三七皂甙对阿霉素所致的小鼠骨髓细胞微核的影响(全).doc

三七皂甙对阿霉素所致的小鼠骨髓细胞微核率的影响常 征（云南师范大学，生命科学院，文山学院，生化系 云南文山663000）摘要：目的研究三七皂甙对阿霉素诱导的小鼠骨髓细胞微核率的影响。方法将42只小鼠随机分成7个组，每组6只，雌雄各半。阴性对照组（CKn）和阳性对照组（CKp）每天灌胃生理盐水一次，其余5组分别以12.5mg/kg、25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg和200mg/kg的剂量每天灌胃PNS一次，所有7个组都连续灌胃7d，最后一次灌胃后CKn腹腔注射生理盐水一次，其余各组以80%LD50的DXR剂量分别腹腔注射一次。给药结束48h后取小鼠骨髓进行微核分析，评价三七皂甙对阿霉素诱导的小鼠骨髓细胞微核率的影响。结果PNS12.5组的微核率显著高于CKn组和显著低于其他各给药组和CKp组（P0.05）；PNS25组和PNS50组的显著高于CKn组、PNS12.5组和显著低于CKp组（P0.05）。结论 低剂量的PNS具有一定的保护染色体不受损伤的作用。关键词：三七皂甙；阿霉素；小白鼠；腹腔注射；微核率三七(Panax notoginseng(Burk.) F.H.Chen)为五加科(Araliaceae) 人参属（Panax）多年生草本植物1，别名参三七、山漆、田七等，主产于云南、广西及四川等地。在植物分类上，与人参、西洋参(花旗参)同属于五加科人参属，其体细胞染色体数目为2n=24,核型公式为K(2n)=2x=24=24m，属于“1B”型,全部都属于中部着丝粒染色体,核型为对称型2；三七属半阴性多年生的宿根草本植物，是中国特有的名贵中药材，起源于2500万年前第三纪古亚热带山区，由于其对生长环境条件有特殊要求，现仅存于中国西南山区。据有关文献记载，三七使用历史近600年，栽培历史近500年，因其自古以来就被公认为具有显著的活血化瘀、消肿定痛功效而被誉为“金不换”和“南国神草”等。三七主要含有三萜皂甙、三七素、黄酮、挥发油、氨基酸、糖类及各种微量元素等，其中皂苷类是三七主要生理活性成分,含量高达12%3，它由三萜皂甙元和糖经糖苷键连接而成的配糖体，它广泛存在于自然界，尤以双子叶植物中分布最多，迄今,已从三七全株中分离到20多种达玛烷型四环三萜皂苷。在植物中，皂甙的主要功能是防御病原体和害虫。然而，最引人注目的是它们具有抗肿瘤、抗病毒、降低胆固醇等多种生物活性，有着相当可观的药用商业价值4。现代化学和药理学研究发现三七皂苷(Panax notoginosides, PNS)在耐缺氧、抗衰老、提高机体免疫力等方面的药理作用显著优于人参总皂苷,且PNS和部分单体皂苷在血液系统、心脑血管系统、神经系统、物质代谢以及抗炎、抗肿瘤等方面均有较好活性5。但在对抗60Co射线照射引起的骨髓嗜多染红细胞微核率增加方面作用不显著6，而三七皂苷Rg1对环磷酰胺诱导的小鼠骨髓细胞微核发生率和对丝裂霉素诱导的小鼠睾丸染色体畸变均有明显的抑制作用7。而对阿霉素所致的小鼠骨髓细胞微核率的影响方面尚未见报道。阿霉素(Doxorubicin, DXR)也叫亚德里亚霉素，属蒽环类药物，它被用作一种高效、广谱的抗肿瘤药物已有近40年的历史，它对乳腺癌、食道癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、骨肉瘤、Kaposi肉瘤和软组织肉瘤均有较好的疗效8。阿霉素具有抑制DNA合成的能力9 ，还具有引起DNA链断裂的潜能 10,11；阿霉素的细胞毒性作用可能通过各种各样的机制发生，如自由基的形成10、DNA的绑定12、拓扑异构酶II的失活9,13等等。先前的研究显示，阿霉素能诱导正常细胞和肿瘤细胞发生突变和染色体畸变9,14,15。而检测染色体损伤最方便、快速的方法就是小鼠微核试验。微核（micronucleus, 简称MN），也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。微核往往是各种理化因子，如辐射、化学药剂对分裂细胞作用而产生的。在细胞有丝分裂间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。多数学者认为细胞通过两种机制产生微核：一是染色体断裂剂导致染色体断裂，产生无着丝粒断片或环，不能进入子细胞核，被包含在子细胞的胞质内，单独形成一个或几个规则的微核；二是纺锤丝毒性药物能抑制纺锤丝的形成，破坏染色体和纺锤体的连接，阻止细胞分裂中期纺锤丝将染色体拉至细胞的两端，染色单体行动滞后，不能进入子细胞的主核，而形成了一组微核，这样形成的微核体积往往略大于一般典型的微核。