DB37∕T 4481.4—2021 土壤中农药残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 第4部分：霜脲氰残留量的测定(山东省).pdf

ICS 13.080 CCS Z 18 37 山东省地方标准 DB37/T 4481.42021 土壤中农药残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 第 4 部分：霜脲氰残留量的测定 Determination of pesticide residues in soilLiquid chromatography-tandem mass spectrometryPart 4:Determination of cymoxanil residues 2021 - 12 - 29 发布 2022 - 01 - 29 实施 山东省市场监督管理局 发 布 DB37/T 4481.42021 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。 本文件是DB37/T 4481 土壤中农药残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 的第4部分。 DB37/T 4481已经发布了以下部分： 第 1 部分：9 种三唑类杀菌剂残留量的测定； 第 2 部分：六种除草剂残留量的测定； 第 3 部分：壬基酚二氧乙烯醚、壬基酚和 4-正壬基酚残留量的测定； 第 4 部分：霜脲氰残留量的测定。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由山东省农业农村厅提出并组织实施。 本文件由山东省农业标准化技术委员会归口。 DB37/T 4481.42021 II 引言 作为土壤中农药残留分析的一部分，本文件规定了土壤中霜脲氰残留量液相色谱-串联质谱测定方法，方法的检出限、精密度等均能满足土壤样品检验的要求，对产地环境的保护、农产品产业的健康、可持续发展有积极和深远的意义。DB37/T 4481.42021 1 土壤中农药残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 第 4 部分： 霜脲氰残留量的测定 1 范围 本文件规定了土壤中霜脲氰残留量液相色谱-串联质谱测定方法。 本文件适用于土壤中霜脲氰残留量的测定。 注： 本标准的方法定量限为0.01 mg/kg，线性范围为0.01 mg/L0.5 mg/L。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验用水规格和实验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样经乙腈提取，提取液经净化后，用液相色谱串联质谱仪检测，外标法定量。 5 试剂与材料 除非另有说明，在分析中仅使用分析纯的试剂，水为GB/T 6682 规定的一级水。 试剂 5.1 5.1.1 乙腈（CH3CN，CAS 号：75-05-8）。 5.1.2 甲醇（CH3OH，CAS 号：65-56-1）：色谱纯。 5.1.3 乙酸铵（CH3COONH4，CAS 号：631-61-8）：色谱纯。 5.1.4 氯化钠（NaCl，CAS 号：7647-14-5）：140 烘烤 4 h。 5.1.5 无水硫酸镁（MgSO4，CAS 号：7487-88-9）：650 灼烧 4 h，置干燥器中贮存备用。 5.1.6 甲酸（HCOOH，CAS 号：64-18-6）：色谱纯。 溶液配制 5.2 0.05 %甲酸+2 mmol/L乙酸铵水溶液：准确吸取0.5 mL甲酸于1 000 mL容量瓶中，准确称取0.154 g乙酸铵于上述1 000 mL容量瓶中，用水定容至刻度，然后将其置于超声波中超声15 min，现配现用。 标准品 5.3 DB37/T 4481.42021 2 霜脲氰标准品(cymoxanil,C7H10N4O3，CAS号：57966-95-7)：纯度96 %。 标准溶液配制 5.4 5.4.1 霜脲氰标准储备溶液（100 mg/L）：准确称取 10 mg（精确至 0.1 mg）霜脲氰标准品于 10 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并转移至 100 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀，-18 冷冻避光保存，有效期 6 个月。 5.4.2 霜脲氰标准工作溶液（10 mg/L）：准确吸取 1 mL 标准储备溶液于 10 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀，4 下保存，有效期 1 个月。 材料 5.5 5.5.1 乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶（PSA）：40 m60 m。 5.5.2 十八烷基硅烷键合硅胶(C18)：50 m。 5.5.3 微孔滤膜（有机相）：0.22 m。 6 仪器和设备 液相色谱-串联质谱：配备电喷雾离子源（ESI）。 6.1 天平：感量 0.00 001 g 和感量 0.01 g。 6.2 恒温水浴振荡器（往复式）。 6.3 瓶口分液器。 6.4 旋涡混匀器。 6.5 氮吹仪。 6.6 离心机：5 000 r/min。 6.7 离心管：50 mL、15 mL。 6.8 土壤筛：2 mm 孔径。 6.9 7 试样制备 土壤鲜样， 除去石块、 动植物残体等杂物， 风干后过2 mm孔径筛， 装入洁净容器， 密封， 标明标记，于-18 条件下保存备用。 8 分析步骤 提取 8.1 称取混匀后的试样10 g（精确至0.01 g），于50 mL具塞离心管中，加入10 mL水浸泡1 h，然后准确加入乙腈10.0 mL， 于40 水浴振荡器上振荡提取30 min后， 加入5 g氯化钠， 涡旋振荡1 min， 5 000 r/min离心5 min，待净化。 