DYRK1A调控NLRP3激活在帕金森病模型中的研究.pdf

基金项目:国家自然科学基金地区科学基金项目(8 1 9 6 0 2 4 3);中央引导地方科技发展专项项目(Z Y Y D 2 0 2 2 C 1 7)作者简介:蔡 倩(1 9 8 6-),女,博士,主治医师,研究方向:帕金森病的发病、诊断及治疗。通信作者:杨新玲,女,教授,主任医师,博士生导师,研究方向:帕金森病发病机制的研究,E-m a i l:p o p l a r 8 6 2s o h u.c o m。本文引用:蔡 倩,夏 欢,罗 琴,等.D Y R K 1 A调控N L R P 3激活在帕金森病模型中的研究J.新疆医科大学学报,2 0 2 3,4 6(1 2):1 5 6 8-1 5 7 4.d o i:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 9-5 5 5 1.2 0 2 3.1 2.0 0 2D Y R K 1 A调控N L R P 3激活在帕金森病模型中的研究蔡 倩1,2,夏 欢1,2,罗 琴1,杨新玲3(1新疆医科大学附属肿瘤医院,乌鲁木齐 8 3 0 0 1 1;2新疆神经系统疾病研究重点实验室,乌鲁木齐 8 3 0 0 6 3;3新疆医科大学,乌鲁木齐 8 3 0 0 1 7)摘要:目的 通过在帕金森病模型中分析双特异性酪氨酸调控激酶1 A(D Y R K 1 A)与NO D样受体热蛋白结构域相关蛋白3(N L R P 3)激活的关系,探讨帕金森病中神经炎症的治疗靶点。方法(1)采用MP P+处理B V 2细胞(小鼠小胶质细胞)后,使用免疫印迹法(W e s t e r n b l o t)检测D Y R K 1 A及N L R P 3蛋白的表达水平;加用D Y R K 1 A抑制剂(H a r m i n e)处理帕金森细胞模型,使用C C K 8法检测小胶质细胞活性,免疫印迹法检测N L R P 3蛋白表达水平。(2)MP T P慢性P D动物模型中,腹腔注射D Y R K 1 A抑制剂(H a r m i n e),免疫组织荧光观察小鼠中脑黑质区小胶质细胞数目,免疫印迹法检测小鼠中脑黑质区N L R P 3蛋白表达水平。结果(1)不同浓度MP P+处理小胶质细胞后,D Y R K 1 A及N L R P 3的蛋白水平较对照组均有升高(P0.0 5);H a r m i n e(浓度为1 0、1 5 m o l/L)时可改善MP P+对B V 2细胞活性的损伤(P0.0 5);相比MP P+组,H a r m i n e+MP P+组N L R P 3蛋白水平明显下降(P0.0 5)。(2)与对照组相比,模型组小鼠中脑黑质的小胶质细胞数量增多;与模型组相比,模型中浓度抑制剂组小鼠中脑黑质的小胶质细胞数量减少;模型组小鼠中脑黑质区N L R P 3的蛋白水平较对照组升高,与模型组比较,模型中浓度及高浓度抑制剂组小鼠中脑黑质中N L R P 3蛋白表达下降明显(P0.0 5)。结论 抑制D Y R K 1 A可减轻帕金森病模型中N L R P 3炎症蛋白的激活,为帕金森病的治疗和研究提供新的思路。关键词:D Y R K 1 A;MP P+/MP T P;帕金森病;N L R P 3中图分类号:R 7 4 2.5 文献标识码:A 文章编号:1 0 0 9-5 5 5 1(2 0 2 3)1 2-1 5 6 8-0 7d o i:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 9-5 5 5 1.2 0 2 3.1 2.0 0 2D u a l s p e c i f i c i t y t y r o s i n e-r e g u l a t e d k i n a s e 1 a(D Y R K 1 A)r e g u l a t e s N O D-l i k e r e c e p t o r t h e r m a l p r o t e i n d o m a i n a s s o c i a t e d p r o t e i n 3(N L R P 3)a c t i v a t i o n i n a P a r k i n s o n s d i s e a s e m o d e lC A I Q i a n1,2,X I A H u a n1,2,L U O Q i n1,Y A N G X i n l i n g3(1T h e A f f i l i a t e d T u m o r H o s p i t a l o f X i n j i a n g M e d i c a l U n i v e r s i t y,U r u m q i 8 3 0 0 1 1,C h i n a;2X i n j i a n g K e y L a b o r a t o r y o f N e r v o u s S y s t e m D i s e a s e s R e s e a r c h,U r u m q i 8 3 0 0 6 3,C