细菌鉴定图课件.ppt

临床床细菌室的任菌室的任务：是从是从临床感染床感染标本中分离出病原菌并本中分离出病原菌并进行准确行准确鉴定，同定，同时指指导临床合理使用抗菌床合理使用抗菌药物，物，为临床感染性疾病的床感染性疾病的诊断、治断、治疗和流和流行病学行病学调查以及院内感染的以及院内感染的监控提供可靠的依据控提供可靠的依据.1.一一.诊断断对象和象和诊断目的断目的病原菌的病原菌的变迁迁：感染性疾病病原菌的种感染性疾病病原菌的种类不断不断发生生变迁，迁，过去威去威胁人人类的的传染病如鼠疫、霍乱、白喉等己明染病如鼠疫、霍乱、白喉等己明显减少。新的病原菌不断出减少。新的病原菌不断出现，原有的病原菌因，原有的病原菌因变异、耐异、耐药等又重新流行。目前，医院等又重新流行。目前，医院临床床实验室遇到的主要是条件致病菌，它室遇到的主要是条件致病菌，它们在机体抵抗力下降、菌群在机体抵抗力下降、菌群失失调或天然屏障防御功能被破坏或天然屏障防御功能被破坏时引起感染。引起感染。2.正常菌群与病原菌的致病性正常菌群与病原菌的致病性 对于存在正常菌群的部位，于存在正常菌群的部位，应区区别标本中是致病菌本中是致病菌还是常居菌群的是常居菌群的污染，如痰染，如痰标本。本。正常菌群与病原菌的致病性差异是相正常菌群与病原菌的致病性差异是相对的，既不要的，既不要轻易易认为从病人从病人标本中分离出的非致病菌是本中分离出的非致病菌是污染菌，也不要染菌，也不要轻易易认为所所发现的的细菌就是菌就是该感染的病原菌，根据感染的病原菌，根据临床症状和床症状和标本来源有本来源有助于病原菌的正确助于病原菌的正确诊断。断。机体的某些部位是无菌的，如机体的某些部位是无菌的，如检到到细菌即可菌即可视为病原病原菌，如血液、菌，如血液、脑脊液、骨髓等。脊液、骨髓等。3.临床分离病原菌的床分离病原菌的鉴定水平定水平一种一种细菌菌鉴定到哪一水平，取决于定到哪一水平，取决于诊断的目的断的目的1.1.以疾病的病原学以疾病的病原学诊断断为目的目的 一般情况下只需一般情况下只需鉴定到定到细菌的种菌的种2.2.为提供治提供治疗方案方案为目的目的 可以可以进行行临床床标本的直接本的直接药敏敏试验 还可根据分离出病原菌种可根据分离出病原菌种类直接提供直接提供选择抗生素范抗生素范围和种和种类不少不少细菌菌对某种某种药物有天然耐物有天然耐药性，由于性，由于细菌耐菌耐药性的性的产生和生和变迁，迁，临床上床上对分离的病原菌都要作分离的病原菌都要作进一步的一步的药敏敏试验，以期提供，以期提供更可靠的治更可靠的治疗方案。方案。3.3.以作流行病学研究以作流行病学研究为目的目的 必必须对病原菌病原菌鉴定到型定到型(血清型或基血清型或基因型因型)的水平。只有的水平。只有这样才能明确才能明确传染源的所在。染源的所在。4.4.了解了解细菌与感染的关系菌与感染的关系为目的目的 一种一种类型的感染可以由不同种型的感染可以由不同种细菌菌引起，一种引起，一种细菌也可以引起多种菌也可以引起多种类型的感染。型的感染。现己知以前那些曾己知以前那些曾经被被认为不致病的不致病的细菌在某些情况下会引起人体的感染。要了解菌在某些情况下会引起人体的感染。要了解这些些细菌的致病菌性，必菌的致病菌性，必须进行行细致的致的鉴定。定。4.二二.诊断断试验选择鉴定一个定一个细菌，尽可能用一个菌落做全部菌，尽可能用一个菌落做全部鉴定定试验。如果一个菌落不如果一个菌落不够应考考虑采用采用纯培养，即挑取培养，即挑取单个菌落接种于斜面培个菌落接种于斜面培养基，养基，经过培养即可培养即可获得大量得大量纯培养物。培养物。对一株一株细菌准确菌准确鉴定定应综合多种特性合多种特性进行分析。但行分析。但临床床实验室每天要室每天要处理大量理大量标本，且由于本，且由于经济原因不可能做很多原因不可能做很多试验，进行全面分析行全面分析鉴定，因而需要定，因而需要选择一些合理的一些合理的试验项目用于常目用于常规检测。挑挑选试验应以既能完成病原学以既能完成病原学鉴定又使定又使试验项目尽可能少而快速目尽可能少而快速为原原则。5.1.1.