TORCH的检测.ppt

TORCH的的检测 检验科检验科 李彩李彩 一、TORCH的定义 二、TORCH的感染 三、TORCH的检测一、一、TORCH的定的定义 TORCH是指可是指可导致先天性致先天性宫内感染及内感染及围产期感染而引起期感染而引起围产儿畸形的病原体，它是儿畸形的病原体，它是一一组病原体微生物的英文名称病原体微生物的英文名称缩写，其中写，其中TO：弓形虫（：弓形虫（TOX）R：风疹病毒（疹病毒（RV）C：巨：巨细胞病毒（胞病毒（CMV）H：单纯疱疹病毒（疱疹病毒（HSV）这组这组病原体感染有着共同的特征，即可造成母病原体感染有着共同的特征，即可造成母婴婴感染。孕感染。孕妇妇由于内分泌改由于内分泌改变变和免疫力下降易和免疫力下降易发发生原生原发发感染，既往感染的孕感染，既往感染的孕妇妇体内潜在的病毒也容易被激活体内潜在的病毒也容易被激活而而发发生复生复发发感染。孕感染。孕妇发妇发生病毒血症生病毒血症时时，病毒可通，病毒可通过过胎胎盘盘或或产产道道传传播感染胎儿，引起早播感染胎儿，引起早产产、流、流产产、死胎或、死胎或畸胎等。以及引起新生儿多个系畸胎等。以及引起新生儿多个系统统、多个器官的、多个器官的损损害，害，造成不同程度的智力障碍等症状。特造成不同程度的智力障碍等症状。特别别在在怀怀孕初的三孕初的三个月胚胎个月胚胎处处于器官形成期，此于器官形成期，此时时受病毒感染，可破坏受病毒感染，可破坏细细胞或抑制胞或抑制细细胞的分裂和增殖。器官形成期以后感染胞的分裂和增殖。器官形成期以后感染病毒，可破坏病毒，可破坏组织组织和器官机构，并形成持和器官机构，并形成持续续感染，出感染，出生后生后继续继续排毒，能引起相排毒，能引起相应应的病的病变变。TORCH检测的意义l l由于成人由于成人由于成人由于成人TORCHTORCH感染的感染的感染的感染的临临床症状不明床症状不明床症状不明床症状不明显显，无法自，无法自，无法自，无法自我感我感我感我感觉觉到是否收到感染，因此孕前几孕早期到是否收到感染，因此孕前几孕早期到是否收到感染，因此孕前几孕早期到是否收到感染，因此孕前几孕早期诊诊断断断断对优对优生生生生优优育十分重要。育十分重要。育十分重要。育十分重要。l l目前，国目前，国目前，国目前，国际际上公上公上公上公认认的最方便、最先的最方便、最先的最方便、最先的最方便、最先进进的早期的早期的早期的早期诊诊断断断断方法是方法是方法是方法是检测检测人体血清中的特异性人体血清中的特异性人体血清中的特异性人体血清中的特异性IgMIgM、IgGIgG抗体，抗体，抗体，抗体，以判断受到感染的情况。以判断受到感染的情况。以判断受到感染的情况。以判断受到感染的情况。l l世界上世界上世界上世界上许许多多多多发发达国家已达国家已达国家已达国家已经经将将将将TORCHTORCH列列列列为为孕期常孕期常孕期常孕期常规规检查项检查项目，在目，在目，在目，在优优生生生生优优育方面育方面育方面育方面发挥发挥着重要作用。在着重要作用。在着重要作用。在着重要作用。在国内，随着科学技国内，随着科学技国内，随着科学技国内，随着科学技术术的的的的发发展和人民生活水平的提展和人民生活水平的提展和人民生活水平的提展和人民生活水平的提高，人高，人高，人高，人们对优们对优生生生生优优育的育的育的育的认识认识逐步提高，逐步提高，逐步提高，逐步提高，TORCHTORCH检检测测越来越受到重越来越受到重越来越受到重越来越受到重视视。二、二、TORCH的感染的感染l l弓形虫感染弓形虫感染l l风疹病毒感染疹病毒感染l l巨巨细胞病毒感染胞病毒感染l l单纯疱疹病毒感染疱疹病毒感染弓形虫感染l l弓形虫感染主要是弓形虫感染主要是摄入被猫入被猫粪中卵囊中卵囊污染染的食物和水，或的食物和水，或摄入含有入含有组织包囊的未煮包囊的未煮熟肉引起的熟肉引起的获得性感染。得性感染。l l 由于弓形虫可以通由于弓形虫可以通过胎胎盘，胎儿在孕期，胎儿在孕期经 胎胎盘传播感染，引起先天性弓形虫病。播感染，引起先天性弓形虫病。