艾滋病常用实验室检测及临床意义分析PPT课件.ppt

艾滋病常用艾滋病常用实验实验室室检测检测及及临临床意床意义义分析分析 广西疾病广西疾病预预防控制中心防控制中心 梁富雄梁富雄 2013.42013.4主要内容主要内容nHIVHIV抗体抗体检测检测nCD4CD4检测检测n病毒病毒载载量量检测检测n实验实验室安全防室安全防护护HIVHIV抗体抗体-感感染染成成功功抗抗体体转阳阳诊断断艾艾滋滋病病死死亡亡-4-8周周-出出现症症状状 2-10 年年 1年年 0.5-2年年 HIV抗体抗体+无症状无症状有症状有症状HIV抗体抗体+艾滋病艾滋病感染艾滋病毒后的自然感染艾滋病毒后的自然发展展过程程急性感急性感染期染期潜伏期潜伏期发病期病期艾滋病感染者艾滋病感染者艾滋病患者艾滋病患者窗口期窗口期1234急性感染期急性感染期KINETICS OF VIRAL MARKERS DURING PRIMARY HIV-1 INFECTIONHIV RNAHIV p24 antigenHIV antibodiesHIV感染后血液中核酸、抗原和抗体感染后血液中核酸、抗原和抗体动态变化化窗口期暴露天数检测域感染HIV后病毒载量、CD4与病程变化规律艾滋病艾滋病实验实验室分室分类类n筛查实验筛查实验室（室（CD4CD4检测实验检测实验室）室）n确确证实验证实验室（室（CD4CD4、病毒、病毒载载量量实验实验室室)中国中国HIVHIV实验实验室网室网络络 国家艾滋病参比国家艾滋病参比实验实验室室 中国中国CDCCDC性艾中心性艾中心 艾滋病确艾滋病确认认中心中心实验实验室室 省、市省、市 艾滋病确艾滋病确认实验认实验室室 省、市省、市 艾滋病艾滋病筛查筛查中心中心实验实验室室 省、市、州、省、市、州、县县 艾滋病艾滋病筛查实验筛查实验室室 省、市、州、省、市、州、县县 艾滋病艾滋病检测检测点点 乡乡、镇镇HIVHIV实验实验室条件室条件n人人员员:经过专门经过专门技技术术培培训训,取得培取得培训训合格合格证证/上上岗证岗证;n环环境境:功能分区功能分区,符合生物安全二符合生物安全二级级要求要求;n仪仪器器设备设备:按要求配按要求配备备，满满足足检测检测要求。要求。实验实验室必室必须经过资质认证须经过资质认证/验验收！收！HIVHIV病原体病原体诊诊断断 HIV HIV抗体抗体检测检测 艾滋病病毒抗原艾滋病病毒抗原检测检测（P24P24）HIV HIV核酸核酸检测检测 病毒分离病毒分离检测样检测样品品n血清、血血清、血浆浆n尿液尿液n抗凝全血（抗凝全血（CBCCBC、CD4CD4、VL)VL)nPBMCPBMC（外周血淋巴（外周血淋巴细细胞）胞）样样品的采集和品的采集和处处理理 一、一、样样品的采集品的采集 最最常常用用的的样样品品是是血血液液，包包括括血血清清、血血浆浆和和全全血血(抗抗凝凝血血)。唾唾液液或或尿尿液液有有时时也也可可作作为为测测试试样样品品。常常用用样样品品的的采采集方法如下：集方法如下：（一一）采采集集样样品品应应按按临临床床采采血血技技术术规规范范及及检检测测试试剂剂盒盒要要求求进进行。行。（二二）采采集集标标本本时时应应注注意意安安全全，操操作作应应戴戴双双层层手手套套。建建议议采用真空采血管及蝶形采用真空采血管及蝶形针针具，以免直接接触血液。具，以免直接接触血液。（三三）血血清清样样品品采采集集：用用注注射射器器抽抽静静脉脉血血3 35ml5ml，室室温温放放置置1-21-2小小时时，待待血血液液凝凝固固或或用用3000rpm3000rpm离离心心1515分分钟钟，吸吸出出血血清清备备用。用。（四四）抗抗凝凝血血样样品品采采集集(免免疫疫功功能能CD4/CD8CD4/CD8测测定定、血血液液常常规规CBCCBC测测定定、病病毒毒载载量量）：用用加加有有抗抗凝凝剂剂（K K3 3EDTAEDTA）的的真真空空采采血血管管或或试试管管抽抽取取静静脉脉血血，反反复复轻轻摇摇，常常温温6 6小小时时以以内内送送达达实实验验室室检测检测CD4/CD8CD4/CD8或或CBCCBC后，再分离血后，再分离血浆浆和血和血细细胞胞备备用。用。（五五）血血清清或或血血浆浆样样品品应应存存放放于于-20-20，短短期期内内（1 1周）周）进进行行检测检测的的样样品可存放于品可存放于2-82-8。