微生物问答.doc

1．比较酵母菌和细菌的乙醇发酵。
主要差别是葡萄糖生成丙酮酸的途径不同。酵母菌和某些细菌(胃八叠球菌、肠杆菌)的菌株通过EMP途径生成丙酮酸，而某些细菌(运动发酵单胞菌、厌氧发酵单胞菌)的菌株通过ED途径生成丙酮酸。丙酮酸之后的途径完全相同。

2．用来测定细菌生长量的直接计数法和间接计数法一般采用什么具体的方法?并从实际应用、优点、使用的局限性3个方面加以具体分析。
直接计数法通常是利用细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下直接计算一定容积里样品中的微生物的数量。该方法简便、易行，成本低，且能观察细胞大小及形态特征。该法的缺点是：样品中的细胞数不能太少，否则会影响计数的准确性，而且该法不能区别活细胞和死细胞。间接计数法又称活菌计数法，一般是将适当稀释的样品涂布在琼脂培养基表面，培养后活细胞能    形成清晰的菌落，通过计算菌落数就可以知道样品中的活菌数。平板涂布和倾倒平板均可用于活菌计数。平板计数简单灵敏，广泛应用于食品、水体及土壤样品中活菌的计数。该法的缺点有：可能因为操作不熟练使得细胞未均匀分散或者由于培养基不合适不能满足所有微生物的需要而导致结果偏低，或使用倾倒平板技术时因培养基温度过高损伤细胞等原因造成结果不稳定等。

3．封闭系统中微生物的生长经历哪几个生长期?以图表示并指明各期的特点。如何利用微生物的生长规律来指导工业生产?
封闭系统中微生物的生长经历迟缓期、对数期、稳定期和衰亡期等4个生长时期。在迟缓期中细胞体积增大，细胞内RNA、蛋白质含量增高，合成代谢活跃，细菌对外界不良条件反应敏感。在迟缓期细胞处于活跃生长中，但分裂迟缓。在此阶段后期，少数细胞开始分裂，曲线略有上升。对数期中细菌以最快的速度生长和分裂，导致细菌数量呈对数增加，细胞内所有成分以彼此相对稳定的速度合成，细菌为平衡生长。由于营养物质    消耗，代谢产物积累和环境变化等，群体的生长逐渐停止，生长速率降低至零，进入稳定期。稳定期中活细菌数最高并保持稳定，细，菌开始储存糖原等内含物，该期是发酵过程积累代谢产物的重要阶段。营养物质消耗和有害物的积累引起环境恶化，导致活细胞数量下降，进入衰亡期。衰亡期细菌代谢活性降低，细菌衰老并出现自溶，产生或释放出一些产物，菌体细胞呈现多种形态，细胞大小悬殊。在工业发酵和科学研究中迟缓期会增加生产周期而产生不利影响，因此需采取必要措施来缩短迟缓期。对数期的培养物由于生活力强，因而在生产上普遍用作“种子”，对数期的培养物也常常用来进行生物化学和生理学的研究。稳定期是积累代谢产物的重要阶段，如某些放线菌抗生素的大量形成就在此时期，因此如果及时采取措施，补充营养物或去除代谢物或改善培养条件，可以延长稳定期以获得更多的菌体或代谢产物。

*4．病毒区别于其他生物的特点是什么?
要点：结构简单，独特的繁殖方式，绝对的细胞内寄生，生命形式的二重性。

*5．病毒的非增殖性感染有哪几类?引起病毒非增殖性感染的原因是什么?
要点：类型：流产感染、限制性感染、潜伏感染。原因：细胞的非允许性、缺损病毒。

*6．病毒的复制循环分为哪几个阶段，各个阶段的主要过程如何?
要点：吸附：病毒吸附蛋白、细胞受体、辅助受体、病毒的吸附过程；侵入：噬菌体、动物病毒、植物病毒的侵入方式；脱壳：病毒的包膜和／或壳体除去而释放出病毒核酸；病毒大分子合成：噬菌体、动物病毒、植物病毒大分子合成的特点；装配与释放：噬菌体、动物病毒、植物病毒装配与

7.从遗传学角度谈谈你对朊病毒(Prion)的理解和看法。
朊病毒(或朊粒)是不含核酸的蛋白质传染颗粒，但它不是传递遗传信息的载体，也不能自我复制而仍然是由基因编码的一种正常蛋白质(PrP)的两种异构体PrPc(存在正常组织中)和 PrP‘‘(存在于病变组织中)，其氨基酸和线性排列顺序相同但是三维构象不同，因此，由PrPsc引起的疾病又称之为构象病。

*8．简述微生物作为重要成员在生态系统中所起到的重要作用。
微生物在生态系统中可以在多个方面起重要作用，但主要作为分解者。其重要作用可以概括如下：①微生物是有机物的主要分解者，微生物分解存在于生物圈内的动物、植物和微生物残体等复杂有机物质，并转化成最简单的无机物，再供初级生产者利用。②微生物是物质循环中的重要成员，微生物参与所有的物质循环，大部分元素及其化合物都受到微生物的作用。③微生物是生态系统中的初级生产者，光能营养和化能营养微生物具有固定太阳能和化学能的能力，成为生态系统的初级生产者。④微生物是物质和能量的贮存者，生态环境中的微生物贮存着大量的物质和能量。⑤微生物是地球生物演化中的先锋种类，微生物是地球上最早出现的生物体，微生物的活动为后来的生物进化打下基础。

