SN∕T 5118-2019 进出口食用动物、饲料中三聚氰胺残留测定 液相色谱-质谱∕质谱法.pdf

书 书 书犐 犆犛 犅 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖犜 进出口食用动物、饲料中三聚氰胺残留测定液相色谱质谱质谱法犇犲 狋 犲 狉犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犿犲 犾 犪犿 犻 狀 犲狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊犻 狀犾 犻 狏 犲犪 狀 犻 犿犪 犾犪 狀 犱犳 犲 犲 犱犳 狅 狉犻 犿狆 狅 狉 狋犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犔犆 犕犛犕犛犿犲 狋 犺 狅 犱 发布 实施中华人民共和国海关总署发 布书 书 书前言本标准按照 给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国重庆海关、中华人民共和国南京海关。本标准主要起草人：夏明星、李光满、陈宗祥、王凯民、吴杰、唐柏彬、王昱、胡硕、李应国。犛犖犜 进出口食用动物、饲料中三聚氰胺残留测定液相色谱质谱质谱法范围本标准规定了进出口食用动物、饲料中三聚氰胺残留量液相色谱质谱质谱检测方法。本标准适用于进出口食用动物（如猪、牛、羊、兔、鸡、鸭）血液、尿液以及动物饲料中三聚氰胺的测定和确证。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 分析实验室用水规格和试验方法 饲料采样 动物饲料试样的制备方法提要试样经酸性甲醇水溶液超声提取后，经混合阳离子固相萃取柱净化，液相色谱质谱质谱法检测和确证，内标法定量。试剂材料除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为 规定的一级水。 甲醇：高效液相色谱级。 乙腈：高效液相色谱级。 乙酸：高效液相色谱级。 乙酸铵 甲醇水溶液（，） ：量取 甲醇和 水，混匀。 乙腈水溶液：取 水与 乙腈混匀。 乙酸溶液：取乙酸溶于 水中。 氨水甲醇：取氨水溶于 甲醇中。 酸性甲醇提取液： 甲醇水溶液（ ）中加 乙酸混匀。 乙酸铵溶液：称取 乙酸铵溶于 水中。 标准物质：三聚氰胺（ ，号： ） 、三聚氰胺同位素内标（ ，号： ） ，纯度均大于 。 标准储备液：准确称取三聚氰胺标准品 （精确到 ） ，用 甲醇水溶液（ ）充分溶解，稀释定容于 容量瓶中，配制成浓度为 的标准储备溶液，将三聚氰胺同位素内标标准品，用 甲醇水溶液（ ）充分溶解，稀释定容于 容量瓶中，配制成浓度为犛犖犜 的标准储备溶液，分别将定容后的标准储备液倒入棕色试剂瓶中， 以下避光保存。 标准中间储备液：准确移取 三聚氰胺标准储备液（ ）和 三聚氰胺内标标准储备液（ ）于两个 容量瓶中，用乙腈稀释定容，分别配成 的三聚氰胺标准溶液和 三聚氰胺同位素内标标准溶液，该溶液置于棕色试剂瓶中， 以下避光保存。 标准工作液：根据需要用 乙腈水溶液（ ）将标准中间储备液（ ）稀释成合适浓度的混合标准工作曲线溶液，参考线性浓度范围为 ，三聚氰胺同位素内标浓度为 临用时现配。 固相萃取柱（ ，）或相当者：使用前依次用甲醇、水和乙酸溶液（ ）活化。 微孔滤膜：有机系， 。仪器与设备 液相色谱质谱质谱仪：配电喷雾离子源（ ） 。 天平：感量为 和 。 离心机：转速不低于 。 旋涡混匀器。 超声清洗器。 固相萃取装置。 氮吹仪。试样制备与保存 试样采集制备 饲料：按照 采集代表性样品，按照 制备。 血液：动物血液用肝素钠抗凝采血管收集，采集数量不得少于 ，密封，并表明标记。 尿液：用洁净的离心管收集，采集数量不得少于 ，充分搅拌均匀后，密封，并标明标记。 试样保存饲料样品常温保存，待检血液和尿液试样于保存，留存血液和尿液试样于 冷冻保存。分析步骤 提取称取（精确到 ）试样于 离心管中，分别加入 的三聚氰胺同位素内标溶液（ ，相当于三聚氰胺同位素内标质量为 ）和 酸性甲醇提取液（ ）旋涡混匀 ，超声提取 ，以 冷冻离心 ，取上清液 转移至 试管中，待净化。）固相萃取柱为 公司生产，给出这一条信息是为了给本标准使用者提供方便，而不是标准管理部门对这一产品的认可。