骨代谢异常的生物化学诊疗.pptx

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,骨代谢异常生物化学诊疗,河北医科大学第三医院实验中心,李亚,骨代谢异常的生物化学诊疗,第1页,细胞：,35%,有机成份：,65%无机物 钙磷镁,少许糖蛋白，骨磷蛋白和-羟化蛋白,主要为 型胶原,骨基质,骨质,成骨细胞 破骨细胞 骨细胞 骨原细胞,骨功效,机械支撑,保护脏器,参加代谢,骨代谢异常生物化学诊疗,骨代谢异常的生物化学诊疗,第2页,第一节 钙和磷代谢及调整,钙,、,磷,、,镁在体内分布(%),钙 磷 镁,骨和牙齿：,99 85 55,软组织：,1 15 45,细胞外液,0.2 0.1 1,总量,g(mol),1000(25)600(19.4)25(1.0),骨代谢异常的生物化学诊疗,第3页,血浆中钙存在形式,血钙通常指血浆钙，正常值为,2.252.75mmol/L,血钙,血浆蛋白结合钙40%（不可扩散）,与弱酸根结合钙15,离子钙45,可扩散,骨代谢异常的生物化学诊疗,第4页,血浆中磷存在形式,蛋白结合磷，游离磷（离子化），复合物磷,正常成人血浆无机磷含量为0.71.1mmol/L,血浆磷不如血钙稳定，儿童时期血磷增高，今后随年纪增加而下降，在15岁时达成人水平。此改变与碱性磷酸酶活性相关。,血钙与血磷之间有一定浓度关系,以mg/dl计算每 100 ml 血液中钙磷质量之积是一常数,Ca P,=36 40,成骨作用 溶骨作用,Ca P,40,成骨作用,溶骨作用,Ca P,35,成骨作用,溶骨作用,（正常成人）,（少年儿童）,（佝 偻 症）,骨代谢异常的生物化学诊疗,第5页,一、钙和磷生理功效,（一）钙生理功效,1.细胞内钙,含量：10,-6,10,-7,mol/L,与磷脂,、,二羧酸,、,钙结合蛋白结合,线粒体,、,肌浆,、,内质网,骨代谢异常的生物化学诊疗,第6页,细胞内钙功效,1.触发神经-肌肉收缩偶联,骨骼肌细胞内储存Ca,2+,受神经冲动而释放，Ca,2+,浓度增大到10,-7,-10,-5,mol/L时，Ca,2+,可快速地与钙蛋白钙结合亚基结合，引发一系列构象改变后造成肌肉收缩。,2.作用于质膜，降低细胞膜通透性,3.为细胞内第二信使，参加细胞内信号传递,4.酶辅助因子,5.抑制维生素D3-1-羟化酶活性，参加钙磷代谢,6.钙结合蛋白-钙调蛋白为酶调整物质,骨代谢异常的生物化学诊疗,第7页,细胞外钙功效,1.是细胞内钙起源,2.稳定神经细胞膜影响其应激性。降低神经、肌肉兴奋性。抽搐,3.钙离子能够作为凝血因子，参加凝血过程,骨代谢异常的生物化学诊疗,第8页,Ca,+,骨代谢异常的生物化学诊疗,第9页,（二）磷生理功效,1.,组成各种主要核苷酸（如,ATP,、,GTP,、,UTP,、,CTP,等）,2.,组成核苷酸辅酶类（如,NAD,+,、,NADP,+,、,CoA,等）和含磷酸根辅酶（如,TPP,、磷酸吡哆醛等）,3.,细胞膜磷脂在组成生物膜结构、维持膜功效以及代谢调控上均发挥主要作用。如 酶蛋白及各种功效性蛋白质磷酸与脱磷酸化,4.细胞内磷酸盐参加许多酶促反应如磷酸基转移反应、加磷酸反应等。,骨代谢异常的生物化学诊疗,第10页,细胞外磷功效,1.,血中磷酸盐（HPO,4,2-,/H,2,PO,4,-,）是血液缓冲体系主要组成成份。,2.