*2．为什么16S(18S)rRNA目前被挑选作为研究微生物进化的主要对象?
主要是因为：①16(18)SrRNA普遍存在于各类原核和真核生物中，在进化历程中功能重要而稳定，而且分子中存在高度保守、中度保守和高变化的序列区域，因此适用于对亲缘关系远近不同的各类生物的比较；②相对分子质量大小适中，既含有适当的信息量，在技术上又便于序列测定和序列资料的分析比较。

*试述古生菌和细菌的主要区别。
古生菌的16S rRNA缺乏作为细菌特征的印迹序列；细胞壁无胞壁酸；有醚键分支链的膜脂；tRNA的T或T少C臂没有胸腺嘧啶；特殊的RNA聚合酶；核糖体的组成和形状也不同等。

*基因克隆的载体有哪些基本特征？
1.要有可转移性 已进入宿主细胞
2.要有自主复制或者是整合功能 能携带目的基因一起稳定复制或表达
3.要是足够大的装载量 如plasmid 15kb YAC 400kb
4.要有合适的筛选标记 便于筛选
5.有合适的多克隆位点 便于目的基因的插入
6.要足够安全

*微生物资源特点？
A代谢类型多样、遗传资源丰富，具有潜在用途和价值；B微生物分布广、种类多，繁殖快、代谢强，易变异、利生产，是进行大规模工业化生产，获取高收率产物的理想资源；C对微生物可利用资源的探索尚存在很大空间，具有开发、挖掘新资源的巨大潜力。
微生物的一般特点
1.种类繁多,分布广泛
2.生长繁殖快,代谢能力强
3.遗传稳定性差,容易发生变异

原核生物的基因调控主要发生在转录水平上。根据调控机制的不同可分为负转录调控和正转录调控。(1)在负转录调控系统中，调节基因的产物是阻遏蛋白（repressor），起着阻止结构基因转录的作用，根据其作用性质可分为负控诱导和负控阻遏。在负控诱导系统中，阻遏蛋白不和效应物（诱导物）结合时，阻止结构基因转录；在负控阻遏系统中，阻遏蛋白和效应物（有阻遏作用的代谢产物，辅阻遏物）结合时，阻止结构基因转录。阻遏蛋白作用部位是操纵区。（2）在正转录调控系统中，调节基因的产物是激活蛋白（activator protein），根据激活蛋白的作用性质分为正控诱导系统和负控阻遏系统。在正控诱导系统中，效应物分子（诱导物）的存在使激活蛋白处于活动状态；在负控诱导系统中，效应物分子（有阻遏作用的代谢产物，抑制物）的存在使激活蛋白处于不活动状态。不论是诱导系统还是阻遏系统，激活蛋白的作用部位不是操纵区而是离启动区很近的激活结合位点，对启动区起正的作用。

*比较转化、转导、接合和染色质体融合的异同？
1.转化是感受态的细胞吸收外界游离的核酸，从而发生重组，影响性状。
2.转导是通过噬菌体的感染然后错误包装，携带外源基因进入新宿主，从而整合。
3.接合是细胞之间通过直接接触传递遗传物质。
4.原生质体融合是通过物理、化学、生物的方法是两个细胞原生质体融合为一个细胞，根据核质融合关系可以得到几种不同的杂种细胞。
其中，接合、转化、转导是遗传物质转移最常见的3种方式

*基因工程的基本步骤？
1.目的基因的分离或合成
2.将目的基因与载体DNA连接，构建重组DNA分
子-表达载体
3.将重组DNA分子导入受体细胞，并获得具有外
源基因的个体
4.转基因生物的检测与鉴定
5.转基因生物的安全性评价
目的基因的获取——适当基因表达载体的构建——目的基因的导入受体——转化受体的转基因检测
*菌种保藏的目的、原理及常用的方法有哪些？
菌种保藏是一切微生物工作的基础，其目的：是使菌种被保藏后不死亡、不变异、不被杂菌污染，并保持其优良性状，以利于生产和科研应用。
菌种保藏的原理：是为了达到长期保持菌种的优良特性，核心问题是必须降低菌种变异率，而菌种的变异主要发生于微生物旺盛生长、繁殖过程，因此必须创造一种环境，使微生物处于新陈代谢最低水平，生长繁殖不活跃状态。
常用的方法主要有：常规转接斜面低温保藏法，半固体穿刺保藏法，液体石蜡保藏法，含甘油培养物保藏法等，沙土管保藏法。特殊的有：真空冷冻干燥保藏法和液氮超低温保藏法。

肺炎双球菌实验结论：加热杀死的S型细菌中，含有某种促成R型菌转化为S型细菌的“转化因子”
烟草花叶病毒侵染烟草试验证明了RNA也是遗传物质，也说明了DNA是主要遗传物质。
噬菌体侵染细菌试验结论：在噬菌体中，亲代与子代之间具有连续性的物质是DNA，即DNA是遗传物质。

耐药的主要机理
产生灭活酶
靶位改变
低通性屏障作用(膜通透性下降及生物被膜)
主动外运
细胞缺乏自溶酶，对抗菌药物产生耐受性