犛犖犜 净化将待净化液转移至活化后的固相萃取柱（ ）中，流速不能超过滴，用水润洗装样液的离心管并过柱，再用甲醇（ ）淋洗小柱，最后用氨水甲醇溶液（ ）洗脱，收集洗脱液，于 下氮气吹干，用 乙腈水溶液（ ）充分溶解残渣，过 滤膜（ ）后，供液相色谱质谱质谱仪测定和确证。 测定和确证 液相色谱质谱质谱参考条件 液相色谱参考条件参考条件如下：）色谱柱： 柱， （内径） ，或相当者。）流动相： 乙酸铵溶液（ ） ：乙腈（ ） ，梯度洗脱程序见表。）流速： 。）柱温： 。）进样量：。表流动相及梯度洗脱程序时间（ ）流速（ ） 乙酸铵溶液（）乙腈（） 质谱参考条件参考条件如下：）离子源：电喷雾离子源（ ） ：）扫描方式：正离子；）监测方式：多反应监测（） ；）雾化气（ ） 、气帘气（） 、辅助气（ ） 、碰撞气（）均为高纯氮气或其他合适气体；使用前应设置各气体流量、离子源温度以及电喷雾电压到合适值，使质谱灵敏度达到检测要求，详细条件参见附录；）去簇电压（） 、碰撞室入口电压（） 、碰撞电压（） 、碰撞室出口电压（）应优化至最佳条件，监测离子和定量离子等详细信息条件参见附录。 定量测定根据试样中待测物的含量情况，配制响应值适宜的标准工作液进行色谱分析，标准曲线工作液应有个浓度水平，应包括零点。标准工作液和待测液中三聚氰胺的响应值应在仪器线性响应范围内。如犛犖犜 果样品中待测物含量超过标准曲线的线性范围，用 乙腈水溶液（ ）稀释至合适浓度后分析。在上述色谱条件下三聚氰胺保留时间为 ，三聚氰胺标准溶液的多反应监测（）色谱图参见附录。 定性分析按照液相色谱质谱质谱条件测定试样和标准工作溶液，如果试样中待测物质的保留时间与标准品一致，保留时间偏差在之内；定性离子对的相对丰度是用相对于最强离子丰度的强度百分比表示，应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表规定的范围，则可判断试样中存在对应的待测物。表定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度 允许的相对偏差 空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。结果计算和表达用仪器软件处理数据或按内标法绘制标准曲线，以各标准溶液与内标物溶液色谱峰面积比值为横坐标，以各标准溶液与内标物溶液浓度比值为纵坐标绘制标准曲线，将样液中分析物与内标物峰面积比值代入曲线方程，计算出样液中分析物与内标物浓度比值，因内标物浓度已知，进而得出样液中分析物浓度犆，代入公式（）中，计算结果须扣除空白值：犡（犆犆）犞犿（）式中：犡 试样中待测物质的含量，单位为微克每千克（ ） ；犆 从标准曲线得到的待测物质的溶液浓度，单位为微克每升（） ；犆 从标准曲线得到的空白试验待测物质的溶液浓度，单位为微克每升（） ；犞 样液最终定容体积，单位为毫升（） ；犿 最终样液所代表的试样质量，单位为克（） 。结果保留三位有效数字。测定低限和回收率 测定低限（犔犗犙）本方法的测定低：食用动物（如猪、牛、羊、兔、鸡、鸭）血液、尿液以及动物饲料中检出限均为 。 回收率采用本方法对食用动物（如猪、牛、羊、兔、鸡、鸭）血液、尿液以及动物饲料等基质进行回收率试验，回收率数据参见附录。犛犖犜 精密度在重复性条件下获得的两次独立结果绝对差值不超过算数平均值的 。犛犖犜 附录犃（资料性附录）质谱参考条件）参考质谱条件）电喷雾电压（ ） ： ：）碰撞气压力（） ： ；）雾化气压力（ ） ： ；）气帘气压力（） ： ；）辅助气压力（ ） ： ；）离子源温度（） ： ；）监测离子对、去簇电压（） 、碰撞室入口电压（） 、碰撞电压（） 、碰撞室出口电压（）见表 。表犃 定性、定量离子对以及犆犈、犇犘、犈犘、犆犡犘参考值化合物母离子（）检测模式子离子（）三聚氰胺 正离子 三聚氰胺内标 正离子 注：表中带的离子为定量离子；对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。）非商业性声明：附录所列参考质谱条件是在 型液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。犛犖犜 附录犅（资料性附录）三聚氰胺标准溶液和同位素内标溶液多反应监测（犕犚犕）色谱图图犅 三聚氰胺（ 狀 犵犿犔）标准溶液和三聚氰胺同位素内标（狀 犵犿犔）标准溶液的多反应监测（犕犚犕）色谱图犛犖犜 附录犆（资料性附录）不同基质中三聚氰胺添加回收率试验数据基质添加水平 回收率基质添加水平 回收率猪血 兔血 牛血 尿液 羊血 颗粒饲料 鸡血 预混饲料 鸭血 浓缩饲料 犛犖犜