选择有有鉴定价定价值的的试验 要要对两种两种细菌菌进行行鉴别，须选择一一项两两种菌呈种菌呈现截然不同截然不同结果的果的试验，即一种菌呈，即一种菌呈现阳性阳性(阳性反阳性反应菌株菌株阳性率阳性率须大于大于90%)90%)，另一菌，另一菌为阴性阴性(阴性反阴性反应的菌株阳性率的菌株阳性率应小于小于10%)10%)，这项试验才有才有鉴定价定价值，否，否则就没有就没有鉴定价定价值。2.2.选择简易、快速、方便的易、快速、方便的试验 鉴定一种定一种细菌可能有多种特异菌可能有多种特异的方法的方法,没必要逐一没必要逐一进行行试验，只，只选其中一或两种达到目的即可，其中一或两种达到目的即可，多多选无意无意义。选择操作操作简便，快速的方法。便，快速的方法。选用复合培养基，用复合培养基，一次操作可同一次操作可同时看几个生化反看几个生化反应，如此可，如此可简化操作，化操作，节约人力物力。人力物力。3.3.综合考合考虑试验的敏感性和特异性的敏感性和特异性 敏感性敏感性=所有阳性所有阳性结果数果数/所有感染病人数所有感染病人数 特异性特异性=阴性阴性结果果总数数/未感染病人未感染病人总数数 试验的敏感性和特异性是相互的敏感性和特异性是相互联系的，系的，试验的敏感性增加，会使的敏感性增加，会使特异性下降，反之亦然。特异性下降，反之亦然。6.三三.常用常用诊断流程断流程完成一个完成一个细菌菌鉴定要做多定要做多项试验，将，将结果与己知果与己知细菌特性菌特性进行比行比较，才能最后确定。，才能最后确定。在在选择试验项目以及分析目以及分析试验结果果时应遵循一个合理且思路清晰遵循一个合理且思路清晰完整的思完整的思维模式，避免不必要的重复，少走弯路。模式，避免不必要的重复，少走弯路。在在临床床细菌菌鉴定中常借用一些定中常借用一些简便的流程和方法。便的流程和方法。7.1.1.双歧索引法双歧索引法 细菌的菌的鉴定中定中经常常选用的方法。主要用的方法。主要针对那些相互那些相互区区别比比较容易，有容易，有较特殊特征的特殊特征的细菌。双歧索引是表菌。双歧索引是表明明鉴定思路的一种流程，使用起来非常方便。定思路的一种流程，使用起来非常方便。8.临床常床常见菌的初步分群双岐索引菌的初步分群双岐索引鉴定定 分离菌分离菌 革革兰染色染色 +-球菌球菌 杆菌杆菌 球菌球菌 杆菌杆菌 触触酶 动力力 DNADNA酶 发酵酵 +-+-+-+-+-+-+-微微 链 李李 棒棒 卡卡 奈奈 氧化氧化酶 非非 球球 球球 斯斯 状状 他他 瑟瑟 +-+-发 菌菌 菌菌 特特 菌菌 莫莫 菌菌 弧弧 肠 酵酵 科科 科科 菌菌 菌菌 拉拉 属属 菌菌 菌菌 菌菌 属属 等等 菌菌 科科 科科 9.革革兰阳性球菌双岐索引阳性球菌双岐索引鉴定定10.葡萄球菌属双岐索引葡萄球菌属双岐索引鉴定定11.链球菌属的双岐索引球菌属的双岐索引鉴定定12.THANK YOUSUCCESS2024/3/15 周五13.革革兰阴性球菌的双岐索引阴性球菌的双岐索引鉴定定 革革兰阴性球菌阴性球菌 氧化氧化酶+DNA DNA酶 +布布兰汉菌属菌属 营养养琼脂上生脂上生长 +其他奈瑟菌其他奈瑟菌 麦麦芽糖芽糖 +脑膜炎膜炎奈瑟菌奈瑟菌 淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌 14.革革兰阴性杆菌初步分群的阴性杆菌初步分群的鉴定流程：定流程：革革兰阴性杆菌阴性杆菌 +葡萄糖葡萄糖发酵酵 氧化氧化酶 非非发酵酵菌菌 +弧菌科弧菌科 肠杆菌科杆菌科15.2.2.表解法表解法将各种将各种细菌及其多种特性列成矩菌及其多种特性列成矩阵表格，使相互的区表格，使相互的区别点十分明点十分明显，便于分析比，便于分析比较。此法。此法对于相互区于相互区别比比较复复杂的的细菌，如菌，如肠杆杆菌科的初步分属。菌科的初步分属。肠杆菌科初步分属杆菌科初步分属试验 埃希菌属埃希菌属 沙沙门菌属菌属 克雷伯菌属克雷伯菌属变形杆菌属形杆菌属靛基靛基质枸椽酸枸椽酸盐硫化硫化氢葡萄糖酸葡萄糖酸盐苯丙氨酸苯丙氨酸16.3.3.数字数字编码鉴定法定法编码是将某一是将某一细菌的全部生化反菌的全部生化反应结果果转化成数字，化成数字，经查阅检索手册又可将索手册又可将该数字数字转化成化成细菌名称菌名称编码的原的原则是：是：鉴定定细菌的各种微量生化反菌的各种微量生化反应管管组成成系列系列试剂，将生化，将生化项目排序并依次目排序并依次进行分行分组，每，每组中中的每个的每个试验都有其一个数都有其一个数值代代码。