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山西农业科学 2023，51（10）：1203-1209Journal of Shanxi Agricultural Sciences7种杀菌剂对藜麦叶斑病菌的室内毒力测定及其分生孢子萌发形态的影响吕红，秦楠，田淼，彭玉飞，任璐，殷辉，赵晓军（山西农业大学 植物保护学院，山西 太原 030031）摘要：为明确咪鲜胺、苯醚甲环唑、丙环唑、啶酰菌胺、腈菌唑、吡唑萘菌胺和甲基硫菌灵等7种杀菌剂对藜麦链格孢叶斑病菌（Alternaria alternata）菌丝和分生孢子的室内毒力及其分生孢子的形态毒理学，采用菌丝生长速率法测定 7种杀菌剂对 A.alternata菌丝生长的室内毒力，同时用悬滴法测定并观察 7种杀菌剂对 A.alternata分生孢子萌发的室内毒力和萌发形态的影响。结果表明，7种杀菌剂对 A.alternata菌丝生长与分生孢子萌发的室内毒力不同，对菌丝生长的毒力大小依次为咪鲜胺苯醚甲环唑丙环唑啶酰菌胺腈菌唑吡唑萘菌胺甲基硫菌灵，EC50值的范围为0.19245.45 g/mL，其中，在最高质量浓度下，咪鲜胺（2.5 g/mL）、苯醚甲环唑（2.5 g/mL）、丙环唑（10.0 g/mL）对A.alternata菌丝生长的抑菌效果均最好，抑菌率分别为78.9%、81.4%和79.7%，EC50值分别为0.19、0.26、0.47 g/mL。7种杀菌剂对A.alternata分生孢子萌发的毒力大小依次为吡唑萘菌胺啶酰菌胺丙环唑腈菌唑咪鲜胺苯醚甲环唑甲基硫菌灵，EC50值的范围为 0.21524.69 g/mL，其中，在最高质量浓度下，吡唑萘菌胺（1.0 g/mL）和啶酰菌胺（5.0 g/mL）对 A.alternata分生孢子萌发的抑制作用均最好，抑制率分别为 76.9%和84.0%，EC50值分别为0.21、0.29 g/mL。形态毒理学研究发现，吡唑萘菌胺和啶酰菌胺可导致A.alternata的分生孢子畸形萌发，表现为分生孢子的芽管顶端膨大、分枝增多。综上可知，吡唑萘菌胺和啶酰菌胺可作为保护药剂防治藜麦链格孢叶斑病，咪鲜胺、苯醚甲环唑、丙环唑作为治疗药剂防治藜麦链格孢叶斑病。关键词：藜麦；链格孢；毒力；生长速率法；悬滴法；畸形；萌发中图分类号：S435.19 文献标识码：A 文章编号：10022481（2023）10120307Toxicity Determination of Seven Fungicides against Quinoa Leaf Spot Pathogen and the Effect on Conidial Germination MorphologyL Hong，QIN Nan，TIAN Miao，PENG Yufei，REN Lu，YIN Hui，ZHAO Xiaojun（College of Plant Protection，Shanxi Agricultural University，Taiyuan 030031，China）Abstract：To determine the toxicity of 7 fungicides including prochloraz,difenoconazole,propiconazole,boscalid,myclobutanil,isopyrazam,and thiophanate-methyl against conidia of quinoa leaf spot pathogen(Alternaria alternate),and their morphological toxicology against conidia,the toxicity of 7 fungicides against growth of A.alternata mycelium was determined by mycelial growth rate method,and the toxicity and the effects of 7 fungicides on germination toxicity and germination morphology of conidia of A.alternata were determined and observed by hanging drop method.The results showed that the 7 fungicides had different toxicities against mycelial growth and conidial germination of A.alternata,and the toxicity against mycelial growth was as follows:prochloraz difenoconazole propiconazole boscalid myclobutanil isopyrazam thiophanate-methyl.The EC50 values ranged from 0.19 g/mL to 245.45 g/mL.Among