h i n a;3X i n j i a n g M e d i c a l U n i v e r s i t y,U r u m q i 8 3 0 0 1 7,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e T o e x p l o r e t h e t h e r a p e u t i c t a r g e t o f n e u r o i n f l a mm a t i o n i n P a r k i n s o n s d i s e a s e(P D)b y a n a l y z i n g t h e r e l a t i o n s h i p b e t w e e n d u a l s p e c i f i c i t y t y r o s i n e-r e g u l a t e d k i n a s e 1 a(D Y R K 1 A)a n d N O D-l i k e r e c e p t o r t h e r m a l p r o t e i n d o m a i n a s s o c i a t e d p r o t e i n 3(N L R P 3)a c t i v a t i o n i n P D m o d e l.M e t h o d s (1)A f t e r m i c r o-g l i a w a s t r e a t e d w i t h MP P+,t h e p r o t e i n l e v e l s o f D Y R K 1 A a n d N L R P 3 w e r e d e t e c t e d b y W e s t e r n b l o t.P a r k i n s o n s c e l l m o d e l w a s t r e a t e d w i t h D Y R K 1 A i n h i b i t o r(H a r m i n e),m i c r o g l i a a c t i v i t y w a s d e t e c t e d b y C C K 8 m e t h o d,N L R P 3 p r o t e i n l e v e l w a s d e t e c t e d b y W e s t e r n b l o t.(2)I n M P T P c h r o n i c P D a n i m a l m o d e l,i n t r a p e r i t o n e a l i n j e c t i o n o f D Y R K 1 A i n h i b i t o r(H a r m i n e)w a s u s e d t o o b s e r v e t h e n u m b e r o f m i c r o g l i a i n 第4 6卷 第1 2期新 疆 医 科 大 学 学 报V o l.4 6 N o.1 2 2 0 2 3年1 2月J o u r n a l o f X i n j i a n g M e d i c a l U n i v e r s i t yD e c.2 0 2 3 t h e s u b s t a n t i a n i g r a r e g i o n o f m i c e b y i mm u n o h i s t o f l u o r e s c e n c e,a n d N L R P 3 p r o t e i n l e v e l i n t h e s u b s t a n-t i a n i g r a r e g i o n o f m i c e w a s d e t e c t e d b y W e s t e r n b l o t.R e s u l t s (1)T h e p r o t e i n l e v e l s o f D Y R K 1 A a n d N L R P 3 i n m i c r o g l i a t r e a t e d w i t h d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s o f MP P+w e r e h i g h e r t h a n t h o s e i n c o n t r o l g r o u p(P0.0 5).H a r m i n e(1 0,1 5 m o l/L)c a n i m p r o v e t h e d a m a g e o f MP P+o n B V 2 c e l l a c t i v i t y(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h MP P+g r o u p,N L R P 3 p r o t e i n l e v e l i n H a r m i n e+MP P+g r o u p w a s s i g n i f i c a n t l y d e-c r e a s e d(P0.0 5).