细胞外磷酸盐为细胞内以及骨矿化所需磷酸盐起源,骨代谢异常的生物化学诊疗,第11页,食物钙,肠吸收,影响原因,血钙,（2.25-2.75,mmol/L）,蛋白结合,有机酸结合,骨(99%),其它组织(结合),(1%),Ca,+,0.01,m,mol/L,粪钙80%,尿钙(20%),随血钙调整,钙正常代谢,二,、,钙和磷代谢,Ca+/,P,2/1,骨代谢异常的生物化学诊疗,第12页,钙代谢,1.吸收 每日摄入,0.6 1.0g,部位,：,小肠上段,，主指十二指肠,方式,：在活性VitD,3,下,主动吸收过程,影响原因：,肠道pH,：酸促进吸收，乳酸，胃酸,草酸 植酸,Ca(H,2,PO,4,),2,Ca,3,(PO,4,),2,食物中钙磷百分比：Ca:P=2:1时吸收最正确,肠道中,活性VitD,3,影响,年纪影响。,2.排泄,部位：,肾（20）和肠道（80）,由消化道排泄钙量占总量80(未吸收钙及分泌钙600mg）。由肾排出钙占总排钙20（150mg)。,骨代谢异常的生物化学诊疗,第13页,磷正常代谢,食物,磷,肠吸收,Vit D促进,血磷,（0.81.6,mmol/L）,骨和牙(85%),其它组织(结合),(15%),粪磷30%,尿磷(70%),随血磷调整,骨代谢异常的生物化学诊疗,第14页,磷代谢,1.吸收 每日摄入1.0,1.5g,部位,：,小肠上段,主指空肠（70）,方式：,食物中磷主指有机磷酸酯在磷酸酶作用下生成H,2,PO,4,-,，才能被吸收；,影响原因：,食物中金属离子影响:,长久口服,氢氧化铝凝胶,以及食物中钙、镁、铁离子过多，均可因为形成不溶性磷酸盐而影响磷吸收。,2.排泄：肾是磷排泄主要器官，肾排磷占总排磷70，其余30由粪便排泄,骨代谢异常的生物化学诊疗,第15页,三,、,钙和磷及骨代谢激素调整,甲状旁腺素,维生素D,降钙素,甲状旁腺激素相关蛋白,骨代谢异常的生物化学诊疗,第16页,（一）,甲状旁腺素 parathyroidhormone，PTH,合成部位：,甲状旁腺主细胞,前甲状旁腺素原 (115个Aa),粗面内质网,25Aa,甲状旁腺素原 (90个Aa),高尔基复合体,-6Aa,甲状旁腺素(84个Aa单链多肽),分子量9500,骨代谢异常的生物化学诊疗,第17页,肝,肝,骨代谢异常的生物化学诊疗,第18页,PTH,对血钙和血磷调整作用,PTH,是维持血钙正常水平最主要调整原因，它有,升高血钙、降低血磷和酸化血液、促进溶骨,等作用，其主要靶器官是,骨,、,肾小管,，其次是,小肠粘膜,等。,骨代谢异常的生物化学诊疗,第19页,作用机制,：作用于靶细胞膜，活化腺苷酸环化酶系统，激活ATP生成cAMP及PPi，cAMP能促使线粒体钙转入细胞浆，PPi则作用于细胞膜外侧，使膜外侧钙进入细胞，致细胞内Ca,2+,升高，并激活胞膜上钙泵将Ca,2+,主动转至胞外。引发血钙升高。详细如图,骨代谢异常的生物化学诊疗,第20页,1.对骨作用：,PTH浓度,升高,时，骨细胞则有溶骨效应。,间质网状细胞破骨细胞成骨细胞骨细胞,PTH作用机理可表现在二个方面,使前破骨细胞和间质细胞向破骨细胞转化，抑制破骨细胞向成骨细胞转化，造成溶骨和骨钙大量释放。,使破骨细胞活动性增强，骨盐溶解，血钙升高,溶酶体释放各种水解酶；抑制异柠檬酸脱氢酶活性，使细胞内柠檬酸，异柠檬酸，乳酸，碳酸及透明质酸浓度增加；胶原酶活性增加,骨代谢异常的生物化学诊疗,第21页,2.,对肾作用,促进,远曲小管和髓袢上段对钙,重吸收，抑制,近曲小管及远曲小管对磷,重吸收，结果使,血钙升高,，,血磷降低,，,尿钙降低,，,尿磷增加,3.,促进活性VitD,3,形成。