（六六）用用于于抗抗原原和和核核酸酸检检测测的的血血浆浆和和血血细细胞胞样样品品应应冻冻存存于于-20-20以以下下，进进行行病病毒毒 RNARNA检检测测的的样样品品如如长长期期（3 3个月以上）保存个月以上）保存应应置于置于-80-80。二、二、样样品的运送品的运送（一）抗体（一）抗体检测实验检测实验室室间传递间传递的的样样品品应为应为血清或血血清或血浆浆，血，血液常液常规规、CD4CD4和病毒和病毒载载量等要求送抗凝血。量等要求送抗凝血。样样品品应应置于置于带带盖的盖的试试管内，管内，试试管上管上应应有明有明显显的的标记标记，标标明明样样品的品的编编号号或受或受检检者姓名、种者姓名、种类类和采集和采集时间时间。（二二）将将试试管管放放入入专专用用带带盖盖的的容容器器内内，容容器器的的材材料料要要易易于于消消毒毒处处理理。在在试试管管的的周周围围应应垫垫有有缓缓冲冲吸吸水水材材料料，以以免免碰碰碎碎。如如果果路路程程较较远远或或气气候候炎炎热热，应应在在2-82-8条条件件下下运运送送。抗抗凝凝血血和和抗抗体体检检测测样样品品路路程程短短可可常常温温送送检检。包包装装内内需需附附有有送送检检单单。（三三）特特殊殊情情况况下下如如需需对对个个别别样样品品进进行行复复测测，可可以以用用特特快快专专递递形形式式投投寄寄，但但必必须须将将盛盛样样品品的的试试管管包包扎扎好好，保保证证不不会会破碎和溢漏。破碎和溢漏。三、三、样样品的接收品的接收 （一一）含含有有感感染染性性样样品品的的包包裹裹必必须须在在具具有有处处理理感感染染源源设设备备的的实实验验室室内内由由经经过过培培训训的的工工作作人人员员打打开开，用用后后的的包包裹裹应应进进行消毒。行消毒。（二）核（二）核对标对标本与送本与送检单检单，检查样检查样品管有无破品管有无破损损和溢漏。和溢漏。（三三）检检查查样样品品的的状状况况，记记录录有有无无严严重重溶溶血血、微微生生物物污污染染、血脂血脂过过多以及黄疸等情况。多以及黄疸等情况。（四四）因因特特殊殊临临床床治治疗疗导导致致自自发发荧荧光光的的样样品品不不可可用用于于荧荧光光方法方法测试测试。HIVHIV抗体抗体检测检测的目的的目的n诊诊断断 确定个体确定个体HIV感染状况，包括感染状况，包括临临床床检测检测、自愿咨、自愿咨询检测询检测、根据特殊需要、根据特殊需要进进行的体行的体检检等。等。n血液血液筛查筛查防止防止输输血血传传播播HIV，包括献血，包括献血员筛查员筛查和原料血和原料血浆筛查浆筛查。n监测监测 了了解解不不同同人人群群HIV感感染染率率及及其其变变化化趋趋势势，包包括括各各类类高高危危人人群群、重重点点人人群群和一般人群。和一般人群。HIVHIV抗体抗体检测检测的方法的方法n筛查试验筛查试验（包括初（包括初筛筛和复和复检检）：）：酶酶联联免疫吸附免疫吸附试验试验（ELISA)ELISA)、化学、化学发发光光试验试验、明胶、明胶颗颗粒凝聚粒凝聚试验试验（PAPA）、）、免疫渗免疫渗滤试验滤试验、免疫、免疫层层析析试验试验等等n确确证试验证试验：免疫印迹：免疫印迹试验试验（WB)WB)、条、条带带免疫免疫试验试验、放射免、放射免疫沉淀疫沉淀试验试验、免疫、免疫荧荧光光试验试验等。等。艾滋病抗体确艾滋病抗体确证试验证试验 免疫印迹法（免疫印迹法（WBWB）为为目前最常用的目前最常用的HIVHIV抗体确抗体确认认方法，方法，被公被公认为认为判断判断HIVHIV感染的黄金方法。感染的黄金方法。艾滋病抗体艾滋病抗体检测试剂检测试剂使用条件使用条件 HIVHIV筛筛查查或或确确认认试试剂剂必必须须是是HIV/1+2HIV/1+2混混合合型型，国国家家卫卫生生部部批批准准或或注注册册，经经过过国国家家医医药药监监督督管管理理局局批批批批检检合合格格，临临床床试剂评试剂评估估优优良，并且在有效期内。良，并且在有效期内。检测检测要点要点1 1、严严格按照格按照试剂说试剂说明明书书操作，不得擅自更改。操作，不得擅自更改。2 2、注意防止交叉、注意防止交叉污污染。染。3 3、严严格遵守格遵守实验实验室操作室操作规规程。程。4 4、认认真做好真做好实验记录实验记录。HIVHIV抗体抗体检测结检测结果及果及结论结论 HIVHIV抗抗体体筛筛查查结结果果阴阴性性反反应应可可做做HIVHIV抗抗体体阴阴性性报报告告，筛筛查查试试验验呈呈阳阳性性反反应应，可可出出具具“HIVHIV抗抗体体待待复复查查”报报告告，不不能能出出HIVHIV抗抗体体阳阳性性报报告告。