掌状玫耳粗多糖对环磷酰胺所致小鼠免疫低下的影响.pdf

40 食用菌学报 2023.30（4）：2023.04.收稿日期：2023-02-27原稿；2023-04-03修改稿基金项目：教育部长江学者与创新团队（IRT15R25）作者简介：李 诣（1999），女，在读硕士，主要从事天然药物药理研究。*本文通信作者 E-mail:4050005掌状玫耳粗多糖对环磷酰胺所致小鼠免疫低下的影响李 诣，曹润康，包海鹰*（吉林农业大学药用菌物资源及开发利用重点研究室，农业农村部北方食用菌资源利用重点实验室，吉林 长春130118）摘 要：采用掌状玫耳（Rhodotus palmatus）粗多糖（低、高剂量分别为100、200 mgkg-1）腹腔注射环磷酰胺所致免疫低下小鼠，测定脾脏、胸腺指数，血清中TNF-、IL-1、IL-6、溶血素含量，耳肿胀度，血液中白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板含量，血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活性，血清中尿素氮（BUN）、肌酸酐（CRE）含量，并测定脾脏组织NF-B通路相关蛋白表达量，研究掌状玫耳粗多糖对免疫低下小鼠免疫功能的影响。结果表明：与模型组相比，掌状玫耳粗多糖高、低剂量组小鼠胸腺、脾脏指数均显著增加；高剂量组TNF-、IL-1和IL-6含量显著增加；高、低剂量组小鼠耳肿胀度均显著增加；高剂量组小鼠血清溶血素含量显著增加；高剂量组小鼠血液中白细胞、红细胞、血红蛋白含量显著增加，高、低剂量组小鼠血液中血小板含量均显著增加；高剂量组小鼠血清中ALT活性显著降低，高、低剂量组小鼠血清中AST活性和CRE、BUN含量均显著降低；高、低剂量组TLR-4、IKK、NF-B p50表达量均显著升高，IB-表达量显著降低；高剂量组NF-B p65表达量极显著升高。结果表明掌状玫耳粗多糖对环磷酰胺所致免疫抑制小鼠具有良好的免疫保护作用，可为掌状玫耳的进一步开发提供参考。关键词：掌状玫耳；多糖；环磷酰胺；免疫功能Effects of Rhodotus palmatus Polysaccharide on Immunodeficient Mice Induced by CyclophosphamideLI Yi,CAO Runkang,BAO Haiying*Key Laboratory of Medicinal Fungal Resources and Development and Utilization;Key Laboratory of Edible Fungal Resources and Utilization(North),Ministry of Agriculture and Rural Affairs,Jilin Agricultural University,Changchun 130118,Jilin,ChinaAbstract:The effects of Rhodotus palmatus polysaccharide(MR)on the immune function of cyclophosphamide-induced immunodeficient mice were studied.MR was obtained by hot water extraction of artificially cultivated R.palmatus,and the immunodeficient mouse model was established by intraperitoneal injection of cyclophosphamide.Two MR dose groups were established by intraperitoneal injection of low dose MR at 100 mgkg-1 and high dose MR at 200 mgkg-1 to immunodeficient mice,respectively.Then mice in different groups were determined for spleen index,thymus index,serum TNF-,IL-1,IL-6,hemolysin,blood urea nitrogen(BUN)and creatinine(CRE)levels,mouse ear swelling degree,contents of white blood cells,red blood cells,hemoglobin,and platelets in blood,activities of alanine aminotransferase(ALT)and aspartate 41 李 诣，等：掌状玫耳粗多糖对环磷酰胺所致小鼠免疫低下的影响第 4 期aminotransferase(AST)in serum,and NF-B pathway-related protein expression in