CD4、CD8在三阴性乳腺癌中的表达及意义.pdf

中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 23 CD4、CD8 在三阴性乳腺癌中的表达及意义 吴中语1 张 莹1 马伟强1 范静婧2 马斌林2（通讯作者）1.新疆医科大学附属肿瘤医院/新疆医科大学第三临床医学院/新疆乳腺甲状腺肿瘤临床医学研究中心，新疆 乌鲁木齐 830011 2.新疆医科大学附属肿瘤医院乳腺甲状腺外科/新疆医科大学第三临床医学院/新疆乳腺甲状腺肿瘤临床医学研究中心，新疆 乌鲁木齐 830011 摘要：摘要：目的：探讨 CD4、CD8 在三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer，TNBC)中的表达及其临床意义。方法：选择 TNBC 癌组织、癌旁组织以和乳腺良性肿瘤组织各 5 例，运用免疫组织化学法对三组中 CD4、CD8 的表达进行测定。结合检验结果，应用 SPSS27.0 统计软件分析，对其进行探讨。结果：在 TNBC 癌组织与乳腺良性肿瘤中 CD4、CD8 均呈高表达状态，与 TNBC 癌旁组织相比差异具有统计学意义（P0.05），且在乳腺良性肿瘤中CD4、CD8 的表达稍强于 TNBC 癌组织；在 TNBC 癌旁组织中 CD4、CD8 几乎不表达。结论：CD4 和 CD8 在 TNBC 癌组织、癌旁组织以及乳腺良性肿瘤中的表达存在显著差异，对 CD4 和 CD8 的表达情况进行研究，可以帮助评估患者的病情和肿瘤的发展情况。关键词：关键词：三阴性乳腺癌；CD4；CD8；免疫抑制 中图分类号：中图分类号：R737 最新数据表明，由乳腺癌导致的死亡病例在所有女性癌症患者中占 1/61。乳腺癌的发病率和死亡率在发展中国家和发达国家中目前仍在稳步上升2。一般情况下，通过免疫组织化学检测，其特征为雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和人表皮生长因子受体 2（HER2）表达不足（1%）的一种乳腺癌被定义为三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer，TNBC)3。TNBC 约占所有乳腺癌的 10%15%4，与其他乳腺癌亚型相比具有更为特殊的临床和病理特点，TNBC 在发病早期更容易复发，且通常伴有淋巴结远处转移，对广大患者来说预后尚不可观2。在间质肿瘤浸润淋巴细胞（stromal tumor-infiltrating lymphocytes,sTILs）中的肿瘤浸润淋巴细胞（tumor-infiltrating lymphocytes，TILs），分为 CD8+T 淋巴细胞和 CD4+T 淋巴细胞，在肿瘤微环境中具有抗肿瘤的作用。但是有研究报道，免疫抑制与免疫逃逸是使肿瘤细胞快速进展的重要因素之一，T 淋巴细胞的增殖分化受到恶性肿瘤细胞分泌的某些因子影响使其免疫功能受损。本研究旨在通过检测在三阴性乳腺癌组织中 CD4、CD8 的表达情况，以期为评估三阴性乳腺癌患者的病情提供理论依据，进一步探究肿瘤浸润淋巴细胞对 TNBC 的免疫治疗的影响。1 资料与方法 1.1 一般资料 收集 2020 年 3 月至 2022 年 9 月新疆医科大学附属肿瘤医院首次确诊为三阴性乳腺癌并于本院行手术治疗的患者的癌组织标本及其配对的癌旁组织标本以及乳腺良性肿瘤组织标本各 5 例。纳入标准:三阴性乳腺癌患者均经病理明确诊断为 Her-2（-）、ER（-）、PR（-）的浸润性乳腺癌；乳腺良性肿瘤患者经病理明确诊断为乳腺纤维腺瘤；KPS 评分在 70 分以上。排除标准:合并其他恶性肿瘤、急性或慢性感染性疾病、免疫系统疾病的患者，病理标本过小无法提供充足的组织标本，既往行术前干预措施的患者，如新辅助放、化疗或内分泌治疗等其他。1.2 检测方法 将三阴乳腺癌癌组织、癌旁组织、乳腺良性肿瘤组织三个组分分别用免疫组织化学方法对三阴乳腺癌癌组织中 CD4 和 CD8 的表达水平进行了测定：所有收集而来的手术组织标本均经过固定，包埋及连续切片。