l l孕早期感染：孕早期感染：多可多可导致死胎、流致死胎、流产、早、早产、畸胎和无、畸胎和无脑儿、儿、脑积水、小水、小头畸形等畸形等l l孕中、晚期感染：孕中、晚期感染：出生出生婴儿多呈儿多呈隐性感染，以后可出性感染，以后可出现脑钙化灶、化灶、视网膜脉网膜脉络膜炎、精神运膜炎、精神运动障碍等障碍等流行病学 弓形虫人群感染相当普遍，血清学弓形虫人群感染相当普遍，血清学调查国国外人群抗体阳性率外人群抗体阳性率为2550%，少数地区可，少数地区可达达80%以上。我国以上。我国较大大规模模调查显示，人示，人群血清抗体阳性率群血清抗体阳性率为0.329%11.793%，平，平均均5.3%。家畜阳性率可达。家畜阳性率可达10%50%。风疹病毒感染l l 风疹病毒主要通疹病毒主要通过呼吸道感染引起呼吸道感染引起风疹。疹。l l 风疹病毒易疹病毒易发生垂直感染。若孕生垂直感染。若孕妇妊娠早妊娠早期感染期感染风疹病毒，病毒可通疹病毒，病毒可通过胎胎盘感染胎感染胎儿，引起流儿，引起流产或死胎，或死胎，还可可导致胎儿致胎儿发生生先天性先天性风疹疹综合征（合征（CRS），引起胎儿畸），引起胎儿畸形。形。l l畸形主要表畸形主要表现为先天性心先天性心脏病、白内障、病、白内障、和耳和耳聋。l l妊娠月份越小，妊娠月份越小，CRS出出现的的频率越高。率越高。第第1个月感染率个月感染率为58%第第2个月感染率个月感染率为35%第第3个月感染率个月感染率为15%第第4个月感染率个月感染率为 7%流行病学l l隐性感染或感染性感染或感染风疹病毒后机体可疹病毒后机体可产生特生特异性异性IgM和和IgG，IgG能持能持续多年，可多年，可获得得持久免疫力。持久免疫力。l l 调查表明，我国育表明，我国育龄妇女血清中抗女血清中抗风疹病疹病毒毒IgG阳性率阳性率为76%98%。巨细胞病毒感染l l巨巨细胞病毒可由唾液、尿液及子胞病毒可由唾液、尿液及子宫颈分泌分泌物中排出。密切接触、物中排出。密切接触、飞沫、沫、经口、口、输血血等都可以感染。等都可以感染。l l巨巨细胞病毒是能引起先天性感染（胎儿的胞病毒是能引起先天性感染（胎儿的宫内感染）的主要病毒之一。内感染）的主要病毒之一。l l 先天性感染先天性感染 妊娠早期原妊娠早期原发感染可能垂直感染可能垂直传播播给胎儿，造胎儿，造成胎儿先天性感染：巨成胎儿先天性感染：巨细胞包涵体病胞包涵体病（CID），表），表现为黄疸、肝脾黄疸、肝脾肿大、血小板大、血小板减少性紫癜、溶血性减少性紫癜、溶血性贫血和不同程度的神血和不同程度的神经系系统损害，包括小儿畸形、智力低下、耳害，包括小儿畸形、智力低下、耳聋、脉脉络膜膜视网膜炎等，重者可网膜炎等，重者可导致流致流产或死或死产。l l 围产期感染期感染 妊娠后期，妊娠后期，产妇泌尿道和泌尿道和宫颈排出排出CMV，分，分娩娩时新生儿新生儿经产道亦可受到感染。多数症状道亦可受到感染。多数症状轻微或无微或无临床症状。若有床症状。若有为轻度呼吸障碍、度呼吸障碍、肝功能肝功能损害，通常全身症状害，通常全身症状轻，无神，无神经损伤。流行病学l l 巨巨细胞病毒在我国人群中的感染极胞病毒在我国人群中的感染极为普遍，普遍，初感染大多在初感染大多在2岁以下，通常呈以下，通常呈隐性感染，性感染，少数人有少数人有临床症状。床症状。l l90%以上成人已有巨以上成人已有巨细胞病毒抗体。胞病毒抗体。单纯疱疹病毒感染l l 单纯疱疹病毒所引起的生殖系疱疹已成疱疹病毒所引起的生殖系疱疹已成为一种常一种常见的性的性传播疾病。播疾病。l l 孕孕妇处于免疫抑制状于免疫抑制状态，易受感染，一旦，易受感染，一旦感染，可引起垂直感染，可引起垂直传播，使胎儿先天性感播，使胎儿先天性感染，引起畸形、智力低下、流染，引起畸形、智力低下、流产等。等。l l HSV有两种血清型：有两种血清型：HSV-和和HSV-l l HSV-主要通主要通过呼吸道、皮肤和粘膜密切呼吸道、皮肤和粘膜密切接触接触传播，感染腰以上部位的皮肤粘膜和播，感染腰以上部位的皮肤粘膜和器官。器官。l l HSV-主要通主要通过性行性行为传播和母播和母婴传播，播，感染腰部以下部位的皮肤粘膜和器官，原感染腰部以下部位的皮肤粘膜和器官，原发感染主要引起生殖器疱疹。感染主要引起生殖器疱疹。