spleen tissue.The results showed that both spleen index and thymus index were significantly increased in both MR groups compared with those in the model group.TNF-,IL-1,IL-6 and hemolysin were significantly increased in the high dose MR group.Mouse ear swelling degree increased significantly in both MR groups.The contents of white blood cells,red blood cells and hemoglobin of the high dose MR group,and the contents of platelets of both MR groups were significantly greater than those of the model group.Compared with the model group,the serum ALT activity of the high dose MR group,the serum AST activity of both MR groups,and the CRE and BUN levels of both MR groups were significantly decreased.Compared with the model group,both MR groups had significantly increased expression levels of TLR-4,IKK,NF-B p50,and a significant decrease in IB-.The high dose MR group showed an extremely significantly increase in NF-B p65 expression.The R.palmatus polysaccharide showed a good immunoprotective effect on cyclophosphamide-induced immunodeficient mice,thereby providing a reference for further development of R.palmatus.Key words:Rhodotus palmatus;cyclophosphamide;immune function掌状玫耳（Rhodotus palmatus）又名网盖红褶伞、网盖粉菇，隶属于蘑菇科（Agaricaceae）、红褶伞属（Rhodotus）1。掌状玫耳菌盖呈粉红色、胶状，在生长过程中光照强度和颜色会影响子实体大小、形状和颜色。掌状玫耳具有补钙、美容等作用，特别是治疗便秘效果显著。目前，掌状玫耳已驯化成功，并实现规模化栽培2。机体免疫系统包括免疫器官、免疫细胞和免疫分子，其通过对病原体产生的特异性与非特异性免疫应答来维持身体平衡3。免疫应答是人体免疫系统的重要防御手段，对生命健康起着重要作用4-5。化疗药物、营养不良和压力过大等均会引起机体免疫力下降6。环磷酰胺（cyclophosphamide,CTX）是一类氮芥衍生物，在人体内会被肝脏和肿瘤中含有的过量磷酰胺酶或磷酸酶分解成具有活性的氮芥。CTX是一种抗癌药物，会对免疫系统造成不可逆损伤，因而成为免疫抑制模型的常用造模药物7。NF-B信号通路是激活免疫系统的重要途径，NF-B是核转录因子，通常与抑制蛋白IB结合为无活性复合物，受到刺激时，NF-B解离，与NF-B p65/p50形成二聚体，进入细胞核，启动细胞因子转录、翻译和组装，参与调节免疫反应8。NF-B信号通路是典型的调节免疫低下的信号通路，顾婷9发现美洲大蠊糖蛋白可以通过激活NF-B信号通路调节环磷酰胺诱导小鼠的免疫抑制，宋广福等10发现参芪扶正注射液通过激活NF-B/IB信号通路提高C57BL/6小鼠免疫力。掌状玫耳是一种主要生长在长白山地区的稀有真菌，由吉林农业大学图力古尔教授课题组驯化成功，并在河南果菇蓉生物科技有限公司实现规模化栽培。目前，掌状玫耳研究尚处于起步阶段，在其发酵液中分离出部分倍半萜和去甲倍半萜类化合物，在其液体培养菌丝中分离出粗多糖并进行初步分析11-12。笔者建立环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠模型，通过测定脾脏、胸腺指数，血液指标，肝肾功能标志物以及脾脏组织NF-B通路相关蛋白表达量，探索掌状玫耳粗多糖对免疫低下小鼠的影响。1 材料与方法1.1 材料掌状玫耳（R.palmatus）新鲜子实体（图1）由河南果菇蓉生物科技有限公司提供，由吉林农业大学图力古尔教授鉴定。42 第 30 卷食 用 菌 学 报注：A、B为野生子实体；C、D为栽培子实体。