(2)C o m p a r e d w i t h t h e c o n t r o l g r o u p,t h e n u m b e r o f m i c r o g l i a i n t h e s u b s t a n t i a n i g r a o f t h e m o d e l g r o u p w a s i n c r e a s e d;C o m p a r e d w i t h m o d e l g r o u p,t h e n u m b e r o f m i c r o g l i a i n t h e s u b s t a n t i a n i g r a o f m i c e i n t h e m o d e l g r o u p w a s d e c r e a s e d.T h e l e v e l o f N L R P 3 p r o t e i n i n t h e s u b s t a n t i a n i g r a o f t h e m o d e l g r o u p w a s h i g h e r t h a n t h a t o f t h e c o n t r o l g r o u p.C o m p a r e d w i t h t h e m o d e l g r o u p,t h e e x p r e s s i o n o f N L R P 3 p r o t e i n i n t h e s u b s t a n t i a n i g r a o f t h e m o d e l g r o u p a n d t h e h i g h-c o n c e n t r a t i o n i n h i b i t o r g r o u p w a s s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d(P0.0 5).C o n c l u s i o n I n h i b i t i o n o f D Y R K 1 A c a n r e d u c e t h e a c t i v a t i o n o f N L-R P 3 i n f l a mm a t o r y p r o t e i n i n P D m o d e l,w h i c h i s h e l p f u l f o r t h e t r e a t m e n t a n d r e s e a r c h o f P D.K e y w o r d s:d u a l s p e c i f i c i t y t y r o s i n e-r e g u l a t e d k i n a s e 1 a(D Y R K 1 A);MP P+/MP T P;P a r k i n s o n s d i s e a s e(P D);NO D-l i k e r e c e p t o r t h e r m a l p r o t e i n d o m a i n a s s o c i a t e d p r o t e i n 3(N L R P 3)帕金森病(P a r k i n s o n s D i s e a s e,P D)是老年人中第二大常见的神经退行性疾病。据估计,P D占6 5岁以上人口的2%3%,这给家庭和社会造成了巨大的负担1。尽管尚未阐明P D的确切机制,但越来越多的证据表明,小胶质细胞介导的神经炎症是大脑老化和包括P D在内的大多数神经退行性疾病的共同特征2-3。小胶质细胞是中枢神经系统(C e n t r a l n e r v o u s s y s t e m,C N S)的先天免疫细胞,在维持大脑稳态方面发挥着重要作用4。然而,小胶质细胞的持续过度激活会诱发慢性神经炎症反应,在帕金森病(P D)的神经炎症和神经变性中起着至关重要的作用,其中小胶质细胞富含的NO D样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NO D-l i k e r e c e p t o r t h e r m a l p r o t e i n d o m a i n a s s o c i a t e d p r o t e i n 3,N L R P 3)炎症小体可能作为P D治疗的潜在靶点5。N L R P 3是其中核心蛋白之一,它的激活启动炎症小体的形成。双特异性酪氨酸调控激酶1 A(D u a l s p e c i f i c i t y t y r o s i n e-r e g u l a t e d k i n a s e 1 a,D Y R K 1 A)是一种蛋白激酶,在中脑黑质、纹状体及海马中表达丰富,对中脑多巴胺(D o p a m i n e,D A)神经元发育及其生理功能至关重要。