,4.,对小肠作用,为一个间接反应，促进肠道对钙磷重吸收,骨代谢异常的生物化学诊疗,第22页,(二)维生素D(Vitamin D,VitD),合成,肝,和,肾,是VitD,3,活化主要器官,麦角固醇,紫外线,麦角钙化醇(D,2,),D2,脱氢,7-脱氢胆固醇,紫外线,胆钙化醇(D,3,),活 化：,Vit D,3,(活性 D,3,),肝,肾,25-OH-D,3,1.25-(OH),2,-D,3,Vit D,3,羟化酶,25-（OH）-D,3,1,a,羟化酶,骨代谢异常的生物化学诊疗,第23页,高Ca,2+,外源性食物,内源性(皮肤),维生素D,3,肝脏 25-羟化酶,1,25-(OH),2,D,3,25-(OH)D,3,低P,3-,高P,3-,肾 1-,a,羟化酶,降钙素,甲状旁腺素,无生物活性,微弱生物活性,生物活性显著增加,低Ca,2+,(),(),(),(),(),(),骨代谢异常的生物化学诊疗,第24页,对小肠作用,促进小肠对钙磷吸收,改变膜磷脂结构，增加对钙通透性。,上调与钙转运相关蛋白质表示,提升腺苷环化酶活性，作为第二信使发挥 作用。,骨代谢异常的生物化学诊疗,第25页,2.对骨骼作用：,直接作用,是促进溶骨：加速破骨细胞形成，增强破骨细胞活性,间接作用,是促进骨钙化：促进肠道对钙磷吸收，增加血钙,结果表现为,促进骨组织更新,3.对肾作用：,促进肾小管上皮细胞对钙磷重吸收,（同PTH比较）,其机制是增加细胞内钙结合蛋白生物合成，从而促进钙磷吸收。,骨代谢异常的生物化学诊疗,第26页,（三）降钙素（calcitonin,CT）,合成：由甲状腺滤泡旁细胞合成和分泌一个单链多肽。32Aa,分子量3418,血钙增高时，CT分泌增多；血钙降低时，CT分泌降低,作用：1.对骨作用,抑制骨基质分解和骨盐溶解,：抑制破骨细胞活性；,促进骨盐沉积,：,促使破骨细胞向成骨细胞转化，造成骨盐沉积。,2.对肾脏作用,CT可直接作用于肾脏近曲小管，,抑制钙磷重吸收,，,使尿钙排出增加,。,3.对小肠作用：主要是间接作用，经过抑制活性D,3,形成，而抑制小肠钙磷重吸收。,骨代谢异常的生物化学诊疗,第27页,甲状旁腺素,维生素D,3,降钙素,起源,甲状旁腺,皮 肤,甲状腺C细胞,对钙磷代谢影响,骨,溶骨作用,成骨作用,肾,重吸收钙,重吸收磷,肠吸收钙,无显著影响,血钙,血磷,总效应,保钙排磷,保钙保磷,排钙排磷,甲状旁腺素,、,维生素D、降钙素对钙磷代谢影响,骨代谢异常的生物化学诊疗,第28页,（四）甲状旁腺激素相关蛋白 (PTHrP),1987年研究一些癌症引发恶性肿瘤体液性高钙血症(humoral hypercalcemia of malignancy，HHM)时发觉。约有7580%恶性肿瘤并发高钙血症，如乳癌,肾癌,多发性骨髓瘤,淋巴瘤和白血病等。,它与PTH氨基酸结构相近，可与PTH受体结合，并发挥甲状旁腺素功效，引发血钙升高。,骨代谢异常的生物化学诊疗,第29页,第二节 钙、磷、镁代谢紊乱,一,、,钙代谢异常,（一）低钙血症,hypocalcemia,(,血清钙,2.7 5mmol/L),骨代谢异常的生物化学诊疗,第37页,二、磷代谢异常,（一）低磷血症,hypophosphatemia,(,血清磷,1.4 5mmol/L),骨代谢异常的生物化学诊疗,第39页,补钙是预防低钙高磷摄入对骨质不良影响最正确方案，当然作什么事情都有度，过分补钙也有不良影响，如钙奶综合征等。