Notes:A and B are wild R.palmatus fruiting bodies;C and D are cultivated R.palmatus fruiting bodies.图 1 掌状玫耳子实体Fig.1 R.palmatus fruiting bodies1.2 主要试剂和仪器注射用环磷酰胺（江苏恒瑞医药股份有限公司）；盐酸左旋咪唑（仁和堂药业有限公司）；10倍补体（上海源叶生物科技有限公司）；20%绵羊红细胞（南京森贝伽生物科技有限公司）；IL-1、IL-6、TNF-检测试剂盒，谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、肌酸酐（CRE）、小鼠尿素氮（BUN）检测试剂盒（长春晶美生物工程有限公司）；BCA蛋白定量试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司）；TLR4、NF-B p50、NF-B p65（北京博奥森生物技术有限公司）；IkB、IKK艾博抗（上海）贸易有限公司；-actin（北京中杉金桥生物技术有限公司）；葡聚糖标准品（中国药品生物制品检定所）。RE-5210A旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；ELX800酶标仪（美国BioTek公司）；MINISPIN离心机（德国 Eppendorf 公司）；HI1210组织摊片机、EG1150组织包埋机（德国LEICA公司）；AL-104精密天平（上海梅特勒-托利多仪器公司）；BC-2800vet兽用全自动血液细胞分析仪（迈瑞医疗器械公司）。1.3 实验动物雌性 BalB/c 小鼠，SPF 级，体质量（202）g，购自北京华富康生物科技有限公司，证书号：SCXK京2019-0008。1.4 掌状玫耳粗多糖制备将掌状玫耳子实体40 烘干，取2 000 g参照文献13的方法提取多糖，采用Sevag法除蛋白，采用D101大孔树脂柱进行纯化，收集水相，使用截留相对分子质量为3 000的透析袋透析72 h，获得粗多糖（MR），采用苯酚-硫酸法14测定多糖含量，参照周恒斌等15的方法对MR进行水解，采用PMP衍生方法测定单糖组成。43 李 诣，等：掌状玫耳粗多糖对环磷酰胺所致小鼠免疫低下的影响第 4 期1.5 小鼠免疫抑制模型构建和胸腺、脾脏指数测定小鼠在吉林农业大学动物实验中心适应性饲养7 d。将小鼠随机分为5组，每组10只，空白组（KC）和模型组（MC）灌胃生理盐水（0.02 mLkg-1），阳性组(PC)灌胃盐酸左旋咪唑(50 mgkg-1)，掌状玫耳粗多糖低剂量组（MRL）、高剂量组（MRH）分别灌胃100、200 mgkg-1 MR，每日1次。在第1921天，除空白组外，其他组每日腹腔注射一次环磷酰胺（80 mgkg-1），在第21天给药结束24 h后，称小鼠体质量；眼眶取血，室温静置40 min，1 960 g离心15 min，将上清液在-80 保存。取胸腺和脾脏，称质量，计算胸腺、脾脏指数。胸腺指数/(mgg-1)=胸腺质量/mg小鼠体质量/g 脾脏指数/(mgg-1)=脾脏质量/mg小鼠体质量/g 1.6 小鼠血清细胞因子含量测定参照试剂盒说明书测定小鼠血清中IL-6、IL-1和TNF-含量。1.7 小鼠耳肿胀度测定参照1.5进行造模和给药，在给药的第14 天，剃掉小鼠腹部毛，涂50 L 10 gL-1的2,4-二硝基氟苯，进行初始免疫刺激，在第21天给药24 h后，在小鼠右耳涂抹20 L 10 gL-1的 2,4-二硝基氟苯作为抗原攻击，涂抹1 h后颈椎脱臼处死小鼠，剪下左耳和右耳，用打孔器取直径为8 mm的耳片，称量并计算耳肿胀度。耳肿胀度=右耳耳片质量-左耳耳片质量1.8 小鼠血液指标测定参照1.5进行造模和给药，在第21天上午给药后每组取4只小鼠分别腹腔注射0.2 mL 20%绵羊红细胞，7 d后在超净工作台上眼眶取血，参考LIU等16和刘颖17的方法制备血清并计算血清溶血素含量，采用全自动血细胞分析仪测定小鼠血液中红细胞（RBC）、白细胞（WBC）、血红蛋白（HGB）和血小板（PLT）含量。1.9 脾脏组织苏木精和伊红（HE）染色将脾脏组织在4%多聚甲醛中固定1824 h，经脱水、包埋、切片，用苏木精和伊红（HE）染色，用显微镜观察并拍照18。1.10 MR对小鼠肝肾功能标志物的影响参照试剂盒说明书测定小鼠血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）活性，肌酸酐（CRE）和尿素氮（BUN）含量。1.11 MR对小鼠脾脏组织NF-B通路相关蛋白表达的影响取40 mg脾脏组织，加入液氮研磨，参考YUN等19的方法，加入150 L裂解缓冲液，混匀后在冰浴中静置30 min，4、1 500 g离心30 min，参照试剂盒说明书测定上清液蛋白含量。1.12 数据处理数据以平均值标准差表示，采用Graphpad Prism 8.0.1软件作图，并进行单因素方差分析，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2 结果与分析2.1 掌状玫耳粗多糖多糖含量和单糖组成掌状玫耳粗多糖多糖含量为74.98%；主要由葡萄糖、半乳糖以及少量木糖和半乳糖醛酸组成，葡萄糖和半乳糖摩尔比为1.221.56。