PBS配方个人总结.doc

我们实验室的配方：
A液：0.1mol/L磷酸二氢钾：
磷酸二氢钾（KH2PO4，MW136.09）1.361g，加双蒸水至100ml。
B液：0.1mol/L磷酸氢二钠：
酸酸氢二钠（Na2HPO4.2H2O，MW177.99）1.78g，加双蒸水至100ml。
或者酸酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O，MW358.14）3.58g，加双蒸水至100ml。
pH －－ A液 （ml） －－ B液（ml）
5.60 －－ 9.50 －－ 0.25
5.91 －－ 9.00 －－ 1.00
6.24 －－ 8.00 －－ 2.00
6.47 －－ 7.00 －－ 3.00
6.64 －－ 6.00 －－ 4.00
6.81 －－ 5.00 －－ 5.00
6.98 －－ 4.00 －－ 6.00
7.17 －－ 3.00 －－ 7.00
7.38 －－ 2.00 －－ 8.00
7.73 －－ 1.00 －－ 9.00
8.04 －－ 0.50 －－ 9.50

一般免疫组化用PBS都只包含Na2HPO4•12H2O（磷酸氢二钠）
NaH2PO4•2H2O（磷酸二氢钠）Nacl
用于细胞培养的PBS需含有氯化钾

称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可0.01M

PBS缓冲液
称取NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4•12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。

PBS是最普遍不过的实验室缓冲液，但其配方各异。以下是我的总结： 

母液的配制： 

0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水
0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水
各种浓度PB(pH=7.4)的配制：
先配 0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。
然后 只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释 即可，如：
0.1M PB（PH=7.4） ：取 500ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。
0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。
0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可。 

若需要 NaCL 的话，加入 NaCL 至0.9%（g/100ml）即可。 

另：其它各种另 PH值的 0.2M PB（100ml)配方 ：
pH       0.2M NaH2PO4（ml）   0.2M Na2HPO4（ml）
5.7             93.5                          6.5
5.8             92                             8            
5.9             90                             10
6.0             87.7                          12.3
6.1             85                             15
6.2             81.5                          18.5
6.3             77.5                          22.5
6.4             73.5                          26.5
6.5             68.5                          31.5
6.6             62.5                          37.5
6.7             56.5                          43.5
6.8             51                            49
6.9              45                           55
7.0              38                           62
7.1              33                           67
7.2             28                            72
7.3              23                           77
7.4              19ml                         81ml
7.5              16                           84
7.6              13                           87
7.7             10.5                          0.5
7.8              8.5                          91.5
7.9             7                              93
8.0             5.3                           94.7 

磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer, PB），磷酸氢二钠和磷酸二氢钠缓冲液配方
默认分类   2009-03-25 11:16   阅读251   评论0  
字号： 大大  中中  小小
磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer, PB）
试剂： NaH2PO4·2H2O     Na2HPO4·12H2O
配制方法：配制时，常先配制0.2mol/L的 NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4，两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（PB），根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。
（1）0.2mol/L的 NaH2PO4；称取NaH2PO4.H2O 31.2g(或 NaH2PO4·H2O 27.6g)加重蒸水至1000ml溶解。
（2）0.2mol/L的 Na2HPO4：称取Na2HPO4.·12H2O 71.632g（或 Na2HPO4·7H2O 53.6g或 Na2HPO4·2H2O 35.6g）加重蒸水至1000ml溶解。
（3）0.2mol/L pH7.4的PB的配制：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的 Na2HPO4·12H2O,充分混合即为0.2mol/L的PB（pH约为7.4～7.5）。若pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例来加以调整，室温保存即可。
0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH5.7～8.0）
pH   0.2mol/L NaH2PO4(ml)   0.2mol/L Na2HPO4(ml)
5.7           93.5                       6.5
5.8           92.0                       8.0
5.9           90.0                     10.0
6.0           87.7                     12.3
6.1           85.0                     15.0
6.2           81.5                     18.5
6.3           77.5                     22.5
6.4           73.5                     26.5
6.5           68.5                     31.5
6.6           62.5                     37.5
6.7           56.5                     43.5
6.8           51.0                     49.0
6.9           45.0                     55.0
7.0           39.0                     61.0
7.1           33.0                     67.0
7.2           28.0                     72.0
7.3           23.0                     67.0
7.4           19.0                     81.0
7.5           16.0                     84.0
7.6           13.0                     87.0
7.7           10.5                     89.5
7.8            8.5                     91.5
7.9            7.0                     93.0
8.0            5.3                     94.7
[font=黑体][font=楷体_GB2312][font=宋体][size=2]关于磷酸缓冲溶液的知识，我在网上搜索了好多帖子，但是还是不能确定正确的答案。现在把他们链接过来，希望有高手们参与讨论，我会把最终的正确解答整理出来，提供给大家。