筛筛查查阳阳性性反反应应或或可可疑疑阳阳性性反反应应不不能能作作最最终终报报告告通通知知被被检检测测者者，对对个个体体诊诊断断来来说说,只只有有经经过过确确证试验证试验，结结果阳性才可做果阳性才可做HIVHIV抗体阳性抗体阳性报报告。告。检测检测程序及流程程序及流程图图1 1、筛查检测筛查检测 验验收收标标本本，用用筛筛查查试试剂剂进进行行检检测测，如如呈呈阴阴性性反反应应，报报告告HIVHIV抗体阴性；抗体阴性；对对呈阳性反呈阳性反应应的的标标本，本，须进须进行重复行重复检测检测。2 2、重复、重复检测检测 对对筛筛查查呈呈阳阳性性反反应应的的标标本本用用原原有有试试剂剂和和另另外外一一种种不不同同原原理理或不同厂家的或不同厂家的试剂试剂重复重复检测检测。HIVHIV抗体抗体筛查检测筛查检测流程流程样样 品品品品初初初初筛检测筛检测筛查试剂筛查试剂阳性反阳性反阳性反阳性反应应阴性反阴性反阴性反阴性反应应重复重复重复重复检测检测原有原有原有原有试剂试剂和另外一种不同原理和另外一种不同原理和另外一种不同原理和另外一种不同原理（或厂家）的（或厂家）的（或厂家）的（或厂家）的试剂试剂，或另外两，或另外两，或另外两，或另外两种不同原理或不同厂家的种不同原理或不同厂家的种不同原理或不同厂家的种不同原理或不同厂家的试剂试剂 一阴一阳一阴一阳一阴一阳一阴一阳均阴性反均阴性反均阴性反均阴性反应应均阳性反均阳性反均阳性反均阳性反应应送确送确送确送确认实验认实验室确室确室确室确认认报报告阴性告阴性告阴性告阴性 HIVHIV抗体确抗体确证证 1 1、常用的确、常用的确证实验证实验方法是免疫印迹法（方法是免疫印迹法（WBWB）。）。2 2、免免疫疫印印迹迹试试剂剂有有HIV-1/2HIV-1/2混混合合型型和和单单一一型型。一一般般先先用用HIV-1/2HIV-1/2混混合合型型试试剂剂进进行行检检测测，如如果果呈呈阴阴性性反反应应，则则报报告告HIVHIV抗抗体体阴阴性性，如如果果呈呈阳阳性性反反应应，则则报报告告HIV-1HIV-1抗抗体体阳阳性性，如如果果不不满满足足阳阳性性标标准准，则则判判为为HIVHIV抗抗体体不不确确定定。如如果果出出现现HIV-2HIV-2型型的的特特异异性性指指示示条条带带，还还需需要要用用HIV-2HIV-2型型免免疫疫印印迹迹试试剂剂再再做做单单一一的的HIV-2HIV-2型型抗抗体体确确认认试试验验，呈呈阴阴性性反反应应，报报告告HIV-2HIV-2抗抗体体阴阴性性；呈呈阳阳性性反反应应的的则则报报告告HIV-2HIV-2抗抗体体血血清清学学阳阳性。性。HIVHIV抗体确抗体确证检测证检测流程流程免疫印迹法（免疫印迹法（免疫印迹法（免疫印迹法（WBWB，HIV-1/2HIV-1/2混合型）混合型）混合型）混合型）HIV-1HIV-1阳性反阳性反阳性反阳性反应应不确定反不确定反不确定反不确定反应应 出出出出现现HIV-2HIV-2指示条指示条指示条指示条带带报报告告告告HIV-1HIV-1阳性阳性阳性阳性结结合流行病学合流行病学合流行病学合流行病学资资料，可以在料，可以在料，可以在料，可以在4 4周后随周后随周后随周后随访检测访检测，如，如，如，如带带型没有型没有型没有型没有进进展或呈阴性反展或呈阴性反展或呈阴性反展或呈阴性反应应，则报则报告阴性；如随告阴性；如随告阴性；如随告阴性；如随访访期期期期间间出出出出现现阳性反阳性反阳性反阳性反应应，则报则报告阳性；如随告阳性；如随告阳性；如随告阳性；如随访访期期期期间带间带型有型有型有型有进进展，但不展，但不展，但不展，但不满满足阳性足阳性足阳性足阳性标标准，准，准，准，应继续应继续随随随随访访到到到到8 8周。如周。如周。如周。如带带型没有型没有型没有型没有进进展或呈阴性反展或呈阴性反展或呈阴性反展或呈阴性反应则报应则报告阴性；告阴性；告阴性；告阴性；满满足足足足HIVHIV抗体阳性抗体阳性抗体阳性抗体阳性诊诊断断断断标标准准准准则报则报告阳性，不告阳性，不告阳性，不告阳性，不满满足阳性判断足阳性判断足阳性判断足阳性判断标标准可准可准可准可视视情况决定是否情况决定是否情况决定是否情况决定是否继续继续随随随随访访。