44 第 30 卷食 用 菌 学 报2.2 掌状玫耳粗多糖对免疫低下小鼠体质量和胸腺、脾脏指数的影响如表1所示，与空白组相比，模型组小鼠体质量极显著降低，表明造模成功。与模型组相比，掌状玫耳粗多糖低、高剂量组小鼠体质量分别显著、极显著增加。如图2所示，与空白组相比，模型组小鼠胸腺、脾脏指数极显著降低，表明造模成功。与模型组相比，掌状玫耳粗多糖低、高剂量组小鼠胸腺指数分别显著、极显著增加；脾脏指数分别极显著、显著增加。表 1 掌状玫耳粗多糖（MR）对免疫低下小鼠体质量的影响Table 1 Effect of R.palmatus crude polysaccharide(MR)on body mass of immunodeficient mice组别 Group体质量 Body mass/g0 d21 dKC19.950.2223.230.88MC 20.050.4620.950.46*PC19.900.2621.980.36#MRL19.740.5621.610.51#MRH19.930.4721.710.57#注：数据为平均值标准差（n=10）；KC、MC、PC、MRL、MRH分别表示空白组，模型组，阳性组，掌状玫耳粗多糖低、高剂量组；*表示与空白组比较差异极显著（P0.01）；#和#分别表示与模型组比较差异显著（P0.05）和极显著（P0.01）。Notes:values are means SD(n=10);KC,MC,PC,MRL and MRH indicate blank group,model group,positive group,low dose MR group and high dose MR group,respectively;*indicates an extremely significant difference compared with the blank group(P0.01);#and#indicate a significant(P0.05)and an extremely significant difference(P0.01)compared with the model group,respectively.注：数据为平均值+标准差（n=10）；KC、MC、PC、MRL、MRH分别表示空白组，模型组，阳性组，掌状玫耳粗多糖低、高剂量组；*表示与空白组比较差异极显著（P0.01）；#和#分别表示与模型组比较差异显著（P0.05）和极显著（P0.01）。Notes:values are means+SD(n=10);KC,MC,PC,MRL and MRH indicate blank group,model group,positive group,low dose MR group and high dose MR group,respectively;*indicates an extremely significant difference compared with the blank group(P0.01);#and#indicate a significant(P0.05)and an extremely significant difference(P0.01)compared with the model group,respectively.图2 掌状玫耳粗多糖对免疫低下小鼠胸腺指数（A）和脾脏指数（B）的影响Fig.2 Effects of R.palmatus crude polysaccharide on thymus index(A)and spleen index(B)in immunodeficient mice2.3 掌状玫耳粗多糖对免疫低下小鼠血清TNF-、IL-6和IL-1含量的影响如图3所示，与空白组相比，模型组小鼠细胞因子TNF-、IL-6和IL-1含量极显著降低，说明造模成功。与模型组相比，掌状玫耳粗多糖高剂量组TNF-含量极显著增加，为（406.3940.21）ngmL-1；IL-6、IL-1含量显著增加，分别为（84.3417.86）、（91.4219.54）pgmL-1。2.4 掌状玫耳粗多糖对免疫低下小鼠耳肿胀度的影响如图4所示，与空白组相比，模型组小鼠耳肿胀度极显著降低，说明腹腔注射CTX能够降低小鼠迟发性超敏反应。与模型组相比，掌状玫耳粗多糖低、高剂量组小鼠耳肿胀度分别极显著、显著增加，分别为（4.900.60）、（5.400.73）mg，说明掌状玫耳粗多糖能够提高免疫低下小鼠的迟发性超敏反应。45 李 诣，等：掌状玫耳粗多糖对环磷酰胺所致小鼠免疫低下的影响第 4 期注：同图2。Note:footnotes as in Fig 2.图3 掌状玫耳粗多糖对免疫低下小鼠血清中TNF-（A）、IL-6（B）和IL-1（C）含量的影响Fig.3 Effects of R.palmatus crude polysaccharide on serum TNF-(A),IL-6(B)and IL-1(C)in immunodeficient mice注：同图2。