种癌症的抑制因子，有研究报道 miR-106b-5p通过靶向PTEN可促进恶性黑色素瘤细胞周期进展，并增加肝癌细胞的干细胞样特性22-23。本研究证实在786-0细胞中miR-106b-5p与PTEN直接结合，且抑制 miR-106b-5p 可增加 PTEN 表达水平，提示在RCC 中存在 miR-106b-5p/PTEN 调控途径。进一步实验表明，转染 miR-106b-5p mimics 过表达 miR-106b-5p明显减弱外源性IL-37干预对786-0细胞的抗增殖、抗迁移和促凋亡作用，且减弱对PTEN表达的促进作用，这说明IL-37在RCC中的抑癌作用可能通过抑制miR-106b-5p/PTEN途径实现。Note：A.Overexpression of miR-106b-5p can attenuate IL-37s detection of miR-106b-5p expression in 786-0 cell；B.Overexpression of miR-106b-5p can attenuate the detection of PTEN protein expression in 786-0 cell by IL-37；C.Overexpression of miR-106b-5p can weaken the detection of IL-37 on 786-0 cell viability；D.Overexpression of miR-106b-5p can attenuate IL-37s detection of 786-0 cell apoptosis rate；E.Overexpression of miR-106b-5p can weaken the detection of 786-0 cell colony formation by IL-37；F.Overexpression of miR-106b-5p can weaken IL-37s detection of 786-0 cell scratch healing rate.Compared with IL-37 group，*.P0.05；compared with IL-37+miR-NC group，#.P0.05.图6过表达miR-106b-5p可减弱IL-37对786-0细胞增殖、凋亡、迁移及PTEN蛋白表达的影响Fig.6Overexpression of miR-106b-5p can attenuate effects of IL-37 on proliferation，apoptosis，migration and PTEN protein expression of 786-0 cells1698顾鹏等 IL-37调控miR-106b-5p/PTEN抑制肾细胞癌细胞生物学行为 第 8 期总之，本研究证实 IL-37在 RCC组织中表达下调，外源性IL-37可抑制RCC细胞增殖和迁移，诱导细胞凋亡，其抗肿瘤作用可能与抑制miR-106b-5p/PTEN 途径有关。因此，IL-37、miR-106b-5p、PTEN有望成为治疗RCC的潜在靶点。参考文献：1 POWLES T，STAEHLER M，LJUNGBERG B，et al.European association of urology guidelines for clear cell renal cancers that are resistant to vascular endothelial growth factor receptor-targeted therapyJ.Eur Urol，2016，70（5）：705-706.DOI：10.1016/j.eururo.2016.06.009.2 JIA H，LIU J，HAN B.Reviews of interleukin-37：Functions，receptors，and roles in diseases J.Biomed Res Int，2018，2018（1）：3058640-3058650.DOI：10.1155/2018/3058640.3 刘良忠，李小红，马楼艳，等.白细胞介素37对食管癌细胞增殖、迁移、炎症反应的影响及其机制 J.山东医药，2016，56（45）：34-37.DOI：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.45.010.4 李婷婷，朱 迪，牟 童，等.IL-37通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的磷酸化而诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡和自噬 J.细胞与分子免疫学杂志，2017，33（4）：440-445.5 WANG S，AN W，YAO Y，et al.Interleukin 37 expression inhibits STAT3 to suppress the proliferation and invasion of human cervical cancer cells J.J Cancer，2015，6（10）：962-969.DOI：10.7150/jca.12266.6 LU J，WEI J H，FENG Z H，et al.miR-106b-5p promotes renal cell carcinoma aggressiveness and stem-cell-like phenotype by activating Wnt/-catenin signalling J.Oncotarget，2017，8（13）：21461-21471.DOI：10.18632/oncotarget.15591.7 倪建华，辛 军，伍伯聪，等.Livin和PTEN在肾细胞癌中的表达及其临床意义 J.实用癌症杂志，2011，26（1）：42-44.DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2011.01.013.8 DENG W，HAN W，FAN T，et al.Scutellarin inhibits human renal cancer cell proliferation and migration via upregulation of PTENJ.Biomed Pharmacother，2018，107（1）：1505-1513.DOI：10.1016/j.biopha.2018.08.127.9 WANG H，CHEN B，DUAN B，et al.miR-205 suppresses cell proliferation，invasion，and metastasis via regulation of the PTEN/AKT pathway in renal cell carcinomaJ.Mol Med Rep，2016，14（4）：3343-3349.DOI：10.3892/mmr.2016.5589.10 YAN X，ZHAO J，ZHANG R.Interleukin-37 mediates the antitumor activity in colon cancer through-catenin suppression J.Oncotarget，2017，8（30）：49064-49075.DOI：10.18632/on cotarget.17093.11 GE G，WANG A，YANG J，et al.Interleukin-37 suppresses tumor growth through inhibition of angiogenesis in non-small cell lung cancer J.J Exp Clin Cancer Res，2016，35（1）：13-23.DOI：10.1186/s13046-016-0293-3.12 JIANG M，WANG Y，ZHANG H，et al.IL-37 inhibits invasion and metastasis in non-small cell lung cancer by suppressing the IL-6/STAT3 signaling pathway J.Thorac Cancer，2018，9（5）：621-629.DOI：10.1111/1759-7714.12628.13 OUYANG P，AN W，CHEN R，et al.IL-37 promotes cell apoptosis in cervical cancer involving Bim upregulation J.Onco Targets Ther，2019，12（1）：2703-2712.DOI：10.2147/OTT.S20 1664.14 JIANG Y，WANG Y，LIANG L，et al.IL-37 mediates the antitumor activity in renal cell carcinoma J.Med Oncol，2015，32（11）：250-260.DOI：10.1007/s12032-015-0695-7.15 RUPAIMOOLE R，SLACK F J.MicroRNA therapeutics：Towards a new era for the management of cancer and other diseasesJ.Nat Rev Drug Discov，2017，16（3）：203-222.DOI：10.1038/nrd.2016.246.16 万智双，熊 丁，曹 宸.miR-433-3p靶向MAPK8对肝癌细胞MHCC97H增殖、凋亡和迁移的调控作用 J.中国免疫学杂志，2020，36（1）：57-62.DOI：10.3969/j.issn.1000-484X.2020.01.011.17 HU B，QIU-LAN H，LEI R E，et al.Interleukin-9 promotes pancreatic cancer cells proliferation and migration via the miR-200a/Beta-catenin axisJ.Biomed Res Int，2017，2017：2831 056.DOI：10.1155/2017/2831056.18 肖 庆，刘 莉，胡雅君，等.IL-17通过抑制miR-195-5p表达促进子宫内膜癌细胞生长和转移 J.中国病理生理杂志，2019，35（6）：1063-1068.DOI：10.3969/j.issn.1000-4718.2019.06.016.19 WANG Z，LI T E，CHEN M，et al.miR-106b-5p contributes to the lung metastasis of breast cancer via targeting CNN1 and regulating Rho/ROCK1 pathway J.Aging（Albany NY），2020，12（2）：1867-1887.DOI：10.18632/aging.102719.20 YU L X，ZHANG B L，YANG M Y，et al.MicroRNA-106b-5p promotes hepatocellular carcinoma development via modulating FOG2 J.Onco Targets Ther，2019，12（1）：5639-5647.DOI：10.2147/OTT.S203382.21 SUN K，JIA Z，DUAN R，et al.Long