them,prochloraz,difenoconazole,and propiconazole had the best antibacterial effect on mycelial growth of A.alternata at the highest concentration(2.5,2.5,and 10.0 g/mL,respectively),the inhibition rates were 78.9%,81.4%,and 79.7%,respectively.The EC50 values were 0.19,0.26,and 0.47 g/mL,respectively.The toxicity of the 7 fungicides against A.alternata conidia was as follows:isopyrazam boscalid propiconazole myclobutanil prochloraz difenoconazole thiophanate-methyl.Their EC50 values ranged from 0.21 g/mL to 524.69 g/mL.Among them,isopyrazam and boscalid had the best inhibition effect on A.alternata conidial germination,with inhibition rates of 76.9%and 84.0%at the highest concentration(1.0 g/mL and 5.0 g/mL,respectively).Their EC50 values were 0.21 g/mL and 0.29 g/mL,respectively.Morphological toxicology study showed that isopyrazam and boscalid could cause malformed germination of A.alternata conidia,which was characterized by enlargement of the germ tube tip and doidoi:10.3969/j.issn.1002-2481.2023.10.12收稿日期：2023-07-15基金项目：山西省重点研发计划项目（2022ZDYF117）；山西省基础研究计划项目（20210302123419）；山西省现代农业产业技术体系建设专项（2023CYJSTX03-32）；山西农业大学“特”“优”农业高质量发展科技支撑工程项目（TYGC23-03）作者简介：吕红（1980-），女，山西运城人，助理研究员，主要从事果蔬病害绿色防控及病原菌抗药性研究工作。通信作者：赵晓军（1974-），男，山西临汾人，研究员，博士，主要从事农作物病原物的抗药性及其抗性机理研究工作。1203山西农业科学 2023 年第 51 卷第 10 期increased branching of the conidia.In conclusion,isopyrazam and boscalid could be used as protective agents to control the alternaria leaf spot of quinoa,and prochloraz,difenoconazole,and propiconazole could be used as therapeutic agents to control the alternaria leaf spot of quinoa.Key words：Chenopodium quinoa;Alternaria alternata;toxicity;growth rate method;hanging drop method;malformed;germination藜麦（Chenopodium quinoa Willd.）是苋科藜属1年生双子叶草本植物，原产于安第斯山脉，在玻利维亚和秘鲁已有 5 0007 000 a 的栽培历史，是印第安人的传统食物，因其具有独特的营养价值，被印第安人称为“粮食之母”1-3。近年来，藜麦已发展成为杂粮“新宠”4。我国藜麦种植与产业发展开始于 20世纪 90年代，目前我国藜麦产区分布在内蒙古、西藏、青海、河北、甘肃、山西、吉林、四川、北京等 20余省，2020年我国藜麦种植面积约20 000 hm2，总产量约2.88万t，种植面积和产量已跃居世界第 3 位5-6。2008 年藜麦在山西省静乐县引种成功，自试种成功以来，藜麦种植面积逐年扩大，当前山西省藜麦种植面积超过 4 000 hm27，主要集中在忻州市静乐县、五台县、原平县、繁峙县、岢岚县等。静乐县是山西省主要藜麦产区，2022年静乐县藜麦种植面积约 3 300 hm2。目前藜麦产业市场广阔、发展势头强劲8。链格孢叶斑病菌（Alternaria alternata）引起的链格孢叶斑病是藜麦常见的一种病害，在我国内蒙古自治区、西藏自治区和山西省藜麦种植区均有发生，严重影响藜麦种植的经济效益9-11。