,有些人提出“大量饮用可乐会增加妇女骨质疏松危险”。,骨代谢异常的生物化学诊疗,第40页,镁代谢及其异常,总量与分布：2128g，居组成机体元素第11位，,调整细胞代谢，调控细胞生长,血清,(Mg,+,),0.75-1.00,mmol/L,骨(55%),其它组织(结合),(45%),镁生理功效：,1.细胞内镁功效：,Mg,2+,是近,300,种酶辅助因子，广泛参加各种生命活动。,参加酶底物形成。,是许多酶变构激活因子。,氧化磷酸化,、,糖酵解,、,细胞复制,、核,苷,酸,代谢,、蛋白质。,骨代谢异常的生物化学诊疗,第41页,2.细胞外镁功效,血清镁：,正常值：0.751.00mmol/L 血清镁存在形式：蛋白结合镁30，离子镁55，镁盐15,1.细胞内镁起源,2.降低,神经、肌肉兴奋性,3.在突触前神经末梢竞争性抑制,Ca,+,进入,功效,Ach,Ca,+,Ca,+,Mg,+,骨代谢异常的生物化学诊疗,第42页,镁代谢,食物,250mg,镁,血清,(Mg,+,),0.75-1.00,mmol/L,骨(55%),其它组织(结合)(45%),约95%重吸收,肾,尿镁(2-5%),甲状腺素,醛固酮,(),VitD,PTH,甲状腺素,+,骨代谢异常的生物化学诊疗,第43页,肌肉镁：,在有核细胞中存在镁约有80存在于肌肉中。,肌肉,是维持镁平衡主要组织。,镁缺乏,：急性血清镁与肌肉镁,无,交换,慢性血清镁与肌肉镁,有,交换,镁增加：,不论是急性与慢性均无血清镁与肌肉镁交换,骨代谢异常的生物化学诊疗,第44页,（一）低镁血症,血镁1.00mmol/L临床较少见,原因：过多镁盐摄入 静脉输入,三、镁代谢异常,骨代谢异常的生物化学诊疗,第45页,第三节 骨代谢异常临床生化,细胞：,35%,有机成份：,65%无机物 钙磷镁,少许糖蛋白，骨磷蛋白和-羟化蛋白,主要为 型胶原,骨基质,骨质,成骨细胞 破骨细胞 骨细胞 骨原细胞,一、骨组成：,骨代谢异常的生物化学诊疗,第46页,骨功效：,1.机械支撑,2.保护脏器,3.参加钙磷等贮备和代谢,骨代谢异常的生物化学诊疗,第47页,二、骨代谢：,1.成骨作用（两个过程）（P298）,骨有机质形成,骨盐沉积,2.溶骨作用,骨代谢异常的生物化学诊疗,第48页,三、骨细胞凋亡：,概念：骨细胞程序性死亡,（一）破骨细胞凋亡,1.表现,（丫啶橙荧光染色）,正常细胞：体积大，多核，发绿色荧光,凋亡细胞：体积缩小，核固缩发橙红色荧光,坏死细胞：细胞肿胀，可见均匀淡红色荧光,骨代谢异常的生物化学诊疗,第49页,三、骨细胞凋亡：,（一）破骨细胞凋亡,2.调整,各种细胞因子、激素和维生素,维持破骨细胞生存：M-CSF、IL-1、,促进破骨细胞凋亡：TGF-,破骨细胞凋亡调整：雌激素和VitK,骨代谢异常的生物化学诊疗,第50页,（二）软骨内成骨细胞凋亡（P300）,1.骺板软骨细胞凋亡现象,2.细胞凋亡与软骨发育不良,3.关节生长发育和功效改建中细胞凋亡,骨代谢异常的生物化学诊疗,第51页,（一）骨质疏松症（osteoporosis),概念：,是因各种原因引发骨组织显微结构受损，骨矿成份和骨基质等成份百分比降低，骨质变薄，骨小梁数量降低，骨脆性增加，使骨折危险度增高一个全身骨代谢障碍性疾病。