Note:footnotes as in Fig 2.图4 掌状玫耳粗多糖对免疫低下小鼠耳肿胀度的影响Fig.4 Effect of R.palmatus crude polysaccharide on ear swelling in immunodeficient mice2.5 掌状玫耳粗多糖对免疫低下小鼠血液指标的影响如图5所示，与空白组相比，模型组小鼠血清溶血素含量极显著降低，表明造模成功。与模型组相比，掌状玫耳粗多糖高剂量组小鼠血清溶血素含量显著增加，为0.480.04。与空白组相比较，模型组小鼠血液中白细胞、红细胞含量极显著降低，血红蛋白、血小板含量显著降低，说明造模成功。与模型组相比，掌状玫耳粗多糖高剂量组小鼠血液中白细胞、红细胞、血红蛋白含量显著增加，分别为（5.870.78）109 L-1、（3.220.49）1012 L-1、（261.7350.59）g L-1；低、高剂量组小鼠血液中血小板含量均显著增加，分别为（349.9033.59）109 L-1、（369.4030.34）109 L-1。2.6 免疫低下小鼠脾脏组织HE染色结果如图6所示，空白组小鼠脾脏组织有明显的红髓、白髓界限划分，细胞排列紧密而整齐。模型组小鼠脾脏组织红髓和白髓界限不清晰，细胞排列杂乱。阳性组小鼠脾脏组织红髓和白髓界限较明显。掌状玫耳粗多糖高剂量组小鼠脾脏组织的结构损伤较小，白髓和红髓界限较明显，白髓结构完整，细胞较密集。46 第 30 卷食 用 菌 学 报注：AE分别为血清溶血素、红细胞、白细胞、血红蛋白和血小板含量；数据为平均值+标准差（n=4）；KC、MC、PC、MRL、MRH分别表示空白组，模型组，阳性组，掌状玫耳粗多糖低、高剂量组；*和*分别表示与空白组比较差异显著（P0.05）和极显著（P0.01）；#和#分别表示与模型组比较差异显著（P0.05）和极显著（P0.01）。Notes:A-E indicate serum haemolysin,RBC,WBC,HGB and PLT levels,respectively;values are means+SD(n=4);KC,MC,PC,MRL and MRH indicate blank group,model group,positive group,low dose MR group and high dose MR group,respectively;*and*indicate a significant(P0.05)and an extremely significant difference(P0.01)compared with the blank group,respectively;#and#indicate a significant(P0.05)and an extremely significant difference(P0.01)compared with the model group,respectively.图5 掌状玫耳粗多糖对免疫低下小鼠血液指标的影响Fig.5 Effects of R.palmatus crude polysaccharide on peripheral blood indices of immunodeficient mice注：AE分别为空白组，模型组，阳性组，掌状玫耳粗多糖低、高剂量组；rp、wp分别表示红髓、白髓。Notes:A-E are blank group,model group,positive group,low dose MR group and high dose MR group,respectively;rp and wp indicate red pith and white pith,respectively.图6 小鼠脾脏组织HE染色结果(200)Fig.6 Hematoxylin and eosin(HE)staining results of mouse spleen tissue(200)47 李 诣，等：掌状玫耳粗多糖对环磷酰胺所致小鼠免疫低下的影响第 4 期2.7 掌状玫耳粗多糖对免疫低下小鼠肝肾功能标志物的影响如图7所示，与空白组相比，模型组小鼠血清中ALT和AST活性、BUN和CRE含量极显著升高，说明在CTX刺激下，小鼠肝肾损伤严重。与模型组相比，掌状玫耳粗多糖高剂量组小鼠血清中ALT活性显著降低，为（24.292.69）UL-1。低剂量组AST活性显著降低，为（27.273.26）UL-1；高剂量组极显著降低，为（26.102.81）UL-1。低剂量组CRE含量极显著降低，为（20.942.32）mmolL-1；高剂量组显著降低，为（19.404.61）mmolL-1。高剂量组BUN含量极显著降低，为（52.7714.70）mmolL-1。注：AD分别为ALT、AST活性，CRE和BUN含量；其他注同图2。Notes:AD are ALT activity,AST activity,CRE content,and BUN content,respectively;other notes as in Fig.2.