由于微核的产生与染色体和DNA损伤有较大关系，故常将微核的检出率作为DNA损伤的一种指标16。微核实验创建于20世纪70年代中期17,18，而小鼠微核试验是目前检测化学物质导致染色体损伤方便、快速的方法,是遗传毒理实验常用的细胞遗传学方法之一19,20。所以目前许多国家（地区）和国际组织都将其视为评价新药、食品添加剂、农药、化妆品等化合物毒理安全性的必做试验之一21,22。本实验也就是采用小鼠骨髓细胞的微核率作为指标来探讨三七皂甙对阿霉素引起的小鼠骨髓细胞微核率的影响。1 材料与方法1.1材料与仪器1.1.1实验动物 昆明种健康小白鼠 云南实验动物许可证: SCXK (滇2005 -0008)。购于昆明医学院动物试验中心。1.1.2实验药品三七总皂甙，七花有限责任公司（文山），产品批号：20031002；注射用盐酸多柔比星（阿霉素），10mg装，深圳万乐药业有限公司生产，产品批号：0808E1，生产日期：20080823；氯化钠注射液，250ml装，昆明南疆制药有限公司生产，产品批号：B081111h1，生产日期：20081111。1.1.3仪器设备日本奥林巴斯BX51系统荧光显微镜；800型离心机（金坛市大地自动化仪器厂）。1.2实验方法小白鼠42只，体重1822g，随机分成7个组，每组6只，雌雄各半。阴性对照组（CKn）和阳性对照组（CKp）每天灌胃生理盐水一次，其余5组分别以12.5mg/kg、25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg和200mg/kg的剂量每天灌胃PNS一次，所有7个组都连续灌胃7d26，27，最后一次灌胃后CKn腹腔注射生理盐水一次，其余各组以80%LD50的DXR剂量分别腹腔注射一次，注射量为0.10.2ml/10g体重23。给药结束后48 h用颈椎脱臼法处死、取样，进行小鼠骨髓细胞微核实验。小鼠骨髓细胞微核实验方法参照了肖福英16 、Makoto Hayashi21 和汪旭20,24,25等的方法，稍加改动。取小鼠股骨，剪去股骨的两端，每条股骨用1ml生理盐水冲洗骨髓腔，每只小鼠用一个离心管。将骨髓冲洗液1 000 rmin-1离心5 min，弃大部分上清液，留少许液体（约0.2ml），轻轻震荡使细胞均匀分散开来。用毛细吸管在每个载玻片上滴两滴，血常规涂片法涂片，自然干燥，甲醇固定10 min，晾干，Giemsa原液用磷酸缓冲液（PH6.8）按120的比例稀释，染色20min。自来水轻轻冲去多余染液，充分晾干，中性树胶封片，在油镜下对每只小鼠骨髓细胞分别计数1 000个，再分别统计其微核发生率。计数细胞要符合以下条件：细胞结构完整。即必须有细胞质和细胞核，且细胞质和细胞核对比明显；细胞核着色鲜明、均匀且边缘相对光滑。部分被污物或其它细胞组织遮盖的细胞不计数，而如果已经确认是微核细胞则计数。1.3统计学处理半致死剂量实验的LD50计算即采用了Bliss法，同时，还进行了Feiller校正。微核实验结果以平均数标准差（xs）表示，微核实验数据用SPSS11.5统计软件进行方差分析，剂量-反应关系进行直线相关分析，计算相关系数。2 结果与分析2.1阿霉素对小白鼠经腹腔给药途径的半致死剂量实验经过预实验一和二得到近似的最大致死剂量(Dm)10 mg/kg和最小致死剂量(Dn)80 mg/kg。在正式实验中按1：0.7的比例，6个组的腹腔给药剂量分别为13.4 mg/kg、19.2 mg/kg、27.4 mg/kg、39.2 mg/kg、56 mg/kg和80 mg/kg，给药后，80 mg/kg组所有小鼠约3 h即出现中毒症状。中毒的症状包括毛发竖起、蓬松无光泽、行动迟缓、四肢无力、走路蹒跚、食欲减小、眼睛紧闭、颈部皮松散、血管暂时扩张等现象。除最小剂量(13.4mg/kg)外，其他剂量组在7 d内均有数量不等的动物死亡，并且死亡率随着阿霉素浓度的增加而递增。存活动物在给药7 d后精神、活动、食欲均逐渐恢复正常。 通过统计小鼠死亡数量，用bliss算半数致死量的软件计算，得到此次实验的回归方程y(Probit)= -7.6323 + 9.043Log(D)，经Feiller校正后的小鼠腹腔给药阿霉素的半数致死量为LD50= 24.941 mg/kg，95%的可信限为21.24129.271mg/kg，5%死亡率（LD5）的剂量为16.407mg/kg，95%死亡率（LD95）的剂量为37.915mg/kg(详见表1)。