检验核医学：放射性核素示踪技术 (2).ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,放射性核素示踪技术,Radioactive Nuclide Tracer Method,应用思考,1,食物中有两种含甲基的化合物,胆碱和蛋氨酸，其甲基部分可相互转移，彼此代替，并供给肌酸与肾上腺素合成的需要。,其转移过程是以甲基作为完整基团直接转移，还是分解后重新形成？,应用思考,2,3-,羟,-3-,甲基戊二酰辅酶,A,还原酶主要存在细胞的内质网，能催化,HMG-CoA MVA,该酶是胆固醇生物合成关键限速酶,有多种因素,(,药物、激素、代谢物）主要通过调节此酶活性影响胆固醇合成,如何测定其活性,?,应用思考,3,从某中药中提取得某单体，可能对瘤细胞,DNA,合成有抑制作用,如何设计一体外实验验证？,应用思考,4,如何比较口服止血药,A,及剂型改进型,B,对消化道出血的治疗效果？,如何比较某些药物增加或降低冠状动脉血流量？,应用思考,5,某生物制剂对神经损伤有修复作用，现将其制成海绵敷贴剂，以延长作用时间（缓释作用）,如何设计一实验，证明此敷贴剂对神经损伤创面的缓释作用？,应用思考,6,某新型肿瘤单克隆抗体在肿瘤组织有较好的特异性浓聚。,如何设计一实验证明其浓聚程度？,应用思考,7,如何监测干细胞的移植,?,一、概念,放射性核素示踪技术是利用放射性核素及其标记化合物作,示踪剂,来研究生物体内各种代谢物质的吸收、分布、排泄、转移规律及疾病诊断的一门科学。,Label:,放射性核素,Substance,：观察对象,System:,整体、离体,Labeled-Substance,吸收、分布、排泄,放,射,性,核,素,示,踪,技,术,*,放射性核素稀释法,*物质吸收、分布、转化、排泄的示踪研究,*放射性核素示踪动力学,细胞动力学的示踪研究,药物代谢反应机制的示踪研究,分子生物学的示踪研究,特定探针（单克隆抗体、配基）的示踪研究,.,二、原理,放射性核素及标记化合物与 相应普通原子及分子具相同 的生物学性质,.,如,I,与,125,I,、雌二醇与,3,H-,雌二醇 放射性核素发出的射线可记录分析,三、放射性核素示踪的特点,灵敏度高,检测方法简单,合乎生理条件,定位准确,非创伤性,待,分,析,物,析,量,g,比,色,分光,光度色,质,谱,层,析,放射性核素示踪,技术,10,-2,10,-8,10,-8,10,-10,10,-15,10,-18,四、常用示踪方法及其应用,放射性核素稀释法,物质吸收示踪法,物质转化示踪法,物质分布示踪法 物质示踪动力学,放射性核素稀释法,radionuclide dilution technique,利用化学物质在稀释前后质量不变的原理与示踪技术相结合而建立的微量物质定量分析方法,基本公式,A,：放射性示踪剂的总活度,S1,、,m1,：混合前示踪剂比活度与质量,S2,、,m2,：混合后的比活度及非标记物质量,例,1,：某样品中含有残留甲胺磷，加入比活度为,450000dpm/mg,的,32P,标记的甲胺磷,0.02mg,混匀后分离得,0.1mg,甲胺磷的放射性为,2000dpm,求样品中的甲胺磷含量。,例,2,以,14,CO,2,通过植物的光合作用生成放射性蛋白。取其中少量蛋白水解分离出部分谷氨酸比活度为,508dpm/mg,，欲求谷氨酸的含量，取,126mg,放射性蛋白样品，水解后加入非标记谷氨酸,10.7mg,，混匀后，分离出少部分谷氨酸测得其比活度为,328dpm/mg,，求标记谷氨酸的量及蛋白中标记谷氨酸的重量百分比？,标记谷氨酸的重量百分比为：,32.44126=25.7%,物质转化示踪研究,揭示机体内重要生命物质的前身物、中间物和产物的关系以及完成某种转化的必要条件,参入实验,(incorporation experiment,）是放射性核素示踪技术应用到研究生物体内物质转化的重要方法,.,参入实验,(,incorporation experiment),研究生物体系中化合物,A,与,B,是否为产物和前身物的关系或转化的必要条件,基本原理,A B?,*A *B,主要参数,参入实验的类型,整体参入实验,离体参入实验,参入实验应用,1.,淋巴细胞转化实验,细胞免疫功能肿瘤细胞增殖,铅中毒病人淋巴细胞转化率,淋巴细胞转化率（,10,4,CPM/10,6,淋巴细胞,）,病人,n=60 21.2710.32,正常,n=100 48.9621.46,2.,代谢物转化实验,细菌放射呼吸实验：,原理：细菌,CO,2,14,C-,葡萄糖、,14,C-,氨基酸,14,CO,2,设备：细胞代谢快速闪烁计数器,滤膜,培养液,细菌放射呼吸实验的应用：,生长指数（,GI,）,测定：,GI=C,i,/C,0,GI,3,为阳性,细菌倍增时间（,t,2x,）,测定：,logR,2,-logR,1,=K(t,1,-t,2,)t,2x,=0.301/K,R,2,为,t,2,的计数，,R,1,为,t,1,的计数，,K,为对数生长期的速度常数。,常见需氧菌倍增时间（,min,）,菌种,t,2x,菌种,t,2x,大肠杆菌,27.50.7,炭疽杆菌,38.05.2,产气杆菌,28.70.5,枯草杆菌,48.82.3,肠炎沙门氏菌,43.75.5,福氏痢疾杆菌,51.54.1,粘质沙雷氏菌,44.31.6,宋内氏痢疾杆菌,29.70.1,腊样杆菌,33.60.8,金黄色葡萄球菌,40.93.6,巨大芽孢杆菌,40.12.0,白色葡萄球菌,74.58.7,3.,参入竞争抑制实验：,体外抗肿瘤药物筛选,Drug IR,（,%,）,ADM 57.73,Carbo 29.38,BLM 38.26,VCR 56.80,Taxol 63.35,Holoxan 32.97,MMC 19.34,DTIC 38.31,ADM+Carbo 70.90,VCR+Carbo+BLM 81.45,卵巢癌常用化疗药物体外敏感实验,五、放射性示踪实验的基本方法 及注意事项,1.,放射性示踪实验的类型,整体示踪实验,离体示踪实验,2.,注意事项,实验准备阶段,:,选择合适示踪物,射线类型 半衰期 放化纯度 比活度 核素标记位置,选择合适的测量方法,实验阶段,:,示踪剂量估算,稀释作用,组织浓聚作用,实验周期及安全剂量,示踪剂引入途径,静脉、腹腔、皮下、肌肉注射口服、灌胃敷贴、涂布,放射性样品的制备,核素特性 生物样品特性,数据处理,放射性含量 比活度 相对比活度,思考题,放射性示踪技术的原理是什么,?,有何主要技术特点,?,参入实验的基本原理是什么,?,有何主要用途,?,