净化 8.2 取上清液2.0 mL于15 mL离心管中， 分别加入100 mg无水硫酸镁、 100 mg PSA、 100 mg C18， 涡旋1 min，过0.22 m滤膜后上机测定。 仪器参考条件 8.3 DB37/T 4481.42021 3 8.3.1 液相色谱参考条件 色谱柱：C18，100 mm2.1 mm（i.d.），1.9 m，或性能相当者。 柱温：40 。 流速：0.2 mL/min。 进样量：1.0 L。 流动相组成及梯度洗脱程序见表1。 表1 流动相及梯度洗脱程序 时间 min 流动相 A（甲醇） % 流动相 B（0.05 %甲酸+2 mmol/L 乙酸铵水溶液） % 0 10 90 4.0 95 5 7.0 95 5 7.2 10 90 8.3.2 质谱参考条件 离子化模式：电喷雾离子源（ESI）。 去溶剂气（N2）：15 mL/min。 碰撞气：3 mL/min。 碰撞气类型：氩气。 DL管温度：250 。 加热模块温度：400 。 扫描方式：正离子模式。 质谱扫描模式：多反应监测(MRM)，监测条件见表2。 表2 霜脲氰多反应监测(MRM)的条件 中文名称 保留时间 电离模式 定量离子对 碰撞能 V 定性离子对 碰撞能 V 霜脲氰 5.75 + 199.1/128.1 -8 199.1/111.1 -18 标准工作曲线 8.4 准确吸取适量4.4.2中配制的系列标准溶液， 用基质空白提取液稀释， 配制成质量浓度为0.005 mg/L、0.01 mg/L、0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L系列基质匹配标准溶液，供液相色谱-串联质谱仪测定。以测得峰面积为纵坐标、对应的标准溶液质量浓度为横坐标，绘制标准工作曲线。基质匹配标准溶液现配现用。 定性及定量测定 8.5 8.5.1 定性及定量测定 被测试样中目标化合物色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，相对误差应在2.5 %之内。 8.5.2 定量离子、定性离子及子离子丰度比 DB37/T 4481.42021 4 在相同实验条件下进行样品测定时， 如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致， 并且在扣除背景后的样品质谱图中，目标化合物的质谱定性离子应出现，而且同一检测批次，对同一化合物，样品中目标化合物的2个离子的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比，其相对偏差不超过表3规定的范围，则可判断样品中存在霜脲氰。本文件的霜脲氰标准物质多反应监测色谱图和质谱图参照附录A。 表3 定性测定时时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 50 % 20 %至 50 % 10 %至 20 % 10 % 允许相对偏差 20 % 25 % 30 % 50 % 测定 8.6 将标准工作溶液与待测溶液分别注入液相色谱-串联质谱仪中，以保留时间和定性离子定性，样品中霜脲氰质量浓度应在标准工作曲线质量浓度范围内，超过工作曲线最高点时则应稀释后再进行分析，采用外标法定量。 平行试验 8.7 按8.18.6的规定对同一试样进行平行试验测定。 空白试验 8.8 除不加试样外，按照8.18.6的规定进行平行操作。 9 数据处理 试样中霜脲氰残留含量，按式（1）计算： X =132 (1) 式中： X 试样中霜脲氰残留量，单位为毫克每千克(mg/kg)； 霜脲氰标准工作溶液的质量浓度，单位为毫克每升(mg/L)； As 霜脲氰标准工作溶液的峰面积； A 样品中霜脲氰的峰面积； V1 提取溶剂总体积，单位为毫升(mL)； V2 吸取出用于检测的提取溶液的体积，单位为毫升(mL)； V3 样品定容体积，单位为毫升(mL)； m 样品质量，单位为克(g)。 注： 计算结果应扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留2位有效数字，当结果大于1 mg/kg时，保留3位有效数字。 10 精密度 在重复性条件下，2次独立测定结果的绝对差不大于重复性限（r），重复性限（r）的数据应按照附录B执行。 在再现性条件下，2次独立测定结果的绝对差不大于再现性限（R），再现性（R）的数据应按照附录C执行。 DB37/T 4481.42021 5 11 回收率 本文件的添加水平和回收率范围应符合附录D的要求。 DB37/T 4481.42021 6 附录A （资料性） 霜脲氰标准溶液多反应监测（MRM）色谱图及质谱图 霜脲氰标准溶液多反应监测（MRM）色谱图见图A.1。 图A.1 霜脲氰标准溶液（0.1 mg/L）多反应监测（MRM）色谱图 霜脲氰标准溶液质谱图见图A.2。 图A.2 霜脲氰标准溶液（0.1 g/mL）质谱图 DB37/T 4481.42021 7 附录B （规范性） 实验室重复性限（r）数据 实验室重复性限（r）数据见B.1。 表B.1 实验室重复性限（r）数据 名称 含量 mg/kg 重复性限 r 含量 mg/kg 重复性限 r 含量 mg/kg 重复性限 r 霜脲氰 0.01 1.710-3 0.05 8.110-3 0.5 5.310-2 DB37/T 4481.42021 8 附录C （规范性） 实验室再现性限（R）数据 实验室再现性限（R）数据见表C.1。 表C.1 实验室再现性限（R）数据 名称 含量 mg/kg 再现性限 R 含量 mg/kg 再现性限 R 含量 mg/kg 再现性限 R 霜脲氰 0.01 1.810-3 0.05 8.710-3 0.5 5.910-2 DB37/T 4481.42021 9 附录D （规范性） 土壤中霜脲氰的回收率数据 土壤中霜脲氰的回收率数据见表D.1。 表D.1 三个添加水平下土壤中霜脲氰的回收率和变异系数 化合物 添加水平 mg/kg 回收率 % 平均回收率 % RSD % 1 2 3 4 5 霜脲氰 0.01 96.0 84.0 74.0 80.0 96.0 86.0 11.4 0.05 86.7 83.4 99.1 82.6 92.8 88.9 7.8 0.5 81.9 85.4 86.4 84.5 85.0 84.6 2.0