表1 用 Bliss 法计算腹腔注射半数致死量（LD50（i.p.） calculated by Bliss method）剂量对数剂量(x)动物数(只)死亡数(只)死亡百分率(%)实验机率单位(Y)回归机率单位(Y)CK-1000.00-13.41.12711000.00-2.560119.21.283310110.003.71833.972627.41.437810880.005.84155.369339.21.593310990.006.28176.7758561.74821010100-8.1766801.90311010100-9.57742.2小鼠腹腔注射阿霉素诱发产生微核的最佳时间剂量效应分析实验2.2.1不同剂量阿霉素注射后对小鼠骨髓细胞微核率的影响不同剂量阿霉素注射后小鼠骨髓细胞微核统计结果见表2。通过对剂量与微核发生率的相关性分析（表3，图1），可以看出：阿霉素的腹腔给药剂量与小鼠骨髓细胞的微核发生率有极显著的正相关性（P0.01），即小鼠骨髓细胞的微核发生率随阿霉素的腹腔给药剂量的增大而极显著的增大，它们表现出了极显著的剂量-反应关系。而通过对各给药剂量间微核发生率（）均数的两两比较（S-N-K法）（表4）可以看出：所有给药组的微核率都极显著的高于阴性对照组（P0.01），这说明一次染毒就可造成微核率的显著上升。同时还可以看出20% LD50组的微核率极显著的高于10% LD50组（P0.01），40% LD50组的微核率极显著的高于20% LD50组（P0.01），只有80%LD50组与40% LD50组的微核率相比较差异不显著（P0.05），但从图1中可以看出，虽然差异不显著，但仍保持了上升的趋势。表2不同剂量、不同取样时间阿霉素对骨髓微核率的影响()组别取样时间18h24h30h48h72hTotalCK2.172.142.331.213.001.792.831.471.831.172.431.5510%LD505.003.524.673.337.331.863.500.843.000.894.702.6920%LD507.332.665.831.479.332.168.331.036.171.947.402.2440%LD505.171.608.832.7914.673.2015.53.0210.331.5110.904.5480%LD5010.003.036.503.1513.334.3219.008.0712.002.0012.176.00Total5.933.645.633.219.535.029.837.516.674.29-表3 给药剂量与微核率的相关性分析MN（）DOSEMN（）Pearson Correlation10.697(*)Sig. (2-tailed).000N150150DOSEPearson Correlation0.697(*)1Sig. (2-tailed)0.000.N150150* Correlation is significant at the 0.01 level (2-tailed). 图1 给药剂量与微核率的折线图表4 各给药剂量间微核率（）均数的两两比较（S-N-K法）Student-Newman-Keulsa,b MN（）DOSENSubset1234CK302.4310%LD50304.7020%LD50307.4040%LD503010.9080%LD503012.17Sig.1.0001.0001.0000.084a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 30.b. Alpha =0.012.2.2不同取样时间对小鼠骨髓细胞微核率的影响通过对各取样时间间微核发生率（）均数的两两比较（S-N-K法）（表5）可以看出：30h和48h时取样的微核率显著(P0.05)甚至是极显著(P0.01)（用P =0.01进行检验结果同样成立）的高于18h、24h和72h时取样的微核率；而18h与24h与72h取样时，微核率差异不显著（P0.05），30h与48h取样时，微核率差异也不显著（P0.05）。但通过图2可以看出：在所有的取样时间里，48h取样时微核率是最高的，48 h后微核率显著下降。阿霉素腹腔注射后随取样时间不同，小鼠骨髓细胞微核率统计结果变化见表2。