该病害于6 月至 8 月上旬发病，在叶片上形成黄绿或黄棕色近圆形病斑，表面附着黄绿色霉层，且多个病斑易连接成片，导致叶片枯裂易脱落。目前，主要通过化学药剂来防治链格孢引起的植物病害，如陶航等12研究表明，嘧菌酯和吡唑醚菌酯乳油对芍药黑斑病菌（A.alternata）的抑制作用较强；刘俏等13对樱桃叶斑病菌（A.alternata）进行室内毒力测定，结果发现，250 g/L 嘧菌酯悬浮剂抑菌效果最好，其EC50值为1.26 g/mL。目前仍未见使用登记的农药来防治藜麦病害，因此，对链格孢叶斑病的防治存在一定的盲目性。本研究测定了 7 种杀菌剂对藜麦链格孢叶斑病菌（A.alternata）的室内毒力，以期为该病害的防治药剂筛选奠定理论基础。1 材料和方法1.1试验材料1.1.1供试菌株于山西省忻州市藜麦种植区（38.466 9N，112.725 1E）采集藜麦叶斑病叶片，经前期分离鉴定确定该致病菌为链格孢叶斑病菌（Alternaria alternata）11。1.1.2 供 试 药 剂 97.2%咪 鲜 胺（Prochloraz）原药，山东潍坊润丰化工有限公司；96.8%苯醚甲环唑（Difenoconazole）原药，杭州大阳化工有限公司；98.4%甲基硫菌灵（Thiophanate-methyl）原药，山东西亚化学工业有限公司；95%腈菌唑（Myclobutanil）原药，浙江禾本科技股份有限公司；95%丙环唑（Propiconazole）原药，青岛恒宁生物科技有限公司；97%啶酰菌胺（Boscalid）原药，陕西美邦药业集团股份有限公司；92%吡唑萘菌胺（Isopyrazam）原药，瑞士先正达作物保护有限公司。以上原药均用丙酮配制成 10 000 g/mL 的母液，4 冰箱保存备用。1.1.3培养基、仪器和设备马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基 1 000 mL：马铃薯浸粉 6.0 g、琼脂20.0 g、葡萄糖 20.0 g（上述试剂为索莱宝公司，北京）。121 高压蒸气灭菌 2030 min。试验主要仪器和设备为超净工作台、灭菌锅和恒温培养箱等。1.2试验方法1.2.17种杀菌剂对病原菌菌丝生长的毒力测定采用菌丝生长速率法测定杀菌剂对病原菌菌丝生长的室内毒力14。将 A.alternata置于 PDA 培养基上 25 培养 7 d，取菌饼（5 mm）备用；将灭菌后的PDA培养基冷却至50 左右备用。用无菌水将7种杀菌剂母液分别稀释成 5 个质量浓度梯度，以药剂PDA 体积比为 1 9 制备成含药平板，含药平板最终药剂质量浓度如表 1所示，在 PDA 中加入相同体积的丙酮作为对照。25 恒温培养箱培养，重复3次。培养 7 d后用十字交叉法测定菌落直径，计算菌丝生长抑制率。将菌饼接种到含有不同质量浓度杀菌剂的 PDA 培养基上，置于 25 恒温培养箱中培养 7 d后，用十字交叉法测定菌落直径，并计算各个质量浓度药剂对代表性菌株的菌丝生长抑制率。菌丝生长抑制率=（对照菌落直径5）（处理菌落直径5）/（对照菌落直径5）100%（1）1204吕红等：7种杀菌剂对藜麦叶斑病菌的室内毒力测定及其分生孢子萌发形态的影响1.2.27种杀菌剂对病原菌分生孢子萌发的室内毒力测定采用孢子萌发法测定杀菌剂对病原菌分生孢子萌发的室内毒力15。收集 A.alternata 在 PDA上培养 7 d的分生孢子于 1.5 mL 无菌离心管中，加入无菌水配成孢悬液（1.0105个/mL）。采用涂片法，将含药PDA均匀涂布于无菌载玻片（大小约2.5 cm4.0 cm，厚度约 1 mm）上，滴加孢悬液至上述涂片，并将涂片置于铺有湿润滤纸的无菌培养皿内进行保湿，含药涂片最终药剂质量浓度如表1所示。最后将培养皿置于25 培养箱，重复3次；6 h后镜检500个分生孢子的萌发情况，计算分生孢子萌发抑制率。分生孢子萌发抑制率=（对照分生孢子萌发率处理分生孢子萌发率）/对照分生孢子萌发率100%（2）1.3数据处理以各处理杀菌剂质量浓度的对数值为自变量（x），相对应的菌丝生长或孢子萌发抑制率的概率值为因变量（y），作毒力回归直线得到回归方程，求出有效抑制中浓度 EC50值。2 结果与分析2.17 种杀菌剂在不同质量浓度下A.alternata菌丝生长的抑制率7 种杀菌剂在不同质量浓度下对 A.alternata菌丝生长抑制率的影响如表所示。研究结果表明，7 种杀菌剂对病原菌菌丝的生长都有不同程度的抑制作用，且抑制率与质量浓度表 1 7种杀菌剂的药剂质量浓度Tab.1 Concentrations of the seven fungicidesg/mL杀菌剂Fungicide咪鲜胺Prochloraz苯醚甲环唑Difenoconazole甲基硫菌灵Thiophanate-methyl腈菌唑Myclobutanil丙环唑Propiconazole啶酰菌胺Boscalid吡唑萘菌胺Isopyrazam菌丝生长使用的药剂质量浓度Mass concentrations of the fungicides for mycelial