全基因组关联研究(GWA S)的荟萃分析显示D Y R K 1 A是P D的一个危险因素6。本研究拟分析D Y R K 1 A在帕金森病神经炎症中的作用,在MP P+(1-m e t h y l-4-p h e n y l p y r i d i n i u m,1-甲基-4-苯基吡啶离子)/MP T P(1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶)诱导的P D细胞及动物模型上分 析D Y R K 1 A与N L R P 3蛋白的关系,探讨可能的 机制,为帕金森病的发病机制提供研究依据。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 细胞及实验动物 实验所用B V 2细胞(小鼠小胶质细胞)购自上海雅吉生物科技有限公司。68周龄的雄性C 5 7 B L/6小鼠采购于广东药康生物科技有限公司,体重(2 01.2 4)g,共4 0只。所有的实验操作流程均符合中国动物研究协会规定,遵从伦理委员会的动物实验伦理要求。1.1.2 试剂 MP P+(美国S i g m a公司)、MP T P(美国S i g m a公司)、H a r m i n e(美国A b c a m公司)、兔抗N L R P 3(A B c l o n a l)、小鼠抗D y r k 1 a(美国S a n-t a c r u z公司)、小鼠抗-a c t i n(美国S a n t a c r u z公司)、A l e x a F l u o r 5 5 5山羊抗小鼠二抗(美国C e l l S i g n a l i n g T e c h n o l o g y公司)、A l e x a F l u o r 4 8 8山羊抗兔二抗(美国C e l l S i g n a l i n g T e c h n o l o g y公司)、HR P标记的抗兔二抗(美国T h e r m o S c i e n t i f i c公司)、HR P标记的抗小鼠二抗(美国T h e r m o S c i e n-t i f i c公司)。1.1.3 主要仪器 细胞培养箱(美国T h e r m o S c i-e n t i f i c公司)、全波长酶标仪(美国T h e r m o S c i e n t i f-i c公司)、化学发光成像仪(英国S y n g e n e公司)、正置荧光显微镜(日本O l y m p u s公司)、台式低速离心机(上海卢湘仪离心机仪器有限公司)等。1.2 方法1.2.1 D Y R K 1 A抑制剂H a r m i n e处理P D细胞模型 培养B V 2细胞,培养条件如下:3 7、5%C O2、高糖DMEM(I n v i t r o g e n,C a r l s b a d,C A,U S A)和5%胎牛血清(F B S,I n v i t r o g e n)。提前2 4 h将B V 2细胞接种于1 0 c m细胞培养皿中,约11 06个/皿,密 度 达8 0%9 0%后,将 配 好 的MP P+母 液(1 0 mm o l/L)解冻后,用完全培养基稀释为不同浓度(MP P+为0、5 0、7 5、1 0 0和1 2 5 m o l/L)处 理B V 2细胞,培养2 4 h后收集细胞做后续实验。选不同浓度 的H a r m i n e(0、5、1 0和1 5 m o l/L)处 理B V 2细胞(同时加入MP P+或者不加入MP P+)。9651 第1 2期 蔡 倩,等:D Y R K 1 A调控N L R P 3激活在帕金森病模型中的研究1.2.2 D Y R K 1 A抑制剂H a r m i n e处理P D慢性动物模 型 4 0只 雄 性C 5 7 B L/6小 鼠 随 机 分 为5组7,分别为对照组(DM S O组)、模型组(DM S O+M P T P组)、模型低浓度抑制剂(1 0 m g/k g)组(DM S O+H 1+M P T P组)、模型中浓度抑制剂(2 0 m g/k g)组(DM S O+H 2+MP T P 组)、模 型 高 浓 度 抑 制 剂(3 0 m g/k g)组(DM S O+H 3+MP T P 组),每组8只。除对 照 组 外,剩 余4组 小 鼠 给 予 腹 腔 注 射MP T P,2 5 m g/k g,每周2次,连续注射5周构建P D慢性动物模型8。3组抑制剂组还需间隔给予腹腔注射低、中、高浓度的H a r m i n e,共5周。1.2.3 C C K 8法检测细胞活性 细胞计数后,计算所铺细胞的孔的数量,在9 6孔板中每孔加入1 0 0 L含有4 0 0 0个细胞的细胞悬液,在细胞培养箱中培养2 4 h;分别加入不同浓度MP P+,每个浓度设置3个复孔,细胞培养箱 孵育2 4 h;每孔 加 入1 0 L C C K 8溶液,避光,在细胞培养箱内继续孵育2 h;在酶标仪上测定吸光度,波长为4 5 0 n m。吸光度值减去培养基的阴性对照即为相应的O D值,统计分析各个浓度的O D值。