表4 各取样时间间微核率（）均数的两两比较（S-N-K法）Student-Newman-Keulsa,b MN（） TIMENSubset1224h305.6318h305.9372h306.6730h309.5348h309.83Sig.0.3340.681a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 30.b. Alpha = 0.05图2 取样时间与微核率的折线图2.3三七皂甙对阿霉素所致的小鼠骨髓细胞微核率的影响实验 通过对表2中80% LD50组48h取样的微核率和表5中CKp组的微核率进行两个独立样本的平均数比较T检验得出：两组数据间不存在显著差异。说明在PNS对DXR引起的小鼠骨髓细胞微核率影响的实验中，阳性对照是成功的，且对微核的判断也是准确的、前后一致的。通过对表5中各组的微核率均数进行两两比较（表6），可以看出，PNS12.5组的微核率显著高于CKn组和显著低于其他各给药组和CKp组（P0.05）；PNS25组和PNS50组的显著高于CKn组、PNS12.5组和显著低于CKp组（P0.05）,但是其值也是比CKp组的小的。说明PNS在低剂量时对DXR所导致的小鼠骨髓细胞微核率有一定的抑制作用，但不能完全抑制；当剂量增加时，这种抑制作用逐渐减小乃至最后就消失了。但PNS并不会引起小鼠骨髓细胞微核率的增加，即PNS对小鼠骨髓细胞的染色体至少是没有损伤的。实验中部分小鼠骨髓细胞微核见图3。图中箭头所示为小鼠骨髓细胞微核。表5 三七皂甙对阿霉素所致的小鼠骨髓细胞微核率的影响组别小鼠数观察细胞数微核率CKn660003.831.33CKp6600018.671.03PNS12.5+DXR6600011.503.02PNS25+DXR6600015.502.17PNS50+DXR6600014.501.87PNS100+DXR6600014.002.76PNS200+DXR6600014.333.08Total424200013.194.85表6 各组间微核率（）均数的两两比较（S-N-K法）Student-Newman-Keuls MN GROUPSNSubset for alpha = .051234CKn 63.83PNS12.5+DXR611.50PNS100+DXR614.0014.00PNS200+DXR614.3314.33PNS50+DXR614.5014.50PNS25+DXR615.50CKp618.67Sig.1.0000.1290.6761.000a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.0图3 实验中部分小鼠骨髓细胞微核3 讨论为了用药安全和实验的顺利进行，本研究探讨了DXR对昆明种小白鼠的半致死剂量。通过bliss软件计算，得到此次实验的回归方程y(Probit)= -7.6323 + 9.043Log(D)，经Feiller校正后的小鼠腹腔给药阿霉素的半数致死量为LD50= 24.94 mg/kg，95%的可信限为21.2429.27mg/kg；为了得到较好的DXR所致的小鼠骨髓细胞的微核率，本研究摸索了小鼠腹腔注射阿霉素诱发产生微核率的最佳时间剂量条件。因为微核率出现峰值的时间因不同化合物而异，波动范围可能在18 h72 h内，大多数化合物诱发的形成的微核，其检出峰值在给药后的24-30h间，72h后出现峰值的情况很少见21。而且同一化合物，如果给药的剂量与途径不同，动物种属不同，微核率峰值出现的时间也不同28,29,30。因此，合理的选择取样时间和给药剂量对获得较高的微核率显得尤为重要。在本实验中，小鼠一次染毒18 h后，骨髓细胞微核率就明显升高，直到48h时出现峰值（当然，30h与48h时的微核率差异不显著（P0.05），这与付小锁31，许重洁32,33的阿霉素两次染毒得到的小鼠骨髓细胞微核率出现峰值的时间是一致的。这提示了我们，要获得理想的腹腔注射阿霉素诱导的小鼠骨髓细胞微核率的峰值，无须进行二次染毒，一次染毒即可得到。这不仅可以节约一定的实验经费，同时也可以节约一定的时间和精力。另外，本实验同样也得出了与付小锁31，许重洁32,33相同的剂量-反应关系的结果，即小鼠骨髓细胞的微核发生率随阿霉素的腹腔给药剂量的增大而极显著的增大，并对它进行了线性相关分析，得到了相关性极显著（P0.01）的结果。本研究得到的理想的腹腔注射阿霉素诱导的小鼠骨髓细胞微核率峰值的条件为：一次染毒，剂量在10% LD50即2.5mg/kg 至80%LD50即20mg/kg的范围内越大微核率越高，取样时间在30h至48h间微核率最高。