,在美国因为骨质疏松，每年引发150万骨折。1/365岁以上女性有脊柱压迫性骨折。一生中患髋骨骨折约15%。在我国依据流行病学调查，60岁以上老年人患骨质疏松男女百分比分别为35.8%和73%；4559岁者为16.9%和51.5%。据预计我国患骨质疏松者约有60008000万之多。,二、代谢性骨病临床生物化学,骨代谢异常的生物化学诊疗,第52页,病因：,1.生长发育期钙和维生素D摄入不足,2.激素水平不稳定,3.1，25（OH）,2,D,3,合成不足,4一些药品 罗格列酮、糖皮质激素类药品,骨代谢异常的生物化学诊疗,第53页,临床表现：,1.疼痛。原发性骨质疏松症最常见症症，以腰背痛多见，占疼痛患者中70%-80%。,2.身长缩短、驼背。,3.骨折。这是退行性骨质疏松症最常见和最严重并发症,。,试验室检验,X光片、骨密度扫描,骨代谢异常的生物化学诊疗,第54页,骨代谢异常的生物化学诊疗,第55页,骨质软化症（osteomalacia)佝偻病,是继发于骨质疏松疾病,骨矿物质吸收，显微镜下非矿化骨,类,骨质（非矿化有机质）增加，,1.病因：维生素D缺乏，磷酸盐缺乏,胃肠切除术 小肠疾病 肝胆疾病 胰腺功效不全，,依赖维生素D型佝偻病（缺乏,1,25-(OH),2,D羟化酶），,依赖维生素D型佝偻病（受体与,1,25-(OH),2,D结合亲协力差）,低磷血症骨质软化症：(维生素D抵抗佝偻病）肾小管磷酸盐转运缺点，大量排泄磷酸盐,药品,骨代谢异常的生物化学诊疗,第56页,维生素D缺乏,肠Ca,2+,、P,3-,吸收,血Ca,2+,甲状旁腺代偿机制增强,尿P,3-,排出,旧骨脱钙,血 P,3-,血钙正常或稍低,钙磷乘积,骨样组织钙化障碍,骨质软化,骨样组织堆积,成骨作用,骨代谢异常的生物化学诊疗,第57页,肌无力，张力过低,骨骼改变：,脊柱侧弯,，,“O”、“X”形腿,其它：外伤易骨折,肋骨串珠,方颅,2.临床表现,骨代谢异常的生物化学诊疗,第58页,3.,试验室检验：,血清碱性磷酸酶测定、钙、磷、,血清,25(OH)D,浓度测定,肾小管磷酸盐最大吸收率：,测定空腹血清磷酸盐肌酐和同时搜集2小时尿磷酸盐,、,肌酐，分别计算出磷酸盐和肌酐去除率,肾磷酸盐转运缺点,骨代谢异常的生物化学诊疗,第59页,Pagets病 变形性骨炎,骨局部性病变，骨吸收后被混乱形式骨质所替换。,1.临床表现：受侵部位出现局部骨痛和发烧，骨胳变形，关节炎，神经压迫。,2.试验室检验：血清ALP,B-ALP增高，尿脱氧吡啶酚,、,羟脯氨酸增高，,骨代谢异常的生物化学诊疗,第60页,骨代谢异常的生物化学诊疗,第61页,肾性骨营养障碍,（renal osteodystrophy),各种原因造成肾衰引发骨骼异常。,纤维性骨炎，骨软化症，骨发育不全，骨骼淀粉样变,发病机制,临床表现：,骨痛：小腿臀部脊柱,儿童骨骼畸形,骨组织外骨化：关节周区域，动脉中间层，肺，心肌,试验室检验：,血清尿素氮、肌酐升高，高磷、低钙、高镁血症,PTH升高，,1,25-(OH),2,D降低,骨代谢异常的生物化学诊疗,第62页,第四节 骨代谢疾病生化标志物与检测,一,、骨代谢标志物,骨形成标志物,骨钙素,骨性碱性磷酸酶,前胶原肽,骨吸收标志物,胶原交联,耐酒石酸酸性磷酸酶,尿半乳糖羟赖氨酸,尿羟脯氨酸,骨代谢异常的生物化学诊疗,第63页,骨钙素(osteocalcin),分子量为5669，含49个氨基酸，骨钙素是在骨中含量十分丰富非胶原蛋白，其总量占骨组织中非胶原蛋白1520。