将组织切片烘烤后脱蜡，再通过无水酒精进行水化。煮沸后，将切片置于修复液，加热至排气，断火，在缓冲液中浸泡后开盖室温冷却，修复抗原。用新鲜配 中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 24 制去离子水浸泡，灭活内源性过氧化物酶活性。向每张切片滴加抗体（CD4 抗体 1：50，CD8 抗体 1：100），过夜，滴加辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素工作液。DAB 显色，在显微镜下掌握染色程度（DAB 显色为棕色颗粒状沉淀）显色满意后终止染色，苏木精复染，自来水中反蓝。脱水后封片并 37烤片过夜。1.3 结果判读 将所有经过免疫组化处理后的切片放置于光镜下观察，发现 CD4、CD8 阳性表达定位于淋巴细胞膜，观察淋巴细胞，评分标准为显色强度和阳性细胞密度：棕褐色 3 分，棕黄色 2 分，淡黄色 1 分，没有染色 0 分；在每个高倍镜下取 100 个细胞，其中细胞阳性率小于5%为 0，从 5%到 25%为 1，从 26%到 50%为 2，50%以上为 3。对每一切片进行打分，把上面的得分加在一起，04 分可以判断为低表达，6 分以上可以判断为高表达。1.4 统计学分析 利用 SPSS27.0 对数据进行统计分析，符合标准分布的计量资料用()描述,两组间检验用成组 t 检验。P0.05 为差异具有统计学意义。2 结果 2.1 三个分组中 CD4 的表达情况 镜下观察切片可见，在 TNBC 癌组织与乳腺良性肿瘤组织中 CD4 的平均着色面积大、平均着色强度强、表达状态均呈高表达，与 TNBC 相比，CD4 在乳腺良性肿瘤中的表达略强于 TNBC；在 TNBC 癌旁组织中 CD4 的平均着色面积小、平均着色强度弱、呈低表达(图 1)。CD4 在 TNBC 癌组织和癌旁组织、TNBC 癌旁组织和乳腺良性肿瘤组织中的表达差异均具有统计学意义（P0.05，=0.40，=5.20，表 1）。分组 40 100 200 400 三阴性乳腺癌癌组织 三阴性乳腺癌癌旁组织 乳腺良性肿瘤组织 图 1 免疫组织化学分析 CD4 在三阴性乳腺癌的癌组织、癌旁组织以及乳腺良性肿瘤组织中的表达（40、100、200、400）分组 40 100 200 400 三阴性乳腺癌癌旁组织 三阴性乳腺癌癌旁组织 乳腺良性肿瘤组织 图 2 免疫组织化学分析 CD8 在三阴性乳腺癌的癌组织、癌旁组织以及乳腺良性肿瘤组织中的表达（40、100、200、400）中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 25 2.2 三个分组中 CD8 的表达情况 镜下观察切片可见，在 TNBC 癌组织与乳腺良性肿瘤组织中 CD8 的平均着色面积大、平均着色强度强、表达均呈高表达，与 TNBC 相比，CD8 在乳腺良性肿瘤中的表达略强于 TNBC；在 TNBC 癌旁组织中 CD8 的平均着色面积小、平均着色强度弱、呈低表达（图 2）。CD8在 TNBC 癌组织和癌旁组织、TNBC 癌旁组织和乳腺良性肿瘤组织中的表达差异均具有统计学意义（P0.05，=0.20，=6.00，表 1）。3 讨论 作为威胁全世界女性健康的“杀手”之一，不成比例地影响年轻，绝经前妇女5。三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer，TNBC)，其异型性大、核分裂多、高增殖和侵袭性表型。对内分泌药物缺乏敏感性，靶向治疗的选择有限。局部和远处复发率均高于其他亚型6。临床上，TNBC 肿瘤在诊断时往往体积较大，分级较高，常累及淋巴结。由于缺乏明显的生物学靶点或生物标志物，TNBC 治疗策略的发展多年来一直受到限制7。肿瘤浸润淋巴细胞是一种局部浸润肿瘤组织的单核免疫细胞，对肿瘤细胞表现出较高的特异性免疫反应性。而 TNBC 的生物学特性可以使其肿瘤免疫微环境更为活跃，并且在 TNBC 中肿瘤浸润淋巴细胞（tumor-infiltrating lymphocytes，TILs）的浸润密度更高8,9，有研究证实，TILs 密度增加与生存率之间存在很强的线性关系10。