流行病学人群中人群中HSV感染非常普遍，其中：感染非常普遍，其中：HSV-的抗体阳性率的抗体阳性率为90%100%HSV-的抗体阳性率的抗体阳性率为3%5%三、三、TORCH的的检测l l 目前，在我国最方便、最常用的早期目前，在我国最方便、最常用的早期筛查方法是采用方法是采用ELISA方法。方法。l l 定量定量检测采用化学采用化学发光法。光法。TORCH的检测项目弓形虫弓形虫IgM抗体抗体弓形虫弓形虫IgG抗体抗体风疹病毒疹病毒IgM抗体抗体风疹病毒疹病毒IgG抗体抗体巨巨细胞病毒胞病毒IgM抗体抗体巨巨细胞病毒胞病毒IgG抗体抗体单纯疱疹病毒疱疹病毒型型IgM抗体抗体单纯疱疹病毒疱疹病毒型型IgG抗体抗体 其中本科室其中本科室对单纯疱疹病毒疱疹病毒型型IgM抗抗体、体、单纯疱疹病毒疱疹病毒型型IgG抗体的抗体的检测是采是采用用ELISA方法，其余六方法，其余六项则是采用化学是采用化学发光光法定量法定量检测。全自动化学发光仪酶联免疫吸附试验（ELISA）HSV-HSV-型型型型IgMIgM抗体抗体抗体抗体检测检测原理：原理：原理：原理：l l采用鼠抗人采用鼠抗人采用鼠抗人采用鼠抗人IgMIgM抗体包被微孔板抗体包被微孔板抗体包被微孔板抗体包被微孔板l l加入待加入待加入待加入待测标测标本，捕本，捕本，捕本，捕获标获标本中的相本中的相本中的相本中的相应应抗体，当存在抗体，当存在抗体，当存在抗体，当存在该该抗体，抗体，抗体，抗体，则则与包被的鼠抗人与包被的鼠抗人与包被的鼠抗人与包被的鼠抗人IgMIgM抗体抗体抗体抗体结结合合合合l l加入辣根加入辣根加入辣根加入辣根过过氧化物氧化物氧化物氧化物酶酶（HRPHRP）标记标记的的的的HSVHSV抗原，抗原，抗原，抗原，与之与之与之与之结结合，形成鼠抗人合，形成鼠抗人合，形成鼠抗人合，形成鼠抗人IgMIgM抗抗抗抗HSVIgMHSVIgM抗体抗体抗体抗体HSVHSV抗原抗原抗原抗原-HRP-HRP复合物复合物复合物复合物l l 加入加入加入加入A A、B B底物底物底物底物显显色，色，色，色，显显色程度直接反映色程度直接反映色程度直接反映色程度直接反映标标本抗本抗本抗本抗体的量体的量体的量体的量酶联免疫吸附试验（ELISA）HSV-HSV-型型型型IgGIgG抗体抗体抗体抗体检测检测原理：原理：原理：原理：l l 采用采用采用采用HSV-HSV-型重型重型重型重组组抗原包被微孔板抗原包被微孔板抗原包被微孔板抗原包被微孔板l l加入待加入待加入待加入待测标测标本，当本，当本，当本，当标标本中存在本中存在本中存在本中存在HSV-HSV-型型型型IgGIgG抗体抗体抗体抗体时时，该该抗体与包被的抗体与包被的抗体与包被的抗体与包被的HSV-HSV-型抗原型抗原型抗原型抗原结结合合合合l l加入辣根加入辣根加入辣根加入辣根过过氧化物氧化物氧化物氧化物酶酶（HRPHRP）标记标记的抗人的抗人的抗人的抗人IgGIgG结结合，形成合，形成合，形成合，形成HSVHSV 抗原抗原抗原抗原HSVHSV抗体抗体抗体抗体HRP-HRP-抗人抗人抗人抗人IgGIgG复合物复合物复合物复合物l l加入加入加入加入A A、B B底物底物底物底物显显色，色，色，色，显显色程度直接反映色程度直接反映色程度直接反映色程度直接反映标标本抗体本抗体本抗体本抗体的量的量的量的量酶联免疫吸附试验（ELISA）操作步操作步骤：加入加入样品稀品稀释液液100L，待，待测标本本5L 3737孵育孵育孵育孵育3030分分分分钟钟 洗板，加洗板，加酶100L 3737孵育孵育孵育孵育3030分分分分钟钟 洗板，加洗板，加显色色剂A、B各各50L显色色 3737孵育孵育孵育孵育1010分分分分钟钟 加加终止止剂50L，450nm读取吸光度取吸光度值 判定判定结果果结果判定IgMIgG意义易感人群，无感染史，体内无抗体，需防护、监控+既往感染，体内有抗体+急性期初次感染+近期感染实验操作过程中的注意事项1、操作、操作过程的安全防范程的安全防范2、试剂盒使用前的盒使用前的30分分钟室温平衡室温平衡3、实验操作操作过程中避免交叉程中避免交叉污染染4、洗板要洗干、洗板要洗干净5、同一家、同一家试剂公司，公司，显色色剂、终止止剂可互可互 用，提高效率用，提高效率谢 谢！