图7 掌状玫耳粗多糖对免疫低下小鼠肝肾功能标志物的影响Fig.7 Effects of R.palmatus crude polysaccharide on biomarkers of liver and kidney function in immunodeficient mice2.8 掌状玫耳粗多糖对免疫低下小鼠脾脏组织NF-B通路相关蛋白表达的影响NF-B 通路是典型的免疫信号通路，参与机体免疫应答，调节细胞凋亡和炎症反应等。如图8所示，与空白组相比，模型组小鼠TLR-4、IKK、NF-B p65和NF-B p50表达量极显著降低，IB-表达量极显著升高，说明NF-B信号通路激活程度低。与模型组比较，掌状玫耳粗多糖低剂量组TLR-4、IKK、NF-B p50表达量显著升高，高剂量组极显著升高；低剂量组IB-表达量显著降低，高剂量组极显著降低；高剂量组NF-B p65表达量极显著升高。48 第 30 卷食 用 菌 学 报注：A为蛋白印迹图；BF分别为TLR-4、IB-、IKK、NF-B p65和NF-B p50相对表达量；其他注同图2。Notes:A.Western blotting results;BF are relative expression of TLR-4,IB-,IKK,NF-B p65 and NF-B p50,respectively;other notes as in Fig.2.图8 掌状玫耳粗多糖对免疫低下小鼠脾脏组织NF-B通路相关蛋白表达的影响Fig.8 Effect of R.palmatus crude polysaccharide on NF-B-pathway related protein expression in spleen tissue of immunodeficient mice3 讨论胸腺是T细胞淋巴细胞分化和成熟的场所，也是维持机体免疫的场所20。本研究结果表明，掌状玫耳粗多糖高、低剂量组小鼠体质量、脾脏和胸腺指数均上调，红髓和白髓界限清晰，细胞排列有序。迟发型超敏反应是衡量细胞免疫力强弱的指标，与模型组相比，掌状玫耳粗多糖组小鼠耳肿胀度显著增加，表明掌状玫耳粗多糖可以减弱CTX引起的免疫抑制。血清溶血素是绵羊红细胞的 49 李 诣，等：掌状玫耳粗多糖对环磷酰胺所致小鼠免疫低下的影响第 4 期抗原与淋巴细胞接触时产生的一种特异性抗体，可通过测定血清溶血素含量评估小鼠体液免疫系统功能21-22。在本研究中，模型组血清溶血素分泌水平与空白组相比显著降低，掌状玫耳粗多糖高剂量组血清溶血素含量显著增加，这表明掌状玫耳粗多糖可以在小鼠体液免疫水平上减弱CTX引起的免疫抑制。CTX抑制骨髓功能，导致红细胞、白细胞、血红蛋白和血小板减少，造成免疫抑制，同时损害肝肾的抗氧化防御系统，造成组织损伤23。本研究结果表明，掌状玫耳粗多糖高剂量组红细胞、白细胞、血红蛋白和血小板含量均增加；高剂量组小鼠血清ALT和AST活性显著降低，CRE和BUN含量显著降低，说明掌状玫耳粗多糖能减轻免疫低下小鼠肝肾损伤。研究表明，真菌多糖可以刺激巨噬细胞释放免疫因子，起到免疫干预作用24。IL-6、IL-1、TNF-是免疫系统中的重要成员25。本研究结果表明，掌状玫耳粗多糖可增加小鼠血清中IL-6、IL-1、TNF-含量，有可能通过促进T细胞增值、活化巨噬细胞和NK细胞，促使机体产生免疫因子，调节免疫反应，从而发挥免疫作用。笔者研究发现与空白组比较模型组TLR-4、IKK、NF-B p65和NF-B p50表达量降低，IB-表达量升高，说明在CTX的诱导下TLR4/NF-B 信号通路激活程度很低；掌状玫耳粗多糖高剂量组的TLR-4和IKK表达量显著升高，降解IB-，激活NF-B 信号通路，使NF-B p65和NF-B p50表达量显著升高，从而改善CTX诱导的小鼠免疫抑制，调节脾脏免疫功能。本研究结果表明，掌状玫耳粗多糖可改善CTX导致的小鼠免疫低下状态，该结果可为其开发利用提供参考。参考文献1 李玉，图力古尔.中国长白山蘑菇M.北京:科学出版社,2003.2 图力古尔,李中魁.一种掌状玫耳、果味菇及其培育方法:113079945AP.2022-02-01.3 HAN X,BAI B Y,ZHOU Q,et al.Dietary supplementation with polysaccharides from Ziziphus Jujuba cv.Pozao intervenes in immune response via regulating peripheral immunity and intestinal barrier function in cyclophosphamide-induced miceJ.Food&Function,2020,11(7):5992-6006.4 殷继鹏,杨建江,吴东波,等.2018年印度国家肝病研究学会指南:免疫功能低下伴HBV感染者的管理 摘译J.临床肝胆病杂志,2019,35(5):973-976.5 苏琛,彭鑫,张毅.中医药对免疫低下动物模型作用的研究进展J.