1.2.4 免疫印迹 B V 2小胶质细胞在裂解液中裂解,1 2 0 0 0 r/m i n离心1 5 m i n。参考B S A标准溶液定量上清液中的蛋白质浓度。将1 0 g蛋白质上样到1 0%S D S凝胶上进行电泳分离,并转移到聚偏二氟乙烯(P V D F)膜上。膜在室温下用5%脱脂牛奶封闭1 h,然后 在4下与 一抗(鼠抗D y r k 1 a,15 0 0;兔抗N L R P 3,1 5 0 0)摇床过夜。最后,将膜与二抗(抗小鼠二抗1 5 0 0 0;抗兔二抗1 5 0 0 0)孵育2 h,加用E C L发光液,在化学发光成像仪下检测,获取和分析图像。1.2.5 免疫组织荧光染色 取出冰冻切片,置于室温复温,将所需脑片贴在载玻片上,做好标记,晾干;置于3 7恒温箱内烘干;P B S水化,倒出P B S,将脑片浸泡在枸橼酸修复液中,微波炉修复;梯度冷却,P B S洗3次,0.3%T r i t o n X-1 0 0破膜,P B S洗3次;脑片上滴加即用型山羊血清封闭液,室温封闭1 h;弃去封闭液,加一抗(小鼠抗G F A P,11 0 0 0;兔抗I B A 1,11 0 0 0),4过夜;第二日,室温复温,P B S清洗3次;加荧光二抗(A l e x a F l u o r 5 5 5山羊抗小鼠二抗,A l e x a F l u o r 4 8 8山羊抗兔二抗,均为11 0 0 0),室温避光孵育1 h;P B S洗3次;在脑片上滴加含D A P I的封片剂,将盖玻片盖在脑片上,正置荧光显微镜下避光观察拍照。1.3 统计学分析 采用S P S S 2 5.0统计软件分析数据,实验数据以均数标准差(x-s)表示,多组均数的比较采用单因素方差分析;I m a g e J软件进行图像分析,G r a p h p a d P r i s m 7.0作图,P0.0 5为差异具有统计学意义。2 结果2.1 不同浓度MP P+处理B V 2细胞后D Y R K 1 A及N L R P 3蛋白的表达 当MP P+浓度分别为5 0、7 5和1 0 0 m o l/L时,N L R P 3蛋 白 表 达 水 平 较MP P+浓度为0时明显增高,差异有统计学意义(P0.0 5);当M P P+浓度分别为5 0、7 5和1 2 5 m o l/L时,D Y R K 1 A蛋白表达水平较MP P+浓度为0时明显增高,差异有统计学意义(P0.0 5)(图1)。注:(A-C)不同浓度的MP P+处理B V 2细胞2 4 h后,WB检测D Y R K 1 A及N L R P 3蛋白表达;与0 m o l/L MP P+相比,*P0.0 5,*P0.0 1,*P0.0 0 1。图1 不同浓度MP P+处理B V 2细胞后D Y R K 1 A及N L R P 3蛋白的表达0751 新 疆 医 科 大 学 学 报第4 6卷 2.2 抑制D Y R K 1 A后可减轻MP P+对B V 2的损伤及N L R P 3的激活2.2.1 D Y R K 1 A抑制剂改善MP P+损伤的B V 2细胞活性 选用MP P+5 0 m o l/L的浓度干预B V 2细胞2 4 h,产生毒性作用,细胞的活性下降;同时分别以0、5、1 0、1 5 m o l/L不同浓度的D Y R K 1 A抑制剂(H a r m i n e)处 理2 4 h后,相 比MP P+组,H a r m i n e+MP P+组B V 2细胞的活性增加,其中浓度为1 0、1 5 m o l/L时,分别为7 4%、7 8%,有统计学差 异(P 0.0 5)(图2 A)。相 比MP P+组,H a r m i n e+MP P+组细胞培养基随着H a r m i n e浓度的升高,由黄色逐渐变为红色(图2 B)。2.2.2 抑制D Y R K 1 A后可 减 轻MP P+诱 发 的N L R P 3激活 与0 m o l/L M P P+比较,5 0 m o l/L MP P+处理小胶质细胞后,N L R P 3蛋白表达水平增加;选 用1 0 m o l/L浓 度 的D Y R K 1 A抑 制 剂(H a r m i n e)及5 0 m o l/L的MP P+同时处理小胶质细胞时,N L R P 3蛋白的表达水平降低,差异有统计学意义(P0.0 5),提示D Y R K 1 A抑制剂可减轻MP P+诱发的N L R P 3蛋白激活(图3)。注:(A)不同浓度的H a r m i n e处理MP P+干预的B V 2细胞2 4 h后,随着H a r m i n e浓度的升高,B V 2细胞活性呈浓度依赖性升高;(B)不同浓度H a r m i n e处理MP P+干预的B V 2细胞2 4 h,培养基颜色的变化情况,与MP P+组比较,*P0.0 0 1。