在上述条件下，本人对三七皂甙对阿霉素所致的小鼠骨髓细胞微核率的影响进行了研究，结果表明：PNS12.5组的微核率显著高于CKn组和显著低于其他各给药组和CKp组（P0.05）；PNS25组和PNS50组的显著高于CKn组、PNS12.5组和显著低于CKp组（P0.05）,但其值也是比CKp组的小的。说明PNS在低剂量时对DXR所导致的小鼠骨髓细胞微核率有一定的抑制作用，但不能完全抑制；当剂量增加时，这种抑制作用逐渐减小乃至最后就消失了。但PNS并不会引起小鼠骨髓细胞微核率的增加，即PNS对小鼠骨髓细胞的染色体至少是没有损伤的，这与郑文康34的结果是相符的。阿霉素的细胞毒性作用的可能机制有：自由基的形成10、DNA的绑定12、拓扑异构酶II的失活9,13等等。而PNS具有清除自由基的能力35,36,37，同时，根据本实验推测，PNS也可能具有激活与DNA的修复相关的酶的作用和（或）重新激活拓扑异构酶II的能力。参考文献：1 徐冬英.三七名称及其有文字记载时间的考证J，广西中医学院学报，2000年9月第17卷 第3期2 段承俐,李一果,杨艳琼等.三七的染色体核型分析J，西南农业学报，2007年20卷3期3 Dong TX, Cui XM, Song ZH,et al. Chemical assessment of roots of Panax notoginsengin China: regional and seasonal variations in its active constituentsJ. J Agric Food Chem, 2003, 51:4617-4623.4 姚新生.天然药物化学M.第三版.北京:人民卫生出版社，2001:2895 Ye ZG, Xue BY, Dai BQ,et al. Comparative study on pharmaco-logical action of ginseng saponins and notoginseng saponinsJ. China J Chinese Medicinal Information, 1996, 3(5): 11-14.6 全宏勋,阎育周. 四种中草药对辐射小鼠的防护效果J. 中华放射医学与防护杂志,1996年6月第16卷第3期:188-1897 黄清松,李红枝,张咏莉等. 三七皂苷Rg1抗突变和抗肿瘤研究J. 临床和实验医学杂志,2006年8月第5卷第8期:1124-11258 Mehmet Dogan Gulkac, Gurler Akpinar, Hasan Ustun, et al. Effects of vitamin A on doxorubicin-induced chromosomal aberrations in bone marrow cells of ratsJ. Mutagenesis vol. 19 no. 3 pp. 231-236, 20049 Quiles,J.L., Huertas,J.R., Battino,M., et al. Antioxidant nutrients and adriamycin toxicityJ. Toxicology, 2002（180）：79-95.10 Ramos,K.S., Melchert,R.B., Chacon,E. and Acosta,D.,Jr Toxic response of the heart and vascular systemsA. In Klaassen,C.D. (ed.), Casarett and Doulls Toxicology: Basic Science of PoisonsM. McGraw-Hill, New York, NY, 2001.pp. 597-651.11 Barber,D.A. and Harris,S.R. Oxygen free radicals and antioxidants: a reviewJ. Am. Pharm., 1994,（34）： 26-35. 