近年来在乳腺癌相关的多项研究中表明，TILs 越来越多地被用作预测新辅助治疗疗效及预后11,12。TNBC 中较高数量的免疫浸润与显著改善的临床结果相关，特别是 CD4+T、CD8+T 淋巴细胞的存在作为 TNBC 的预测标志物，与生存获益和术前新辅助化疗(NACT)的反应有关13。TILs 主要包括了 T 淋巴细胞，T 淋巴细胞又可以被划分为两种类型，一种是 CD4+T 淋巴细胞，另一种是CD8+T 淋巴细胞。研究表明，在肿瘤微环境中，CD8+T 淋巴细胞具有显著的抗肿瘤效果，而 CD4+T 淋巴细胞是一类在免疫应答中起重要作用的辅助性 T 细胞，可以分化成多种淋巴细胞亚型，这些不同的淋巴细胞亚型可以通过调控 CD8+T 淋巴细胞的增殖和记忆，并辅助其发挥抗肿瘤的功能14，从而抑制肿瘤的增殖和转移。本实验通过运用 CD4、CD8 单克隆抗体研究在 TNBC 的癌组织、癌旁组织和乳腺良性肿瘤组织中 CD4 和 CD8的表达情况，实验结果表明 CD4、CD8 在 TNBC 及乳腺良性肿瘤中有较高表达，但在 TNBC 癌旁则很少。这与以往多个研究结果一致，在非小细胞肺癌、结直肠癌和TNBC 等多种恶性肿瘤中，CD8+T 淋巴细胞大量存在，它们与肿瘤细胞的生长、浸润、转移和患者预后密切相关。在这些肿瘤细胞中，CD8+T 淋巴细胞的数量和功能发生了显著变化15。同时在非小细胞肺癌的相关研究中，高表达CD4和CD8 的非小细胞肺癌患者有更高的生存率16，提示本研究中 CD4 在 TNBC 癌组织与良性乳腺肿瘤组织中的高表达可能是由于 CD4+T 淋巴细胞通过辅助激活 CD8+T 淋巴细胞介导细胞杀伤作用，以增强和促进抗肿瘤免疫反应。本研究还发现 CD4 和 CD8 在乳腺良性肿瘤组织中表达稍强于 TNBC 癌组织。相关研究发现，癌症相关成纤维细胞（CAFs）可能通过释放 TGF-、IL-10 等细胞因子直接或间接阻碍淋巴细胞增殖分化17,18。根据本实验结论推测，在乳腺良性肿瘤组织中，CD4 和 CD8 的表达比 TNBC 癌组织要高，这与 TNBC 的肿瘤细胞分泌对免疫功能有抑制作用的相关因子有很大关系。在恶性肿瘤发生发展过程中，肿瘤细胞所分泌的抑制因子会对免疫细胞的分化、增殖造成影响，从而降低 T 细胞的生成，从而影响人体的免疫功能。因此，肿瘤细胞能够利用免疫抑制、免疫逃逸等方式来逃避攻击，也会造成癌细胞的生长、转移，从而大大增加了癌症的治疗难度。综上所述，CD4 和 CD8 的表达情况分析可能用于评估 TNBC 患者病情和肿瘤发展情况，而对于 TNBC 患者的预后情况仍需要研究证实。若能进一步阐明肿瘤浸润淋巴细胞产生免疫逃逸的相关机制以及寻找合适的刺激因子增强免疫细胞抗肿瘤作用，将会为抑制 TNBC表 1 乳腺各组织中各指标免疫组化评分数据分析（,n=15）分组 CD4 CD8 三阴性乳腺癌癌组织 4.400.89 5.200.84 三阴性乳腺癌癌旁组织 0.400.89 0.200.45 乳腺良性肿瘤组织 5.200.84 6.000.00 注：与三阴性乳腺癌癌组织相比，P0.05;与三阴性乳腺癌癌旁组织相比，P0.05;中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 26 的进展提供有效的治疗靶点和理论依据。本研究的局限性在于样本量不足，未能联系临床相关预后指标，因此需要更充足的样本量和更全面的临床数据进行更深层次的研究。参考文献 1曹毛毛,陈万青.GLOBOCAN 2020 全球癌症统计数据解读 J.中国医学前沿杂志(电子版),2021,13(3):63-9.2SIEGEL R L,MILLER K D,JEMAL A.Cancer statistics,2019 J.CA Cancer J Clin,2019,69(1):7-34.3CHEN W,ZHENG R,BAADE P D,et al.Cancer statistics in 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