骨钙素由成骨细胞合成和分泌，与羟磷灰石有较强亲和力，约50从容于骨基质，其余50进入血循环。,1，25(OH),2,D能够促进其合成。,生理功效是维持骨正常矿化速率，抑制异常羟基磷灰石结晶形成，抑制软骨矿化速率。,血清骨钙素能够反应成骨细胞活性或者是骨形成指标,骨代谢异常的生物化学诊疗,第64页,骨碱性磷酸酶,(bone alkaline phosphatase):,在骨内碱性磷酸酶起源于,成骨细胞。,成骨细胞活性和骨形成增加时，骨碱性磷酶活性增加。,在血清中稳定，不受昼夜改变影响,在反应骨细胞活性及骨形成上,优于骨钙素,碱性磷酸酶：骨，肝，肾，小肠，胎盘,骨代谢异常的生物化学诊疗,第65页,前胶原肽,I型胶原前肽是最常见骨胶原，是骨基质主要组成部分，几乎组成总蛋白部分90。,反应成骨细胞活动和骨形成以及反应I型胶原合成速率特异指标,。,前胶原,胶原,前胶原氨基端肽（PINP）,前胶原羧基端肽（PICP）,骨代谢异常的生物化学诊疗,第66页,（二）骨吸收标志物,1.胶原交联,骨由无机质和有机质组成，胶原成份占到有机质90%，,I,型胶原,I,型胶原结构:由两条,a,1,(,I,)和一条,a,2,(,I,)链组成，其结构为,a,1,(,I,),2,a,2,(,I,),骨代谢异常的生物化学诊疗,第67页,I,型前胶原（,N-、C-,末端延伸链）,1000Aa,140kD,脯氨酸赖氨酸羟基化,糖基化,三链间二硫键形成,三股螺旋结构,N-、C-端前肽,I,型胶原分子,未成熟纤维,分子内部,、,分子间共价交联,分泌后,2羟赖氨酸侧链，1赖氨酸侧链,脱氧吡啶酚/赖氨酸吡啶酚,3个羟赖氨酸侧链,吡啶酚/羟赖氨酰吡啶酚,成环,稳定成熟纤维,骨代谢异常的生物化学诊疗,第68页,吡啶酚和脱氧吡啶酚,吡啶酚 存在于硬连接组织：软骨,*脱氧吡啶酚 存在于骨、韧带、主动脉,脱氧吡啶酚：,由胶原自然合成，非生物合成,从尿中排出前不被代谢,骨是脱氧吡啶酚主要起源,仅起源于天然基质降解产物，不受饮食等干扰。,特异,、,灵敏地反应骨吸收,骨代谢异常的生物化学诊疗,第69页,耐酒石酸酸性磷酸酶,（Tartratercsistant acid phosphatase,TRAP）,血浆抗酒石酸酸性磷酸酶主要存在于,破骨细胞，,而成骨细胞和骨细胞中含量甚少。,骨吸收时，TRAP由破骨细胞释放入血循环中，所以血浆中TRAP水平被认为是骨吸收一项生化指标，主要反应破骨细胞活性和骨吸收状态。,骨代谢异常的生物化学诊疗,第70页,3.尿半乳糖羟赖氨酸,胶原纤维,糖基化,半乳糖羟赖氨酸,糖化半乳糖羟赖氨酸,羟赖氨酸,骨胶原,皮肤胶原,4.尿羟脯氨酸,体内胶原代谢终产物之一，其中二分之一来自骨胶原破坏，还有一部分来自骨以外各种胶原组织及饮食中胶原破坏。,反应骨吸收和骨转换程度，但不特异。,骨代谢异常的生物化学诊疗,第71页,3.试验室检验,骨吸收标志物,尿钙，尿胶原交联（,尿N端肽、脱氧吡啶酚、C端肽),血碱性磷酸酶，骨钙素,骨形成标志物,骨代谢异常的生物化学诊疗,第72页,第五节 骨代谢相关指标 试验室检验,一,、,钙,、,磷,、,镁试验室检验,（一）钙测定,1.