图2 不同浓度H a r m i n e对MP P+损伤的B V 2细胞活性的影响注:(A-B)使用D Y R K 1 A抑制剂处理MP P+诱导的小胶质细胞,分为对照MP P+(0 m o l/L)组(0)、MP P+(5 0 m o l/L)组(M)、H a r m i n e(1 0 m o l/L)组(H)、H a r m i n e(1 0 m o l/L)+MP P+(5 0 m o l/L)组(H+M),WB检测N L R P 3蛋白的表达;与MP P+(5 0 m o l/L)组(M)比较,*P0.0 1。图3 D Y R K 1 A抑制剂处理M P P+诱导的小胶质细胞中N L R P 3蛋白的表达2.3 D Y R K 1 A抑制剂可减少MP T P慢性P D小鼠模型中脑黑质的小胶质细胞数量 免疫组织荧光结果显示,与对照组(DM S O组)相比,模型组(DM S O+MP T P组)小鼠中脑黑质的小胶质细胞数量增多;与模型组(DM S O+MP T P组)相比,模型中浓度抑制剂(2 0 m g/k g)组(DM S O+H 2+MP T P组)1751 第1 2期 蔡 倩,等:D Y R K 1 A调控N L R P 3激活在帕金森病模型中的研究小鼠中脑黑质的小胶质细胞数量减少(图4)。2.4 抑制D Y R K 1 A后可减轻M P T P小鼠中脑黑质区N L R P 3的激活 与对照组(DM S O组)比较,模型组(DM S O+M P T P组)小鼠中脑黑质中的N L R P 3蛋白表达明显升高;与模型组(DM S O+M P T P组)比较,不同浓度抑制剂组小鼠中脑黑质中N L R P 3蛋白表达均有下降。其中,模型中浓度及高浓度抑制剂组(DM S O+H 2+M P T P、DM S O+H 3+M P T P)下降明显(P0.0 5)(图5)。与M P P+诱导的P D细胞模型中D Y R K 1 A蛋白升高结果一致。注:从左到右,标尺依次为5 0 0 m、1 0 0 m、5 0 m,n=3。图4 各组小鼠黑质区小胶质细胞数量比较注:(A-B)使用不同浓度D Y R K 1 A抑制剂处理M P T P小鼠模型,W B检测N L R P 3蛋白的表达;与DM S O+M P T P组比较,*P 0.0 5,n=5。图5 D Y R K 1 A抑制剂处理M P T P小鼠中脑黑质区N L R P 3蛋白的表达3 讨论神经炎症是导致P D发生和发展的关键因素之一9,研究表明小胶质细胞介导的神经炎症在帕金森病的致病过程中起着关键作用1 0-1 1。作为大脑的主要免疫细胞,小胶质细胞是神经炎症过程中的主要细胞介质,它的激活在神经退行性过程中至关重要1 2-1 3。其中小胶质细胞N L R P 3炎性小体的激活和小胶质细胞释放促炎细胞因子可促进P D进2751 新 疆 医 科 大 学 学 报第4 6卷 展,受损的D A神经元可直接导致小胶质细胞激活,产生大量促炎细胞因子(I L-1、I L-1 8)1 4,而持续存在的小胶质细胞介导的神经炎症又可导致帕金森病(P D)中多巴胺能(D A)神经元的进行性丢失。小胶质细胞N L R P 3可能是神经炎症的持续来源,可以推动D A神经元病理学进行性改变,成为P D疾病缓解治疗的一个潜在靶点1 5。本研究在使用MP P+处理小胶质细胞后发现N L R P 3蛋白升高,其中在5 0 m o l/L浓度时升高最明显,提示神经毒素MP P+在启动N L R P 3激活中可能有作用。与本研究一致的观点,L e e等1 1的研究显示,在原代 小 胶 质 细 胞 和 混 合 神 经 胶 质 细 胞 培 养 物 中,MP T P/AT P处理通过产生线粒体活性氧促进N L-R P 3炎性体的稳健组装和激活。MP P+在小鼠骨髓来源的巨噬细胞中,在AT P或尼日利亚菌素处理存在 的 情 况 下 诱 导N L R P 3炎 性 体 激 活。Q i a o等1 6的研究显示,下调N L R P 3蛋白表达并抑制小鼠肝脏中N L R P 3炎性体的激活,减轻了MP T P触发的小胶质细胞激活和中脑D A神经元丢失1 6。目前已有不少 使用该靶 点进行 相 关 药 物 研 究 的报道1 7-1 9。D Y R K 1 A是一种参与神经细胞增殖和细胞死亡的多效性激酶,在调节大脑生理功能和病理过程中起着关键作用。本课题组既往研究发现不同认知功能障碍的帕金森病患者血浆D Y R K 1 A水平有差异,提示血浆D Y R K 1 A水平可能与帕金森病患者的认知功 能有关2 0。本研究在细 胞模型上发 现D Y R K 1 A与N L R P 3炎症小体有关。在MP P+处理小胶质细胞后,D Y R K 1 A与N L R P 3蛋白表达水平均有所升高;使用D Y R K 1 A抑制剂H a r m i n e后,N L R P 3蛋 白 下 调。考 虑 抑 制D Y R K 1 A可 减 轻MP P+诱导的帕金森病模型中N L R P 3炎症小体激活,从而减少神经元丢失,起到神经保护作用。相似的研究,J u等2 1的研究结果显示,脂多糖(L P S)诱导的永生化小鼠B V 2小胶质细胞系中,D Y R K 1 A激酶的表达和活性均因炎症而增加;使用 H a r m i n e或s i R NA沉默抑制D Y R K 1 A可显著减少L P S刺激的B V 2细胞中促炎因子的产生。