试验阳性阳性时结果用果用其数其数值代代码表示，表示，试验阴性阴性时结果用果用0 0表示，将每表示，将每组中中各各试验结果加起来得一果加起来得一总值，这样按按顺序各序各组总值组成的数成的数码组合，即合，即为检索索编码。查编码手册，手册，该编码所所对应的的细菌名称即菌名称即为鉴定定结果。如果。如肠杆菌科杆菌科细菌生菌生化化编码鉴定：定：17.肠杆菌科细菌生化编码鉴定表 组别试验项目目 代代码结果果结果代果代码总值 硫化硫化氢 1 1 苯丙氨酸苯丙氨酸 葡糖酸葡糖酸盐 靛基靛基质 甲基甲基红 枸枸橼酸酸盐 尿素尿素 动力力 产气气 赖氨酸氨酸 鸟氨酸氨酸 棉子糖棉子糖 山梨醇山梨醇 侧金花醇金花醇 木胶糖木胶糖 18.数字数字编码结果判定果判定 根据根据试验结果判定数果判定数码组合合为，查编码手册，即可找到手册，即可找到对应的的细菌。菌。数字数字编码鉴定己有商品成套供定己有商品成套供应，由于操作，由于操作简单，鉴定方法易于掌握，被定方法易于掌握，被临床床实验室广泛采室广泛采用用这种数种数码分析与分析与电脑分析分析软件配套，形成了半件配套，形成了半自自动或全自或全自动细菌分析系菌分析系统。19.四.临床标本的采集与处理对感染性疾病进行病原检查和鉴定，须通过采集病人的标本，经系列实验，才能获得明确的病原学诊断。标本质量的好坏直接影响诊断结果的正误，不当的标本可导致假阴性，假阳性结果的出现，因此在标本采集，送检，保存等各个环节都要规范操作，严格控制，是确保实验结果准确可靠的前提。20.标本采集的一般原则早期采集采集早期采集采集时间最好是病程早期，急性期或症状最好是病程早期，急性期或症状典型典型时，而且必，而且必须在使用抗生素或其它抗菌在使用抗生素或其它抗菌药物之前物之前采集。采集。无菌采集采集的无菌采集采集的标本本应无外源性无外源性污染染根据目的菌的特性用不同的方法采集根据目的菌的特性用不同的方法采集厌氧菌，需氧菌，需氧菌或兼性氧菌或兼性厌氧菌，以及型菌采用的方法不同氧菌，以及型菌采用的方法不同采集适量采集适量标本采集量不本采集量不应过少，而且要有代表性，少，而且要有代表性，同同时有些有些标本本还要注意在不同要注意在不同时间采集不同部位采集不同部位标本本安全采集采集安全采集采集标本本时不不仅要防止皮肤和粘膜正常要防止皮肤和粘膜正常菌群菌群对标本的本的污染，同染，同时也要注意安全，防止也要注意安全，防止传播和播和自身感染自身感染21.标本的处理一些一些对环境敏感的境敏感的细菌如菌如脑膜炎奈瑟菌等膜炎奈瑟菌等应保温并立保温并立即送即送检而其他所有的而其他所有的标本采集后最好在小本采集后最好在小时内送内送到到实验室若不能及室若不能及时送送检，标本本应置于一定置于一定环境中境中保存一般情况下，用于保存一般情况下，用于细菌培养的菌培养的标本保存本保存时间不不应超超过小小时病人病人标本中可能含在大量致病菌，不管本中可能含在大量致病菌，不管标本运送距离本运送距离远近，都必近，都必须注意安全防注意安全防护标本切勿本切勿污染容器的瓶染容器的瓶口和外壁，容器必口和外壁，容器必须包装好，防止送包装好，防止送检过程中倒翻或程中倒翻或碰破流出碰破流出对于烈性于烈性传染病染病标本运送本运送时更要特更要特别严格，格，必必须按按规定包装，由定包装，由专人运送人运送厌氧性氧性标本本应放在放在专门的运送瓶或的运送瓶或试管内运送，有管内运送，有时可直接用抽取可直接用抽取标本的注射器运送本的注射器运送22.革革兰阳性球菌阳性球菌 触触酶链球菌科球菌科 +葡萄糖葡萄糖发酵酵微球菌微球菌 +玻片凝固玻片凝固酶金葡金葡试管凝固管凝固酶 金金 葡葡+新生霉素新生霉素 表表葡葡腐生葡萄球菌腐生葡萄球菌 S SR R23.革革兰阴性球菌阴性球菌氧化氧化酶阳性阳性 DNADNA酶+卡他莫拉菌卡他莫拉菌 营养养琼脂上生脂上生长 +其它奈其它奈瑟菌瑟菌麦芽糖麦芽糖脑膜炎奈瑟菌膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌+24.THANK YOUSUCCESS2024/3/15 周五25.