总钙测定,(1)分光光度法,邻甲酚酞络合酮,PH12,Ca,紫红色獒合物 570-580nm,偶氮砷,pH 6,蓝紫色复合物 650-660nm,(2)原子吸收分光光度法,镧-盐酸溶液（50）,血清Ca（1）,乙炔火焰,基态钙原子吸收,422.7nm光波,8-羟基喹啉遮盖镁离子,Ca,检测吸光值,骨代谢异常的生物化学诊疗,第73页,离子选择电极法,游离（离子)钙测定,（二）血清磷测定,无机磷,钼酸铵,磷钼酸络合物,340nm,(三)镁测定,1.,血清总镁测定,分光光度法：钙镁试剂(calmagite)，羟甲基偶氮苯萘酚磺酸盐,邻苯二胺,钼蓝,600-700nm,Mg,Mg-Calmagite 530-550nm,EGTA-Ca,KCN-金属离子,聚乙烯吡咯烷酮,表面活性剂,蛋白质，脂血,骨代谢异常的生物化学诊疗,第74页,甲基麝香草酚蓝,Mg,蓝色复合物,原子吸收分光光度法,镧-盐酸溶液（50）,血清Mg（1）,乙炔火焰,基态镁原子吸收,285.2nm光波,检测吸光值,2.游离镁离子测定,离子选择电极法,骨代谢异常的生物化学诊疗,第75页,二,、,钙,、,镁及骨代谢调整激素测定,（一）甲状旁腺激素测定,放射免疫法，免疫化学发光法,（二）,维生素,D测定,放射竞争结正当,（competitive radioimmunoassay,CPB),放射受体测定法,(radioreceptor assay,RRA),放射免疫法,(radio-immunity assay,RIA),HPLC,法,(high performance liquid chromatography,HPLC),骨代谢异常的生物化学诊疗,第76页,(三）降钙素测定,两点免疫法,（四）甲状旁腺相关蛋白测定,竞争性免疫法,测定PTHrP氨基端134、,PTHrP中端氨基酸残基 3767，3774,测定PTHrP羧基,亲和色谱法 反相色谱法,人降钙素基础水平低于10-29ng,骨代谢异常的生物化学诊疗,第77页,三,、,骨代谢标志物测定,（一）骨形成标志物测定,1.骨钙素测定,：,抗人骨钙素抗体，,两点法IRMA,酶免疫法，化学发光法,2.骨性碱性磷酸酶测定,化学法和仪器检测：,热失活法,化学抑制法（L-苯丙氨酸，L-高精氨酸，左旋咪唑）,电泳法，等电聚焦法，麦胚凝集素法，HPLC,免疫法：单克隆B-ALP抗体,与肝性-ALP存在5-20%交叉反应,骨代谢异常的生物化学诊疗,第78页,（二）骨吸收标志物测定,1.吡啶酚和脱氧吡啶酚测定,HPLC法：,小胶原肽段,酸水解,游离吡啶酚及脱氧吡啶酚,色谱柱纯化,HPLC,免疫法：,竞争性酶免疫测定（competitive EIA),单抗检测脱氧吡啶酚,等分子交叉反应法检测吡啶酚,竞争性单克隆抗体ELISA法：测定脱氧吡啶酚,骨代谢异常的生物化学诊疗,第79页,2.C-端肽和N-端肽测定,商品化试剂盒：,竞争性单克隆抗体ELISA法（NTx）：单克隆抗正常青春期尿液N-端肽片段抗体，检测N-端肽NTx,C-端肽ELISA 法（cross-Laps)：兔多克隆抗体，识别与人一致7肽片段,3.,耐酒石酸酸性磷酸酶测定,不特异,4.尿半乳糖羟赖氨酸测定：反相HPLC,5.尿羟脯氨酸测定:无组织特异,骨代谢异常的生物化学诊疗,第80页,要求：,一、掌握钙磷镁代谢及其异常。,二、掌握钙磷镁测定原理，评价及临床意义,三、了解骨代谢异常生物化学,骨代谢异常的生物化学诊疗,第81页,