xydqq 2007-9-16 15:47
PBS可以为三种溶液的英文缩写，分别是
1.磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution）、
2.磷酸盐缓冲盐水（phosphate buffered saline）及
3.磷酸盐缓冲钠（phosphate buffered sodium），
其配制方法不同，pH值不同，发挥的生物学作用亦不完全相同。
如无特殊说明，生物学上常用的PBS是中性磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution）。
(来自百度知道)
无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）
（0.15Mol/L PH 7.2）
NaCl 8.0g
KCl 0.2g
Na2HPO4 1.15g
（如为Na2HPO4·12H2O，则为2.89g）
KH2PO4 0.2g
将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌10min~15min，存在4℃冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。

我们用的都是第二种
磷酸盐缓冲盐水（phosphate buffered sodium），为什么用第三种或第一种呢
lanping 2007-9-17 17:21
这么多年以来我都以为PBS就是磷酸盐缓冲溶液，其他两种说法的英语名称常见到，不过我一直都以为他们是差不多的东西。不同的汉语翻译倒是第一次听说。
我们公司用的PBS有很多种，抗体组用的中和PBS配方就比较简单，没有K+离子， 只起到缓冲PH的作用；Na2HPO4+ KH2PO4 按照不同比例混匀，可以得到不同PH的缓冲液，用于不同目的，这个在分子生物学中用得很多； 用于活细胞或者细菌处理的，为了保持渗透压，会加入其他的溶液，最常见的就是NaCl 和 KCl调节离子浓度。
以上是个人的理解，欢迎批评。
xydqq 2007-9-18 09:32
既然抗体组的PBS是起到缓冲PH的作用，那加入80G的NACL作用是什么？需要平衡渗透压吗？
还有加入K离子的是不是因为细胞上NA-K泵的原因啊
网络伯牙 2007-9-18 17:16
血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一说啊？ [s:49]
网络伯牙 2007-9-18 17:17
我觉得之所以这么配，其实就是对血清中缓冲环境的一种模拟罢了
xydqq 2007-9-18 17:23
[quote]引用第3楼网络伯牙于2007-09-18 17:16发表的:
血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一说啊？ [s:49][/quote]

我没说血清撒。。。。。。 我们用的又没加K，我是说加了K的的
xydqq 2007-9-18 17:24
不加NACL会怎么样啊？多省钱啊
lanping 2007-9-20 21:14
在中和磷酸盐缓冲液中，NaCl的主要作用应当是保持一定的离子浓度，以维持抗体的活性。在离子浓度过高或过低的情况下，蛋白质都会变性，抗体当然不例外。
xydqq 2007-9-21 00:19
哦 晓得了，0.8%的NACL差不多就是生理盐水的浓度。。。。。 [s:46]
ps:哺乳类需用生理盐水浓度是0.9%。称取0.9克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到100毫升。
鸟类需用的生理盐水浓度是0.75%。称取0.75克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。
两栖类需用的生理盐水浓度是0.65%。称取0.65克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。[/size][/font]