4-（三氟甲基）烟酰胺的高效液相色谱分析.pdf

建立一种可对 4-(三氟甲基)烟酰胺进行含量测定的高效液相色谱方法。采用 Agilent C18色谱柱为固定相和二极管阵列检测器，在波长 266 nm 条件下，以甲醇-0.5%冰乙酸水溶液(体积比 2080)为流动相，对 4-(三氟甲基)烟酰胺样品的含量进行定量分析。该方法中的线性相关系数(R2)为 0.999 9，标准偏差为 0.25，变异系数为 0.25%，平均回收率为 100.25%。该方法线性关系良好，具有准确度高、重现性好、分离效果好等优点，适用于 4-(三氟甲基)烟酰胺的定量分析和质量控制。关键词：4-(三氟甲基)烟酰胺；高效液相色谱；分析中图分类号：TQ450.7文献标志码：A文章编号：1009-6485(2023)11-0022-04DOI：10.16201/10-1660/tq.2023.11.05Analysis of 4-(trifluoromethyl)nicotinamide by HPLCZHANG Kai,GUO Yongfei,PAN Lixiang,LI Lele,ZHANG Xiaojun(Sino-Agri Leading Biosciences Co.,Ltd.,Beijing 100052,China)Abstract:A method for separation and quantitative analysis of 4-(trifluoromethyl)nicotinamide was established by HPLC.The separation and quantitative analysis of samples were conducted by DAD detector at 266 nm with the mixture ofmethanol and 0.5%acetic acid solution(20:80,by vol)as mobile phase,and C18column as fixed phase.The resultsshowed that the linear correlation coefficient(R2)was 0.999 9.The standard deviation was 0.25,the coefficient of variationwas 0.25%,and the average recovery rate was 100.25%.The method has several advantages such as high accuracy,goodreproducibility and separation,indicating that it should be suitable for quantitative analysis and quality control of4-(trifluoromethyl)nicotinamide.Keywords:4-(trifluoromethyl)nicotinamide;HPLC;analysis氟啶虫酰胺(flonicamid)化学名称为 N-(氰甲基)-4-(三氟甲基)烟酰胺，是由日本石原产业株式会社发现并开发的一种低毒、高效的新型吡啶酰胺类昆虫生长调节剂类杀虫剂，其通过对蚜虫等刺吸式口器害虫的神经毒性和快速拒食活性而表现出杀虫活性，具有触杀、内吸和渗透作用，且与其他类化合物无交互抗性，可用于防治苹果黄蚜、蔬菜蚜虫、柑橘蚜虫和粉虱、水稻稻飞虱等害虫1-4。4-(三氟甲基)烟酰胺是氟啶虫酰胺的主要代谢物之一，具有杀虫活性，在 1 h 时的毒力甚至高于母体5-6。部分农技术创新第 11 期张凯等：4-(三氟甲基)烟酰胺的高效液相色谱分析23药企业已申请或取得了该化合物的杀虫组合物等专利，防治对象包括蚊虫、棉蚜、白粉虱、水稻褐飞虱等，农业农村部认为该化合物用于预防、控制危害农业、林业的虫害，依据农药管理条例第 2 条规定，应按照农药管理7。目前，相关分析方法国外未见公开报道，国内主要为采用液相色谱-质谱联用法对氟啶虫酰胺及其代谢物的残留量进行检测8-10，分析方法较为复杂，仪器设备昂贵，不适于工业化生产的质量控制和定性定量判定。基于此，本文采用高效液相色谱仪开展了 4-(三氟甲基)烟酰胺的定量分析方法研究，旨在为该产品生产的质量控制和标准制定提供技术支撑11。1 1 材料与方法材料与方法1.11.1 仪器与试剂仪器与试剂Agilent 1260 型高效液相色谱仪(二极管阵列检测器)和色谱工作站(美国安捷伦科技有限公司)；BSA124S 型电子天平赛多利斯科学仪器(北京)有限公司；KQ5200DE 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。甲醇(色谱纯，赛默飞世尔科技公司)；冰乙酸(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；超纯水(实验室自制)；4-(三氟甲基)烟酰胺标准品(质量分数 99.7%，广州佳途科技股份有限公司)；98%4-(三氟甲基)烟酰胺样品(上海麦克林生化科技股份有限公司)。1.21.2 色谱条件色谱条件色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(5 m，250 mm4.6 mm)；流动相：甲醇-0.5%冰乙酸水溶液(2080，体积比)；流量：1.0 mL/min；柱温：室温；检测波长：266 nm；进样体积：5.0 L。在上述色谱操作条件下，4-(三氟甲基)烟酰胺的保留时间约为 7.3 min。标样及样品的高效液相色谱图见图 1。图 14-(三氟甲基)烟酰胺的高效液相色谱图1.31.3 溶液的配制溶液的配制1.3.1 标样溶液的配制称取 0.05 g 4-(三氟甲基)烟酰胺标样(精确至0.000 2 g)于 50 mL 容量瓶中，加入适量甲醇超声溶解，冷却至室温后定容至刻度，摇匀，脱气后待用。