NY∕T 2545-2014 植物性农产品中黄曲霉毒素现场筛查技术规程(农业).pdf

ICS 65.020.01 B 05 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/ T 2545一2014植物性农产品中黄曲霉毒素现场筛查技术规程Technical regulation for on-site screening aflatoxin in plant products 2014-03-24发布2014-06-01实施中华人民共和国农业部发布NY /T 2545-2014 刚吕本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。本标准由农业部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位:中国农业科学院油料作物研究所、农业部油料及制品质量监督检验测试中心。本标准主要起草人:李培武、张奇、姜俊、丁小霞、张文、周海燕、唐晓倩、王督、张兆戚。I NY/T 2545一2014植物性农产品中黄曲霉毒素现场筛查技术规程1 范围本标准规定了植物性农产品(谷物、豆类、坚果及籽类)中黄曲霉毒素现场筛查的技术规程。本标准适用于植物性农产品(谷物、豆类、坚果及籽类)生产、收获、储藏、运输过程控制中黄曲霉毒素的现场筛查。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/ T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 试剂除非另有规定，仅使用分析纯试剂。3. 1 水:符合GB/T6682要求的二级。3. 2 甲醇(CH30H)。3. 3 二氯甲烧(CH2CI2)。3.4 煎糖(C12H220II)。3.5 牛血清白蛋白(BSA)，纯度大于98%。3. 6 吐温20(CS8HII 026) 。3.7 70%甲醇溶液:取70mL甲醇(3.2)和30mL7j(3.1)，混匀。3. 8 样品稀释液:取1.0g煎糖(3.4)、0.5g牛血清白蛋白(3.5)和2.5g吐温20(3.6)，溶解于100mL*(3.1)中。3.9 锦标记黄曲霉毒素BI抗体溶液:黄曲霉毒素BI抗体纯度80%以上，亲和力常数不低于1.OOX 108 L/molo黄曲霉毒素BI抗体与黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2交叉反应率小于10%。3. 10 1000 ng/ mL黄曲霉毒素BI标准溶液。3. 11 100 ng/ mL黄曲霉毒素BI标准储备液:准确吸取黄曲霉毒素BI标准溶液(3.10)1. 0 mL于10mL容量瓶中，甲醇定容。一200C保存，备用。4 仪器设备与材料4. 1 时间分辨荧光检测仪:激发波长(365士5)nm，检测波长(615士5)nm。4. 2 黄曲霉毒素荧光免疫层析装置:固定有黄曲霉毒素-BSA偶联物，检测灵敏度不低于0.1g/烛，用于样品中黄曲霉毒素与锦标记抗体预反应后再与黄曲霉毒素-BSA偶联物反应的载体(图1)。l NY/ T 2545-2014 4.2. 1 黄曲4. 2. 2 样品4. 2. 3 硝酸纤4. 2. 4 吸水纸。4. 2. 5 底板。4. 2. 6 连接胶带。4. 3 均质机。4. 4 分析天平:感量0.014. 5 恒温装置(37.0士2.0)OC。4. 6 游涡混合器。4. 7 微量移液器:10L-飞、.斗.-4. 8 有机相滤膜:0.45m。4. 9 中速定性滤纸。4. 10 烧杯:150mL。4. 11 离心管:5mL。5 抽样5. 1 -般要求2 2 3 5 NY/ T 2545-2014 5. 1. 1 人员抽样人员应熟知抽样程序和方法。5. 1.2 抽样工具和包装容器抽样人员应根据不同的产品准备相应的工具和包装容器。抽样工具和包装容器应清洁、干燥，不会对样品造成污染。5. 2 抽样方法5.2. 1 田间种植环节抽样根据抽样地块内的地形、地势法、蛇形法等多点取样，的农产品。样品应充分混5. 2. 2 收获晾晒环节根据收获晾法等多点取样，每区设中心、四在距边缘约层在堆面下参照5.5. 3 分样抽样6. 2取1.0 mL 于5mL离心管中。6. 3 取150L锦标记黄6.4 取滤液(6.2)200L. . 荧光免疫层析装置(4.2).按箭头方曲霉毒素免疫层析装置，上机(4.1)检测。6. 5 标准曲线6.5. 1 空白基质溶液:取阴性样品，按6.1、6.2制备空白基质溶液。l 时，随机抽取抽样点内、下三层，上分四层;堆8)过滤，滤液收集(4.6)混匀。取出黄曲霉毒素6. 5. 2 取黄曲霉毒素B1标准储备液(3.11)用空白基质溶液(6.5.1)配制标准工作溶液(0.00ng/mL、0.05 ng/mL、0.10ng/ mL、0.20ng/mL、0.50ng/mL、1.00 ng/mL、2.50 ng/ mL) .按6.4检测，根据检测线T信号值与质控线C信号值的比值CT/C)和标准溶液浓度的自然对数值(nc)建立标准曲线。7 结果计算7. 1 结果计算与表示3 NY/ T 2545-2014 试样中黄曲霉毒素BI含量按式(1)计算。计算结果保留至小数点后1位。在三卫主卫. (1) m 式中:X一一黄曲霉毒素BI含量，单位为微克每千克(g/kg); 一一从标准曲线上查得的测定液中黄曲霉毒素BI含量的数值，单位为纳克每毫升(ng/mL); V一一样品测定液体积的数值，单位为毫升(mL);n一一试样稀释倍数的数值;m-一试样质量的数值，单位为克(g)。7. 2 重复性在重复性条件下，黄曲霉毒素BI含量不大于5.0 g/kg时，两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%;黄曲霉毒素BI含量大于5.0 g/kg时，两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。8 现场筛查结果确认玉米、花生黄曲霉毒素BI筛查结果大于18g/烛，或稻谷、糙米、大米中黄曲霉毒素BI筛查结果大于8g/峙，或小麦、大麦、其他谷物、豆类及制品、其他熟制坚果及籽类中黄曲霉毒素BI筛查结果大于4g/kg时，建议采用免疫亲和液相色谱法或免疫亲和液质联用法进行结果确认。4 中华人民共和国农业行业标准植物性农产品中黄曲霉毒素现场筛查技术规程NY/ T 2545-2014 兴争等关中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)(邮政编码100125网址www.ccap.cOID.cn)北京昌平环球印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销长兴兴开本880rnrnX1230rnrn 1/16 fp张O.75 字数15千字2014年6月第1版2014年6月北京第1次印刷书号16109 3235 定价18.00元版权专有侵权必究举报电话[phone]