阴性反阴性反阴性反阴性反应应报报告阴性告阴性告阴性告阴性筛查试验筛查试验阳性反阳性反阳性反阳性反应样应样品品品品根据具体情况根据具体情况根据具体情况根据具体情况进进一步一步一步一步检测检测HIV-2HIV-2检测结检测结果的果的报报告和告和处处理理 HIV HIV抗体抗体筛查筛查：筛筛查查实实验验呈呈阴阴性性反反应应出出具具HIVHIV抗抗体体阴阴性性报报告告，如如果果近近期期有有高高危危行行为为，如如性性乱乱、注注射射毒毒品品等等，或或有有急急性性流流感感样样症症状状等等情情况况，为为排排除除“窗窗口口期期”的的可可能能，建建议议2323个个月月以后再做抗体以后再做抗体检测检测。筛筛查查实实验验呈呈阳阳性性反反应应，可可出出具具“HIV“HIV抗抗体体待待复复查查”报报告告，不能出阳性不能出阳性报报告。告。HIVHIV抗体抗体筛查筛查呈阳性的呈阳性的处处理理 （1 1）填写）填写HIVHIV抗体抗体筛查筛查阳性送阳性送检单检单 （2 2）尽可能重新采集受）尽可能重新采集受检检者的血者的血样样。（3 3）将将二二份份血血样样（或或仅仅原原血血样样）连连同同HIVHIV抗抗体体筛筛查查阳阳性性送送检检单单一一并并送送当当地地艾艾滋滋病病筛筛查查中中心心实实验验室室，再再转转送送艾艾滋滋病病确确认实验认实验室，或直接送确室，或直接送确认实验认实验室确室确认认。（4 4）筛查筛查中心中心实验实验室室应应尽快尽快进进行复行复测测。（5 5）做好）做好检测检测后咨后咨询询。HIVHIV抗体确抗体确证结证结果果报报告告 1 1、HIVHIV抗抗体体阳阳性性应应出出具具HIVHIV抗抗体体阳阳性性确确认认报报告告，并并按按相相关关规规定做好咨定做好咨询询、保密和、保密和报报告工作告工作;2 2、HIVHIV抗抗体体阴阴性性应应出出具具HIVHIV抗抗体体阴阴性性确确认认报报告告，如如果果近近期期有有高高危危行行为为，如如性性乱乱、注注射射毒毒品品等等，或或有有急急性性流流感感样样症症状状等等情情况况，为为排排除除“窗窗口口期期”的的可可能能，建建议议1 1个个月月以以后后再再做做抗体抗体检测检测;抗体确抗体确证证不确定不确定结结果果 HIVHIV抗抗体体不不确确定定出出具具HIVHIV抗抗体体不不确确定定确确认认报报告告，在在备备注中注中应应注明注明“1“1个月后复个月后复查查”。1 1、随、随访访：每：每1 1个月一次，个月一次，连续连续2 2次，共次，共2 2个月。个月。2 2、做好、做好检测检测后咨后咨询询。全国艾滋病全国艾滋病检测检测技技术规术规范范2009版全国艾滋病检测技术规范2009版实验实验室室记录记录要求要求1 1、标标本的登本的登记记 收到收到标标本后，及本后，及时时登登记记有关参数，包括受有关参数，包括受检检者姓名或者姓名或代号、代号、试试管管编编号、性号、性别别、年、年龄龄、职业职业、送、送检单检单位、人群位、人群类类别别、检验结检验结果、送果、送检检日期、日期、报报告日期、告日期、备备注注(必要必要时记录时记录通信地址通信地址)等。等。2 2、实验实验原始原始记录记录表表 应应按按实实验验要要求求，设设计计操操作作的的原原始始记记录录表表，标标明明空空白白对对照照、阳阳性性对对照照、阴阴性性对对照照、外外部部对对照照以以及及待待检检样样品品的的位位置置，便便于于指指导导实实验验人人员员加加样样。要要注注明明试试剂剂盒盒来来源源、测测定定方方法法、批号、有效期、操作人批号、有效期、操作人员员和复核人和复核人员员姓名及姓名及检测检测日期。日期。3 3、HIV HIV 阳性阳性标标本的保存本的保存记录记录 记记录录HIVHIV阳阳性性标标本本的的储储存存量量、储储存存温温度度、储储存存起起始始时时间间以及以及标标本保管人姓名。本保管人姓名。4 4、文件存档、文件存档 实实验验原原始始记记录录表表、打打印印数数据据、检检测测记记录录表表、标标本本登登记记、标标本本保保存存记记录录以以及及仪仪器器设设备备维维修修和和校校准准记记录录等等都都应应该该妥妥善善存存档档保保存存1515年年以以上上。最最好好同同时时使使用用计计算算机机保保存各种文件和存各种文件和记录记录。HIVHIV感染感染产妇所生儿童所生儿童HIVHIV抗体抗体检测策略及流程策略及流程 适用范适用范围围 HIV感染产妇所生婴幼儿；已满18个月的婴幼儿，其母亲HIV感染状态不详，儿童出现HIV相关临床表现，临床怀疑HIV感染的儿童。HIVHIV感染感染产妇所生儿童所生儿童HIVHIV抗体抗体检测策略及流程策略及流程 检测检测程序及程序及结结果果报报告告 婴婴儿儿满满1212个月个月进进行第一次行第一次HIVHIV抗体抗体检测检测。使用两种不同原理或不。