growth2.50、1.00、0.25、0.10、0.052.50、1.00、0.25、0.10、0.05200、180、150、120、10010.00、5.00、1.00、0.10、0.0510.00、5.00、1.00、0.10、0.0110.0、5.0、1.0、0.5、0.15.00、1.00、0.50、0.10、0.05孢子萌发使用的药剂质量浓度Mass concentrations of the fungicides for conidial germination200、150、100、80、50300、250、200、150、100800、700、600、400、200200、150、100、50、1080、50、25、10、55.00、1.00、0.50、0.10、0.051.00、0.50、0.10、0.05、0.01表 2 7种杀菌剂在不同质量浓度下对A.alternata菌丝生长抑制率的影响Tab.2 Effects of 7 fungicides on inhibition rates of mycelial growth of A.alternata at different mass concentrations杀菌剂Fungicide咪鲜胺Prochloraz苯醚甲环唑Difenoconazole甲基硫菌灵Thiophanate-methyl腈菌唑Myclobutanil质量浓度/（g/mL）Mass concentration2.501.000.250.100.0502.501.000.250.100.050200180150120100010.005.001.00病原菌菌落直径/mmDiameter of pathogen colony16.30.2f23.30.5e32.70.7d41.90.2c52.60.5b75.20.5a15.31.1e21.60.5d30.11.0c44.30.8b46.21.2b60.70.7a39.30.8d47.21.3c51.01.0b53.70.3b57.10.9b67.30.5a15.70.3f24.31.3e31.11.4d抑制率/%Inhibition rate78.969.556.944.630.481.470.755.129.326.345.533.226.721.916.682.267.857.2杀菌剂Fungicide腈菌唑Myclobutanil丙环唑Propiconazole啶酰菌胺Boscalid吡唑萘菌胺Isopyrazam质量浓度/（g/mL）Mass concentration0.100.05010.005.001.000.100.01010.05.01.00.50.105.001.000.500.100.050病原菌菌落直径/mmDiameter of pathogen colony46.20.9c54.30.6b65.00.4a17.31.2f22.01.6e37.01.0d46.10.9c51.30.6b65.70.6a15.21.6f22.60.8e29.70.7d36.50.6c41.71.8b59.30.5a24.70.6e37.20.9d43.61.5c48.31.1c54.10.7b66.30.4a抑制率/%Inhibition rate31.717.879.771.947.332.423.681.668.754.641.732.567.947.838.029.320.1注：同列数据后的不同小写字母表示差异显著（P0.05）。Note:Different lowercase letters in the same column indicated significant difference(P苯醚甲环唑丙环唑啶酰菌胺腈菌唑吡唑萘菌胺甲基硫菌灵，研究表明，咪鲜胺、苯醚甲环唑和丙环唑对藜麦链格孢叶斑病菌菌丝生长的抑制效果最好，EC50值均在0.50 g/mL以下。段慧9对内蒙古自治区藜麦叶片上的 A.alternata进行室内药剂毒力测定发现，10%的苯醚甲环唑的 EC50为 0.27 g/mL，本研究测得苯醚甲环唑的 EC50为 0.26 g/mL，表明不同地区链格孢叶斑病菌 A.alternata 对苯醚甲环唑的室内毒力差异不明显。7种杀菌剂对链格孢叶斑病菌分生孢子的毒力大小依次为吡唑萘菌胺啶酰菌胺丙环唑腈菌唑咪鲜胺苯醚甲环唑甲基硫菌灵，研究表明，吡唑萘菌胺和啶酰菌胺对分生孢子萌发的抑制效果最好，EC50值均在 0.50 g/mL 以下，显著高于其他杀菌剂，此外，这 2 种药剂可以导致病原菌分生孢子畸形萌发。对病原菌菌丝与分生孢子的毒力研究发现，甲基硫菌灵在抑制病原生长方面效果最差。药剂对病原菌的室内毒力测定表明，不同药剂对病原菌的作用机理不同22，如吡唑萘菌胺、啶酰菌胺对病原菌的分生孢子萌发具有较好的抑制作用，苯醚甲环唑和咪鲜胺对病原菌的菌丝生长具有较好的抑制作用。因此，在田间防治过程中不同发病阶段要针对性用药。但药剂毒力测定是药剂与病原菌直接接触而产生的效果，而药剂在田间的防治效果还受到寄主植物、病原菌和所处环境条件的综合影响，因此，需要衡量其实际防治效果，还需开展进一步田间试验。参考文献：1 BHARGAVA 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