1.3.2 试样溶液的配制称取含 4-(三氟甲基)烟酰胺 0.05 g(精确至0.000 2 g)的样品于 50 mL 容量瓶中，加入适量甲醇超声溶解，冷却至室温后定容至刻度，摇匀，脱气后待用。4-(三氟甲基)烟酰胺标样4-(三氟甲基)烟酰胺试样2468101214保留时间/min8007006005004003002001000mAU7.29480070060050040030020010002468101214保留时间/min7.295mAU世 界 农 药第 45 卷241.41.4 测定测定待仪器基线稳定后，按照以上色谱条件连续注入数针标样溶液，直到相邻 2 针标样响应值的相对变化小于 1.5%后，方可按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的次序进行测定。1.51.5 计算计算试样中 4-(三氟甲基)烟酰胺的质量分数 X(%)按下式计算：100(%)2112mAPmAX式中：A1为标样溶液中 4-(三氟甲基)烟酰胺平均峰面积值；A2为试样溶液中 4-(三氟甲基)烟酰胺平均峰面积值；m1为 4-(三氟甲基)烟酰胺标样的质量(g)；m2为试样的质量(g)；P 为标样中 4-(三氟甲基)烟酰胺的质量分数(%)。2 2 结果与讨论结果与讨论2.12.1 流动相的选择流动相的选择在甲醇中溶解度较好，优先选择甲醇为有机相。当采用甲醇-水作为流动相时，峰型对称，且加入0.5%冰乙酸后峰型和分离度变得更好。当流动相中甲醇比例太高时，4-(三氟甲基)烟酰胺出峰时间过早，经过反复测试，在流速 1.0 mL/min，甲醇-0.5%冰乙酸水溶液的体积比为 2080 时，4-(三氟甲基)烟酰胺的出峰时间相对适中，且峰型尖锐对称无拖尾，分离效果好。2.22.2 检测波长的选择检测波长的选择采用 DAD(二极管阵列检测器)对 4-(三氟甲基)烟酰胺标准品溶液在 200400 nm 波长下进行扫描，其紫外吸收光谱图如图 2 所示。由图 2 可知：4-(三氟甲基)烟酰胺的最大吸收波长为 266 nm，且能够得到较好的峰型同时避免杂质的干扰。因此，最后选定本分析方法的检测波长为 266 nm。图 24-(三氟甲基)烟酰胺的紫外吸收谱图2.32.3 分析方法的线性相关性分析方法的线性相关性分别配制 5 个不同质量浓度的 4-(三氟甲基)烟酰胺标准品溶液，按照 1.2 节所述的液相色谱条件进行进样测定，每个质量浓度溶液分别测定 2 次，取其平均值。以 4-(三氟甲基)烟酰胺的进样质量浓度(x)为横坐标、峰面积(y)为纵坐标绘制标准曲线(图 4)，得到线性方程为 y=5 623.6x+53.957，相关系数为 R2=0.999 9，说明该方法在测定质量浓度范围内呈现良好的线性关系。y=5 623.6x+53.957R2=0.999 902000400060008000100000.0000 0.5000 1.0000 1.5000 2.0000 峰面积/(mAUs)质量浓度/(mg/mL)图 34-(三氟甲基)烟酰胺质量浓度与峰面积线性关系图2.42.4 分析方法的精密度分析方法的精密度从同一批 98%4-(三氟甲基)烟酰胺样品中准确连续称取 6 个试样，在上述操作条件下进行分析测定，计算其含量平均值、标准偏差、变异系数，结果见表 1。可见，4-(三氟甲基)烟酰胺样品的标准偏差为 0.25，变异系数为 0.25%。说明该方法的重现mAU220240260280300320340360380波长/nm5004003002001000第 11 期张凯等：4-(三氟甲基)烟酰胺的高效液相色谱分析25性好、精密度高，满足工业分析的定量要求。表 1分析方法的精密度测定样品序号质量分数/%平均值/%标准偏差变异系数/%198.1698.320.250.25298.45398.06498.68598.46698.112.52.5 分析方法的准确度分析方法的准确度准确称取 5 个 98%4-(三氟甲基)烟酰胺样品，加入一定量的 4-(三氟甲基)烟酰胺标准品，按上述方法进行测定，并计算回收率，结果见表 2。可见，4-(三氟甲基)烟酰胺的回收率为 98.77%101.43%，平均回收率均为 100.25%，符合分析标准。表 2分析方法的准确度测定样品序号 样品量/g 理论量/mg 实测量/mg 回收率/%平均回收率/%10.025650.3750.66101.15100.2520.027852.5452.90101.4330.026150.8750.6299.0140.027352.0452.26100.8750.026951.6551.3498.773 3 结结论论本文采用高效液相色谱仪建立了一种能够定量测定 4-(三氟甲基)烟酰胺的分析方法。该方法分离效果良好，方法的准确度和精密度均较高，且简单高效易操作，可用于 4-(三氟甲基)烟酰胺的质量控制和定性定量判定，具有很强的可行性和实际应用价值。参考文献1张亦冰.新颖杀虫剂氟啶虫酰胺J.世界农药,2010,32(1):54-56.2何伟,王睿,陈蓓蓓,等.高效液相色谱分析不同基质中的氟啶虫酰胺和噻虫胺J.辽宁化工,2022,51(12):1789-1791.3陈伟,李华,蒋强,等.氟啶虫酰胺中间体 4-三氟甲基烟酸合成研究进展J.农药,2020,59(10):707-710,714.4董新蕊,束学野,冯雪,等.直接法合成氟啶虫酰胺杂质的确定及转化工艺J.农药,2018,57(1):7-8.5吕珍珍,郭南,侯新港,等.氟啶虫酰胺的光解和水解特性J.农药,2022,61(6):428-433.6孙慧,王泽华,王喜乐,等.放射性同位素示踪法研究氟啶虫酰胺在蛋鸡中的代谢J.农药,2023,62(2):129-133.7农业农村部.农业农村部办公厅关于4-(三氟甲基)烟酰胺认定的意见EB/OL.2023-02-24 http:/