使用两种不同原理或不同厂家同厂家筛查试剂进筛查试剂进行抗体行抗体检测检测，两种，两种筛查试剂检测结筛查试剂检测结果均果均为为阴性反阴性反应应，报报告告“HIV“HIV抗体阴性（）抗体阴性（）”，可排除感染。，可排除感染。检测结检测结果出果出现现阳性反阳性反应应（一种（一种为为阴性反阴性反应应一种一种为为阳性反阳性反应应或两种均呈阳性反或两种均呈阳性反应应），不能排除），不能排除感染，感染，应继续应继续追踪随追踪随访访，至儿童，至儿童满满1818个月个月时时再次再次进进行行HIVHIV抗体抗体检测检测。HIVHIV感染感染产妇所生儿童所生儿童HIVHIV抗体抗体检测策略及流程策略及流程 检测检测程序及程序及结结果果报报告告 婴婴儿儿满满1818个月个月时应时应再次再次进进行行HIVHIV抗体抗体检测检测。使用两种。使用两种不同原理或不同厂家不同原理或不同厂家筛查试剂进筛查试剂进行抗体行抗体检测检测。两种。两种筛查试筛查试剂剂的的检测结检测结果均果均为为阴性反阴性反应应，报报告告“HIV“HIV抗体阴性（）抗体阴性（）”，可排除感染。，可排除感染。检测检测出出现现阳性反阳性反应应（一种（一种为为阴性反阴性反应应一一种种为为阳性反阳性反应应或两种均呈阳性反或两种均呈阳性反应应），），进进一步一步进进行确行确证试证试验验，根据确，根据确证试验证试验的的结结果判断是否感染果判断是否感染HIV HIV。HIVHIV感染感染产妇所生儿童所生儿童HIVHIV抗体抗体检测策略及流程策略及流程 检测检测程序及程序及结结果果报报告告 在在发发放放检测报检测报告的同告的同时时上上报报疫情；疫情；做好做好检测检测后咨后咨询询。全国艾滋病全国艾滋病检测技技术规范范2009版免疫功能（免疫功能（CD4/CD8CD4/CD8）的）的检测检测T T淋巴淋巴细细胞分胞分类类 在在T T淋巴淋巴细细胞分胞分类类中，中，CD4CD4代表代表T T辅辅助助细细胞而胞而CD8CD8代代表表T T抑制抑制细细胞和胞和T T杀伤细杀伤细胞。胞。CD4+TCD4+T淋巴淋巴细细胞是胞是HIVHIV感染感染的主要靶的主要靶细细胞，也是免疫反胞，也是免疫反应应的中心的中心细细胞；胞；CD8+TCD8+T淋巴淋巴细细胞是免疫反胞是免疫反应应的效的效应细应细胞。胞。T T淋巴淋巴细细胞分胞分类类 正常人的正常人的CDCD4 4+T T淋巴淋巴细细胞胞约约占占总总的的T T淋巴淋巴细细胞的胞的65%65%，CDCD8 8+T T淋巴淋巴细细胞胞约约占占35%35%。人体感染了。人体感染了HIVHIV后，涉及的主要病后，涉及的主要病理理过过程就是免疫系程就是免疫系统统的的损损害，主要表害，主要表现为现为：CDCD4 4+T T淋巴淋巴细细胞胞的的丢丢失，失，绝对绝对数量的减少，同数量的减少，同时时CDCD8 8+T T淋巴淋巴细细胞数量增加，胞数量增加，CDCD4 4和和CDCD8 8的比例失的比例失调调。因此。因此CDCD4 4+T T淋巴淋巴细细胞胞计计数作数作为为直接直接测测定免疫功能的方法，是提供定免疫功能的方法，是提供HIVHIV感染病人免疫系感染病人免疫系统损统损害状害状况最明确的指况最明确的指标标。CD4+TCD4+T淋巴淋巴细细胞正常胞正常值值 CD4 CD4：410-1590/mm410-1590/mm3 3 CD8 CD8：190-1140/mm190-1140/mm3 3 CD4/CD8 CD4/CD8：1 1CDCD4 4+T T淋巴淋巴细细胞胞计计数数意意义义 是艾滋病疾病分期、确定是艾滋病疾病分期、确定诊诊断、制定抗病毒治断、制定抗病毒治疗疗和和预预防机会性感染方案的防机会性感染方案的标标准准实验实验室指室指标标，也是与病毒，也是与病毒载载量相量相配合配合预测预测疾病疾病进进程的可靠指程的可靠指标标。CD4+TCD4+T淋巴淋巴细细胞胞检测检测意意义义1 1、用于、用于HIVHIV感染者的疾病分期：凡感染者的疾病分期：凡CD4+TCD4+T淋巴淋巴细细胞胞200/mm200/mm3 3或或CD4+TCD4+T淋巴淋巴细细胞的百分比胞的百分比14%14%的的HIVHIV感染者可感染者可归归入艾滋病。入艾滋病。