12Chachoua,A., Hoschster,H. and Muggia,F.M. DoxorubicinA. In Droz,J.P., Cvitkovic,E., Armand,J.P. and Khoury,S. (eds), Handbook of Chemotherapy in Clinical OncologyM. Rhne-Poulenc, Houston, TX, (1988)pp. 125127.13Tewey,K.M., Rowe,T.C., Yang,L.et al. Adriamycin-induced DNA damage mediated by mammalian DNA topoisomerase IIJ. Science, 1984226, 466468.14 Tavares,D.C., Cecchi,A.O., Antunes,L.M. et al. Protective effects of the amino acid glutamine and of ascorbic acid against chromosomal damage induced by doxorubicin in mammalian cellsJ. Teratog. Carcinog. Mutagen., 1998,（18）：153-161. 15 Antunes,L.M. and Takahashi,C.S. Protection and induction of chromosomal damage by vitamin C in human lymphocyte culturesJ. Teratog. Carcinog. Mutagen., 1999,(19): 53-59.16肖福英，蒋林彬主编.医学细胞生物学与医学遗传学试验M.复旦大学出版社，2007.9：9017Heddle A. A rapid in vivo test for chromosomal damageJ. Mutat Res, 1973(18): 187-190.18Schmid W. The micronucleus test J.Mutat Res, 1975(31): 9-15.19郑巧玲,梁丽燕,陈润涛等.职业小剂量照射对医用X射线工作者微核产额影响的研究J.现代预防医学,2006,33(12):2297-2298.20汪旭、刘素清、合正基等，抗着丝点抗体在鉴别微核起源上的应用J，癌变.畸变.突变，1994年第6卷第2期21 Makoto Hayashi. 小鼠骨髓红细胞微核试验A.曹佳,林真(日本),余争平,主编. 微核试验原理、方法及其在人群监测和毒性评价中的应用M.北京:军事医学科学出版社,2000：4622余明泽,刘以农,蒋中仁等，环磷酰胺诱导小鼠骨髓细胞微核的影响因素的研究J，现代预防医学，2007年第34卷第5期23 孙敬方. 动物学实验方法M. 北京：人民卫生出版社，2001：356，19924 Wang Xu，B.Miller, U.Kliesch et al. A study of aneuploidy induction by three mitotic arrestants in mouse bone marrow cellsJ. Chinese Journal of Genetics，1991,18（3）：209-21725 汪旭，李雯，周汝敏等.微核直径测试作为非整倍体诱发剂的分析手段J，遗传，1993，15（3）：16-1926 刘丽波，王贤，李玲等.人参皂甙对雄性小鼠细胞染色体的辐射防护作用J.中国公共卫生学报，1997年第16卷1期：59-6027 陈锡文，管敏强. 三七总皂甙对小鼠抗辐射损伤的实验研究J. 中华放射医学与防护杂志2005年12月第25卷第6期：559-56028 Tice RR, Erexson GL, Hilliard CJ,et al. Effect of treatment protocol and sample time on the frequencies of micronucleated polychromatic erythrocytes in mouse bone marrow and peripheral blood J.Mutagenesis,1990, 5 (4): 313-321.29 Vanparys P, Deknudt G, Vermeiren F,et al. Sampling times in micronucleus testing J .Mutat Res, 1992, 282:191-196.30 Foy C A, Parkes H C. Emerging homogeneous DNA-Based Technologies in the Clinical LaboratoryJ. ClinChem,2001,47(6):990-1000.31付小锁，颜宜苣，韩丽.阿霉素对小鼠骨髓和外周血红细胞微核率的影响J.北京医学，2000，22(1): 52-5332 许重洁，张艳芬，杨保胜等. 