A r a l d i等2 2的研究显示,一种D Y R K 1 A/B酶抑制剂,新型含氟多酚衍生物(1 c)在脂多糖(L P S)诱导的炎症模型和1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MP T P)帕金森病动物模型这两种体内模型中表现出优异的活性。综上,N L R P 3炎性小体激活在P D的神经炎症中起关键作用,本研究结果表明抑制D Y R K 1 A可能抑制N L R P 3的激活,为帕金森病的治疗提供靶点。然而,尽管抑制N L R P 3炎症小体激活已被证明在P D模型中具有治疗作用,但这些潜在药物的安全性和有效性仍需要在P D患者的临床试验中得到证实,应该加快基础研究向临床应用的转化进程,以实现P D的新治疗策略。参考文献:1 P O EWE W,S E P P I K,TANN E R C M,e t a l.P a r k i n s o n d i s-e a s eJ.N a t u r e R e v i e w s D i s e a s e P r i m e r s,2 0 1 7,3:1 7 0 1 3.2 L I Y,X I A Y,Y I N S,e t a l.T a r g e t i n g m i c r o g l i a l -S y n u c l e i n/T L R s/N F-k a p p a B/N L R P 3 i n f l a mm a s o m e a x i s i n P a r k i n s o n s d i s e a s eJ.F r o n t I mm u n o l,2 0 2 1,1 2:7 1 9 8 0 7.3 HE N E KA M T,MCMANU S R M,L AT Z E.I n f l a mm a s o m e s i g n a l l i n g i n b r a i n f u n c t i o n a n d n e u r o d e g e n e r a t i v e d i s e a s eJ.N a t R e v N e u r o s c i,2 0 1 8,1 9(1 0):6 1 0-6 2 1.4 Y I N J,VA L I N K L,D I XON M L,e t a l.T h e r o l e o f m i c r o g l i a a n d m a c r o p h a g e s i n C N S h o m e o s t a s i s,a u t o i mm u n i t y,a n d c a n c e rJ.J I mm u n o l R e s,2 0 1 7,2 0 1 7:5 1 5 0 6 7 8.5 HAQU E M E,AK THE R M,J AKA R I A M,e t a l.T a r g e t i n g t h e m i c r o g l i a l N L R P 3 i n f l a mm a s o m e a n d i t s r o l e i n P a r k i n s o n s d i s e a s eJ.M o v D i s o r d,2 0 2 0,3 5(1):2 0-3 3.6 NA L L S M A,B L AUWE N D R AA T C,VA L L E R GA C L,e t a l.I d e n t i f i c a t i o n o f n o v e l r i s k l o c i,c a u s a l i n s i g h t s,a n d h e r i t a b l e r i s k f o r P a r k i n s o n s d i s e a s e:a m e t a-a n a l y s i s o f g e n o m e-w i d e a s s o c i a t i o n s t u d i e sJ.L a n c e t N e u r o l,2 0 1 9,1 8(1 2):1 0 9 1-1 1 0 2.7 Z HON G Z,T AO Y,YANG H.T r e a t m e n t w i t h h a r m i n e a m e l-i o r a t e s f u n c t i o n a l i m p a i r m e n t a n d n e u r o n a l d e a t h f o l l o w i n g t r a u m a t i c b r a i n i n j u r yJ.M o l M e d R e p,2 0 1 5,1 2(6):7 9 8 5-7 9 9 1.8 MA T T A I B C N,MU S T A P HA M.M P T P-i n d u c e d m o u s e m o d e l o f P a r k i n s o n s d i s e a s e:A p r o m i s i n g d i r