CD4+TCD4+T淋巴淋巴细细胞胞检测检测意意义义 2 2、判断、判断HIVHIV感染者的感染者的临临床合并症（各种机会性感染与床合并症（各种机会性感染与CD4+TCD4+T淋巴淋巴细细胞的相关性），如胞的相关性），如CD4+TCD4+T淋巴淋巴细细胞胞200/mm200/mm3 3时时，很容易很容易发发生卡氏肺囊虫肺炎；而巨生卡氏肺囊虫肺炎；而巨细细胞病毒感染和胞病毒感染和鸟鸟分支杆分支杆菌感染常菌感染常发发生于生于CD4+TCD4+T淋巴淋巴细细胞胞50/mm50/mm3 3的病人，极少的病人，极少见见于于CD4+TCD4+T淋巴淋巴细细胞胞100/mm100/mm3 3的病人。的病人。CD4+TCD4+T淋巴淋巴细细胞胞检测检测意意义义3 3、帮助确定抗帮助确定抗HIVHIV药药物治物治疗疗及机会性感染及机会性感染预预防性治防性治疗疗的适的适应应症，症，例如，当例如，当CD4+TCD4+T淋巴淋巴细细胞胞200/mm200/mm3 3时时，应给应给予抗卡氏肺囊虫予抗卡氏肺囊虫肺炎的肺炎的预预防性治防性治疗疗；4 4、抗、抗HIVHIV药药物物疗疗效的重要判断指效的重要判断指标标。成人及青少年艾滋病分期成人及青少年艾滋病分期标标准准（美国（美国CDC.1993CDC.1993）CD4200/ulCD410001000）提示感染）提示感染发发生的可能性非常大。生的可能性非常大。2 2、窗口期、窗口期辅辅助助诊诊断断n在窗口期抗原峰出在窗口期抗原峰出现现前后通常出前后通常出现现一个病毒一个病毒载载量的高峰，量的高峰，通常此高峰高于通常此高峰高于发发病病时时的血的血浆浆病毒水平，早期病毒病毒水平，早期病毒RNARNA测测定具有特殊的意定具有特殊的意义义。n目前国目前国际际上正在上正在尝试尝试使用使用这这种种检测对检测对采供血采供血样样品品进进行多个行多个样样品混合后的品混合后的RNARNA检测检测以降低窗口期以降低窗口期传传播的残余危播的残余危险险度。度。3 3、病程、病程监监控控n由于由于HIVHIV感染感染发发生后病毒生后病毒载载量的量的变变化具有一定化具有一定规规律，并且律，并且这这种种变变化与疾病的化与疾病的进进程有着密切的相关性。程有着密切的相关性。n通常在感染后无症状期内通常在感染后无症状期内发发生的生的临临床症状很床症状很难难与与AIDSAIDS发发病病时时的症状区的症状区别别，病毒，病毒载载量量测测定可以帮助医生判断一个定可以帮助医生判断一个刚发刚发生的症状是否与生的症状是否与HIVHIV感染有关。感染有关。4 4、指、指导导治治疗疗方案及方案及疗疗效效测测定定n并非在任何情况下感染者都并非在任何情况下感染者都应应该进该进行抗病毒治行抗病毒治疗疗，这这不但是不但是经济经济上的原因，更重要的是在上的原因，更重要的是在于抗病毒于抗病毒药药物的副作用和物的副作用和疗疗效。效。通常在病毒通常在病毒载载量达到一定水平量达到一定水平后（如后（如35000-5000035000-50000拷拷贝贝/毫升）毫升）才具有良好的效果。才具有良好的效果。n只有通只有通过过治治疗疗后病毒水平的后病毒水平的检检测测才能确定治才能确定治疗疗是否有效，通是否有效，通常治常治疗疗后病毒水平降低后病毒水平降低50%50%才被才被认为临认为临床有效。床有效。100010008008006006004004002002006 65 54 43 32 20 20 40 60 week0 20 40 60 weekHAARTHAARTSTISTIHIV-1 plasma RNAHIV-1 plasma RNACD4+T cell countCD4+T cell countHIV-1 plasma RNAHIV-1 plasma RNACD4+T cell countCD4+T cell count5 5、预测预测疾病疾病进进程程nHIVHIV疾病疾病进进程与病毒程与病毒载载量的关系量的关系十分密切，十分密切，观观察感染者病毒察感染者病毒RNARNA水平可大致水平可大致预测预测其其发发病的可能。病的可能。如右如右图图所示，病毒所示，病毒载载量与量与6 6年年发发病率的关系病率的关系为为：500 3000030000时则为时则为80%80%。