阿霉素诱导小鼠骨髓细胞微核影响因素研究J.新乡学院学报(自然科学版)，2008.6，25（2）：48-5033 许重洁，张艳芬，杨保胜等. 阿霉素对小鼠骨髓微核和染色体的影响J. 新乡医学院学报，2008.7，25（4）：357-35934 郑文康，张云生，贺维顺等.金不换鲜三七液对哺乳动物致突变和致畸安全性评价J.动物学研究，1999年10月. 20 (5): 32132635 Xu QF, Fang XL, Chen DF. Pharmacokinetics and bioavailability of ginsenoside Rb1 and Rg1 from Panax notoginseng in ratsJ. J Ethnopharmacology, 2003, 84: 187-192.36 Han JA, Hu WY, Sun ZH. Effect of Panax notoginseng Saponin on Ca2+, CaM in craniocerebral injuryJ. Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine, 1999,19: 227-229.37 黄东轩，郑晓和，林锦俊等.三七总皂苷对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用及其线粒体机制J.中国组织工程研究与临床康复，2007年5月第11卷第21期A Study of the optimal Time-Dose Effect of Doxorubicin on Inducing the Micronucleus Frequency in Mouse Bone Marrow by Intraperitoneal Injection(i.p.)CHANG Zheng(School of Life Sciences, Yunnan Normal University，biological and chemical department, Wenshan university,Yunnan Wenshan 663000)Abstract: Objective to study time-dose effect of doxorubicin on inducing the micronucleus frequency in mouse bone marrow by intraperitoneal injection once. Methods 150 mice are divided into 5 groups randomly, 30 mice one group, half male and half female. Each mouse is injected once by intraperitoneal injection. The dose is: control group is injected physiological saline; the dose of the remaining four groups is 2.5 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg respectively. Micronucleus test were performed in mice after 18h, 24h, 30h, 48h or 72h, and the micronucleus frequency in mouse bone marrow and estimating doxorubicin genotoxicity in mice were counted. Results In the range of 2.5 mg/kg20 mg/kg, with the increasing of dose, the percentage of micronucleus is higher, and the optimal sampling time is 48h after treatment.Keyword: Panax notoginosides； Doxorubicin; Mice; Intraperitoneal injestion; Micronucleus Frequency作者简介：常征(1975)，男，汉族，云南马关人，文山学院生化系副教授，大学本科，主要从事生物化学和遗传学方面的教学和科研工作