四川中医,2016,34(12):217-219.6 ABDOSSAMADI Z,SEYED N,ZAHEDIFARD F,et al.Human Neutrophil Peptide 1 as immunotherapeutic agent against Leishmania infected BALB/c miceJ.PLOS Neglected Tropical Diseases,2017,11(12):e0006123.7 康慧琳,樊卫平,雷波,等.不同剂量环磷酰胺对小鼠免疫功能的影响J.免疫学杂志,2018,34(4):308-312.8 ZHANG L,XIAO X,ARNOLD P R,et al.Transcriptional and epigenetic regulation of immune tolerance:roles of the NF-B family membersJ.Cellular&Molecular Immunology,2019,16(4):315-323.9 顾婷.美洲大蠊糖蛋白对免疫低下小鼠的免疫调节活性及其机制初探D.大理:大理大学,2021.10 宋广福,陈丽娜,许玉凤,等.参芪扶正注射液对免疫低下小鼠的免疫调节作用及其机制研究J.中医药导报,2017,23(20):17-20.11 SANDARGO B,MICHEHL M,STADLER M,et al.Antifungal sesquiterpenoids,rhodocoranes,from submerged cultures of the wrinkled peach mushroom,Rhodotus palmatusJ.Journal of Natural Products,2020,83(3):720-724.12 SANDARGO B,MICHEHL M,PRADITYA D,et al.Antiviral meroterpenoid rhodatin and sesquiterpenoids rhodocoranes AE from the wrinkled peach mushroom,Rhodotus palmatusJ.Organic Letters,2019,21(9):3286-3289.13 孙仓,常骥,常桂英.掌状玫耳多糖的提取与组成分析J.中国食用菌,1998,17(5):40-41.50 第 30 卷食 用 菌 学 报14 朱天仪.五味子多糖对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用研究D.泰安:山东农业大学,2022.15 周恒斌,刘雪蕊,张东星,等.枸杞提取物中糖的组成分析J.食品研究与开发,2018,39(24):161-168.16 LIU Y,ZHENG D D,WANG D H,et al.Immunomodulatory activities of polysaccharides from white button mushroom,Agaricus bisporus(Agaricomycetes),fruiting bodies and cultured mycelia in healthy and immunosuppressed miceJ.International Journal of Medicinal Mushrooms,2019,21(1):13-27.17 刘颖.蒙古口蘑子实体增强免疫活性成分的研究D.长春:吉林农业大学,2021.18 王雨,晏群,田艳,等.五红汤对环磷酰胺所致免疫低下小鼠免疫功能的影响J.中医药学报,2023,51(3):30-34.19 YUN L Y,WU T,LI Q,et al.Dietary supplementation with purified wheat germ glycoprotein improve immunostimulatory activity in cyclophosphamide induced Balb/c miceJ.International Journal of Biological Macromolecules,2018,118:1267-1275.20 侯冰妍,于丹,都晓伟.艾苓强身凝胶膏剂改善免疫低下小鼠免疫功能研究J.长春中医药大学学报,2021,37(3):549-552.21 SHENG X T,YAN J M,MENG Y,et al.Immunomodulatory effects of Hericium erinaceus derived polysaccharides are mediated by intestinal immunologyJ.Food&Function,2017,8(3):1020-1027.22 李立萍,解丽君,郝娜,等.双肾同补胶囊对小鼠免疫调节作用研究J.河北中医,2019,41(8):1230-1235.23 张毓婷,陈健文,董睿敏.六苓扶正方对环磷酰胺致免疫低下小鼠的免疫增强作用J.中国药师,2019,22(4):660-664.24 韩洁,