两种方法两种方法检测检测病毒病毒载载量量（一）（一）RT-PCRRT-PCR（二）（二）NASBA EasyQNASBA EasyQ病毒病毒载载量量检测样检测样品要求品要求n血血浆浆n样样品量品量约约1 1毫升毫升n样样品要求保存低温保存（品要求保存低温保存（-20-20以下）以下）n冷冷冻冻运运输输实验实验室网室网络络n自治区自治区CDC确确证证中心中心实验实验室室n柳州市柳州市CDC确确证实验证实验室室n梧州市梧州市CDC确确证实验证实验室室n贺贺州市州市CDC确确证实验证实验室室n龙龙潭医院确潭医院确证实验证实验室室n桂林市桂林市CDC确确证实验证实验室室3.12105低于最低检测限（400拷贝/毫升）高于最高检测限（7.5105拷贝/毫升）RT-PCRRT-PCR病毒病毒载载量量结结果的果的报报告三种情况告三种情况n具体的一个数具体的一个数值值（该值该值在在400-7.510400-7.5105 5拷拷贝贝/毫升）毫升）n低于最低低于最低检测检测限（限（400400拷拷贝贝/毫升）毫升）n高于最高高于最高检测检测限（限（7.5107.5105 5拷拷贝贝/毫升）毫升）1.6105低于最低检测限（50拷贝/毫升）高于最高检测限（3.0106拷贝/毫升）NASBANASBAEASYQEASYQ病毒病毒载载量量结结果果报报告的三种情况告的三种情况n具体的一个数具体的一个数值值（该值该值在在50 3.01050 3.0106 6拷拷贝贝/毫升）毫升）n低于最低低于最低检测检测限（限（5050拷拷贝贝/毫升）毫升）n高于最高高于最高检测检测限（限（3.0103.0106 6拷拷贝贝/毫升）毫升）注意事注意事项项1 1、不同、不同检测检测方法的方法的结结果不能直接比果不能直接比较较，必，必须转须转化化为为国国际单际单位位 RT-PCR:1IU/ml=0.51copies/ml RT-PCR:1IU/ml=0.51copies/ml NASBA EASYQ:1IU/ml=1copies/ml NASBA EASYQ:1IU/ml=1copies/ml注意事注意事项项2 2、检测结检测结果低于最低果低于最低检测检测限不能排除限不能排除HIVHIV感染感染3 3、病毒、病毒载载量量结结果低于果低于1000copies/ml1000copies/ml不不进进行耐行耐药检测药检测，只有大，只有大于于1000copies/ml1000copies/ml的病人才做耐的病人才做耐药检测药检测。艾滋病艾滋病检测实验检测实验室安全防室安全防护护一、建立安全制度一、建立安全制度（一一）实实验验室室的的设设备备、建建筑筑和和设设施施的的安安全全性性应应通通过过专专家家的的评审评审。（二二）建建立立安安全全标标准准操操作作程程序序，该该程程序序应应适适用用于于现现有有的的实验实验条件，并与条件，并与实验实验室其他室其他规规章制度一致。章制度一致。（三三）无无论论是是否否发发生生意意外外事事故故，每每年年都都要要对对安安全全标标准准操操作程序及其作程序及其实实施情况施情况进进行行检查检查。（四四）制制定定意意外外事事故故处处理理预预案案。建建立立意意外外事事故故的的登登记记和和报报告制度。告制度。二、人二、人员员管理和培管理和培训训（一）人（一）人员员管理管理 1 1、实实验验室室主主任任应应了了解解所所有有工工作作人人员员。在在安安排排工工作作区区域域时时，要要根根据据人人员员的的工工作作种种类类和和所所涉涉及及的的生生物物材材料料，对对实实验验室室环环境做安全境做安全检查检查。2 2、新新调调入入人人员员、外外来来合合作作、进进修修和和学学习习的的人人员员在在进进入入实实验验室室之之前前必必须须经经过过实实验验室室主主任任的的批批准准。非非实实验验室室人人员员和和物品不得物品不得进进入入实验实验室。室。3 3、严严格格执执行行实实验验室室工工作作人人员员年年度度采采血血检检测测HIVHIV抗抗体体和和备备案制度，工作人案制度，工作人员员血清血清应长应长期保留。期保留。（二）培（二）培训训 1 1、所所有有工工作作人人员员必必须须经经过过HIVHIV检检测测技技术术和和实实验验室室安安全全培培训训，包包括括上上岗岗培培训训和和复复训训，并并接接受受实实验验室室管管理理人人员员的的监监督督。实实验验室室的的安安全全责责任任人人要要对对工工作作和和环环境境的的安安全全负负责责，所有工作人所有工作人员员都有都有责责任保任保护护自己和他人的安全。自己和他人的安全。2 2、必必须须告告知知新新上上岗岗人人员员实实验验室室工工作作的的潜潜在在危危险险，进进行行安安全教育，直至有能力后方可全教育，直至有能力后方可单单独工作。独工作。三、安全保障措施三、安全保障措施（一）个人保健（一）个人保健 1 1、高高标标准准的的个个人人保保健健对对于于减减少少感感染染的的危危险险性性很很重重要要。皮皮肤肤受受损损、患患病病都都会会增增加加感感染染的的危危险险。皮皮肤肤的的伤伤口口和和擦擦伤伤都都应应以防水敷料覆盖。以防水敷料覆盖。2 2、进进实实验验室室前前要要摘摘除除首首饰饰，修修剪剪长长的的带带刺刺的的指指甲甲，以以免刺破手套。免刺破手套。3 3、进进入入实实验验室室应应穿穿隔隔离离衣衣，戴戴手手套套。如如果果接接触触物物传传染染危危险险性大，性大，则应则应戴双戴双层层手套和防手套和防护护眼眼镜镜。4 4、脱去隔离衣，离开、脱去隔离衣，离开实验实验室前必室前必须须洗手。洗手。5 5、严严禁禁在在艾艾滋滋病病检检测测实实验验室室内内进进食食、饮饮水水、吸吸烟烟和和化化妆妆。（二）（二）带带入和入和带带出出实验实验室的物品室的物品 1 1、对对所所有有带带入入实实验验室室的的物物品品都都应应进进行行检检查查。含含有有测测试试样样品品的的包裹包裹应应在安全柜或其他适当的装置内打开。在安全柜或其他适当的装置内打开。2 2、将将HIVHIV测测试试样样品品转转送送其其他他实实验验室室时时，应应防防止止对对人人员员和和环环境境的的污污染染。护护送送样样品品的的人人应应明明确确接接收收地地点点和和接接收收人人，实实验验室室负负责责人人或或其其指指定定的的人人员员应应及及时时确确认认样样本本已已送送达达指指定定的的实实验验室室，被被转转入入安全位置并得到妥善安全位置并得到妥善处处理。理。3 3、污污染或可能造成染或可能造成污污染的材料在染的材料在带带出出实验实验室前室前应进应进行消毒。行消毒。（三）减少利器的使用（三）减少利器的使用 1 1、尽尽量量避避免免在在实实验验室室使使用用针针头头、刀刀片片等等利利器器，如如果果必必须须使使用用在在处处理理或或清清洗洗时时，应应采采取取措措施施防防止止刺刺伤伤或或划划伤伤，并并应对应对用用过过的物品的物品进进行消毒行消毒处处理。理。2 2、最好不使用玻璃制品。、最好不使用玻璃制品。3 3、尽尽量量使使用用安安全全针针具具采采血血，如如蝶蝶形形真真空空针针，自自毁毁性性针针具具等等，以以降降低低直直接接接接触触血血液液和和刺刺伤伤的的危危险险性性。.应应将将用用过过的的针头针头直接放入直接放入坚坚固的容器内，消毒后固的容器内，消毒后废废弃。弃。（四）（四）HIVHIV消毒方法消毒方法 实验实验室常用物品的消毒方法如下：室常用物品的消毒方法如下：1 1、废废弃弃物物缸缸：10%10%（v/vv/v）次次氯氯酸酸钠钠（含含1010，000 000 mg/Lmg/L有有效效氯氯）。）。2 2、生物安全柜工作台面和、生物安全柜工作台面和仪仪器表面：器表面：70%70%乙醇。乙醇。3 3、溢出物：、溢出物：10%10%次次氯氯酸酸钠钠。4 4、生生物物安安全全柜柜和和实实验验室室：甲甲醛醛蒸蒸气气熏熏蒸蒸。生生物物安安全全柜柜：25ml25ml福福尔尔马马林林（40%w/v40%w/v甲甲醛醛）和和等等量量水水混混合合后后放放在在一一个个蒸蒸发发皿皿中中使使其其在在密密封封的的生生物物安安全全柜柜中中蒸蒸发发，保保持持至至少少6 6小小时时，最最好好过过夜夜。实实验验室室：福福尔尔马马林林和和水水加加热热沸沸腾腾，其其体体积积根据根据实验实验室的大小而定。室的大小而定。5 5、污污染染的的台台面面和和器器具具：37%37%甲甲醛醛水水溶溶液液，也也可可以以用用过过氧氧化化氢氢或或过过氧乙酸。氧乙酸。四、四、实验实验室事故室事故处处理理（一）（一）紧紧急急处处理措施理措施 发发生生意意外外事事故故时时，应应立立即即进进行行紧紧急急处处理理，根根据据具具体情况采用相体情况采用相应应的方法。的方法。1 1、皮皮肤肤针针刺刺伤伤或或切切割割伤伤：立立即即用用肥肥皂皂和和大大量量流流水水冲冲洗洗，尽尽可可能能挤挤出出损损伤伤处处的的血血液液，用用70%70%乙乙醇醇或或其其他他消消毒毒剂剂消消毒毒伤伤口。口。2 2、皮皮肤肤污污染染：用用水水和和肥肥皂皂冲冲洗洗污污染染部部位位，并并用用适适当当的的消毒消毒剂剂浸泡，如浸泡，如70%70%乙醇或其他皮肤消毒乙醇或其他皮肤消毒剂剂。3 3、粘膜、粘膜污污染：用大量流水或生理染：用大量流水或生理盐盐水水彻彻底冲洗底冲洗 污污染部位。染部位。4 4、衣物、衣物污污染：尽快脱掉染：尽快脱掉污污染的衣物，染的衣物，进进行消毒行消毒处处理。理。5 5、污污染染物物泼泼溅溅：发发生生小小范范围围污污染染物物泼泼溅溅事事故故时时，应应立立即即进进行行消消毒毒处处理理。发发生生大大范范围围污污染染物物泼泼溅溅事事故故时时，应